Treg和Th17在原因不明性复发性流产发病中作用的探讨

目的:探讨原因不明性复发性流产(URSA)患者和正常孕妇间Treg和Th17细胞因子的表达差异。方法:选择URSA患者20例为研究组,正常早孕妇女20例为正常对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测两组蜕膜组织及外周血中Foxp3、ROR-γt、IL-17A及EBi3 mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中IL-17A及IL-35的含量。结果:URSA组蜕膜及外周血中Th17因子(ROR-γt、IL-17A)的表达均显著高于正常对照组(P=0.000),而Treg因子(Foxp3、EBi3)的表达均显著低于正常对照组(P=0.000)。两组蜕膜中各因子表达量均显著高于外周血(P<0.05)。正常孕妇组蜕膜中Foxp3、ROR-γt、EBi3 mRNA的表达与外周血中的表达显著相关(P=0.000、0.007、0.000,r=0.901、0.612、0.943);URSA组仅ROR-γt mRNA在蜕膜及外周血的表达存在相关性(P=0.012),且相关系数不佳(r=0.548<0.75)。URSA组、正常对照组血清中IL-17A含量分别为(16.120±4.155)pg/ml、(5.460±2.036)pg/ml,IL-35含量分别为(11.525±2.262)pg/ml、(31.515±3.473)pg/ml,差异显著。结论:Treg和Th17细胞因子在URSA患者和正常孕妇间存在显著差异,表明Treg和Th17细胞比例失调可能在原因不明性复发性流产的发病中起一定作用。     

蜕膜巨噬细胞TSP-1 IL-10及IFN-γ的表达及其相互关系探讨

目的探讨蜕膜巨噬细胞凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)、白介素-10(IL-10)及干扰素-γ(IFN-γ)的表达。方法对2005年7月至2006年7月在上海交通大学附属仁济医院计划生育门诊要求人工流产的正常妊娠妇女20例(A组)和10例原因不明复发性流产(URSA)患者(B组)检测蜕膜TSP-1mRNA、蜕膜巨噬细胞表面TSP-1的表达及蜕膜巨噬细胞分泌IL-10和IFN-γ的量,并在培养液中加入相应刺激物,观察细胞因子分泌量的变化。结果与A组相比,B组蜕膜TSP-1mRNA表达明显降低(P<0·05)。蜕膜巨噬细胞TSP-1表达水平明显降低(P<0·01)。蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的量显著降低(P<0·05);在培养液中加入各种干预因素对两组病例蜕膜巨噬细胞分泌IFN-γ无显著影响;加入TSP-1后,两组蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的量均增加(P<0·05);加入抗TSP-1后A组蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的量降低(P<0·05)。结论URSA患者蜕膜TSP-1表达下降,且蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的量降低,可能是导致URSA发病的原因。TSP-1可能在调控蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的过程中起重要作用。     

原因不明复发性流产患者蜕膜CD4~+CD25~+CD127~(dim/-) Treg细胞的表达频率和功能研究

目的:探讨原因不明复发性流产(URSA)患者母胎界面免疫耐受环境的变化。方法:留取URSA患者21例(URSA组)和30例正常早孕人流妇女(对照组)蜕膜组织,制备成单个核细胞悬液,流式细胞术分析CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的表达频率;取两组蜕膜单个核细胞悬液各5例,用免疫磁珠分离法分离出CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞,流式细胞术分析CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞内IL-10和TGF-β的表达水平;体外增殖抑制试验分别检测用抗IL-10抗体和抗TGF-β抗体处理的CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞,和未用抗体处理的CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自身效应T细胞增殖的抑制作用。结果:URSA组蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的表达频率明显低于对照组(P=0.005);URSA组蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞内IL-10和TGF-β表达频率均较对照组明显降低(P=0.04,P=0.01);URSA组CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自体效应性T细胞的增殖抑制作用显著低于对照组(P0.05),且抗IL-10抗体和抗TGF-β抗体可部分阻断蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的免疫抑制功能(P均0.05)。结论:URSA患者蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞不仅表达频率降低,而且免疫抑制功能也减弱,且这种免疫抑制功能的减弱主要受IL-10和TGF-β介导,揭示CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对URSA患者蜕膜局部免疫耐受环境产生影响。     

