釉基质蛋白对人牙周膜细胞粘附、伸展的影响

目的：了解釉基质蛋白对人牙周膜细胞黏附，伸展的影响。方法：改良组织块法培养人牙周膜细胞，固相结合分析方法观察釉基质蛋白对人牙周膜细胞黏附，伸展的影响。结果：实验组PDLC黏附率与对照组无差别，实验组PDLC伸展率高于对照组。结论：EMPs对PDLC黏附无影响，但可促进其伸展。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞群骨钙素的影响

目的研究人牙周膜细胞群(human periodontal ligament cell populations,hPDLPs)在釉基质蛋白(em-dogain,EMD)诱导下骨钙素(osteocalcin,OCN)表达的改变。方法组织块法分离培养人牙周膜细胞,实验组用含100 mg/L EMD的培养液诱导6 d,对照组不经EMD诱导培养。免疫细胞化学和实时定量聚合酶链反应(polymer-ase chain reaction,PCR)检测成牙骨质细胞矿化相关蛋白OCN的表达。结果免疫细胞化学结果显示,实验组和对照组hPDLPs细胞胞浆均可见黄色或棕黄色颗粒,OCN表达呈阳性;实验组hPDLPs的OCN检测平均光密度值为0.172 43±0.014 85,对照组为0.167 01±0.017 03,组间差异无统计学意义(t=0.757,P=0.459);实时定量PCR检测结果显示,实验组骨钙素相对表达量是对照组的1.13倍。结论 EMD对hPDLPs的OCN表达无明显影响。     

釉基质蛋白对人牙囊和牙周膜细胞黏附增殖的影响

目的 比较釉基质蛋白（EMP）对人牙囊细胞（hDFC）和人牙周膜细胞（hPDLC）在钛片表面黏附和增殖能力的影响。方法 分离培养hDFC和hPDLC,双喷砂加酸蚀处理钛片表面。实验分为4组：hDFC＋EMP诱导组、hDFC组、hPDLC＋EMP诱导组、hPDLC组。采用噻唑蓝（MTT）法和细胞免疫荧光染色法,定量分析细胞在钛片表面的黏附和增殖情况,扫描电子显微镜观察细胞在钛片表面1～7 d的生长情况。结果 1～7 d各组间MTT值的差异无统计学意义（P〉0.05）;加有EMP诱导的2组细胞较2组单纯细胞培养组的形状系数（Sf）值更高（P〈0.05）,hDFC组和hPDLC两组间Sf值差异无统计学意义（P〉0.05）,hDFC＋EMP诱导组较hPDLC＋EMP诱导组Sf值高（P〈0.05）。结论 EMP能促进hPDLC和hDFC在钛片表面的黏附,且对hDFC的促进作用更强;但对接种在钛片表面的hPDLC和hDFC短期增殖没有影响。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞总蛋白含量和超微结构的影响

目的：观察釉基质蛋白对人牙周膜细胞总蛋白含量及超微结构的影响。方法：组织块法培养人牙周膜细胞。考马斯亮蓝法测定人牙周膜细胞的总蛋白含量。透射电镜技术观察细胞超微结构。结果：釉基质蛋白质量浓度在50mg／L时即可明显增加人牙周膜细胞的总蛋白含量，l00mg／L时细胞的总蛋白含量增加到最大，此时，细胞的超微结构显示：核仁明显，粗面内质网及高尔基复合体发达。结论：釉基质蛋白能促进人牙周膜细胞核酸及蛋白质的合成活性。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白的影响

目的:观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白能力的影响.方法:乙酸法提取猪釉基质蛋白,改良组织块法原代培养人牙周膜细胞,免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白的能力.结果:人牙周膜细胞胞浆骨桥蛋白、骨涎蛋白染色阳性,200、100、50mg/L釉基质蛋白作用下可以使细胞胞浆骨桥蛋白、骨涎蛋白染色不同程度地加深.人牙周膜细胞在釉基质蛋白作用下,最早从第3d开始骨桥蛋白表达增加、从第7d开始骨涎蛋白表达增加.结论:一定浓度的釉基质蛋白在特定的时间可以促进牙周膜细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白.     

