大鼠三叉神经本体觉中枢通路中VGluT1样阳性胞体和终末的生后发育、分布以及与PAG样阳性神经元的联系

本研究应用免疫组织化学和免疫荧光组织化学技术,在光镜和激光共聚焦显微镜下观察了大鼠脑干内三叉神经本体觉中枢通路中I型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1)样阳性神经元胞体和纤维终末的生后发育、表达和分布以及与磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)样阳性神经元之间的联系。结果显示:(1)新生(P0)大鼠所有的三叉神经中脑核(Vme)神经元的胞体内均可观察到VGluT1的表达,3d(P3)时,VGluT1的表达最强,之后至P11,VGluT1的表达随着发育逐渐下降。P11后,在Vme神经元的胞体内未检测到VGluT1样免疫阳性产物,但在阴性胞体周围可观察到VGluT1样免疫阳性终末分布;(2)生后0d,三叉神经脊束核吻侧亚核背内侧部及其邻接的外侧网状结构(Vodm-LRF)、三叉神经感觉主核背内侧部(Vpdm)和三叉上核尾外侧部(Vsup-CL)内已可观察到VGluT1样阳性纤维终末分布。生后7d,VGluT1样阳性纤维终末开始在三叉神经运动核腹侧区(AVM)、上橄榄核背侧区(ADO)出现;(3)激光共聚焦显微镜下,于生后12d在Vme、Vodm和Vpdm内和生后21d在Vsup-CL内分别观察到一些VGluT1样阳性终末与PAG样阳性神经元的胞体或树突形成密切接触。以上结果提示:VGluT1可能与生后发育过程中大鼠脑干内三叉神经本体感觉中枢通路的兴奋性联系的建立密切相关。     

多节段背根节慢性压迫大鼠机械触刺激诱发痛镜像痛的外周机制

目的:研究多节段背根节慢性压迫(chronic compression of multiple dorsal root ganglia,CCD)大鼠机械触刺激诱发痛镜像痛的外周机制。方法:制作单侧L3-L5 CCD模型大鼠,并应用von Frey filaments检测双侧机械触刺激诱发痛行为,利用免疫组织化学方法检测该模型大鼠同侧及对侧DRG大中型和小型神经元中与痛觉信息传递相关的神经肽-降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的表达情况。结果:CCD大鼠表现出明显双侧机械触刺激诱发痛行为;免疫组织化学结果显示,CCD模型大鼠同侧及对侧DRG大和中等大小神经元内,CGRP的表达与正常组大鼠DRG神经元比较有明显升高(P<0.05),而同侧及对侧DRG小神经元,CGRP的表达与正常组大鼠DRG神经元比较无明显变化(P>0.05)。结论:CCD模型大鼠双侧DRG内传递痛觉信息的神经肽CGRP表达升高,提示外周双侧DRG神经元内CGRP的可塑性变化可能参与多节段CCD模型大鼠机械触刺激诱发痛镜像痛的发生。     

外源性bFGF对坐骨神经钳夹损伤后脊髓DRG感觉神经元CGRP变化的影响

目的:观察外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对坐骨神经损伤后大鼠背根神经节(DRG)和脊髓后角内降钙素基因相关肽(CGRP)变化的影响。方法:成年雄性Wistar大鼠随机分成正常组、阳性对照组和bFGF组。阳性对照组动物右侧坐骨神经钳夹损伤,bFGF组动物右侧坐骨神经损伤后给予bFGF,在不同时间点运用免疫荧光技术结合图像分析检测相应背根节和脊髓后角CGRP的变化。结果:bFGF处理组术侧DRG内中小型神经元和脊髓后角内的CGRP表达明显高于阳性对照组,积分光密度值相比(P<0.05);但DRG内大型神经元内CGRP表达没有明显变化。结论:结果提示外源性bFGF能明显促进损伤后同侧DRG中小型神经元和脊髓后角CGRP的合成,对DRG内大型神经元中CGRP的表达没有明显影响。     