原因不明复发性流产蜕膜CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg细胞对自然杀伤细胞的功能调控

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自然杀伤(NK)细胞的功能调控。方法留取2007年2月至2009年2月上海交通大学医学院仁济医院5例URSA患者(URSA组)和5例正常早孕人流妇女(对照组)蜕膜组织,制备成单个核细胞悬液,用免疫磁珠分离法分离出CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞和NK细胞,将CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞和NK细胞共培养,用LDH释放实验测定共培养后NK细胞毒性变化,FCM法测定共培养后NK细胞胞内IFN-γ、穿孔素(perforin)产生情况。结果共培养后对照组和URSA组NK细胞的毒性均比单独纯化NK细胞的毒性明显降低(P=0.002,P=0.03),URSA组NK细胞毒性较对照组高(P0.001);对照组和URSA组NK细胞内细胞因子INF-γ、perforin的水平分别较单独纯化NK细胞内细胞因子水平明显降低[INF-γ(P=0.001,P=0.02);perforin(P=0.01,P=0.03)],URSA组NK细胞INF-γ、perforin的表达较对照组高(P0.001,P0.001)。结论 CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对NK细胞功能有抑制作用;URSA中Treg细胞免疫抑制功能的下降,是NK细胞的活化异常和毒性增加的原因之一。     

原因不明复发性流产患者巨噬细胞表面TSP1、CD36、CD47的表达及其细胞因子的分泌

目的:探讨巨噬细胞表面分子凝血酶敏感蛋白1(TSP1)、CD36、CD47及其分泌细胞因子IL-10和IFN-γ与原因不明复发性流产发病的关系。方法:采用流式细胞技术检测10例原因不明复发性流产患者和20例正常早孕妇女外周血及蜕膜巨噬细胞表面TSP1、CD36、CD47的表达;同时用ELISPOT法检测两组外周血及蜕膜分泌IL-10和IFN-γ的巨噬细胞数。结果:原因不明复发性流产患者外周血巨噬细胞TSP1、CD36、CD47表达水平及其分泌IL-10和IFN-γ的细胞数与正常早孕妇女均无统计学差异。与正常早孕妇女比较,原因不明复发性流产患者蜕膜巨噬细胞CD36表达水平明显升高(P<0.01),TSP1表达水平明显降低(P<0.01),CD47表达水平无明显差异(P>0.05)。蜕膜组织分泌IL-10的巨噬细胞数显著降低(P<0.05),而分泌IFN-γ的巨噬细胞数量无明显差异。结论:蜕膜巨噬细胞在维持正常妊娠免疫耐受和导致原因不明复发性流产发病中起重要作用。     

胸腺基质淋巴细胞生成素及相关因子在原因不明复发性流产中的表达

目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法:建立研究组自然流产小鼠模型(CBA/J×DBA/2)和对照组正常妊娠小鼠模型(CBA/J×Balb/c),采用免疫印迹(Western Blot)方法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测绒毛、蜕膜组织中TSLP的表达;采用酶联免疫吸附双抗体夹心(ELISA)方法检测外周血TSLP、细胞因子白介素-4(IL-4)及干扰素-γ(IFN-γ)的表达;采用流式细胞仪检测调节性T细胞(Treg)表面FoxP3的表达。结果:RT-PCR法检测自然流产模型组绒毛组织中TSLP的表达低于正常妊娠模型组(P<0.05);Western Blot法分析显示自然流产模型组绒毛、蜕膜组织中TSLP的表达低于正常妊娠模型组(P<0.05);ELISA法检测自然流产模型组血清中TSLP、IL-4的表达低于正常妊娠模型组(P<0.05),而IFN-γ的表达较正常妊娠模型组未见明显增高(P>0.05);流式细胞仪检测自然流产模型组CD4+CD25+Treg和FoxP3的表达明显低于正常妊娠模型组(P<0.05)。结论:TSLP明显降低,可能是导致URSA患者母胎界面免疫耐受异常的重要原因。     

