慢性肺心病肺动脉高压患者血红素氧合酶/一氧化碳水平变化的观察

目的探讨慢性肺心病肺动脉高压患者中血红素氧合酶(HO)-1和内源性一氧化碳(CO)的变化.方法选择20例心超肺动脉压力高于30mmHg的肺心病患者作为治疗组,在急性发作期治疗前后分别用分光光度法测定HO-1和HbCO,并和正常人群进行比较.结果慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺心病患者急性发作期HO-1、HbCO为(0.167±0.032)A、(5J15±0.921)%,病情稳定两周后复查为(0J15±0.046)A、(4.269±1.317)%,两者相比差别有显著性意义(P<0.01).同时病情稳定期为(0.049±0.124)A、(1.211±0.477)%,亦明显高于正常人群(P<0.001).治疗前血液H0-1、HbCO浓度与肺动脉压力呈正相关(r=0.903和0.918,P＜0.001).结论COPD肺心病患者血HO-1、HbCO明显高于正常人群,并与肺动脉压呈正相关.提示血红素氧合酶/一氧化碳体系可能参与了机体对缺氧条件下肺血管重构的自身调节.     

诱导型血红素氧合酶/一氧化碳体系对呼吸系统疾病作用的研究进展

血红素氧合酶(Heme oxygenase,HO)是血红素代谢的起始酶和限速酶。HO分解血红素所产生的一氧化碳(car-bon monoxide,CO)是内源性CO的主要来源。研究已经证实,HO存在三种同功酶[1]:HO-1、HO-2、HO-3。HO-1为诱导型,HO-2及HO-3为结构型,通常不被诱导。HO-1是一种热休克蛋白,正常情况下,主要存在于血细胞代谢活跃的组织器官如脾、肝、肺、肾、骨髓等,以脾脏的活性最高,约为肝脏的10倍。HO-1的生成可被血红素、内毒素、热休克、缺血、谷胱苷肽还原酶缺失、紫外线辐射、低氧、氧中毒和细胞转运障碍及炎性细胞因子等多种因素所诱导。本…     

慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞形态的影响

目的 探讨慢性缺氧引起缺氧性肺血管收缩反应降低的机制。方法 采用计算机成像及图像分析系统，观察慢性缺氧培养的大鼠肺内动脉平滑肌细胞形态学变化的情况。结果 慢性缺氧后肺动脉平滑肌细胞中缺氧敏感型细胞的比例明显减小，中间混合型细胞比例明显增高，而缺氧不敏感型细胞的比例不变(P＜0．05)。结论 慢性缺氧可直接使肺动脉平滑肌细胞表型转化，由缺氧敏感细胞向中间混合型细胞转化。这可能是慢性缺氧时缺氧性肺血管收缩反应降低的机制之一。     

缺氧时肺内肺动脉胶原含量的变化

目的：研究缺氧时肺内肺动脉胶原含量的变化。方法：将Wistar大鼠随机分为对照组和缺氧组，采用免疫组织化学方法测定两组大鼠肺内肺动脉I型胶原的含量。结果：缺氧时肺内大、中、小型肺动脉中I型胶原表达与对照组比较明显增加（t值分别为7．43，16．79，9．23，P＜0．01）。结论：缺氧时肺内肺动脉胶原含量增加。     

内源性一氧化碳/血红素氧合酶系统对慢性低氧大鼠脑损伤的影响

近几年来，有多项动物研究发现，内源性一氧化碳(CO)／血红素氧合酶(HO)系统在缺血缺氧性脑损伤过程中有过度升高，提示该系统在缺血缺氧性脑损伤中具有潜在的病理生理意义。本研究的目的是建立低氧模型，了解慢性间断低氧对大鼠脑神经元和微血管的影响，研究HO抑制剂锌原卟啉-9(ZnPP-IX，以下简称ZnPP)对低氧鼠脑的影响，初步探讨内源性CO／HO对慢性间断低氧大鼠脑的作用。     

血红素氧合酶-1/一氧化碳系统与急性肺损伤

血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)系统在多种应激状态下诱导产生,通过抗氧化、抗炎、抗凋亡等机制发挥组织器官保护作用,基因治疗、药物诱导HO-1高表达或外源性CO可能成为治疗多种疾病的新途径。本文就HO-1/CO系统的产生、调控及在急性肺损伤中的表达和作用简要综述。     