VGluT1样阳性终末在大鼠三叉神经本体觉中枢通路的第三级核团-“带状区”内的分布及来源

本文综合运用免疫组织化学、逆行束路追踪和免疫荧光组织化学双标技术,对Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1)样阳性终末在大鼠三叉神经本体觉中枢通路的第三级核团-“带状区”内的分布和来源、以及与向丘脑腹后内侧核(VPM)投射的神经元之间的联系进行了研究。结果显示:(1)在组成“带状区”的四个核团,即三叉神经感觉主核背内侧部(Vpdm)、三叉上核尾外侧部(Vsup-CL)、三叉神经运动核腹侧区(AVM)和上橄榄核背侧区(ADO)内,均可观察到大量的VGluT1样阳性终末呈密集分布;(2)将逆行追踪剂四甲基罗达明(TMR-DA)注入丘脑VPM后,在上述核团内均可观察到大量的TMR逆标神经元的胞体和突起;(3)在激光共聚焦显微镜下可观察到部分VGluT1样阳性终末包绕在TMR逆标神经元的胞体或树突周围,并与之形成密切接触;(4)当切断三叉神经感觉根7d后,光学显微镜下可观察到手术侧Vpdm内的VGluT1样阳性产物明显下降,其他三个核团内无明显变化,但当切断三叉神经运动根8周后,则在手术侧Vsup内观察到VGluT1样阳性产物几乎完全消失,而Vpdm、AVM和ADO内并无变化。以上结果提示:(1)大鼠三叉神经本体觉中枢通路的第三级核团-“带状区”的四个核团内均有大量的VGluT1样阳性终末分布,但它们的来源有所不同,其中Vpdm内的VGluT1样阳性终末来自于外周的三叉神经节细胞,Vsup内的VGluT1样阳性终末来自于三叉神经中脑核神经元,而AVM和ADO内的VGluT1样阳性终末可能来自于中枢其他核团;(2)口面部本体感觉信息从“带状区”向丘脑VPM传递的过程中,谷氨酸发挥着重要作用。     

成年猫L1～L7两侧背根节神经元数量的比较

5只正常成年雄性猫双侧L1～L7背根节(DRG)石蜡包埋,连续切片,显微镜观察计数,比较左、右DRG 神经元数量,为神经系统损伤后对神经元的存活和再生影响的研究提供DRG神经元计数资料.结果1)每只动物各节段左、右DRG神经元数量比较,比率在0.70～1.26 之间,个别节段两侧有显著性差异(P＜0.01),而每只动物左、右DRG神经元总数比较,比率在0.93-1.02(P＞0.5),两侧无显著性差异.2)5只动物L1 ～L7各节段左、右DRG神经元均数比较,两侧无显著性差异(P＞0.5).结论成年猫L1～L7各节段两侧DRG神经元数量呈对称性分布.     

应用病毒示踪技术观察大鼠两侧背根神经节的纤维联系

目的:通过伪狂犬病毒(PRV)逆行示踪技术观察Wistar大鼠两侧背根神经节(DRG)之间神经元的联系,寻找两侧DRG神经元交互支配的形态学基础。方法:选用18只正常成年雌性Wistar大鼠,分为单侧PRV组、双侧PRV组、霍乱毒素B亚单位(CTB)组(n=6)。单侧PRV组将2μl滴度为1×10~(10)的PRV-EGFP注射到左侧坐骨神经;双侧PRV组将2μl滴度为1×10~(10)的PRV-EGFP注射到左侧坐骨神经上,同时2μl滴度为1×10~(10)的PRV-mRuby注射到右侧坐骨神经上;CTB组将2μl浓度为1μg/μl的CTB注射到左侧坐骨神经上。5 d后观察病毒标记结果。结果:单侧PRV组在左侧DRG可见大量被PRV-EGFP标记的神经元,右侧DRG也观察到大量被PRV-EGFP标记的神经元,但数量明显少于左侧(P0.01)。双侧PRV组在左侧DRG可见大量被PRV-EGFP和PRV-mRuby标记的神经元,且有部分神经元被PRV-EGFP和PRV-mRuby同时标记。CTB组大鼠L_4脊髓前角神经元被CTB标记,DRG中枢突大量纤维终末被CTB标记。此外,L_2脊髓中背根神经节中枢突的大量纤维终末被CTB标记。单侧PRV组大鼠L_4脊髓前角神经元被PRV-EGFP标记,腰骶髓后连合核(DCN)有大量神经元被PRV-EGFP标记,L_2腰骶髓后连合核也有大量神经元被PRV-EGFP标记。结论:Wistar大鼠的左右侧DRG神经元之间存在交互支配的现象,两侧DRG神经元之间并没有直接的突触联系,而是通过后连合核等中间神经元跨突触联系。     

大鼠坐骨神经结扎后背根神经节神经生长因子的表达变化

目的:观察坐骨神经结扎后神经生长因子(NGF)在背根神经节的表达变化.方法:健康SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和坐骨神经结扎组,实验组结扎后分别存活1、 3、 5、 7、 14、 21、 28d,取腰4～6背根神经节(DRG),行NGF免疫组织化学显色结合图像分析技术分析其表达变化.结果:结扎后1d DRG NGF表达无明显变化;3d开始下降,7d达最低值,持续到21d;28d恢复正常.结论:神经结扎后DRG神经元NGF表达变化可能参与了神经损伤后的可塑性.     