外周血叉头框蛋白P3的表达与原因不明复发性流产关系的研究

目的:探讨外周血叉头框蛋白P3(Foxp3)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法:选择2018年5月至2020年5月于本院进行治疗的126例URSA患者作为URSA组,选择同期于本院进行产前检查的82例健康孕妇作为对照组。比较两组的一般资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Foxp3的mRNA表达;多因素Logisitic回归分析影响URSA发生的相关因素;Pearson相关性分析外周血Foxp3水平与导致URSA发生的危险因素的相关性;流式细胞术检测Foxp3对Th17/Treg平衡的调控作用;ROC曲线分析Foxp3水平对发生URSA的预测价值,并评价其准确度和有效性。结果:两组的孕酮、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-17、转化生长因子-β(TGF-β)、Foxp3、Th17、Treg、Th17/Treg差异均有统计学意义(P0.05)。孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平及IL-6、IL-17、Th17水平、Th17/Treg比值均是影响URSA发生的独立危险因素(OR1,P0.05)。Foxp3分别与孕酮、IL-10、TGF-β、Treg呈显著正相关(r0,P0.05),与IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg呈显著负相关(r0,P0.05);Foxp3刺激CD4~+T细胞12小时和24小时能够显著降低Th17细胞比例和Th17/Treg比值,增加Treg细胞比例。ROC曲线分析Foxp3预测URSA发生的曲线下面积为0.795,准确度和有效性较好。结论:孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平降低及IL-6、IL-17、Th17水平及Th17/Treg比值增加均可能导致URSA的发生风险增加,Foxp3对Th17/Treg平衡具有调控作用。     

调节性T细胞和Notch1信号通路在原因不明复发性自然流产中的作用

目的探讨调节性T细胞(Treg)和Notch1信号通路在原因不明复发性自然流产(URSA)中的作用。方法流式细胞仪检测URSA患者(URSA组)及正常妊娠妇女(对照组)蜕膜CD4~+CD25~+T细胞Treg表达比例,real time RT-PCR及Western blotting检测蜕膜中CD4~+T细胞中Notch1信号通路和叉头转录因子家族3(Foxp3)表达情况。结果 URSA组CD4~+CD25~+T细胞/淋巴细胞、CD4~+Foxp3~+T细胞/淋巴细胞和CD4~+Foxp3~+T细胞/CD4~+T细胞比例均低于对照组(P0.05)。URSA组CD4~+T细胞中Notch1-Ic、RBPJκ、Foxp3 m RNA及蛋白表达均低于对照组。结论 URSA患者蜕膜CD4~+T细胞中Notch1信号通路和Foxp3表达下调,CD4~+CD25~+T细胞表达比例下降,提示URSA患者Notch1信号通路和Foxp3表达下调可能阻碍CD4~+T细胞转化为CD4~+CD25~+T细胞,进而诱发免疫排斥,诱导流产。     

原因不明复发性流产患者调节性T淋巴细胞对树突状细胞的调控作用

目的 探讨原因不明复发性流产(URSA)患者外周血和蜕膜组织中CD+4CD+25调节性T淋巴细胞(Tr细胞)对树突状细胞(DC)的调控作用.方法 采集4例URSA患者(流产组)和4例正常早孕妇女(对照组)的外周血和蜕膜组织,密度梯度离心法、免疫磁珠分离法分选出Tr细胞和DC,培养6 d,培养方法分为DC单独培养和Tr细胞与Dc混合培养.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两种方法培养的细胞培养上清液中辅助性T淋巴细胞(Th)1型细胞因子--γ干扰素(IFN-γ)的Th2型细胞因子--白细胞介素10(IL-10)的蛋白含量.结果 (1)外周血:流产组细胞混合培养和单独培养后,细胞培养上清液中IFN-γ蛋白含量为(22.5±3.0)、(23.2±0.7)ng/L,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-10蛋白含量分别为(35±4)、(37±7)ng/L,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05).对照组细胞混合培养和单独培养后,IFN-γ蛋白含量为(36±1.1)、(30.5±4.0)ns/L,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-10蛋白含量分别为(36±9)、(54±20)ng/L,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)蜕膜组织:流产组细胞混合培养和单独培养后,IFN-γ蛋白含量分别为(24.4±2.5)、(23.4±2.6)ng/L,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);IL-10蛋白含量分别为(25±5)、(28±7)ng/L,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05);对照组细胞混合培养后,IFN-γ蛋白含量为(22.6±3.8)ng/L,明显低于单独培养后的(30.7±4.6)ng/L,差异有统计学意义(P<0.01);对照组细胞混合培养后,IL-10蛋白含量为(31±9)ng/L,明显高于单独培养后的(27±6)ng/L,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 URSA患者Tr细胞抑制性免疫功能下降,从而导致对DC调控失常,Th1/Th2平衡失调和母胎免疫耐受异常.     

