转染人CD80基因的黑色素瘤细胞生长特性及免疫原性探讨

】 ObjectivesTo investigate the effects of the CD80 costimulatory molecule expression on the immunogenicity and biological characteristics of poorly immunogenic B16 melanoma cells,explore the relationship between the immunogenicity of tumor cells and cell surface molecules. MethodsHuman CD80 cDNA was transfected into B16 melanoma cells by lipofectin-mediated gene transfer before the expansion of tumor cells were tested by MTT method in vitro;C57BL/6 mice were inculated subcutaneously either mock-transfected B16 cells (B16-neo)or CD80-transfected B16 cells (B16-CD80),then the latency,survival times and tumor mass growth were investigated.The lymphocytes were examined for both proliferation indices (PI) and specific cytotoxic activity by MTT method and improved LDH-releasing method,after syngenic Mixed Lymphocyte tumor cultures (MLTCs). ResultsIn the B16-CD80 cells,in which CD80 expression were detected by SABC method, demonstrated slower growth rate than B16-neo Clles in vivo (P<0.05),though they didn't in vitro. Compared with B16-wt and B16-neo cells,B16-CD80 cells more effectively induced the proliferation of effector lymphocytes and the generation of specific lytic activity against B16-wt cells. ConclusionsThe CD80 (B7-1) expression in poorly immunogenic tumor cells can increase their immunogenicity and decrease their tumorigenicity,the effects are associated with the expression of ICAM-1 and MHC molecules on tumor cells surface.     

GM-CSF及B7-1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的研究

目的：研究ＧＭ－ＣＳＦ及Ｂ７－１基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的有效性。方法：我们将小鼠ＧＭ－ＣＳＦ及ＣＤ８０基因通过逆转录病毒载体分别导入ＥＬ－４淋巴瘤细胞中,进而研究了ＥＬ－４／ＧＭ－ＣＳＦ及ＥＬ－４／Ｂ７－１在同系Ｃ５７Ｂ习中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果：转Ｂ７－１基因的肿瘤细胞诱发了ＣＤ８０的高表达。转基因的肿瘤细胞在同源小鼠中的成瘤性下降,免疫原笥增强。在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤     

β-榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

 目的 研究β-榄香烯（β-E） 诱导小鼠黑色素瘤B16 细胞发生凋亡的作用。方法 应用透射电镜和TdT介导的脱氧核苷酸缺口末端标记（TUNEL） 技术。结果 表明10-40ugmlβ-E作用12-48 小时,可使B16 细胞发生凋亡,且凋亡指数与β-E 的剂量及作用时间有关。结论 诱导肿瘤细胞凋亡的作用是β-E抗癌作用的重要机制之一。     

HSA基因转染小鼠淋巴瘤细胞EL-4诱导的抗瘤效应

本文将热稳定抗原(HSA)的CDNA与质粒PcDNA3连接,构建成真核表达体,通过电穿孔的方法将重组质粒导入不表达HSA的淋巴瘤细胞EL-4中,使其表达抗性基因和HSA分子,通过高剂量G418(400μg/ml)选择培养和流式细胞仪免疫荧光染色检测,并进一步通过有限稀释法克隆到高表达HSA的单细胞克隆,用含低剂量G418(200μg/ml的RP-MI1640完全培养液维持培养,以维持转染瘤细胞上的HSA的表达,从而提供活化T细胞必要的协同刺激信号,以诱导出有效的抗肿瘤免疫应答.实验观察了高表达HSA淋巴瘤细胞EL-4在体内诱导的抗癌效应及其提高肿瘤免疫原性的作用.结果表明,用丝裂霉素C灭活的HSA~ 癌细胞作为瘤苗早期治疗野生型瘤细胞EL-4接种小鼠的动物模型显示     

IL—12协同B7—1转基因细胞增强C57BL／6小鼠的抗肿瘤免疫

目的应用逆转录病毒构建IL-12、B7-1表达载体,以研究基因修饰的肿瘤细胞的癌疫苗作用.方法将两种表达载体分别转染EL-4胸腺瘤细胞,使该细胞能表达分泌B7-1或IL-12,并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果.结果当接种了EL-4/IL-12转染细胞后,在C57BL/6同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较EL-4/Wt和EL-4/Neo组明显减少(P＜0.01),在EL-4/IL-12组的肿瘤被排斥后,实验动物体内诱发了抗EL-4/Wt的全身性、保护性免疫,用51Cr释放测定法证明有一个较强的抗EL-4/Wt和一个较弱的抗同系Lewis肿瘤细胞的CTL活性,体内淋巴细胞消除分析的结果提示减少的肿瘤原性主要与CD4+、CD8+和NK细胞有关.用EL-4/IL-12基因转染的瘤细胞进行疫苗治疗比较用EL-4/Neo瘤细胞作疫苗治疗能更加有效地延缓已建立的EL-4/Wt肿瘤的生长(P＜0.005),EL-4/IL-12和EL-4/B7-1基因联合转染组比用单一的转基因细胞增强了治疗效果(P＜0.005).结论研究结果提示应用IL-12进行血液肿瘤的治疗是有效的,IL-12和B7-1联合使用在未来人类癌症的治疗中有一定的应用前景.     

