甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转

目的研究甲基莲心碱逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性(MDR)的作用及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞毒性;PI 染色流式细胞计数测定细胞凋亡;间接免疫荧光流式细胞术检测细胞 P-gp 的表达;HPLC 检测细胞内药物浓度。结果 Nef(1、5、10μmol·L~(-1))对人乳腺癌细胞(MCF-7/S)和耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7/ADM)无显著毒性作用。阿霉素(ADM)对敏感株 MCF-7/S 的 IC_(50)为0.13μg·mL~(-1)而对 MDR 细胞株 MCF-7/ADM 的 IC_(50)为11.63μg·mL~(-1),MCF-7/ADM 细胞较MCF-7/S 细胞对 ADM 耐药88倍,1、5、10μmol·L~(-1) Nef 能使 ADM 对 MCF-7/ADM 细胞的 IC_(50)从11.63μg·mL~(-1)依次下降至4.59、2.44、0.27μg·mL~(-1)。MCF-7/ADM 细胞对 ADM 具有凋亡抗性,Nef(1、5、10μmol·L~(-1))能克服 MCF-7/ADM 细胞对 ADM 的凋亡抗性。MCF-7/ADM 细胞较 MCF-7/S 细胞高表达 P-gp,Nef(10μmol·L~(-1))处理24h 后,MCF-7/ADM 细胞 P-gp 表达明显下降。ADM 作用3h 后,MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度比 MCF-7/S 细胞少2.8倍,Nef(10μmol·L~(-1))可使 MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度增加3.2倍,但并不增加 MCF-7/S 细胞内 ADM 的浓度。结论 Nef 具有逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞 MDR 的作用,其作用机理与促进 MDR 细胞内 ADM 积累和下调 MDR 细胞 P-pg 表达有关。     

β-榄香烯对MCF-7／ADM细胞株中乳腺癌干细胞作用的初步研究

目的探讨乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7／ADM与阿霉素敏感细胞株MCF-7／S中乳腺癌干细胞（BCSCs）含量及乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和P-糖蛋白（P-gp）表达的差异,观察中药β-榄香烯（β-ELE）对BCSCs及BCRP和P-gp表达的影响。方法 应用无血清细胞培养法培养MCF-7／ADM和MCF-7／S细胞株,形态学观察不同细胞株无血清细胞球培养的成球率,RT PCR检测两种细胞株中BCRP和P-gp的mRNA水平,流式细胞仪检测BCRP和P-gp的阳性表达率及CD44+CD24^-／low细胞比例。应用15μg/ml β-ELE作用MCF-7/ADM细胞株48h后,检测细胞成球率及BCRP、P-gp基因与蛋白表达的变化。结果 与MCF-7／S细胞比较,MCF-7／ADM细胞的成球率及BCRP、P-gp mRNA水平较高。MCF-7／ADM细胞中BCRP和P-gp蛋白的阳性表达率分别为（77.78±9.55）％和（32.33±5.12）％,CD44+CD24-／low细胞比例为（64.79±11.78）％,均高于MCF-7／S细胞的（3.97±1.51）％、（14.26±2.51）％和（18.79±3.28）％,差异均有统计学意义（P＜0.01）。β-ELE能明显抑制MCF-7／ADM细胞的成球率及BCRP、P-gp基因与蛋白的表达（P＜0.01）。结论 MCF-7／ADM是BCSCs相对富集的一种耐药细胞株且高表达BCRP和P gp,β-ELE能够抑制MCF-7／ADM细胞中BCSCs比例及其成球率,并降低耐药蛋白的表达。     

LoVo/Adr细胞中sorcin基因的表达与细胞Ca2+浓度的关系

目的：探讨在人结肠癌耐药株LoVo／Adr细胞中可溶性耐药相关钙结合蛋白（soluble resistance related calcium binding protein，sorcin）与Ca^2＋浓度的关系。方法：以Fluo-3／AM标记细胞内Ca^2＋，用共聚焦显微镜观察其浓度变化；采用RT-PCR和免疫组化的方法检测细胞中sorcin基因的mRNA水平和蛋白水平。结果：与亲本LoVo细胞相比，耐药LoVo／Adr细胞中Ca^2＋浓度显著增高（P〈0．01）；sorcin基因在LoVo细胞中几乎不表达，而在耐药LoVo／Adr细胞中，无论mRNA水平还是蛋白水平均显著高表达（P〈0．01）。结论：耐药LoVo／Adr细胞中sorcin高表达没有引起细胞内Ca^2＋浓度的降低。     

