芪灵合剂对慢性乙型肝炎患者T细胞表面程序性死亡1和程序性死亡配体1表达的影响

目的：观察中药芪灵合剂对慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血CD4＋T淋巴细胞表面程序性死亡1（Programmed death-1,PD-1）及程序性死亡配体1（Programmed death-1 ligand1,PD-L1）表达水平的影响。方法：收集56例CHB患者随机分为芪灵合剂联合拉米夫定片（LAM）治疗组29例和单用LAM对照组27例,于抗病毒治疗的第0、24、48周用流式细胞术检测外周血CD4＋T淋巴细胞及其表面的PD-1/PD-L1的表达情况。结果：治疗48周后,治疗组患者HBV DNA转阴率、ALT复常率均高于对照组,与对照组比较,HBV DNA转阴率具有统计学意义（P〈0.05）。治疗组患者外周血CD4＋T细胞表面PD-1 24周、48周表达水平与治疗前比较逐渐下降;48周时与本组治疗前比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。治疗组患者CD4＋T细胞PD-L1 48周后表达水平与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：中药芪灵合剂联合LAM能够提高CHB患者HBV DNA转阴率,ALT复常率,其作用机制可能与抑制CD4＋T淋巴细胞表面PD-1/PD-L1的表达有关。     

苦参碱联合干扰素α-2b治疗转氨酶轻度升高慢性乙型肝炎患者的疗效观察

目的观察注射用苦参碱联合重组人干扰素α-2b对转氨酶轻度升高慢性乙型肝炎（CHB）患者的抗病毒疗效,并从细胞免疫学角度探讨其作用机制。方法研究对象为随机选择CHB轻度患者60例,苦参碱联合重组人干扰素α-2b组及重组人干扰素α-2b组各30例,观察治疗1个月ALT、AST及治疗3个月HBeAg定量、HBV DNA载量变化;同时采用流式细胞技术检测外周血淋巴细胞各亚群数量。结果治疗3个月HBV DNA载量、HBeAg定量显著降低,CD3＋T、CD4＋T和CD8＋T细胞计数均显著升高,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论苦参碱联合重组人干扰素α-2b对于CHB转氨酶轻度升高的患者有较好的抗病毒疗效和安全性。     

恩替卡韦治疗后慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面程序性死亡受体1表达与HBeAg血清学转换的关系

目的 动态观察慢性乙型肝炎患者恩替卡韦抗病毒治疗后不同时期外周血T淋巴细胞(简称T细胞)表面程序性死亡受体1(PD-1)表达的变化,并探讨其与HBeAg血清学转换间的关系.方法 对20例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者予以恩替卡韦抗病毒治疗并随访51周,根据HBeAg是否发生血清学转换分为:HBeAg未转换组(14例),HBeAg转换组(6例).分别于治疗前(基线,T0)、治疗2～4周(T1)、治疗5～10周(T2)、治疗11～20周(T3)、治疗21～30周(T4)、治疗31～51周(T5)收集外周血,流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞表面PD-1的表达水平,实时荧光定量PCR检测血清HBV DNA载量,同时检测血清ALT水平.正态分布资料采用独立样本t检验,非正态分布者采用Mann-Whitney U检验比较组间差异,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 治疗前两组患者血清HBV DNA载量分别为(7.54±0.67)log10拷贝/ml、(7.30±0.79)log10拷贝/ml(P＞0.05),ALT水平为(187.26±184.15)U/L、(272.17±215.07)U/L(P＞0.05),外周血CD4+T细胞表面PD-1表达水平为6.04%±3.71%6.77%±2.88%(P＞0.05),CD8+T细胞表面PD-1表达水平为6.39%±3.33%、8.88%±2.84%(P＞0.05).恩替卡韦抗病毒治疗后两组患者血清HBV DNA载量、ALT水平的下降与CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达的下调呈显著正相关(r=0.212,P=0.05;r=0.377,P＜0.01;r=0.279,P＜0.05;r=0.347,P＜0.01).在相同的随访时间段内,HBeAg转换组血清HBV DNA载量、ALT水平及外周血CD4+、CD8+T细胞表面PD-1表达的下降率均高于HBeAg未转换组,且两组间△ T0～T1、△T0～T2期HBV DNA的下降率及△T0～T2、△T0～T3期CD8+T细胞表面PD-1表达的下降率差异有统计学意义(分别为49.9%对比37.3%,56.7%对比47.4%,70.1%对比-4.2%,66.9%对比24.5%,P值均＜0.05).结论 HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者经恩替卡韦抗病毒治疗后,外周血CD8+T细胞表面PD-1表达的快速下调与血清HBV DNA相似,可作为预测后期HBeAg血清学转换的指标之一.