釉基质蛋白与不同化学方式联合处理根面对牙周膜细胞附着、增殖的影响

目的：观察釉基质蛋白（enamel matrix proteins，EMPs）与不同的化学方式联合处理牙周炎患牙根面后对牙周膜细胞（periodontal ligament cells，PDLCs）附着和增殖的影响，为牙周炎患牙体外牙周组织构建奠定基础。方法：收集因晚期牙周炎拔除的患牙60个，经刮治和根面平整后，制备5mm×5mm×1mm大小的根片并随即分成3组，分别用20g/L盐酸四环素、240g／LEDTA、生理盐水（对照组）处理3min后，再使用100ug／mL EMPs处理2h。人PDLCs体外培养后接种于各组根片并于24h后在扫描电镜下、HE染色观察细胞的附着状况，分别在1、3、5、7d用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖，并对数据进行双因素方差分析，检测水准α=0．05。结果：两实验组采用化学处理与EMPs联合应用后，PDLCs在根片上的附着良好，可见细胞间大量丝状伪足相连，HE染色显示细胞沿根片呈连续排列，优于单纯使用EMPs的对照组。接种第3天开始，240g／LEDTA＋EMPs组的细胞量，比对照组有显著增多（P〈0．05），接种第5天开始，20g/L盐酸四环素＋EMPs组的细胞量比对照组有显著增多（P〈0．05），而两实验组之间无显著性差异。结论：EMPs与不同化学处理方式联合处理牙周炎患牙根面相比，单纯使用EMPs更有利于PDLCs在根面的附着和增殖，而240g／LEDTA与EMPs配伍使用有助于PDLCs在根面的早期增殖。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨釉基质蛋白对于牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：采用细胞培养技术,噻唑盐比色测定（MTT）法和酶动力学方法,观察釉基质蛋白对牙周膜细胞的作用。结果：釉基质蛋白组的牙周膜细胞,其增殖活性显著提高,以50mg/L浓度为最佳;其ALP活性也较对照组明显增加,以200mg/L浓度的效果最佳。具有一个合适的剂量范围。结论：釉基质蛋白可促进人牙周膜细胞的增殖和ALP活性。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和牙骨质相关蛋白基因表达的影响

目的 通过研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMP)对人牙周膜细胞增殖及牙骨质相关蛋白基因表达的影响,探讨EMP促进牙骨质形成的机制.方法 分别用质量浓度为0(对照组)、50、100、200、300 mg/L的EMP作用于培养的人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC),在培养的第1、3、5、7天用甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖活性;在培养的第7天用荧光实时定量反转录聚合酶链反应法检测各组细胞牙骨质附着蛋白(cementum attachment protein,CAP)和牙骨质蛋白23(cementum protein-23,CP-23)mRNA表达量.结果 EMP质量浓度在50 ～ 200 mg/L范围内可以促进人PDLC增殖,在300 mg/L时抑制细胞增殖;EMP质量浓度为100、200 mg/L时可以显著促进CAP mRNA(分别为4.661 ±0.154、5.923±0.788)和CP-23mRNA的表达(分别为1.222±0.089、3.795±0.640)与对照组(CAP:1.006±0.062,CP-23:1.012±0.163)相比差异均有统计学意义(P＜0.05),且以200 mg/L EMP的促表达效果最佳.结论 EMP在一定浓度范围内能促进人PDLC增殖及CAP和CP-23基因表达,提示EMP可能通过促进细胞增殖和牙骨质相关蛋白的表达促进牙骨质的形成.     