GCS在人乳腺癌细胞多药耐药中的作用及与P-gP的关系

目的探讨葡萄糖神经酰胺合成酶（GCS）在人乳腺癌细胞多药耐药中的作用及其与P-糖蛋白（P-gP）的关系。方法采用MTT法检测多柔比星（阿霉素）对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／Adr和敏感株MCF-7的抑制率和IC50。以GCS抑制剂D，L-threo-1-phenyl-2-decanoyl—amino-3-morpholino-1-propanol（PDMP）预处理MCF-7／Adr后检测抑制率和IC50。运用流式细胞术（FCM）检测人MCF-7及MCF-7／Adr中GCS、P-gp的表达，以PDMP预处理细胞后检测GCS、P-gP的表达。FCM法检测细胞中ADM的荧光强度。结果MCF-7／Adr对MCF-7的耐药倍数为22．7倍，PDMP作用后阿霉素对MCF-7／Adr的抑制率升高，IC50下降（P〈0．05）。MCF-7／Adr中GCS和P-gp的表达均高于MCF-7，PDMP使MCF-7／Adr中GCS表达下降（P〈0．05），对P—gp表达无明显影响（P〉0．05）。FCM检测显示PDMP可使阿霉素在MCF-7内潴留增多。结论GCS在MCF-7／Adr多药耐药中起重要作用，PDMP能影响P-gP功能，GCS与P-gP有-定关系。     

miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADM中的表达情况及其对MCF-7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7／ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1（+）miR-490-3p瞬时转染至MCF-7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1（+）miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7／ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P＜0.05）;过表达组瞬时转染24～96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P＜0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）％、（31.67±2.79）％、（45.09±1.88）％和（61.82±2.52）％,高于空载体对照组（P＜0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg／ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P＜0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7／ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。     

乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系

目的研究乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系,探讨p38MAPK信号转导途径在其中的作用。方法 以p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理乳腺癌耐药细胞MCF-7／ADM,采用流式细胞技术分析对细胞凋亡的影响;MTT检测MCF-7／ADM细胞对阿霉素的半数药物抑制浓度（IC50）;Western blot检测SB203580处理MCF-7／ADM和MCF-7两株细胞后p38MAPK蛋白表达水平;RT—PCR检测细胞内MDR-1 mRNA水平。结果SB203580（10μmol／L）干预24h后MCF-7／ADM细胞的凋亡率为（26．73±4．90）％,与未干预组和对照组凋亡率相比差异有显著统计学意义（F=143．80,P〈0．001）;MCF-7／ADM细胞对阿霉素的敏感性明显提高（F=148927．10,P〈0．001）,相对逆转率达68．45％;与对照组和未干预组相比,干预组的MDR1 mRNA（F=9139．24,P〈0．001）及p38MAPK（F=685．42,P〈0．001）蛋白表达水平明显降低。结论p38MAPK信号转导途径与乳腺癌耐药密切相关,其可能机制为p38MAPK保护人乳腺癌耐药细胞（MCF-7／ADM）逃避凋亡,阻断该通路可增强乳腺癌耐药细胞发生凋亡。     

中频交变微电流影响人乳腺癌细胞耐药性的初步研究

目的:探究中频交变微电流是否可以改变人乳腺癌细胞株耐药性;针对实验结果,分析其可能机制。方法:对人乳腺癌细胞MCF-7施加不同参数中频交变微电流,选出较优参数。测定人乳腺癌细胞MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr的IC50值。将处于对数生长期的人乳腺癌耐药细胞MCF-7/Adr接板,分为化疗药物组和联合处理组,施加不同的处理方法。CCK-8法检测以上各组细胞存活率,分析中频交变微电流对乳腺癌细胞株耐药性的影响。将处于对数生长期的人乳腺癌细胞MCF-7分为对照组和电刺激组,用激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）定性观察荧光标记的耐药蛋白P-gp,Western blot法半定量P-gp,流式细胞仪FITC标记定量测定荧光标记的P-gp。结果:中频交变微电流能降低耐药株MCF-7/Adr的IC50和耐药指数（≥80μg/ml,协同作用）。定性、半定量和定量三种方法均显示中频交变微电流刺激后,细胞P-gp蛋白表达量均有下降趋势。结论:中频交变微电流能够增强人乳腺癌耐药细胞药物敏感性,有可能成为辅助化疗的治疗手段,其机制尚不明确,有可能是通过降低细胞P-gp的表达,抑制细胞内药物外排发挥作用的。     