Abstract：

Objective To observe longitudinally the expression of Programmed death 1 (PD-1) on peripheral blood T cells in chronic hepatitis B patients underwent antiviral treatment with entecavir (ETV)and to explore the relationship between PD-1 expression and HBeAg seroconversion.Methods Twenty HBeAg positive patients underwent antiviral treatment with ETV were followed up for 51 weels.14 patients remained HBeAg positive and 6 patients achieved HBeAg seroconversion.Peripheral blood was collected at six time points:T0:baseline,T1:2-4week;T2:5-10week;T3:11-20week;T4:21-30week:T5:31-51week.PD-1 expressions on T cells were assessed by flow cytometry.Serum HBV DNA loads were determined by real-time fluorescent quanttative polymerase chain reaction (PCR) and serum ALT levels were examined at the same time.Results At baseline,serum HBV DNA load of patients without HBeAg seroconversion and with HBeAg seroconversion were (7.54 ± 0.67) log10 copies/ml and (7.30 ± 0.79) log10 copies/ml(P ＞ 0.05),the ALT levels were (187.26 ± 184.15) U/L and (272.17 ± 215.07) U/L (P ＞ 0.05),PD-1 exprissions on CD4+ T cells were 6.04% ± 3.71% and 6.77% ± 2.88% (P ＞ 0.05),PD-1 exprissions on CD8+ T cells were 6.39% ± 3.33% and 8.88% ± 2.84% (P ＞ 0.05).After ETV treatment,serum HBV DNA loads and ALT levels both decreased gradually,which was positively correlated with PD-1 expressions on CD4+ and CD8+ T cells (r = 0.212,P = 0.05;r = 0.377,P ＜ 0.01;r = 0.279,P ＜ 0.05;r = 0.347,P ＜ 0.01 ).During the same monitoring period,the HBV DNA loads,ALT levels and PD-1 expressions on T cells of the patients with HBeAg seroconversion decreased significantly as compared with the patients without HBeAg seroconversion.Besides,the decrease of HBV DNA loads during period △ T0-T1 and △ T0-T2 and PD-1 expressions on CD8+ T cells during period △ T0-T2 and △ T0-T3 were significantly different between these two kinds of patients (49.9% vs 37.3%,P ＜ 0.05;56.7% vs 47.4%,P ＜ 0.05;70.1% vs -4.2%,P ＜ 0.05;66.9% vs 24.5%,P ＜ 0.05).Conclusion The rapid decrease of PD-1 expression on peripheral CD8+ T cells after antiviral treatment with ETV is positvely correlated with the decrease of serum HBV DNA loads and may be used as a predictive index for HBeAg seroconversion in HBeAg positive patients.     

慢性乙肝患者肝组织内CD4+、CD8+和CD25+T淋巴细胞的表达和研究

探讨肝内免疫活性细胞与乙肝病毒（HBV）慢性感染的关系。运用免疫组织化学法分析54例CHB患者肝内CD25^＋T细胞以及部分患者肝内CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞的表达,并与9例正常肝组织进行比较。CD25^＋和CD8^＋T细胞在HBV感染组和非HBV感染组中的表达差异均存在显著性（P〈0．05和P〈0．01）,CIM^＋T细胞在HBV感染组的表达虽有增多的趋势,但统计学上无显著意义（P〉0．05）。HBV感染组CD25^＋T细胞表达与I临床病理炎症分级和ALT的变化相关,随着炎症分级的加重和ALT的升高,其表达逐渐增强（P〈0．05和P〈0．01）。CD4^＋、CD8^＋T细胞表达与临床病理炎症分级和ALT的变化无关（P〉0．05）。CHB患者肝内CD25^＋T细胞表达增强与机体对HBV产生免疫耐受有关,CHB患者肝内CIM^＋、CD8^＋T淋巴细胞的表达异常,功能性免疫活性细胞浸润量不足,不能有效清除HBV。     