Emdogain诱导人牙周膜细胞群向成牙骨质细胞分化的研究

目的探讨人牙周膜细胞群（human periodontal ligament cell populations,hPDLPs）在Emdogain（EMD,商品化的猪釉基质蛋白）诱导下生物学特性的改变。方法组织块法分离培养牙周膜细胞,用含100 mg/L EMD的培养液诱导6 d,光镜下观察细胞形态改变,扫描电镜观察细胞在牙骨质片上的形态变化。免疫细胞化学检测成牙骨质细胞相关矿化蛋白：骨涎蛋白（bone sialoprotein,BSP）、Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ,COLⅠ）的表达。结果EMD诱导后细胞由长梭形向多角形的类成牙骨质细胞分化。免疫组织化学检测结果显示诱导后BSP、COLⅠ的表达增强。结论EMD可以诱导人牙周膜细胞群向类成牙骨质细胞方向分化。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响

目的：观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响。方法：改良组织块法培养人牙周膜细胞，免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的能力。结果：50、100、200mg/L的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞合成I、Ⅲ型胶原，其中，以100mg/L釉基质蛋白的促I型胶原合成作用最明显，50mg/L釉基质蛋白的促Ⅲ型胶原合成作用最明显。但是，这种促进作用有一定的时间性。结论：一定浓度的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原。     

釉基质衍生物对脂多糖作用下牙周膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的研究釉基质衍生物（enamel matrix derivatives,EMD）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS）作用下的人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs）增殖和凋亡的影响。方法从正畸治疗需拔除的前磨牙中,分离培养人hPDLFs,传至第4代;实验组培养液中分别加入100μ/mLEMD、10μg／,mL Pg-LPS或者100μ/mL EMD＋10 μg／mL Pg-LPS,对照组不加入刺激物;以四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethy1-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl．2H-tetrazoliumbromide,MTT]法检测hPDLFs的增殖,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法分析细胞凋亡。结果原代hPDLFs生长良好,加入刺激后第3天时,第4代hPDLFs的Mrrr值由高至低分别是：EMD组、对照组、EMD＋LPS组、LPS组。刺激48h后,LPS组凋亡率（12．10％±2．80％）大于EMD＋LPS组（8．07％±2．04％）、EMD组（3．68％±1．73％）和对照组（3．87％±1．27％）（P〈0．05）。结论EMD能减弱Pg-LPS对hPDLFs增殖的影响,并且降低Pg-LPS所导致的hPDLFs凋亡,可能是其促进牙周组织再生的重要机制。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞在牙骨质根面上生长的影响

目的观察釉基质蛋白(EMP)对牙周膜细胞(PDLC)在牙周炎患牙牙骨质根面上附着和增殖的影响。方法用EMP处理的牙周炎患牙根片为实验组,用生理盐水处理的患牙根片和健康牙根片分别作为对照。扫描电镜下观察PDLC在根面上的生长状况,用噻唑蓝比色法分析细胞在根片上的附着和增殖。结果实验组与健康对照组根片上,可见细胞间大量丝状伪足相连,优于病变对照组。实验组PDLC的附着和增殖显著多于病变对照组(附着:0·45±0·03与0·37±0·05,P<0·05;增殖:0·71±0·02与0·55±0·08,P<0·01),但低于健康对照组(附着:0·67±0·08,P<0·05;增殖:1·05±0·09,P<0·05)。结论EMP能促进PDLC在牙周炎患牙牙骨质根面上的附着和增殖。     

釉基质蛋白对牙周细胞覆盖体外创面的影响

目的：评价体外创面模型环境中,釉基质蛋白对牙周膜细胞、牙龈成纤维细胞覆盖创面能力的影响。方法：利用在盖玻片上形成的人牙周膜和牙龈成纤维细胞的融合培养物,以机械方法去除7mm宽的细胞层条带,形成体外创面模型。受损培养物在含有10％胎牛血清的培养液中继续培养2、6、9d,同时以100μg／ml的釉基质蛋白分别刺激牙周膜、牙龈成纤维细胞,并与不加釉基质蛋白者作对照。玻片经同定后作甲紫染色。以计算机辅助图像分析系统对细胞覆盖体外创面的面积进行百分比定量,采用SAS6、12软件包进行样本均数的t检验。结果：对照组组内牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖创面的面积存在差异,牙龈成纤维细胞覆盖创面面积在创面形成后第9天显著高于牙周膜细胞,差异有显著性（P〈0.05）。在加用100μg／ml釉基质蛋白的条件下,牙周膜细胞覆盖体外创面的面积较对照组明显增加．创面形成后第6、9天,牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖体外创面面积均无显著差异（P〉0．05）。结论：牙龈成纤维细胞覆盖创面的能力高于牙周膜细胞。釉基质蛋白有增进创面愈合,特别是牙周膜细胞创面覆盖的作用。     