大鼠坐骨神经切断后Robo2在脊髓及背根节的表达变化

目的:研究坐骨神经损伤后Roundabout 2(Robo2)在成年大鼠背根节和脊髓的表达变化。方法:健康成年雌性SD大鼠坐骨神经切断后分别存活3～28d,取其L_(4～6)背根节(DRG)和脊髓;利用RT-PCR和免疫组织化学技术检测Robo2在上述组织中的表达变化。图像分析技术对阳性细胞的灰度值进行测定。结果:正常DRG感觉神经元表达Robo2 mRNA和蛋白质,脊髓前角运动神经元不表达。坐骨神经切断后3 d DRG内Robo2表达增加,7～14 d达高峰,21～28 d恢复到正常水平。结论:坐骨神经切断可导致DRG内Robo2的表达上调,可能与早期的感觉轴突再生有关。     

脊髓小胶质细胞反应性在大鼠周围神经再生中的作用(英文)

为探讨大鼠坐骨神经损伤后脊髓小胶质细胞反应性、脊髓腹角运动神经元脱失与坐骨神经再生之间的关系,制备了SD大鼠右侧坐骨神经钳夹损伤模型,术后3d和7d测定相应脊髓节段小胶质细胞免疫反应性、腹角运动神经元数量,4周时于光镜和电镜下评价坐骨神经变性和再生。结果显示:(1)坐骨神经损伤后3d,脊髓腹角小胶质细胞OX-42免疫反应性开始明显增强(P<0.05);(2)脊髓腹角损伤同侧与对侧运动神经元数量比明显降低(P<0.05),说明同侧运动神经元存活数量减少;(3)组织学评价显示损伤神经再生不良;(4)simvastatin(一种降胆固醇药物,具有潜在的免疫调节作用)干预组较非simvastatin干预组小胶质细胞进一步激活,运动神经元存活数量增加,坐骨神经再生良好。本研究结果提示,脊髓腹角小胶质细胞的激活可能在大鼠周围神经损伤后的再生中发挥重要的保护作用。     

囊泡膜谷氨酸转运体与ASIC3或TRPV1在大鼠结状神经节内的共存研究(英文)

为了探讨囊泡膜谷氨酸转运体(VGluTS)与酸敏感离子通道亚基3(ASIC3)或瞬时感受器电位香草酸亚型1(TRPV1)样阳性产物在大鼠迷走神经结状神经节(nodoseganglia,NG)内的分布和共存,本研究采用免疫荧光组织化学双重标记技术,在激光共聚焦显微镜下观察了大鼠NG内VGluT1或VGluT2分别与ASIC3或TRPV1的共存情况。结果显示:(1)在NG内,VGluT2、ASIC3和TRPV1主要见于中、小型神经元的胞浆内,大型神经元少见,而VGluT1阳性神经元数量较少,主要见于大型或中型神经元;(2)部分VGluT2阳性神经元同时显示ASIC3或TRPVl免疫活性,其中VGluT2/ASIC3双标神经元分别占VGluT2阳性神经元的43.06%,占ASIC3阳性神经元的58.74%;而VGluT2/TRPVl双标神经元分别占VGluT2或TRPVl阳性神经元的5617%和51.12%;(3)VGluTI与ASIC3或TRPV1双标神经元的数量很少,不到1%。以上结果提示,VGluT2主要存在于NG内中、小型神经元,这些神经元通常被认为是内脏伤害性信息的初级感受神经元,因而VGluT2分别与ASIC3或TRPVl的共存表明它们可能与内脏伤害性信息的产生和传递密切相关。     

大鼠囊泡膜谷氨酸转运体和5羟色胺阳性终末与三叉神经中脑核神经元的联系(英文)