外周血T细胞表面PD-1在慢性乙型肝炎患者干扰素治疗期间的表达

目的:观察慢性HBV感染(CHB)免疫清除期PD-1的表达状态以及干扰素抗病毒治疗期间T细胞PD-1的表达,明确免疫清除期CHB患者PD-1表达的临床意义.方法:伴有长期ALT反复升高的CHB患者20例被纳入本研究,所有病例均接受为期6 mo的Peg干扰素(1.5μg/kg)抗病毒治疗,每周1次.应用流式细胞术对所有患者抗病毒治疗不同时间点(0、12、24 wk)的外周血总CD8+T细胞和CD4+T细胞PD-1表达百分比和表达强度进行检测.结果:免疫清除期CHB患者外周血总CD8+T细胞和CD4+T细胞PD-1阳性率和PD-1表达荧光强度均明显高于健康对照组(P<0.05);PEG干扰素治疗早期CD8+T细胞PD-1阳性率呈现明显下降,且CD8+T细胞PD-1表达阳性率同ALT水平和病毒水平均呈现明显正相关(R2=0.22,0.357,P=0.001,0.002).结论:CHB患者外周血T细胞PD-1呈高表达:干扰素治疗诱导的病毒水平下降可导致CD8+T细胞PD-1表达明显下降.     

B7-H1及其受体PD-1在慢性乙型肝炎患者淋巴细胞上的表达及意义

目的研究B7-H1及其受体PD-1在慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞及髓样树突细胞（mDCs）上的表达及它们的表达水平与患者疾病状态的关系。方法流式细胞技术检测正常人和慢性乙型肝炎患者CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞及mDCs上B7-H1和PD-1的表达水平。实时定量PCR检测患者的HBV DNA。结果慢性乙型肝炎患者B7-H1及其受体PD-1的表达水平明显升高,健康对照mDCs、CD4^＋及CD8^＋T淋巴细胞B7-H1的阳性表达率分别为0.35%±0.10%、3.63%±0.70%和1.20%±0.19%,慢性乙型肝炎患者分别为7.88%±1.40%、24.28%±2.86%和10.78%±1.62%,慢性乙型肝炎患者B7-H1在mDCs和T淋巴细胞上的表达水平明显高于健康对照（P值均〈0.05）健康对照CD4^＋及CD8^＋T淋巴细胞PD-1的阳性表达率分别为5.92%±1.75%和5.98%±0.88%,慢性乙型肝炎患者分别为17.76%±2.47%和11.92%±2.21%,慢性乙型肝炎患者PD-1在T淋巴细胞上的表达水平也明显高于健康对照（P值均〈0.05）。且它们的表达与患者的ALT水平及HBV DNA载量呈明显的正相关（P值均〈0.05）。结论慢性乙型肝炎患者淋巴细胞上B7-H1和PD-1的表达水平与患者疾病状态密切相关。     

乙肝患者血清lncRNA NEAT 1表达与HBV-DNA载量、肝功及T淋巴细胞亚群的相关性北大核心CSCD

目的分析乙型肝炎(乙肝)患者血清长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)表达与乙型肝炎病毒(HBV)DNA载量、肝功能及T淋巴细胞亚群的相关性。方法按照血清HBV-DNA低、中、高载量1∶1∶1的比例收集2018年2月-2019年9月山东省千佛山医院诊治的慢性乙肝(CHB)患者324例,其中低、中和高载量组各108例。另取同期HBV携带者108例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清lncRNA NEAT1水平及HBV-DNA载量,采用化学发光法检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,采用流式细胞仪检测外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)细胞水平,计算CD4^(+)/CD8^(+)值。采用Pearson法分析lncRNA NEAT1与血清肝功能指标水平及T淋巴细胞亚群的相关性。结果与对照组比较,低、中、高HBV-DNA载量CHB患者血清lncRNA NEAT1、ALT、AST水平及CD8^(+)细胞比例均显著增加(均P<0.05),CHB患者外周血CD3^(+)、CD4^(+)细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)值均显著降低(均P<0.05)。Pearson分析显示,CHB患者血清lncRNA NEAT1水平与ALT、AST、CD8^(+)细胞比例呈正相关(r分别为0.773、0.761、0.683,均P<0.05),与CD3^(+)、CD4^(+)细胞及CD4^(+)/CD8^(+)值呈负相关(r分别为-0.598、-0.719、-0.770,均P<0.05)。结论CHB患者血清lncRNA NEAT1水平随HBV-DNA载量增加而升高,且与肝功能异常及炎症反应有关,检测血清lncRNA NEAT1可能对CHB患者病情进展及发病机制研究有一定指导价值。     

