塞来昔布通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡的影响

目的:观察COX-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨该作用与ERK1/2信号通路之间的关系。方法:用不同浓度的塞来昔布溶液(0、25、50、75和100μmol/L)处理对数生长期的肝癌SMMC-7721细胞,MTT比色法检测不同时间点各药物浓度组细胞增殖情况;流式细胞术分析不同浓度的塞来昔布溶液对SMMC-7721细胞凋亡的影响;RT-PCR检测COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA表达的变化;Western blot检测COX-2、VEGF和ERK1/2蛋白表达的变化。结果:塞来昔布对SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,该作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强;流式细胞术检测结果显示出明显的细胞凋亡,且凋亡率随着塞来昔布浓度的增高而升高;随着塞来昔布剂量的增加,COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA及蛋白的表达水平逐渐降低。结论:塞来昔布可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促使瘤细胞凋亡,且作用呈时间和剂量依赖性,其机制可能与下调ERK1/2信号通路及抑制新生血管生成有关。     

塞来昔布对裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤增殖的影响

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对裸鼠人肝癌细胞皮下移植瘤生长抑制作用及其相关机制.方法 用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721接种BALB/C(nu/nu)裸鼠背部皮下,建立裸鼠人肝癌细胞皮下移植瘤动物模型(n=20)并分成实验组(n=10)和空白对照组(n=10).实验组接种前3 d开始在饮水中添加塞来昔布,对照组给予正常饮水,观察肿瘤生长曲线和质量,并应用免疫组化法对肿瘤组织的细胞凋亡情况、血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤微血管密度(MVD)表达程度进行观察.结果 实验组肿瘤出现的时间显著晚于对照组,肿瘤的体积、质量显著小于对照组,两组差异有高度统计学意义(P＜0.01);塞来昔布处理后肿瘤组织的细胞凋亡明显强于对照组,而VEGF、MVD表达明显弱于对照组.结论 COX-2抑制剂塞来昔布可通过诱导凋亡及抑制肿瘤新生血管生成而抑制裸鼠人肝癌细胞SMMC-7721株移植瘤的生长,其作用途径是抑制了COX-2的表达.     

塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用

目的研究环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用.方法用MTr比色法观察其对肝癌细胞生长的影响;荧光显微镜和透射电子显微镜检测细胞凋亡,TUNEL染色法记数细胞凋亡指数,流式细胞仪定量分析.结果塞来昔布以剂量依赖的方式抑制SMMC-7721细胞的生长,2、10、20及40mmol/L塞来昔布对肝癌细胞的生长抑制率分别为20.78%、33.37%、48.57%和64.96%(P＜0.01).荧光显微镜和透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变.流式细胞仪定量分析示2、10、20及40mmol/L浓度下细胞凋亡率分别为(7.44±0.34)%、(19.59±1.73)%、(29.04±4.18)%和(42.14±2.40)%,与对照组(2.13±0.17)%比较均有显著性差异.结论塞来昔布能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,亦能诱导其凋亡;诱导肿瘤细胞凋亡可能是塞来昔布抑制人肝癌细胞生长的机制.     

环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的 探讨环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响,为塞来昔布在临床上治疗肝肿瘤提供理论依据.方法 应用体外细胞培养技术培养人肝癌细胞株SMMC-7721,并以重建基底膜的侵袭试验、趋化运动试验、对层粘连蛋白的粘附试验以及损伤刮擦实验观察不同浓度塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭、转移能力的影响.结果 塞来昔布作用于人肝癌SMMC-7721细胞后,其细胞黏附率明显下降,而运动抑制率及侵袭抑制率明显上升,与对照组相比差别均有统计学意义,且塞来昔布浓度与肿瘤细胞黏附率,运动抑制率及侵袭抑制率均有相关性.结论 环氧合酶-2抑制剂塞来昔布能明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的黏附、运动及侵袭能力,故可阻抑肝癌细胞的转移,可能是预防肝癌复发的重要候选药物之一.     

非甾体类抗炎药塞来昔布对肺腺癌抑制作用的实验研究

目的观察选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布在体内及体外对肺癌细胞的抑制作用.方法噻唑蓝(MTT)比色法检测肺癌细胞的增殖抑制,流式细胞仪检测塞来昔布处理后肺癌细胞周期变化,通过裸鼠移植瘤实验,比较移植瘤重量检测塞来昔布对肺癌细胞体内抑制作用,TUNEL法染色检测移植瘤癌细胞凋亡.结果塞采昔布对肺癌细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖关系,IC 50为50umol/L.塞来昔布可将细胞阻滞在G0/G1期,阻碍G1期细胞进入S期.称量裸鼠移植肿瘤的瘤结节重量,对照组平均瘤重(2 1567±0.9750)g,药物组平均瘤重(0.9783±0.5423)g,两组有显著性差异(P＜0.05),抑瘤率为54.64%.TUNEL法移植瘤凋亡细胞染色,对照组凋亡指数(AI)为(1.58±0.61),用药组(9.50±2.51),二组有显著性差异(P＜0.05).结论塞来昔布在体内及体外均对肺癌细胞表现出抑制作用,其将细胞周期阻滞在G1期并诱导肿瘤细胞凋亡可能是抑制肺癌细胞增殖的重要机制.     