记忆滤泡性辅助T细胞细胞与原因不明复发性流产的关联研究

目的 探讨原因不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)的发生与记忆滤泡性辅助T(memory Tfh)细胞表达异常是否存在关联.方法 收集15例染色体正常的URSA为流产组,并以15例正常人工流产患者为正常对照组.分离所有患者外周血单个核细胞及蜕膜组织免疫细胞,用流式细胞术(FCM)检测上述细胞中CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1 +memory Tfh细胞水平.结果 流产组蜕膜局部CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1 +memory Tfh细胞水平显著高于正常对照组(P＜0.05).流产组外周血CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1 +memory Tfh细胞水平与正常对照组无明显差异(P＞0.05).结论 早孕妇女蜕膜局部memory Tfh细胞数量增多可能与URSA发生有关,母-胎界面的免疫异常可能导致URSA的发生.     

记忆滤泡性辅助T细胞与原因不明复发性流产的关联研究

目的探讨原因不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)的发生与记忆滤泡性辅助T(memory Tfh)细胞表达异常是否存在关联。方法收集15例染色体正常的URSA为流产组,并以15例正常人工流产患者为正常对照组。分离所有患者外周血单个核细胞及蜕膜组织免疫细胞,用流式细胞术(FCM)检测上述细胞中CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1+memory Tfh细胞水平。结果流产组蜕膜局部CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1+memory Tfh细胞水平显著高于正常对照组(P0.05)。流产组外周血CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1+memory Tfh细胞水平与正常对照组无明显差异(P0.05)。结论早孕妇女蜕膜局部memory Tfh细胞数量增多可能与URSA发生有关,母-胎界面的免疫异常可能导致URSA的发生。     

原因不明复发性流产患者蜕膜IL-27、IL-23的表达及其意义

目的 探讨原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜组织IL-27、IL-23基因和蛋白的表达。方法 采集青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院2010年8月至2011年8月就诊的15例URSA患者和30例正常妊娠早孕妇女的蜕膜,分别应用实时荧光定量RT-PCR方法和Western blotting方法检测蜕膜组织IL-27及IL-23基因和蛋白的表达水平。结果与正常早孕妇女相比,URSA患者蜕膜IL-27基因(0.09±0.02 vs.0.38±0.08,P<0.05)及蛋白(0.46±0.12 vs.0.89±0.19,P<0.05)表达明显降低,IL-23基因(0.26±0.09 vs.0.16±0.06,P<0.05)及蛋白(0.47±0.08 vs.0.19±0.05,P<0.05)表达明显增高。结论 IL-27、IL-23可能在早期妊娠中发挥重要的调控作用,其表达失调可能与URSA发病密切相关。     

原因不明复发性流产与蜕膜CD4~+ CD25~+ T调节细胞和CD8~+ CD28~- T细胞的关系

目的:探讨原因不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)与蜕膜CD4+ CD25+ T细胞和CD8+ CD28-T细胞的关系。方法:采用流式细胞四色荧光法,检测原因不明复发性流产17例(URSA组)和正常早孕人流20例(对照组)的蜕膜CD4+ CD25+ T细胞及其FoxP3(+)表达,CD8+ CD28- T细胞及其表面CD95、CD95L表达。结果:两组蜕膜中CD4+ CD25+ T细胞比例无明显差异(P>0.05),URSA组蜕膜CD4+ CD25+ T细胞中FoxP3阳性率明显低于对照组(P<0.0001)。两组蜕膜CD8+ CD28- T细胞比例及其细胞表面CD95和CD95L的阳性表达率均无明显差异(P>0.05);结论:蜕膜CD4+ CD25+ FoxP3(+)T调节细胞明显减少,是导致URSA患者母胎界面免疫耐受异常的重要原因。     

原因不明复发性流产患者与正常早孕妇女蜕膜活化和抑制分子的比较

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者和正常妊娠妇女蜕膜活化和抑制分子的变化。方法2003年3月至2005年2月采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上海仁济医院25例URSA患者与32例正常妊娠妇女蜕膜组织CTLA-4、GITR、CD69、CD40L、OX40 mRNA的表达。结果URSA患者蜕膜组织CD69、CD40L、OX40 mRNA的表达较正常妊娠患者显著升高,CTLA-4、GITR mRNA的表达显著降低。结论UR-SA患者蜕膜局部的免疫环境失调,活化分子表达增强、抑制因子表达下调,可能影响了CD4 CD25 调节性T细胞的分化,导致母胎耐受形成障碍,介导了URSA的发生。     