白细胞介素-7基因抗肿瘤效应的实验观察研究

目的：探讨白细胞介素－７裸ＤＮＡ质粒用于小鼠肿瘤基因治疗的可行性。方法：构建ＩＬ－７基因真核表达质粒（ｐＳＶＫ３ ＩＬ－７）,并将此质粒ＤＮＡ直接肌肉注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠体内,在此之前７天、同时、之后７天背部皮下接种ＳＰ－２肿瘤细胞,观察该质粒基因的体内抗肿瘤生物学活性;并通过ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测注射部位ＩＬ－７ｍＲＮＡ的表达情况。结果：在实验中观察到直接肌肉注射ＩＬ－７基因质粒ＤＮＡ的荷瘤鼠     

小鼠Egr-1基因启动子的克隆及其辐射诱导基因表达

目的：研究克隆小鼠Ｅｇｒ－１基因启动子及其辐射诱导基因表达特征。方法：用合成的一对引物,以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠基因组为模板,扩增出４４９ｂｐ大小含６个ＣＣ（Ａ／Ｔ）６ＧＧ基序的序列,通过亚克隆技术分别将其插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ测序载体和ｐＨＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ报告载体中,利用测序载体对克隆的ＤＮＡ序列进行分析。报告质粒载体经Ｌｉ－ｐｏｆｅｃＴＡＭＩＮＥ脂质体介导转染ＣＯＳ－７细胞后给予γ射线照射或Ｈ     

不同佐剂增强小鼠黑色素瘤瘤苗抗瘤细胞免疫效应的比较

 目的 评价5种不同配方佐荆在低免疫原性小鼠黑色素瘤瘤苗保护性免疫中的细胞免疫增强作用。方法 实验组用5种不同配方的佐剂（FCA，FCA＋IL-2＋GM-CSF，FIA＋IL-2＋GM-CSF，FIA＋SWZY，FIA＋SWZY＋IL-2＋GM-CSF）和照射灭活的D5黑色素瘤细胞制成瘤苗免疫小鼠，对照组免疫用单纯灭活D5黑色素瘤细胞。末次免疫后3天各组取半数动物检测DTH反应、NK细胞活性及特异性CTL活性，剩余半数动物接种活D5黑色素瘤细胞，3周后再次检测上述各免疫学参数。结果 与对照组相比，经免疫后的各实验组DTH反应、NK细胞活性、CTL活性均明显升高（P〈0．05），但成瘤后随肿瘤增大，则呈下降趋势。结论 5种佐剂配方制成的瘤苗均能诱导免疫小鼠对低免疫原性肿瘤的细胞免疫应答。其中佐剂SWZY和FCA增强免疫的效果相当，而毒副作用较小，可望成为一种人类肿瘤免疫治疗的新型佐剂。     

B7-1基因转染小鼠EL-4淋巴瘤诱导带瘤宿主抗瘤效应的体内研究

本文研究了IL-2、IL-4、IL-6基因转染后B16黑色素瘤细胞表面MHCⅠ类抗原及ICAM-1的表达水平,并探讨了其在CTL诱导过程中的作用.结果表明,IL-2、IL-4、IL-6基因转染的B16黑色素瘤细胞表面MHCⅠ类抗原及ICAM-1表达均高于野生型B16黑色素瘤细胞及转染对照质粒的B16黑色素瘤细胞.体内接种后,小鼠脾脏CTL活性明显增强,CTL培养体系中IFN-γ、TNF-α的分泌水平也增高.在CTL诱导体系中加入抗ICAM-1单抗可以抑制CTL的活化,加入抗MHCⅠ类分子单抗后可使CTL的活化完全阻断.这提示细胞因子基因转染可能通过使肿瘤细胞表面MHCⅠ类抗原、ICAM-1的表达增加,从而增强瘤苗的免疫原性.     

抗胃癌生物活性肽对荷胃癌裸鼠酯酶同工酶代谢的影响

本文观察了协同刺激分子B7-1某因导入小鼠EL-4淋巴瘤细胞后在小鼠体内诱导的抗瘤效应.结果表明,逆转录病毒(PLXSN)载体重组的小鼠B7-1基因表达质粒导入小鼠EL-4淋巴瘤细胞,经有限稀释法克隆后获得高表达的B7-1~ EL-4细胞.B7-1~ 瘤细胞的形态,体外增殖能力及MHC Ⅰ类分子表达水平与野生型肿瘤细胞无显著差别,但致瘤性显著降低,用野生型肿瘤致死剂量接种C57BL/6小鼠完全排斥.同时免疫原性明显增强,以X-线灭活的B7-1~ 肿瘤细胞免疫后小鼠获得了对随后致死剂量野生型细胞攻击的免疫保护作用.以X-线灭活的肿瘤细胞作为瘤苗进行实验性免疫治疗,对早期(接种7天)形成的肿瘤有一定的治疗效果,但时晚期(接种14天)肿瘤.B7-1和B7-1~ 瘤细胞都未显示出明显的治疗效果.上述结果提示肿瘤细胞表达B7-1分子可有效激发机体的抗肿瘤免疫应答.     