塞来昔布对鼻咽癌细胞株CNE-2Z作用的研究

目的:探讨塞来昔布对鼻咽癌细胞株CNE-2Z的生长抑制作用及可能机制.方法:以人鼻咽癌细胞株CNE-2Z为研究对象,体外药物敏感试验(MTT)观察不同浓度和作用时间的塞来昔布对细胞的生长抑制作用;免疫细胞化学染色检测细胞增殖核抗原(PCNA)和环氧化酶-2(COX-2)的表达;流式细胞术(FCM)检测药物作用后细胞周期分布.结果:MTT试验显示塞来昔布对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点;流式细胞术表明塞来昔布可引起CNE-2Z细胞GO/G1期阻滞;免疫组织化学检测显示塞来昔布下调PCNA、COX-2蛋白表达.结论:CNE-2Z细胞中存在COX-2表达,塞来昔布可抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖,可能成为鼻咽癌化疗的有效药物.     

塞来昔布对Lewis肺癌的抑制作用

目的:观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖和Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用,探讨其作用机制.方法:应用不同浓度塞来昔布与Lewis肺癌细胞共培养,以MTT比色法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞上清液VEGF浓度,流式细胞术检测细胞凋亡情况.20只C57BL/6小鼠进行Lewis肺癌移植瘤实验,随机分为加药组(每天给以含塞来昔布1 mg/g的食物)和对照组(普通食物),电镜观察药物作用24 h后Lewis肺癌移植瘤细胞的超微结构改变;免疫组化检测移植瘤VEGF和COX-2的表达.结果:塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖有抑制作用,效应呈剂量(120、50、12.5、3.1、0 μmol/L)和时间(24、48、72 h)依赖性.50 μmol/L塞来昔布组细胞凋亡率为(14.93±0.79)%,明显高于对照组的(4.73±0.83)%(P<0.001).药物组移植瘤质量为(1.37±1.04) g,明显低于对照组的(3.49±1.75) g (P<0.01),抑瘤率为60.1%.电镜观察Lewis肺癌组织,药物组出现较多有凋亡特征的细胞.免疫组化结果显示塞来昔布对肿瘤组织的VEGF表达有明显抑制作用.结论:塞来昔布可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成是其可能的作用机制.     

酒精滥用对HIV脑炎动物模型的影响

目的研究氯化锂对人SMMC-7721肝癌细胞增殖和对荷肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察氯化锂(LiCl)对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;以流式细胞仪分析氯化锂处理SMMC-7721肝癌细胞后,细胞凋亡情况;同时利用小鼠H22肝癌细胞实体瘤模型,观察氯化锂对荷肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用;对肿瘤组织超微结构进行透射电镜观察。结果氯化锂对SMMC-7721细胞具有抑制作用并有浓度依赖性;且氯化锂可诱导SMMC-7721细胞发生凋亡;荷肝癌小鼠动物实验中氯化锂中浓度组和高浓度组抑瘤率分别达到50.0%和60.7%,提示氯化锂对小鼠的肿瘤生长具有一定的抑制作用;电镜下可见氯化锂处理组肿瘤组织的凋亡细胞和凋亡小体。结论氯化锂对SMMC-7721细胞的增殖和荷肝癌小鼠肿瘤的生长具有抑制作用,作用机制可能与其诱导肝癌细胞凋亡有关。     

塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖及移植瘤的抑制作用

目的:探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对Lewis肺癌细胞株增殖及小鼠皮下移植瘤的影响。方法:常规培养Lewis肺癌细胞,实验分为对照组和塞来昔布用药组。MTT法检测细胞增殖水平,损伤修复实验检测细胞迁移能力;将Lewis肺癌细胞接种于12只C57BL/6小鼠皮下,对照组隔日腹腔注射生理盐水;塞来昔布用药组隔日腹腔注射塞来昔布30 mg/kg,24 d后处死,计算抑瘤率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测移植瘤组织中VEGF mRNA表达水平,同时酶联免疫检测小鼠血清中MMP-9浓度。结果:塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用呈时间-剂量依赖性效应(P<0.05)。20μmol/L塞来昔布组细胞迁移速度(0.37±0.03)μm/h明显减慢,与对照组(3.17±0.22)μm/h相比具有显著性差异(P<0.01);在体实验显示,塞来昔布具有明显的抑制Lewis肺癌移植瘤增殖的作用,同时能抑制移植瘤组织中VEGF表达、降低血清MMP-9浓度。结论:塞来昔布可以显著抑制Lewis肺癌细胞的增殖与迁移能力,且对Lewis肺癌移植瘤有明显抑制作用。     