ATP1B1协同阿霉素抑制乳腺癌细胞MCF-7生长及逆转耐药的作用

背景与目的：Na^＋-K^＋ATP酶（Na^＋-K^＋泵）是细胞能量转换的重要系统,可能与肿瘤转移有关,其B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高,低分化细胞中表达低。本实验研究ATP1B1协同阿霉素（ADM）在人乳腺癌细胞株MCF-7和其耐药株MCF-7／ADM中的作用以及其逆转耐药效应的影响。方法：将重组质粒PEGFP—ATP1B1转染到MCF-7和MCF-7／ADM细胞,MTT法检测质粒及其B1亚基因沉默后ADM抑瘤效应,荧光显微镜和流式细胞术分析细胞内药物荧光强度,定磷法检测ATP酶活性,RT—PCR和real-timePCR检测MDR1 mRNA的表达,Western blot法检测P—gP蛋白的表达。结果：转染PEGFP-ATP1B1的MCF-7和MCF-7／ADM细胞对ADM的敏感性相对阴性对照ADM—C3组（pEGFP—C3空载体转染）和空白对照ADM—RPMI-1640组均明显增加,且ADM各浓度梯度ADM—ATP1B1组与ADM—RPMI-1640组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;而B1亚基沉默后阴性对照组ADM-shNC,相对实验组ADM—shATP1B1和空白对照ADM—RPMI-1640组细胞对ADM的敏感性明显偏高。荧光显微镜下观察ADM-ATP1B1组MCF-7和MCF-7／ADM细胞ADM红色荧光均高于对照组。流式细胞术显示,ADM—ATP1B1组MCF-7细胞中ADM平均荧光强度较对照组高（P〈0．05）,ADM—ATPlBl组MCF-7／ADM细胞中ADM平均荧光强度高于对照组（P〈0．05）。MCF-7和MCF-7／ADM细胞的ADM-ATP1B1组ATP酶活性均高于ADM—RPMI-1640组（P〈0．05）．而ADM-C3组与ADM-RPMI-1640组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR和real-time PCR检测结果显示,MCF-7／ADM细胞ADM—ATP1B1组MDR1 mRNA相对表达水平与两对照组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）。Western blot显示P-gp蛋白的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：ATP1B1对ADM抑制乳腺癌细胞生长具有协同作用,并可逆转耐药细胞MCF-7／ADM对ADM的耐药效应,其机理与MDR1基因无明显的相关性,?     

MDR1及MDR3短发夹RNA逆转乳腺癌细胞阿霉素耐药的实验研究

目的 研究靶向多药耐药(MDR)1及MDR3基因的短发夹RNA(shRNA)在逆转人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/Adr耐药中的作用.方法 真核质粒介导的针对MDR1及MDR3基因的shRNA转染细胞,空载体转染作为对照.Annexin-Ⅴ和PI双标法、流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化分别检测细胞凋亡、细胞内阿霉素蓄积、细胞增殖活性及对阿霉素的IC50、MDR1及MDR3 mRNA及P-糖蛋白(P-gp)表达.结果 转染后,MDR1组及MDR3组MCF-7/Adr细胞凋亡率分别为30.21%±1.65%和22.07%±2.17%,与未转染组和空载体转染组比较差异有统计学意义(P＜0.01);MCF-7/Adr细胞内的阿霉素积聚浓度显著增加;MCF-7/Adr细胞存活率显著下降,MCF-7/Adr细胞对阿霉素IC50显著降低;相对于空载体转染组,MCF-7/Adr细胞中MDR1和MDR3 mRNA最高分别下降89.5%±0.8%和85.1%±1.2%,mRNA下降水平与孵育时间有关;P-gp表达明显降低,与未转染组和空载体转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 shRNA可特异性地沉默MDR1及MDR3基因的表达,逆转P-gp介导的乳腺癌细胞阿霉素耐药,而MDR1的这种作用更为显著.     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素(TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K562／ADM多药耐药(MDR)逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达；荧光定量PCR法检测MDR1 mRNA；通过流式细胞仪检测Anexin—V判断凋亡细胞的数量。结果 10μmol/L的TTD处理K562／ADM细胞后，细胞内阿霉素(ADM)的浓度明显提高；K562／ADM细胞MDR1 mRNA／P-gp的表达下降；TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR1 mRNA／P-gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外，增加抗癌药物致细胞凋亡也是耐药逆转的重要原因。．     