GM-CSF gene or B7-1 gene modified murine EL-4 cells vaccine

Since 1990, gene transduced tumor vaccine has been studied. Many articles reported that tumor cells transduced with some cytokine or costimulatory molecule could induce system antitumor immunity[1,2] In this study, EL-4 lymphoma was transduced with recombinant retrovirus containing the murine GM-CSF gene and B7-1 gene, respectively. The effect of gene transduction on antitumor immunity was investigated.MATERIALS AND METHODSMice and Cell Lines Female C57BL/6 mice were bought from …     

树突状细胞与髓性白血病的免疫治疗 *

目的：我们应用逆转录病毒构建了ＩＬ－１２,Ｂ－７和ＧＭ－ＣＳＦ表达载体,以研究基因修的肿瘤细胞的癌疫苗作用。方法：将３种表达载体分别转染ＥＬ－４胞腺瘤细胞并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果。结果：当接种子ＥＬ４／ＩＬ－１２细胞后,在Ｃ５７ＰＬ／６同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较ＥＬ４／Ｗｔ和ＥＬ－４／Ｎｅｏ组明显减少（Ｐ〈０．０１）。在ＥＬ４／ＩＬ－１２被排斥后,体内试验中诱发了实验动物抗     

ANTITUMOR IMMUNITY AND VACCINE EFFECT INDUCED BY IL—12 SYNERGIZES B7—1 GENE TRANSFECTED CELLS

Cytokines play an crucial role in the induction of antitumor immunity. It have been demonstrated that cytokines such as IL-2, IL-4, IL-12 could stimulate immunity response in many basic and clinical experiment[1-3]. Interleukin 12 (IL-12) is a heterodimeric cytokine which consists of p40 and p35 subunits. It stimulates the proliferation and activation of T lymphocyte and other killer cells and induces the production of IFN-g by these cells[4, 5]. IL-12 promotes T helper type 1 responses.…     

三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用

背景与目的评价三羟异黄酮对黑色素瘤B_(16)细胞的诱导分化作用。材料与方法以4',5,7三羟异黄酮处理黑色素瘤B_(16)细胞1~4d后,以生长曲线反映其增殖活力,以B_(16)细胞形态、黑色素含量、及流式细胞仪检测细胞周期变化等观察三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用。结果用10、30、90μmol/L的三羟异黄酮作用肿瘤细胞,有不同程度的抑瘤作用。表现为黑色素生成能力增加,细胞生长缓慢。可使B16细胞阻断在S期。结论三羟异黄酮不同剂量(10、30、90μmol/L)对B_(16)细胞均有明显的分化诱导作用,对体外黑色素瘤增殖有明显的抑制作用。     

STUDY OF ENHANCED IMMUNOGENECITY OF B7-1 GENE TRANSFECTED HUMAN HELA CELL LINE

ＳＴＵＤＹＯＦＥＮＨＡＮＣＥＤＩＭＭＵＮＯＧＥＮＥＣＩＴＹＯＦＢ７１ＧＥＮＥＴＲＡＮＳＦＥＣＴＥＤＨＵＭＡＮＨＥＬＡＣＥＬＬＬＩＮＥＨｅＸｉ何曦ＱｉｎＨｕｉｌｉａｎ秦慧莲ＸｉａｎｇＲｏｎｇ向荣ＺｈａｎｇＹｕｅｊｉａｎ张跃建ＹｅＷｅｎｆｅｉ叶闻斐Ｈｅ...     

腺病毒介导的IL—2基因及B7—1基因联合转染G422细胞致瘤原性和免疫原性的变化

目的研究联合细胞因子基因转染的D422胶质母细胞瘤细胞体内致瘤原性和免疫原性的变化,为胶质瘤的免疫基因治疗打下基础.方法IL-2基因和B7-1基因转染的G422细胞1×105皮下和脑内接种,观察肿瘤生长速度和荷瘤小鼠的存活期,2周取脾脏,检测NK、LAK和CTL的杀伤活性.结果IL-2和B7-1基因联合转染的G422细胞,皮下接种后肿瘤生长明显减慢,脑内接种动物存活期明显延长,NK、LAK和CTL的杀伤活性增强.结论IL-2基因和B7-1基因联合转染的G422细胞,致瘤原性下降,免疫原性增强,能有效激活机体特异性与非特异性抗肿瘤免疫反应.