C型凝集素受体和Toll样受体在原因不明复发性流产患者蜕膜中的表达

目的:研究原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜中树突细胞(DC)特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素因子(DC-SIGN)和甘露糖受体(MR)及Toll样受体2(TLR-2)和TLR-4的表达情况。方法:采集URSA患者及正常妊娠人工流产妇女(对照组)的新鲜蜕膜。采用免疫组化和Western blot法检测蜕膜中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4蛋白表达,RT-PCR检测蜕膜中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4 mRNA表达;流式细胞检测蜕膜中DC表面表达DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的水平。结果:与对照组比较,URSA组蜕膜中及DC表面的TLR-2和TLR-4表达水平明显升高(P0.05,P0.01),DCSIGN表达水平明显降低(P0.01)。两组的MR表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:相对于正常妊娠妇女,URSA患者蜕膜中及树突细胞表面的C型凝集素受体(CLRs)弱势表达,而TLRs优势表达。CLRs与TLRs之间的免疫平衡失调可能是URSA发病机制中的重要因素之一。     

负载HPV16 E7~(44-62)多肽的脐血DC-CIK细胞抗宫颈癌的免疫效应研究

目的:探讨HPV16 E7~(44-62)多肽对脐血DC-CIK细胞分化和功能调节,以及其对宫颈癌CaSki细胞的体外杀伤效应。方法:采集脐血单个核细胞在体外诱导成DC和CIK细胞,HPV16 E7~(44-62)多肽负载DC与CIK细胞以细胞比1∶5共同培养。流式细胞术(FCM)分析细胞表型。RT-qPCR及Western blot法检测T-bet、GATA-3及Foxp3表达水平。ELISA法检测共培养前后CIK细胞上清液中IFN-γ、IL-12、IL-10水平。CCK-8法检测体外DC-CIK细胞抗宫颈癌Caski细胞的细胞毒杀伤效应。结果:DC及CIK细胞体外诱导成功。共培养6天,HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组的CD3+CD56+、CD3+CD8+、CD3+CD4+细胞比例明显高于DC-CIK组及CIK组(P0.05),DC-CIK组较CIK组高(P0.05);HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组的CD4+CD25+(Treg)阳性率明显低于DC-CIK组及CIK组(P0.05)。HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组的T细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3表达与DC-CIK组及CIK组比较,差异有统计学意义(P0.05),其中T-bet表达最高,而GATA-3和Foxp3表达最低。HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组细胞上清液中IFN-γ、IL-12、IL-10与其余两组比较,差异有统计学意义(P0.05),IFN-γ、IL-12表达最高,IL-10表达最低。在各效靶比下,HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组对宫颈癌CaSki细胞杀伤率最高(P0.05)。结论:负载HPV16 E7~(44-62)多肽的DC可增强同源CIK细胞体外抗宫颈癌的免疫作用,本研究为宫颈癌DC-CIK细胞免疫治疗提供新的致敏方法。     

原因不明复发性流产患者外周血及蜕膜组织中CD+4CD+25调节性T细胞比例的变化

目的 探讨原因不明复发性流产(URSA)患者外周血及蜕膜组织中CD+4CD+25调节性T(Tr)细胞比例的变化.方法 采用双荧光标记流式细胞分析技术检测25例URSA患者(流产组)、34例正常早孕妇女(正常妊娠组)和22例正常非孕妇女(正常非孕组)外周血及蜕膜组织中CD+4CD+25Tr细胞的比例.结果 (1)流产组和正常妊娠组妇女外周血CD+4 CDbright25T细胞的比例[分别为(1.55±0.77)%、(2.65±1.10)%]均显著高于正常非孕组妇女[(0.39±0.14)%],分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);流产组妇女外周血CD+4 CDbright25T细胞的比例显著低于正常妊娠组妇女,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)流产组妇女蜕膜组织中CD+4 CDbright25T细胞比例[(0.59±0.23)%]显著低于正常妊娠组妇女[(1.24±0.55)%],两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).流产组妇女蜕膜组织中CD+4CDdim25T细胞比例[(4.23±1.52)%]与正常妊娠组[(3.75±1.88)%]比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)正常妊娠组妇女蜕膜组织中CD+4CDbright25T细胞占CD+4T细胞的比例(CD+4CDbright25/CD+4)为(13.10±10.25)%,显著高于外周血[(5.59±2.62)%],两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);流产组患者蜕膜组织中CD+4CDbright25/CD+4比例[(5.16±2.83)%]与外周血[(4.64±2.07)%]比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 CD+4CD+25Tr细胞数量在早孕期显著升高,参与了正常妊娠的维持,有可能是调控母-胎界面局部免疫耐受形成的一个重要因素;CD+4 CD+25Tr细胞数量的减少可能与URSA的发生有关.     