TSA抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖能力

目的 研究TSA对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响.方法 选用人肝癌SMMC-7721细胞作为实验对象,分为对照组和不同浓度TSA(0.1、0.5、1.0.2.0 μM)处理组,倒置显微镜观察TSA对SMMC-7721细胞形态的影响,MTT比色法测定TSA对SMMC-7721细胞增殖的抑制情况,流式细胞术(FCM)分析细胞周期;结果 倒置显微镜下.经TSA处理的细胞增殖速度显著减慢;MTT比色法测定结果显示不同浓度TSA对SMMC-7721细胞的增殖均有抑制作用,并有明显的剂量依赖和时间依赖关系;流式细胞仪检测结果 显示,SMMC-7721细胞经TSA处理后,GO/G1期细胞明显增加,S期细胞则明显减少,细胞被阻滞于GO/G1期.结论 TSA通过抑制HDAC的活性,调节相关基因的转录,从而调控细胞周期,有效抑制肝癌细胞的增殖.     

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721荷瘤鼠移植瘤作用

目的 研究沙利度胺对人肝癌细胞株SMMG7721荷瘤鼠移植瘤的生长抑制作用及可能机制.方法 建立肝癌细胞株SMMC-7721的荷瘤鼠模型,观察沙利度胺组与对照组瘤体变化,应用免疫组化方法测定瘤体组织中微血管密度,ELISA法测定荷瘤鼠外周血血管内皮生长因子(VEGF)表达,并采用流式细胞仪测定瘤体组织细胞凋亡指数及瘤...     

重组腺病毒载体转染p16基因对肝癌细胞的生长抑制作用

目的：通过腺病毒转染p16基因观察对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤作用。方法：克隆人p16基因全长cDNA序列，构建携带p16基因的增殖缺陷型重组腺病毒p16(AdV-p16)，以AdV-p16感染人肝癌SMMC-7721细胞，观察p16基因的表达及其对细胞的生长抑制或杀伤作用。结果：AdV．p16能介导外源基因p16在肝癌SMMC-7721细胞系中高效表达。在感染AdV-p16后随重复感染度(MOI)升高p16基因阳性表达率升高，四甲基偶氮唑蓝染色法(MTT)实验结果表明，SMMC-7721细胞的生长受抑制。结论：腺病毒能够介导p16基因在肝癌细胞中高效表达，促进细胞周期阻滞和诱导肿瘤细胞凋亡。     

银杏酚对SMMC-7721肝癌细胞和荷H22肝癌小鼠的抗癌作用

目的: 研究银杏酚对体外SMMC-7721肝癌细胞的毒性作用,及对体内荷H22肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法： MTT法测定银杏酚对SMMC-7721细胞的抑制作用,计算半数抑制质量浓度IC50。建立小鼠肝癌H22实体瘤模型,并随机分为模型对照组,环磷酰胺组,银杏酚20、40、80、160 mg/kg组,分别于腹腔注射生理盐水,环磷酰胺,20、40、80、160 mg/kg银杏酚,连续给药7 d。于末次给药后24 h,眼球采血后脱颈处死小鼠,剥离瘤体,分别摘取脾脏、胸腺,计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数,并作血常规检测。结果： 银杏酚作用于SMMC-7721 细胞24、48和72 h的半数抑制质量浓度IC50分别为(15.33±1.19)、(12.20±1.08)、(10.88±1.03)mg/L。银杏酚20、40、80、160 mg/kg组的抑瘤率分别为8.96%、39.81%、48.51%和28.36%,除外40 mg/kg组,其余组与环磷酰胺组(42.94%)比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05)。银杏酚组的胸腺指数较模型对照组均明显降低(P均＜0.05);银杏酚组的外周血淋巴细胞数明显高于模型对照组与环磷酰胺组(P均＜0.05)。结论： 银杏酚于体外能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,并呈时间和剂量依赖关系;于体内能显著抑制荷H22肝癌小鼠肿瘤生长,其抑瘤作用可能与调节机体的免疫功能有关。     