活动性慢性乙型肝炎患者特异性 CD8＋T 细胞转录因子 T-bet 表达及临床意义

目的：分析转录因子 T-bet 在活动性慢性乙型肝炎患者外周血 HBV 特异性 CD8＋ T 细胞中的表达及其临床意义。方法用 HBV 肽五聚体结合流式细胞仪检测 HLA-A2阳性的活动性慢性乙型肝炎患者和急性乙型肝炎患者外周血 HBV 特异性 CD8＋ T 细胞中 T-bet 的表达。比较分析 HBV 特异性 CD8＋ T 细胞中 T-bet 表达在急性、慢性乙型肝炎之间的差异,并进一步分析慢性乙型肝炎患者 HBV 特异性 CD8＋ T 细胞中 T-bet 表达与 HBV DNA 水平、ALT 水平以及临床预后之间的相关性。结果急性乙型肝炎患者外周血 HBV 特异性 CD8＋ T 细胞中 T-bet 表达水平显著高于活动性慢性乙型肝炎患者。活动性慢性乙型肝炎患者及 CHB 患者外周血 HBV 特异性 CD8＋ T 细胞中 T-bet 表达水平与 HBV DNA 水平及 ALT 水平无明显相关性,HBV 特异性 CD8＋ T 细胞中 T-bet 表达水平高的活动性慢性乙型肝炎患者发生HBeAg 血清转换率显著升高。结论活动性慢性乙型肝炎患者特异性 CD8＋ T 细胞转录因子 T-bet 表达与 HBV 感染的免疫控制密切相关。     

中药辨证干预对慢性乙型肝炎肾虚患者树突状细胞功能影响

目的研究中药辨证干预对慢性乙型肝炎（CHB）肾虚患者外周血树突状细胞（DC）功能的影响。方法 CHB肾虚证患者60例,健康对照组10例,分离各组外周血单个核细胞,体外诱导培养DC,流式细胞仪检测DC表面分子CD80、CD86、CD1a、HLA-DR表达率;酶联免疫吸附检测（ELISA）检测DC培养上清液中细胞因子IL-10表达水平,同时检测CHB患者血清HBV DNA定量并记录中医证候积分。予中药辨证干预治疗3个月,检测患者治疗后外周血DC表面分子CD80、CD86、CD1a、HLA-DR及培养上清中IL-10的表达水平及血清HBV DNA定量,并记录中医证候积分的变化。结果治疗前CHB肾虚证患者CD80、CD86、CD1a、HLA-DR表达率显著低于正常对照组（P〈0.05）,IL-10表达水平显著高于正常对照组（P〈0.05）;治疗后CHB肾虚证患者CD80、CD86、CD1a、HLA-DR表达率明显提高、IL-10表达水平明显降低（P〈0.05）,中医证候积分明显改善（P〈0.05）。结论 CHB肾虚证患者存在DC成熟障碍及功能异常,主要表现为表面共刺激分子表达率下降,抑制因子表达率升高。中药辨证干预不仅能改善患者中医证候积分,同时能提高DC表面共刺激分子表达率,降低抑制因子表达率,提示DC可能与中医虚实病机存在一定相关性。     