IL-10对人早孕蜕膜基质细胞的细胞因子信号抑制因子(SOCSs)基因表达的调控作用

目的:研究细胞因子信号抑制因子SOCS1、SOCS2、SOCS3基因在正常人早孕蜕膜基质细胞的表达及其意义。方法:体外分离培养人早孕蜕膜基质细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting法检测SOCS表达,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测细胞IL-10、IFN-γ的分泌。结果:无血清培养蜕膜基质细胞未见SOCS1表达,但表达SOCS2、SOCS3;细胞培养14h所分泌的IL-10高于细胞培养2h时的水平(P<0.05),IFN-γ分泌则无明显变化(P>0.05);IL-10(0.1ng/ml)作用蜕膜基质细胞14h内,不同程度上调SOCS2、SOCS3表达。结论:人早孕蜕膜基质细胞自分泌、旁分泌的IL-10可能诱导细胞SOCS2、SOCS3的表达。     

白介素β1及凝血酶降低孕早期蜕膜细胞同源框A10基因的表达

目的:探讨炎症及出血导致流产的作用机制。方法:选择复发性流产(RSA)及正常妊娠孕6~10周的蜕膜组织各10例,并在体外分离培养正常妊娠的蜕膜细胞,加入雌、孕激素、白介素β1(IL-β1)及凝血酶处理后,用实时荧光定量RT-PCR及Western blotting检测RSA患者、正常妊娠者蜕膜组织及培养处理的各组蜕膜细胞内的同源框A10(HOXA10)的表达情况。结果:1HOX A10基因在孕早期蜕膜细胞中有表达;与正常妊娠者相比,RAS患者蜕膜组织HOXA10的表达明显下降(P0.05)。2雌、孕激素处理组的蜕膜细胞HOXA10 mRNA的表达显著增加(P0.05),是未处理组的9.5倍。3进一步加入IL-β1或凝血酶后,HOXA10 mRNA表达显著下降(P0.05);与雌、孕激素组相比,分别下降89.5%和74.9%。结论:1 HOXA10基因在孕早期蜕膜细胞中有显著表达,在RAS患者中的表达显著下降。2雌、孕激素促进HOXA10的表达,而IL-β1及凝血酶抑制HOXA10的表达。     

Th17/Treg平衡与正常妊娠及子痫前期关系的研究

目的:探讨Th17及CD4+CD25+Foxp3+调节性T(regulatory T,Treg)细胞介导的免疫反应在子痫前期发病中的作用。方法:选取在山东大学齐鲁医院进行产前检查的子痫前期患者25例及正常晚孕期妇女27例,并选取育龄期健康未孕妇女20例。利用流式细胞技术检测3组患者血样中分泌IL-17的Th17及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞亚群占CD4+T淋巴细胞的百分比,并计算Th17/Treg比率,比较其在子痫前期与正常妊娠时的变化;再用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3组患者外周血中IL-17、IL-10、TGF-β1等细胞因子的表达并进行比较。结果:(1)与正常未孕组及正常妊娠组相比,子痫前期患者外周血中分泌IL-17的Th17细胞占CD4+T淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01),CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞百分比明显降低(P<0.01);与正常未孕组相比,正常妊娠组Th17细胞的比例明显降低(P<0.01),Treg细胞比例明显升高(P<0.05);(2)子痫前期患者外周血中Th17/Treg比率明显高于正常未孕组及正常妊娠组(P<0.01),正常妊娠组外周血中Th17/Treg比率与健康未孕组相比明显降低(P<0.01);(3)子痫前期患者外周血中IL-17及TGF-β1的TGF-β1表达明显高于正常未孕组及正常妊娠组(P<0.05),而IL-10的表达未见明显差异(P>0.05);与正常未孕组相比,正常妊娠组外周血中IL-17、IL-10及TGF-β1的水平均未见明显变化(P>0.05)。结论:正常妊娠可能依赖于Treg细胞介导的免疫耐受状态,子痫前期患者外周血中Th17/Treg之间的平衡失调而倾向于Th17介导的促炎状态,这一机制可能参与了子痫前期的发生发展。