三氧化二砷联合BSO对K562／ADM细胞P-糖蛋白的抑制作用研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺（BSO）对肿瘤多药耐药细胞K562／ADM细胞中P-糖蛋白（P—gP）的抑制作用，比较单用As2O3与两药联合的作用效果。方法As2O3组（0．5μmol／L，2．0μmol／L，5．0μmol／L）单独及联合100μmol／LBSO作用于K562／ADM细胞后，分光光度法检测K562／ADM细胞内谷胱甘肽（GSH）含量变化；流式细胞术（FCM）检测P-gp蛋白水平表达变化；反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测mdr-1 mRNA的表达变化。结果As2O3临床剂量组（0．5μmol／L，2μmol／L）联合BSO24h内即可抑制P-gp和mdr-1mRNA的表达水平，在48h后，临床剂量联合组抑制mdr-1mRNA的作用效果要明显强于单用高剂量组，在72h后，临床剂量联合组抑制P—gP的作用效果要明显强于单用高剂量组。结论临床剂量As2O3联合BSO可有效抑制K562／ADM细胞P—gp及mdr-1 mRNA的表达。     

鞣酸对LLC/cMOAT细胞多药耐药性的逆转机制

目的本研究探讨鞣酸(Tannic acid,TA)对LLC/cMOAT细胞多药耐药性的逆转作用及其可能机制。方法采用MTT法检测LLC/CMV和LLC/cMOAT细胞对各种化疗药物的敏感性以及在不同浓度的TA处理下细胞的存活状态;确定TA的非细胞毒性浓度以及在该浓度下各梯度浓度处理时细胞的存活率;采用流式细胞仪技术检测使用非细胞毒性浓度的TA处理前后LLC/cMOAT细胞内柔红霉素(DNR)浓度变化、细胞周期阻滞及对凋亡的影响。结果LLC/cMOAT细胞对羟基喜树碱(CPT-11),阿霉素(ADM),顺铂(DDP)和长春新碱(VCR)均有不同程度的耐药,其耐药倍数分别是2.08、3.02、4.01和9.31,对依托泊苷(VP-16)、紫衫醇(TAX)无明显耐药,10.0μmol/L浓度以下的TA对LLC/CMV和LLC/cMOAT细胞无明显细胞毒性,2.5、5.0、10.0μmol/L浓度的TA能显著降低LLC/cMOAT细胞的IC₅₀(P<0.05),其逆转倍数分别为5.09、6.33、7.76倍;细胞内DNR荧光强度随着TA浓度的增高而明显增强;TA作用细胞12h可使G₁期细胞数百分比由(46.35±3.74) %增至(66. 43 ±5. 87) % , 阻滞细胞于G₁期; TA 与VCR 联合处理细胞24 h 和48 h 时凋亡率分别为12. 1 %和19. 0 % ,与处理前(1. 65 %) 相比提高明显;使用2. 5μmol/ L 、5.0μmol/ L 和10. 0μmol/ L 浓度的TA 与VCR 共同处理细胞24 h 后,凋亡率由处理前的4. 96 %分别提高到11. 2 %、17. 9 %和25. 1 %。结论　TA能部分逆转LLC/ cMOAT 细胞的多药耐药,显著提高耐药细胞内DNR 荧光强度并呈浓度依赖性,阻滞细胞周期于G₁ 期,并可诱导细胞凋亡,呈时间、剂量依赖性,其机制可能与抑制化疗药物外排、增加细胞内药物浓度以及诱导细胞凋亡有关。     

三氧化二砷逆转人肺腺癌A549/ R 细胞耐药及对GSTs 表达的影响

 目的 探讨三氧化二砷（As₂O₃）对人肺腺癌A549／R细胞耐药的逆转及谷胱甘肽S转移酶（GSTs）表达的变化。方法 分别采用生化方法及RT-PCR方法检测GSTs活性及GST-πmRNA表达水平的变化。结果 0．15μmol／L As2O3可使A549／R细胞内阿霉素（ADM）浓度增加，其IC50值由原来的0．495μmol／L降低至0．217μmol／L，逆转倍数为2．3倍。耐药细胞中GSTs活性增高，GST-πmRNA呈过表达状态。不同浓度的As2O3作用后，GSTs活性下降（P〈0．05），GST-πmRNA表达水平下调，呈浓度依赖性变化。结论 As₂O₃可部分逆转A549／R细胞对ADM的耐药性，GST-π的改变参与其耐药机制。     