细胞外基质磷酸化糖蛋白mRNA在人牙周韧带细胞成骨分化过程中的表达

目的 检测人牙周韧带细胞(periodontal ligament stem cell,PDLC)诱导矿化过程中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)和细胞外基质磷酸化糖蛋白(matrix extracellular phosphoglycoprotein,MEPE)mRNA的表达,探讨MEPE能否作为人牙周韧带细胞的分化标记及其功能.方法 酶消化法培养PDLC并鉴定其来源,取未诱导及矿化诱导7、14和21 d的PDLC,茜素红染色检测矿化结节的形成;免疫组织化学染色检测OCN的表达;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ALP、OCN和MEPE mRNA的表达变化,并对结果进行方差分析.结果 PDLC矿化诱导后茜素红染色显示钙化结节形成,免疫染色OCN表达增强;PDLC成骨诱导培养前ALP、OCN和MEPE mRNA表达系数分别为72、1.1和534.随着诱导时间延长,ALP、OCN和MEPE mRNA表达上调,诱导7 d组的表达系数分别为78、9.56和629.6,诱导14 d组的表达系数分别为290、133和638.3,诱导21 d组的表达系数分别为1108、925和2261.1.与对照组相比,各诱导组OCNmRNA的表达、诱导14 d和21 d组ALP mRNA的表达,以及诱导21 d组MEPE mRNA的表达,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在PDLC向成牙骨质或成骨样细胞分化过程中,MEPE mRNA与ALP和OCN呈现相似的表达变化趋势,提示MEPE与PDLC成骨分化有关,有可能作为PDLC向成牙骨质或成骨样细胞分化的标志.     

深低温冻存对牙周膜干细胞膜片增殖和分化能力的影响

目的：研究深低温冻存对牙周膜干细胞膜片增殖和分化能力的影响。方法：将牙周膜干细胞膜片用90％胎牛血清＋10％ DMSO 冻存液冻存3月后复苏,采用甲基噻唑基四唑（MTT）法、von Kossa 染色和油红 O 染色法检测冻存对增殖和分化的影响。结果：冻存牙周膜干细胞膜片与新鲜牙周膜干细胞膜片的增殖率和成骨、成脂分化能力没有明显差异。结论：牙周膜干细胞膜片经深低温保存后可继续保持冻存前原有的增殖能力和多向分化能力。     

Effects of enamel matrix protein application on the viability,proliferation, and attachment of human periodontal ligament fibroblasts to diseased root surfaces in vitro

OBJECTIVES: The purpose of this research was to examine the influence of enamel matrix proteins (EMP) on the viability, proliferation, and attachment of periodontal ligament fibroblasts (PDLF) to diseased root surfaces. MATERIALS AND METHODS: Primary cell cultures of PDFL were obtained from clinically healthy third molars or premolar teeth. Viability and proliferation rates were carried out over a 10-day period. A total of 80,000 cells were plated in 24-well plates followed by EMEM with 10% FBS (positive control) and EMEM plus EMP at 25, 50, 75, and 100 micro g/ml. Cells were harvested on days 1, 3, 5, 7, and 10 and viability was performed utilizing an MTS assay. PDLF proliferation rates were assessed by a CyQUANT GR dye assay. SEM analysis was used to examine the qualitative effects of cellular attachment to diseased root surfaces following EMP compared to nontreated controls. RESULTS: The results indicated that viability was negatively affected for higher doses over time while lower doses displayed viability effects similar to control. Proliferation, however, appeared to be ameliorated following exposure to EMP. The SEM analysis suggests that cellular attachment to diseased dentin was enhanced following EMP application. CONCLUSION: These in vitro studies support the concept that EMP may act as a suitable matrix for PDLF.