绿茶提取物EGCG对人肝癌裸鼠移植瘤凋亡和血管生成的影响

目的：用人肝癌SMMC-7721细胞建立裸鼠移植瘤模型,观察绿茶提取物EGCG单体对裸鼠移植瘤凋亡和血管生成的影响。方法：用人肝癌SMMC-7721细胞建立裸鼠移植瘤模型,待皮下移植瘤形成后,将裸鼠随机分为实验组和对照组,每天分别给予EGCG单体溶液50mg/kg.只灌胃和生理盐水灌胃,3周后瘤块离体称重,计算抑瘤率;透射电镜观察实验组与对照组肝癌移植瘤超微结构;用TUNEL法检测移植瘤中人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的情况;用免疫组织化学法检测移植瘤中VEGF蛋白表达的变化,并通过CD34表达检测微血管密度（MVD）;用RT-PCR检测移植瘤中VEGF mRNA的表达。结果：实验组裸鼠经EGCG单体溶液灌胃后,皮下移植瘤体积、重量明显小于对照组,抑瘤率为30.13%±5.17%;透射电镜观察,实验组肝癌移植瘤组织见不同时期凋亡细胞,部分形成凋亡小体;TUNEL法检测实验组移植瘤中人肝癌SMMC-7721细胞凋亡明显多于对照组（P〈0.05）;实验组移植瘤中VEGF蛋白和mRNA表达均明显下调（P〈0.05）,实验组MVD较对照组明显下降（P〈0.05）。结论：绿茶提取物EGCG可能通过增加人肝癌SMMC-7721细胞凋亡,抑制新生血管生成达到抗癌作用     

Replication-incompetent Adenovirus Vector-mediated MDA-7/IL-24 Selectively Induces Growth Suppression and Apoptosis of Hepatoma Cell Line SMMC-7721

In order to investigate the effect of replication-incompetent adenovirus vector expressing MDA-7/IL-24 on tumor growth and apoptosis of human hepatocellular carcinoma （HCC） cell line SMMC-7721 and normal liver cell line L02, the recombinant replication-incompetent Ad.mda-7 virus vector was constructed and infected into the HCC cell line SMMC-7721 and normal liver cell line L02. RT-PCR was performed to examine the expression of MDA-7 mRNA. The concentrations of MDA-7/IL-4 in culture superuatants were determined by using ELISA. MTT and Hoechst staining assay were applied to observe the inhibitory and killing effects of MDA-7 on the HCC cells. By using flow cytometry, the apoptosis, cell cycle and proliferation of SMMC-7721 and L02 cells were measured. The results showed recombinant replication-incompetent virus expressing MDA-7/IL-24 was constructed successfully, and RT-PCR revealed that it could mediate the high expression of the exogenous gene MDA-7/IL-24 in SMMC-7721 and L02 cells. The expression of MDA-7/IL-24 proteins in the culture superuatant was detectable by ELISA. Ad.mda-7 infection induced apoptosis and growth suppression in SMMC-7721 cells and an increased percentage of HCC cells in the GyM phase of the cell cycle, but not in L02 cells. It was concluded that mda-7/IL-24 gene, mediated with replication-incompetent adenovirus vector, could selectively induce growth suppression and apoptosis in HCC cell line SMMC-7721 but without any toxic side-effect on normal liver line L02.     

Morphological Study on the Mechanism of Tumor-selective Cytocidal Action of Tumor Necrosis Factor

Using light microscopy and electron microscopy, we observed the morphological changes inheuman hepatocellular carcinoma cell line (SMMC-7721) treated with tumor necrosis tumor necrosis factor (TNF)and the cytocidal effect of TNF on the heterotransplanted human hepatocellular carcinoma. It wasfound that the changes of the injury occurred earlier in the cell membranes than in the nuclei duringthe course of TNF killing of SMMC-7721 cells and there were similar lesions around the necroticarea in the heterotransplanted human hepatocellular carcinoma in the nude mice as compared withthose produced in SMMC-7721 cells. In addition, the determination of the DNA content in TNF-treated SMMC-7721 cells and controls revealed no significant difference between them. On the basisof these results and Darzynkiewicz's proposals, it is suggested that TNF exerts its tumor-selectivekilling effect by binding to a specific to a specific plasma membrane receptor to disturb synthesis or assembly ofcell membrane components, thus causing the plasma membrane injury and finally cell lysis.     

5-FU、HCPT诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的观察两种传统抗癌药5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,从细胞凋亡的角度探讨其抗癌机制,为它们的临床应用提供实验依据。方法用不同浓度的5-FU(2.5、5、7.5、15、25 mg/L)和HCPT(0.25、0.5、1、1.5、2 mg/L)分别干预人肝癌SMMC-7721细胞生长,采用倒置相差显微镜、荧光显微镜、透射电镜和DNA凝胶电泳方法观察培养不同时间(12、24、48、72 h)人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡,并比较两种药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果。结果5-FU、HCPT均能诱导人肝癌SMMC-7721细胞产生凋亡,产生最高凋亡率的作用时间均为48 h,最佳浓度分别为7.5、1 mg/L,最高凋亡率分别为38.7%、42.6%,5-FU、HCPT两种药物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的效果相当,而与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论5-FU、HCPT均能诱导人肝癌SMMC-7721细胞产生凋亡,小剂量的5-FU、HCPT有望作为凋亡诱导剂用于临床肝癌治疗。