PD-1分子对慢性丙型肝炎患者T细胞免疫功能的影响

目的 探讨慢性丙型肝炎患者外周血T细胞表面程序性死亡因子-1（PD-1）分子在T细胞免疫应答中的作用。方法受试对象包括40例慢性丙型肝炎患者,10例非病毒性肝炎的肝病患者,以及20名健康对照。取外周血,采用流式细胞术检测CD4^＋及CD8^＋T细胞上PD-1的表达水平;ELIsA法测定混合淋巴细胞培养上清中IFN—γ及IL-2的浓度。结果慢性丙型肝炎患者外周血CD4^＋及CD8^＋T细胞上PD-1阳性表达率[（38．61±4．35）％、（48．17±5．16）％]明显高于其他肝病患者及健康对照（P〈0．01）。慢性丙型肝炎患者产生Ⅰ型细胞因子的能力明显降低,阻断PD-1共刺激信号途径能够增强患者T细胞分泌I型细胞因子的能力。结论慢性丙型肝炎患者外周血T细胞上PD-1表达水平的升高,可能是导致T淋巴细胞应答能力下降的重要原因。     

CD127在慢性重型乙型肝炎患者外周血T细胞中的表达及意义

目的:研究慢性重型乙型肝炎患者外周血T细胞表面CD127表达水平的变化及与慢性重型乙型肝炎发病的关系。方法:流式细胞术检测30例慢性重型乙型肝炎、20例慢性乙型肝炎(CHB)患者和20例健康志愿者外周血T细胞中CD127的表达,用ELISA方法检测血清中细胞因子IL-7(白细胞介素-7)的表达。结果:慢性重型乙型肝炎组和CHB组CD8+T比例均较健康对照组高(P均<0.01),慢性重型乙型肝炎组CD4+T比例较健康对照组高(P<0.01)。慢性重型乙型肝炎与CHB组CD127+细胞的比例均较健康对照组低(P均<0.05)。慢性重型乙型肝炎组CD4+CD127+双阳性细胞的比例低于CHB组,CHB组又低于健康对照组(P均<0.01);慢性重型乙型肝炎组CD8+CD127+双阳性细胞比例较CHB组和健康对照组低(P均<0.01)。CD8+CD127+细胞的表达与HBV DNA载量呈负相关。慢性重型乙型肝炎组和CHB组血清IL-7含量均较健康对照组高(P均<0.01)。结论:慢性重型乙型肝炎患者外周血中CD4+CD127+、CD8+CD127+细胞表达降低;以CD8+CD127+降低更明显,并与HBV DNA载量呈负相关;血清中IL-7表达增高,可能与慢性重型乙型肝炎的发病有关。     

慢性乙型肝炎患者PB MC中H BV特异性IL-21表达及其对CD8^＋T淋巴细胞功能的影响

目的：探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）中 HBV特异性IL-21的表达及其对CD8＋T淋巴细胞功能的调节作用。方法以 HBVc18-27（10μg/mL）多肽刺激46例不同临床类型慢性乙型肝炎患者PBMC。ELISA检测上清液IL-21水平。在 HBVc18-27（10μg/mL）多肽和IL-21（50 U/mL）或IL-2（100 ng/mL）培养条件下,应用 MHC-肽五聚体结合流式细胞术检测PBMC中 HBV特异性CTL细胞频数变化;免疫磁珠分离纯化免疫耐受期和免疫激活期慢性乙型肝炎患者PBMC中CD8＋T淋巴细胞,以 HBcAg（10μg/mL）预刺激CD8-PBMC 5 h后,采用Transwell 小室共培养技术,在阻断IL-21通路条件下,应用实时PCR检测CD8^＋T淋巴细胞IFN-γmRNA的表达。结果 HBV特异性IL-21在免疫控制期和免疫激活期慢性乙型肝炎患者P B MC中表达水平显著高于免疫耐受期患者,而在免疫控制期和免疫激活期两组之间无显著差异。与 PBS 对照组相比,IL-21组 HBV 特异性 CTL 细胞频数明显增高,差异有统计学意义（P＜0．01）,而与IL-2组相比差异无统计学意义。以IL-21抗体阻断IL-21通路后,CD8^＋T 淋巴细胞IFN-γmRNA 表达水平显著下降,差异有统计学意义。结论免疫控制期和免疫激活期慢性乙型肝炎患者PBMC 均可生成一定水平的 HBV 特异性IL-21,并能增强外周CD8＋T淋巴细胞的增殖和IFN-γ表达水平。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血T细胞PD-1和PD-L1表达水平及意义