靶向survivin siRNA与5-Fu协同抑制MCF-7细胞增殖

 目的研究以survivin为靶标的小干扰RNA(siRNA)与化疗药5-Fu联合应用抑制MCF-7细胞增殖的作用。方法以脂质体为载体,将survivin siRNA转染至MCF-7细胞中,用四氮唑盐(MTT)法染色并计算siRNA联用5-Fu对MCF-7细胞的抑制率,用SAS统计软件及金正均Q值法进行统计分析。结果单用5-Fu,IC50为4.42μg/ml;加入5nmol/LsiRNA后,IC50降为1.18μg/ml;siRNA与5-Fu联用的抑制作用较单用5-Fu强(F=26.74,P<0.01);Q值分析表明survivin siRNA与中低浓度的5-Fu联用,有较好的协同作用(Q≥1.15)。结论survivinsiRNA与5-Fu联用,可显著增强对MCF-7细胞增殖的抑制,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

沙利度胺对人乳腺癌细胞血管内皮生长因子-C及其受体表达的影响

 目的 探讨沙利度胺对人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231VEGF-C及KDR表达的影畸。方法 MTT法检测沙利度胺对细胞增殖的抑制作用，从而选择适当的药物浓度及作用时间；RTPCR法检测沙利度胺处理前后细胞中vEGF-CmRNA的表达水平；流式细胞术检测沙利度胺处理前后细胞中VEGF_C及KDR蛋白的表达水平。结果 沙利度胺在（6～120）μg／ml范围内对MCF-7和MDA-M13-231细胞有明显的抑制增殖作用，60μg／ml明显抑制两株细胞的VEGF-CmRNA及VEGF-C、KDR蛋白的表达。结论 沙利度胺在一定浓度范围内能抑制人乳腺癌细胞的增殖，其抗血管生成作用可能与下调vEGF-C及KDR表达有关。     

钙通道阻滞剂对体外培养的脑膜瘤细胞信号转导及增殖的影响

 目的 观察维拉帕米对体外培养的脑膜瘤细胞信号转导及增殖的影响并探讨其作用机制。方法 采用荧光光度计检测脑膜瘤细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]i)水平，结合细胞计数方法测定细胞的增殖情况。结果 1μmol／L维拉帕米能明显抑制血清诱导的脑膜瘤细胞的增殖(P<0．01)；细胞数为对照组的80％。10％的血清作用于脑膜瘤细胞以后，[Ca²⁺]i迅速升高到(435．3±34．9)μmol／L(P<0．01)。用维拉帕米预处理后，[Ca²⁺]i为221．1±26．1，升高辐度明显降低，(P<0．01)。结论 维拉帕米能抑制血清诱导的体外培养的脑膜瘤细胞增殖信号的转导，其作用机制与降低了[Ca²⁺]i增加有关。     

细胞分裂周期蛋白42高表达在雌激素诱导的乳腺癌细胞耐药性增强过程中的作用

目的 观察细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在雌激素作用下的变化,探讨细胞内物质运输的改变在雌激素引发的乳腺癌细胞耐药中的意义.方法 分别以100 ng/ml 17β雌二醇(E2)处理MCF-7细胞,以Cdc42的小干扰RNA(siRNA) Stealth Select RNAiTM siRNA转染MCF-7细胞.采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的药物敏感性,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的蓄积量,实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞的Cdc42 mRNA表达,Western blot法检测细胞活化的Cdc42蛋白及总Cdc42蛋白表达量.结果 E2处理后,ADM对MCF-7细胞的半数抑制浓度(IC50)由(0.098±0.011) μg/ml增高到(0.134±0.130)μg/ml(P＜0.05),细胞内ADM的相对含量则由7.253±0.310下降为3.233±0.313(P＜0.05),而Cdc42 mRNA、活化Cdc42蛋白及总Cdc42蛋白的表达量均显著增加(P＜0.05).Cdc42 siRNA转染后,ADM对MCF-7细胞的IC50下降到(0.057±0.017)μg/ml(P＜0.05),细胞内ADM的相对含量增高为11.217±0.521(P＜0.05),而Cdc42 mRNA、活化Cdc42蛋白及总Cdc42蛋白则均有显著下降(P＜0.05).结论 雌激素可以诱导乳腺癌细胞耐药性增强,其机制可能是通过上调Cdc42基因的转录、表达和活化,加速胞内物质运输速度,使得化疗药物无法在细胞内聚集.