本研究应用免疫荧光组织化学三重染色技术和免疫电镜双重标记技术,对大鼠囊泡膜谷氨酸转运体 (VGluT1和VGluT2)和 5 -羟色胺(5- HT)阳性终末与三叉神经中脑核(Vme)神经元之间的联系进行了观察。在激光共聚焦显微镜下,Vme内可观察到许多磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)阳性神经元,其中绝大多数为大的假单极神经元。VGluT1和VGluT2免疫阳性的神经纤维和终末广泛分布于Vme内,其中VGluT2阳性纤维和终末的分布密度高于VGluT1。在Vme内还可观察到相当数量的 5- HT阳性终末,其中部分终末同时呈VGluT2免疫阳性。一些VGluT1、VGluT2、5- HT及VGluT2 /5- HT双重标记的阳性终末与PAG阳性的Vme神经元胞体形成密切接触。在电镜下,分别用银加强的金颗粒和DAB反应产物显示VGluT1 /VGluT2和 5- HT阳性终末。在Vme内只观察到部分终末呈VGluT2和 5- HT双重免疫阳性,并且这些终末主要形成非对称性突触。以上结果提示,在口面部本体感觉信息向更高一级中枢传递过程中,谷氨酸能和 5 HT能神经终末可能通过Vme神经元对该信息进行复杂的调控。     

下颌神经切断术后Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体在大鼠三叉神经复合体中表达的变化

目的观察下颌神经切断术后不同存活时间Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体（VGluT1）样免疫阳性物质在大鼠三叉神经复合体中表达水平的变化。方法免疫细胞化学和图像分析技术。结果正常大鼠三叉神经复合体内可观察到大量的VGluT1样免疫阳性物质,且主要分布于终末内。切断一侧下颌神经后,手术侧与对照侧相比,术后存活1周组的Vp背侧部内VGluT1样阳性物质的表达有所下降（P〈0．05）;术后存活2周组的Vp背侧部、Vc背侧部、Vi背侧部,以及Vsup和Vmo内VGluT1样阳性物质的表达明显下降（P〈0．01）,且与术后存活1周组手术侧比较其下降有显著差异（P〈0．05）;术后存活3周组上述部位内VGluT1样阳性物质表达的下降更加明显（P〈0．01）,且与前两组手术侧相比均有显著差异（P〈0．01或P〈0．05）;其中在Vmo内的表达几乎完全消失。结论切断初级传入神经元的周围突可以导致其中枢突终末内VGluT1的表达水平下降;三叉神经复合体内部分VGluT1样阳性终末来源于外周。     

大鼠脊髓内囊泡膜谷氨酸转运体与星形胶质细胞之间的联系(英文)

本研究应用双重免疫荧光组织化学法观察了大鼠脊髓胶质细胞内囊泡膜谷氨酸转运体 (VGlu Ts包括 VGlu T1,VG-lu T2及 VGlu T3 )的表达状况。结果显示 :大鼠脊髓内 VGlu T1、VGlu T2和 VGlu T3样阳性轴突终末与星形胶质细胞之间形成密切接触 ;部分星形胶质细胞同时呈 VGlu T3样免疫阳性。上述结果提示 ,脊髓内谷氨酸能神经终末与星形胶质细胞之间存在着信号传递 ;且在星形胶质细胞通过胞吐作用释放谷氨酸的过程中 VGlu T3可能发挥重要作用。     

大鼠囊泡膜谷氨酸转运体样和谷氨酸脱羧酶样阳性终末与表达GABAA受体α3亚单位的三叉神经中脑核神经元之间的联系

目的 观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)内囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1和DNPI)样和谷氨酸脱羧酶(GAD)样阳性终末与GABAA受体α3亚单位(GABAARα3)样阳性神经元之间的联系。方法 免疫荧光组织化学三重染色技术，在激光共聚焦显微镜下观察。结果 在Vme吻尾方向上，有大量的神经元胞体呈GABAARα3样免疫阳性，这些神经元多为大的假单极神经元(直径为25—50μm)。VGluT1样、DNPI样和GAD样免疫阳性终末密集分布于Vme内，一些VGluT1／DNPI样和GAD样阳性终末包绕在GABAARα3样阳性Vme神经元胞体周围，并与之形成密切接触。结论 Vme神经元在介导口面部本体感觉信息的传递过程中，可能同时接受中枢其他来源的谷氨酸能和GABA能终末的调控，其中GABA能终末的作用可能是通过GABAA受体实现的。     