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者外周血T淋巴细胞程序性死亡分子-1(PD-1)及其主要配体PD-L1的表达情况。方法在50例乙型肝炎肝硬化患者和25例健康体检者,使用流式细胞仪检测外周血T细胞PD-1和PD-L1表达;采用荧光定量核酸扩增及测序法检测血清HBV DNA载量。结果对照组和肝硬化组外周血T细胞PD-1阳性表达率分别为11.93±1.23%和33.13±3.38%(P<0.05),PD-L1阳性表达率分别为10.59±1.88%和32.47±2.18%(P<0.05);Child-Pugh A级(30.58±2.99%和32.19±1.44%)、B级(34.61±1.43%和33.46±2.58%)和C级(34.2±2.31%和31.76±2.33%)患者外周血T细胞PD-1和PD-L1表达率无显著性相差(P>0.05);在肝硬化患者,T细胞表面PD-l和PD-Ll表达水平与血清HBV DNA载量呈明显正相关(r2=0.8326和:r2=0.643,P<0.05)。结论肝硬化患者外周血T细胞PD-1和PD-L1表达水平明显上调,且与血清HBV DNA载量呈明显正相关,提示T细胞高表达的PD-1可能通过与其配体PD-L1作用而抑制T细胞免疫应答,并导致病毒感染持续。     

The Expression of Programmed Death-1 in Circulating CD4+ and CD8+ T Cells during Hepatitis B Virus Infection Progression and Its Correlation with Clinical Baseline Characteristics

Background/Aims

Programmed death-1 (PD-1) expression was investigated in CD4⁺ and CD8⁺ T cells from hepatitis B virus (HBV)-infected patients at the chronic hepatitis B (CHB) infection, liver cirrhosis (LC), and hepatocellular carcinoma (HCC) stages.

Methods

PD-1 expression in circulating CD4⁺ and CD8⁺ T cells was detected by flow cytometry. The correlations between PD-1 expression and HBV viral load, alanine aminotransaminase (ALT) levels and aspartate aminotransferase (AST) levels were analyzed using GraphPad Prism 5.0.

Results

PD-1 expression in CD4⁺ and CD8⁺ T cells was significantly increased in both the CHB group and advanced-stage group (LC plus HCC). In the CHB group, PD-1 expression in both CD4⁺ and CD8⁺ T cells was positively correlated with the HBV viral load, ALT, and AST levels. However, in the LC plus HCC group, significant correlations between PD-1 expression and the clinical parameters were nearly absent.

Conclusions

PD-1 expression in peripheral CD4⁺ and CD8⁺ T cells is dynamic, changes with HBV infection progression, and is related to HBV viral load and liver function, especially in CHB. PD-1 expression could be utilized as a potential clinical indicator to determine the extent of virus replication and liver injury.     

慢性HBV感染者CD8^＋ T细胞免疫反应的研究

目的观察不同慢性HBV感染者外周血CD8^＋ T细胞的细胞内毒性颗粒和细胞因子的表达水平。方法用rHBcAg作为刺激剂,采用免疫荧光染色结合流式细胞术分析慢性乙型肝炎中度、重度患者以及无症状HBV携带者外周血CD8^＋ T细胞的IFN-γ/IL-4和穿孔素/颗粒酶B表达水平。结果慢性乙型肝炎重度患者CD8^＋T细胞的穿孔素及颗粒酶B百分率显著高于正常对照（P〈0.01）和HBV携带者（P〈0.05,P〈0.01）,中度患者显著高于正常对照（P〈0.05）。2组慢性乙型肝炎IFN-γ＋/CD8^＋ T细胞（Tc1）百分率均高于正常对照和HBV携带者（P〈0.05）。HBV携带者CD8^＋T细胞的穿孔素和颗粒酶B表达以及Tc1百分率与健康对照差异无统计学意义。IL-4^＋/CD8^＋ T细（Tc2）表达各组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 CD8^＋ T细胞中穿孔素/颗粒酶B表达率的增加以及Tc1细胞增加与慢性HBV感染的肝损伤有关。     