血红素氧合酶-1对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)增殖的影响。方法大鼠主动脉平滑肌细胞株经复苏、传代培养后用于实验,设置空白对照组、HO-1诱导组、HO-1抑制组,后两组分别加用血晶素、锌原卟啉Ⅸ与细胞共同孵育,用Western blot法检测HO-1表达量,并检测HO-1活力;用MTT法检测RASMC增殖能力。同时,还观察了血晶素、锌原卟啉Ⅸ的细胞毒性作用。结果上调HO-1蛋白表达及升高HO-1活力能显著抑制血清刺激的RASMC增殖,反之,抑制HO-1蛋白表达及其活力则增强血清刺激的RASMC增殖。实验浓度的血晶素、锌原卟啉Ⅸ无明显细胞毒性作用。结论 HO-1蛋白高表达能有效抑制RASMC增殖。     

低氧肺动脉高压时血红素氧合酶基因表达状况的研究

目的 探讨血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)基因在低氧肺动脉高压大鼠肺动脉组织中的表达及一氧化碳(carbon monoxide,CO)对其的影响.方法 60只Wistar大鼠随机分为5组:常氧组;低氧肺动脉高压组;血晶素组;锡原卟啉组;低浓度CO组(n=12).采用紫外分光光度计、逆转录-聚合酶链反应、免疫组织化学染色和原位杂交进行检测.结果 ①HO-1活性:低氧组、血晶素组、低浓度CO组肺动脉组织HO-1活性以胆红素生成量计算,均升高,其中血晶素组最高,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01).②逆转录-聚合酶链反应:各组大鼠肺动脉HO-2 mRNA表达没有明显变化,均保持稳定.缺氧组、血晶素组、锡原卟啉组和低浓CO组HO-1 mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加深2～3级,低浓度CO组肺动脉外、中、内膜细胞质均明显加深4级.处理前后HO-2的染色变化不大.结论 低氧肺动脉高压时,肺动脉组织HO-1基因的表达升高,可能在肺动脉高压的发生和发展中起一定作用. mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加深2～3级,低浓度CO组肺动脉外、中、内膜细胞质 明显加深4级.处理前后HO-2的染色变化不大.结论 低氧肺动脉高压时,肺动脉组织HO-1基因的表达升高,可能在肺动脉高压的发生和发展中起一定作用. mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加     

心脉隆对肺动脉平滑肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究心脉隆(XML)注射液对人源性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)缺氧损伤的保护作用,探讨XML降低肺动脉高压(PAH)的可能机制?方法:利用Na2S2O4建立缺氧模拟肺动脉高压细胞缺氧模型,流式细胞术观察缺氧刺激下细胞凋亡率,实时定量PCR检测凋亡相关基因表达,采用激光共聚焦法检测细胞膜电位?胞浆钙离子的表达变化?结果:在缺氧情况下,与对照组比较,PASMCs 增殖显著,Bcl-2基因表达增高,Bax表达下调,具有显著性差异(P < 0.05)?而XML能显著抑制缺氧过程中Bcl-2基因表达上调及Bax基因表达的下调,差异具有统计学意义(P < 0.05)?此外,XML能稳定细胞膜电位和降低胞浆钙浓度,抑制缺氧诱导的PASMCs增殖?结论:XML可减轻因缺氧引发的PASMCs凋亡减少而导致的平滑肌增殖重塑,为XML用于临床肺动脉高压的治疗提供实验依据?     

血红素氧合酶-1/一氧化碳系统修复组织器官损伤的研究概况

血红素氧合酶（heme oxygenase，HO）降解血红素产生一氧化碳（carbon monoxide，CO）、胆绿素（biliverdin）和铁离子（iron）。胆绿素再经胆绿素还原酶作用生成胆红素，而铁离子诱导铁蛋白的合成。CO是继一氧化氮（NO）之后发现的另一种具有重要生理作用的气体分子，具有调节血管张力、抑制血管平滑肌细胞增殖、抑制血小板聚集等效应；胆绿素和铁蛋白具有抗氧化和细胞保护作用。HO／CO系统参与体内许多生理和病理过程的调节，尤其具有组织器官的保护作用。     