Post-traumatic survival in different subpopulations of sensory neurons

An expression of high molecular component of neurofilament triplet NF200 (marker of neurons forming A-fibers) and binding of isolectin B4 (IB4) was examined immunohistochemically in LIV-LV dorsal root ganglia (DRG) neurons after ligation or transection of the sciatic nerve in rat. NF200 immunoreactivity was detected in 15% of all neurons in DRG of intact rats. Ligation of sciatic nerve caused a two-fold decrease in number of NF200-positive neurons by 90th day after nerve injury, however in animals treated with peripheral nerve regeneration stimulator xymedon the number of surviving NF200-positive neurons was increased by 50.7% as compared with control group (nerve ligation without treatment). In DRG of intact rats 23.6% of neurons showed IB4 binding. Of the DRG neurons 2.6% were labeled by IB4 at 30th day after ligation of the nerve. At 90th day after ligation no IB4-positive neurons were revealed in DRG of untreated rats, while xymedon treatment was shown to result in more than 8-fold increase in the number of surviving IB4-positive neurons. IB4-positive neurons have greater probability of entering the posttraumatic apoptosis. After nerve ligation the survival of NF200- and IB4-positive neurons was less than that one following nerve transection, suggesting that axon lengthening could be a the factor supporting neuronal survival. Pyrimidine derivative xymedon promoted the survival of neurons in both subpopulations with predominant effect on IB4-positive neurons.     

Long-term IL-1β exposure causes subpopulation-dependent alterations in rat dorsal root ganglion neuron excitability

The effect of interleukin-1β (IL-1β) on the electrical properties of sensory neurons was assessed at levels and exposure times comparable to those found in animal models of neuropathic pain. Experiments involved whole cell current-clamp recordings from rat dorsal root ganglion (DRG) neurons in defined-medium, neuron-enriched cultures. Five- to six-day exposure to 100 pM IL-1β produced subpopulation-dependent effects on DRG neurons. These included an increase in the excitability of medium-diameter and small-diameter isolectin B(4) (IB(4))-positive neurons that was comparable to that found after peripheral nerve injury. By contrast, a reduction in excitability was observed in large-diameter neurons, while no effect was found in small-diameter IB(4)-negative neurons. Further characterization of changes in medium and small IB(4)-positive neurons revealed that some, but not all, effects of IL-1β were mediated through its receptor, IL-1RI. Although the acute actions of IL-1β on sensory neurons have been well studied and related to acute and/or inflammatory pain, the present study shows how sensory neurons respond to long-term cytokine exposure. Such effects are relevant to understanding processes that contribute to the onset of neuropathic pain.     

益精养血方对帕金森病大鼠多巴胺能神经元Bcl-2及caspase-3表达的影响

为了观察益精养血方对帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)大鼠多巴胺能神经元Bcl-2及caspase-3表达的影响,本研究采用6-羟多巴胺注入右侧黑质制备的PD模型大鼠,实验分为模型组、实验(益精养血方)组和正常组。正常组和模型组大鼠用生理盐水灌胃,实验组大鼠用益精养血方灌胃,各30d。灌胃结束两周后进行旋转行为学检测,并用免疫荧光组织化学方法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元及神经纤维的变化,用免疫组织化学方法观测黑质神经元Bcl-2、caspase-3的表达。结果显示:(1)实验组大鼠的旋转圈数比治疗前明显减少(P<0.05);(2)实验组损毁侧与健侧黑质TH阳性神经元数量百分比和网状部TH阳性纤维面积百分比较模型组显著提高(P<0.05);(3)实验组损毁侧黑质神经元caspase-3表达的OD值比模型组显著降低(P<0.05),而Bcl-2的表达与caspase-3相反。以上结果提示益精养血方可使帕金森病大鼠黑质内多巴胺能神经元Bcl-2的表达升高,caspase-3的表达降低,进而明显抑制神经细胞的凋亡。     

针刺对脑源性神经营养因子在脊髓Ⅱ板层可塑性中表达的影响

采用免疫组化和原位杂交技术 ,探讨了针刺促进脊髓 板层可塑性过程中脑源性神经营养因子及其 m RNA表达的变化。结果显示 :针刺侧备用背根节的脑源性神经营养因子及其 m RNA阳性中 (4 2～ 5 7μm)、小 (<42 μm)型神经元的百分数有所增加 (P<0 .0 5 ) ;脊髓 板层的脑源性神经营养因子的阳性神经膨体密度明显增多 (P<0 .0 1)而阳性神经元百分数无变化 (P>0 .0 5 ) ;针刺后脊髓 板层未见脑源性神经营养因子 m RNA的杂交信号。提示针刺促进脊髓 板层可塑性可能与背根节中、小神经元表达脑源性神经营养因子的增多有关