不同病毒载量HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群和转化生长因子β的变化及意义

目的通过检测不同病毒载量慢性乙型肝炎(CHB)患者和HBV携带者(ASC)外周血T淋巴细胞各亚群变化的规律,探讨T淋巴细胞与人转化生长因子(TGF)β、ALT及TBil相关性。方法选择2012年7月至2012年12月兰州市第二人民医院收治的175例HBV感染者作为研究对象,分为ASC组(112例)、CHB组(63例),以同期健康体检者84例作为对照组。运用流式细胞术检测3组血清中T淋巴细胞亚群水平,同时检测肝功能指标等。正态分布的计量资料多组间比较采用方差分析,偏态分布的计量资料组间比较采Kruskal-Wallis H秩和检验。结果与健康对照组相比,ASC和CHB组TGFβ表达水平显著升高(P均0.05),CD3+、CD4+T淋巴细胞百分数显著降低(P0.05或P0.01),CD4+与CD8+T淋巴细胞比值显著降低(P0.01),CD8+T淋巴细胞百分数显著升高(P0.05或P0.01)。ASC与CHB组HBeAg阳性组和HBeAg阴性组患者CD3+、CD4+T淋巴细胞百分数均降低,CD8+T淋巴细胞百分数升高,CD4+与CD8+T淋巴细胞百分数降低。结论 TGFβ可能参与了CHB的发病过程,其免疫抑制作用可能是通过对T淋巴细胞、抗原递呈细胞成熟分化的抑制等多个环节发挥作用。     

肝内IFN-γ及其分泌细胞在乙型慢加急性肝衰竭发病机制中的作用

目的通过研究肝内促炎细胞因子IFN-γ的表达及IFN-γ的分泌细胞——T淋巴细胞的数量,以明确二者在乙型慢加急性肝衰竭（acute—on—chronic liver failure,ACLF）发病机制中的作用。方法采用免疫组化方法,分析乙型ACLF患者、慢性乙型肝炎（乙肝）患者及正常对照组肝内IFN-γ的原位表达以及其分泌细胞CD4^＋T淋巴细胞与CD8^＋T淋巴细胞的数量。结果①乙型ACLF患者IFN-γ阳性分泌细胞数均明显高于慢性乙肝患者及正常对照组,差异有统计学意义（P均〈0．001）,慢性乙肝患者IFN-γ阳性分泌细胞数明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．001）;②乙型ACLF患者肝内CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞数量较慢性乙肝及正常对照组明显增加（P均〈0．001）,慢性乙肝患者肝内CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞数量较正常对照组明显增加（P均〈0．001）;③肝内IFN-γ阳性分泌细胞数量与CD4＋T淋巴细胞和CD8^＋T淋巴细胞数量均具有明显的相关性（r=-0．896和0．885,P均〈0．001）。结论乙型ACLF患者肝内CD4^＋T淋巴细胞、CD8^＋T淋巴细胞数量的增加,其分泌的IFN-γ的增加可能参与了ACLF的发病过程。     

急性乙型肝炎患者体内巨细胞病毒特异性CD8 T细胞漂移的研究

目的通过观察急性乙型肝炎发病早期患者体内巨细胞病毒（CMV）CTL的数量和程序性细胞死亡受体1（PD-1）的表达水平,探讨该信号途径对CMVCTL频率和功能的影响。方法合成识别CMVV抗原表位的五聚体,同时采集12例HLA-A2阳性的急性乙型肝炎患者的外周血,用五聚体染色后,通过流式细胞仪分析CMVPP65表位特异性CTL的频率及其表面PD-1分子的表达特点,通过阻断PD-1/PD-L1信号途径的方法,探讨PD-1分子的表达对CMVCTL功能的影响。同时进行肝功能、HBsAg、抗-HBs和血清HBV DNA载量检测。结果急性乙型肝炎发病早期,患者体内CMVCTL的频率显著低于健康对照（P〈0.001）,同时PD-1分子的表达显著升高（P〈0.05）,该分子的上调表达与CMV特异性CD8T细胞的凋亡有关,而且阻断PD-1分子与其配体PD-L1的结合,能够有效恢复CMV特异性CD8T细胞分泌因子IFN-γ的能力。结论急性HBV感染造成异质性病毒CMVCTL的数量减少和功能降低,且免疫抑制性分子PD-1参与并调节了CMVCTL的数量减少和功能的降低,提示在人的病毒感染早期,免疫抑制性信号途径参与的删除前存在的记忆性CD8T细胞会为抵抗新病毒感染的抗原特异性T细胞提供更多的空间。