异搏定对缺氧和缩血管物质促肺动脉平滑肌细胞增生的影响

采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、结晶紫染色以及ＰＣＮＡ免疫细胞化学方法观察异搏定对缺氧和４种缩血管物质促肺动脉平滑肌细胞增生的影响。结果发现：①４种缩血管物质（ＥＴ－１、ＡＴⅡ,Ａ２３１７８、ＫＣ１）均有不同程度的促肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ合成的作用,其作用可被Ｃａ＾２＋通道阻滞剂异搏定阻断;③缺氧所致ＰＡＳＭＣ增殖的３项指标变化同样可被异搏定阻断。表明〖（Ｃａ＾２＋〗ｉ升高可能为缩血管物质引     

缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞Akt mRNA表达的变化

目的通过观察缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC）3种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（Akt1、Akt2、AkG）mRNA的表达水平变化,初步探讨Akt信号途径在缺氧肺动脉高压（hypoxia pulmonary hypertension,HPH）血管重建中的作用。方法组织贴片法建立纯PASMC细胞系。采用半定量RT-PCR技术检测常氧组（N组）、低氧2、8、12、24组的Akt1、Akt2和AkG基因mRNA的表达水平。结果建立了纯PASMC细胞系。各组均检测出Akt1、Akt2和AkG基因的mRNA,图像定量分析光值显示各组表达的mRNA含量与缺氧时限存在一定的关系。结论Akt信号通路可能是大鼠缺氧肺动脉高压中PASMC增殖和分化的重要传导途径,其中Akt1可能起主要作用。     

一氧化碳对大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]、cAMP、cGMP的作用

目的 观察低密度一氧化碳（ＣＯ）对大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）的作用。方法 应用细胞培养,ｏｗｒｙ法测量蛋白质含量,Ｆｕｒａ－２荧光批示剂测ＰＡＳＭＣ的人钙浓度（〖Ｃａ＾２＋〗,放射免疫ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ药盒测ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度。结果 （１（缺氧组ＰＡＳＭＣ内质网扩张,胞浆内出现髓鞘样结构,线粒体肿胀、空泡化。低浓度ＣＯ组ＰＡＳＭＣ的损害减轻、仅线粒体稍肿大,部分内质网有扩张。（２）缺氧     

活性氧对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制

目的 研究和探讨缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)内活性氧(reactive oxygen species,ROs)对细胞凋亡的影响及其调控机制.方法 原代培养正常大鼠PASMCs,选用第2～4代用于实验.分别在常氧及低氧条件下使用ROS清除剂Tiron进行分组干预.通过四唑硝基蓝(NBT)还原法、2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内ROS水平,原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 ①缺氧组细胞ROS水平[NBT:(0.214±0.024),DCFH-DA:(39.33±3.27)]明显高于对照组[NBT:(0.114±0.017),DCFH-DA:(15.84±2.86)](均P<0.01);②缺氧组细胞凋亡指数(2.42±0.74)显著低于对照组(4.50±0.45)(P<0.01),Tiron+缺氧组细胞的凋亡指数(5.75±0.94)与缺氧组比较则明显升高(P<0.01);③与对照组[Bcl-2:(0.098±0.017),Bax:(0.210±0.031),Bcl-2/Bax:(0.465±0.021)]相比较,缺氧组Bcl-2蛋白表达(0.141±0.024)增强(P<0.05),Bax蛋白表达(0.074±0.020)减弱(P<0.05),Bcl-2/Bax比值(1.973±0.283)升高(P<0.01);④和缺氧组比较,缺氧+Tiron组Bcl-2蛋白表达(0.124±0.018)降低(P<0.05),同时Bax蛋白表达(0.182±0.019)增强(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(0.678±0.071)(P<0.01).结论 缺氧状态时大鼠PAsMCs内ROS生成增多,ROS可通过促进Bcl-2/Bax蛋白表达比值升高来抑制PASMCs凋亡,从而在缺氧性肺动脉重建的发病机制中发挥重要作用.     