Abstract：

Objective To investigate the changes of Cdc42 expression under estrogen stimulation, and to explore the signaling pathway of intracellular material transportation caused by estrogen. Methods MTT was used to test the drug sensitivity of cells. Real-time PCR was used to evaluate the expression of Cdc42 mRNA. The amount of ADM accumulated in MCF-7 cells was detected by flow cytometry. The protein levels of active-Cdc42 and Total-Cdc42 were measured by Western blot. Results IC50 of ADM in MCF-7 cells was increased from (0.098±0.011)μg/ml to (0.134±0.130)μg/ml (P<0.05) after estrogen stimulation. The amount of ADM accumulated in MCF-7 cells was reduced from 7.253±0.310 to 3.233±0.313 (P<0.05). All of Cdc42 mRNA, active-Cdc42 protein and total-Cdc42 protein were increased (P<0.05). After the treatment with siRNA, the IC50 of ADM in siRNA group was decreased to (0.057±0.017)μg/ml (P<0.05) compared with that in the control group. The amount of accumulated ADM was significantly increased in the siRNA group, and all the expression levels of Cdc42 mRNA, active-Cdc42 protein and total-Cdc42 protein were decreased in the siRNA group (P<0.05). Conclusions Estrogen enhances the drug resistance in breast cancer cells. The mechanism of this effect may be via the enhancing Cdc42 expression and decreasing the accumulation of chemotherapeutic drugs in the cancer cells.     

莪术油对鼻咽癌CNE22 细胞的凋亡及放疗 增敏机制的影响

 目的　探讨莪术油、莪术油联合γ2射线照射对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE22 的增殖抑制和诱 导凋亡作用;分析莪术油是否具有放疗增敏的作用,并研究其机制。方法　体外培养CNE22 细胞,莪术 油以体外直接加药的方式作用于CNE22 细胞,采用MTT、流式细胞术、电镜等分子生物学手段,检测莪 术油单用或联合γ2射线对CNE22 的诱导凋亡作用、放疗增敏作用。结果　莪术油单独使用,对CNE22 细胞有确切的增殖抑制及诱导凋亡作用,并与常规化疗药物52Fu 有相近的抑制作用( P > 0. 05) 。莪术 油的药物抑制作用呈现浓度依赖性,最低起效浓度为10μg/ ml ,最佳作用时间为48 小时; 5μg/ ml 、100 μg/ ml 、300μg/ ml 的莪术油联合100 cGy 的γ2射线作用2 天后凋亡率由0. 5 %、2. 15 %、10. 2 %显著提高 到8. 6 %、14 %和26 % ,细胞的死亡率均在5 %以下有明显的协同增效作用( P < 0. 01) ;联合作用96h 后 试验组的细胞主要以死亡为主,凋亡较少;500μg/ ml 的莪术油主要导致细胞死亡,有明显的细胞毒性。 流式细胞仪结果显示较高浓度时,莪术油使CNE22 细胞阻滞在G1 期。电子显微镜观察细胞凋亡的超微 结构可以看到凋亡小体。结论　莪术 油可以抑制鼻咽癌细胞CNE22 的增 殖并诱导其凋亡;莪术油和100 cGy 的 γ2射线联合作用有明显的增敏作用; 其作用机制与诱导肿瘤细胞发生凋亡 及影响细胞生长周期有关。     

塞来昔布逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药及其机制探讨

目的观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对肿瘤多药耐药（MDR）的逆转作用,并探讨其初步作用机制。方法在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr中,应用MTT方法检测塞来昔布对多柔比星（阿霉素,DOX）的耐药逆转倍数;RT-PCR及Western blot方法检测基因及蛋白的变化;流式细胞术（FCM）检测细胞膜P-gp的表达、功能、细胞周期和凋亡。结果塞来昔布作用24小时后,MCF-7/Adr细胞对DOX的敏感性明显增加,浓度为10μmol/L及20μmol/L时,耐药逆转倍数分别为1.82和3.80,呈现剂量依赖性。COX-2、mdr1、c-Jun、YB-1、survivin等在基因和蛋白水平明显下调（P〈0.01）,NF-κB无明显差异（P〉0.05）;20μmol/L作用24小时,P-gp的功能受抑制;G0＋G1期细胞增多,S期细胞减少（P〈0.05）,凋亡率明显增高（P〈0.05）。结论选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布可有效逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药,在一定的浓度范围内呈现剂量依赖性,初步机制可能涉及干预转录因子的表达而下调mdr1,阻滞细胞周期及增加细胞凋亡。