衰老和缺氧对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法 将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组。应用MTT比色法、^3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果 同年轻组比较，老年组PASMCs的生长曲线明显抬高，^3H-TdR掺入明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，增殖细胞核抗原(PCNA)增加；同常氧组比较，缺氧组PASMCs的生长曲线明显抬高。^3H-TdR掺入先受抑制，后明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，PCNA增加。结论 衰老和缺氧部能直接刺激平滑肌细胞的增殖．衰老的平滑肌细胞受缺氧刺激增殖最为明显。     

肝素对内皮细胞缺氧的条件培养基致肺动脉平滑肌细胞增生 …

本研究用细胞培养，结晶紫染色方法，观察肝素对内皮细胞缺氧的条件培养基致肺动脉平滑肌细胞增生的影响，发现肺动脉内皮细胞缺氧２４小时后收集的培养基可刺激平滑肌细胞，使结晶紫染色的ＯＤ增加，而在其中加入肝素可抑制这种促增生作用，其ＯＤ值明显降低，并且随肝浓度升高，这种抑制增生作用亦加强。     

原代大鼠肺动脉平滑肌细胞的提取和鉴定以及缺氧对其增殖的影响

目的提取SD大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）并原代培养,为研究肺血管疾病提供体外模型,研究缺氧对大鼠PASMCs增殖的影响。方法组织贴壁法分离大鼠PASMCs,光镜观察细胞形态、透射电镜、α肌动蛋白（α-SM-actin）细胞免疫化学和细胞免疫荧光法进行鉴定。原代培养的PASMCs分别于常氧和/或低氧下培养2、6、12、24及48 h,用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和增殖细胞核抗原（PCNA）细胞免疫化学法检测细胞增殖情况。结果光镜下PASMCs细胞为长梭形,呈典型的＂峰-谷＂状结构。免疫学检测显示胞浆被染成棕黄色,阳性率达96%以上。透射电镜下细胞呈长梭形,胞浆内有密斑、密体和大量肌丝,细胞器较少。MTT检测结果示各时间点缺氧组PASMCs吸光度（A值）均高于相对应的常氧组;与常氧组比较,低氧组A值在12 h时开始增加（P〈0.05）,24 h时增加最显著（P〈0.01）。与缺氧2 h组比较,A值在缺氧12 h开始增高（P〈0.05）,缺氧24 h增高最显著（P〈0.01）,而缺氧48 h与缺氧24 h基本一致。PCNA免疫学结果与MTT结果基本一致。结论用组织块贴壁法提取PASMCs,简单易行,且能得到纯度高、稳定生长的PASMCs。缺氧可以促进PASMCs的增殖。     

PDGF在缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及其机理初探

目的：研究缺氧性肺动脉高压肺血管结构改建中肺血管平滑肌细胞增殖的机理。方法：采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和核酸分杂交技术观察了缺氧对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）增殖及血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ链，－Ｂ链，α，β亚基受体基因表达的影响，结果：低氧６ｈ使ＰＡＳＭ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入减少（Ｐ〈０．０５），无氧６ｈＰＡＳＭ的＾３Ｈ－ＴｄＲ参入均较常氧对照组明显增多Ｐ〈０．００１，而缺氧１２ｈ则促进参入，至     

尾加压素Ⅱ对大鼠肺动脉平滑肌细胞胶原合成的影响

目的 研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体拮抗剂Urantide (UR)对培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法 以组织贴块法培养的大鼠PASMCs为研究对象,采用BrdU掺入实验观察不同浓度UⅡ(1×10-10～1×10-7 mol/L)及Urantide对PASMCs增殖的影响;采用Western blotting及Real-timePCR法,分别在蛋白和基因水平检测不同浓度UⅡ及Urantide对Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响.结果 UⅡ(1×10-9～1×10-7mol/L)浓度依赖性地促进PASMCs增殖(P＜0.05,P＜0.001,P＜0.001),增加PASMCs中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达(P＜0.01,P＜0.001),而1×10-10 mol/L UⅡ对PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ胶原基因和蛋白表达无明显作用(P＞0.05);UⅡ受体拮抗剂Urantide可拮抗UⅡ的上述作用(P＜0.01).结论 UⅡ通过与大鼠PASMCs的UⅡ受体UT结合而发生一系列诱导作用,最终引起PASMCs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成增加,Urantide通过竞争性结合UT而阻断UⅡ与UT的结合,使UⅡ无法发挥诱导作用.