大肠癌患者门静脉血p53和k-ras基因突变的检测及临床意义

目的 研究大肠癌患者门静脉血中基因突变检测的可行性,探讨门静脉血微转移癌细胞与大肠癌肝转移的关系。方法 以聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）／银染技术,检测55例大肠癌门静脉血中p53和k-ras基因的突变。结果 55例患者门静脉血中检出基因突变阳性22例（40％）,阳性检出与Dukes分期、肝转移显著相关。随访发现门静脉血基因突变阳性者,术后发生肝转移机会增加。结论 门静脉血内微转移癌细胞的基因突变检测有助于判断大肠癌恶性程度和患者预后,对早期诊断或预测大肠癌肝脏微小转移有一定的临床价值。     

大肠癌患者门静脉血癌细胞的检测及临床意义

目的 探讨门静脉血管癌细胞与大肠癌肝转移的关系。方法 以非核素ＲＴ－ＰＣＲ方法,对５４例大肠癌患者门静脉血中结肠癌细胞的标志物细胞角质蛋白２０（ＣＫ２０）进行了检测。结果 ５４例中,４１例门静脉血中检出ＣＫ２０阳性表达,阳性率７５．９％,ＣＫ２０阳性检出与Ｄｕｋｅｓ分期,肝转移存在显著性相关,随着Ｄｕｋｅｓ分期的进展ＣＫ２０阳性率显著增加,随访发现,门静脉血ＣＫ２０扩增阳性者,术后发生肝转移机会增     

门静脉血CEA—mRNA、CK20-mRNA动态检测对早期诊断结直肠癌肝转移的意义

目的动态检测结直肠癌患者门静脉血CK20mRNA、CEAmRNA的表达情况，探讨其对早期诊断结直肠癌肝转移的临床意义。方法40例结直肠癌患者随机分为两组（各20例），实验组术中留置门静脉埋植式给药装置（implantable drug delivery system，IDDS），术后常规随访加用荧光定量RT—PCR方法动态检测门静脉血CK20mRNA、CEAmRNA的表达情况；对照组常规术后随访。结果两组病例术后发生肝转移的时间和比例无显著性差异，发生肝转移的病例中，在影像学检查检出病灶的同时，几乎均有外周血CEA的增高，3例未发生肝转移的病例也可见外周血CEA的增高，实验组发生肝转移的病例则在影像学检查检出病灶之前3-9月即有门静脉血CK20mRNA、CEAmRNA的表达阳性。结论门静脉血CEA—mRNA、CK20-mRNA动态检测比外周血CAE检测和影像学检查更敏感、特异性更高，是早期诊断结直肠癌肝转移的有效方法。     

大肠癌K-ras、p53基因突变分析及其与肝转移的关系

目的 对大肠癌患者外周血、手术前后门静脉血及癌组织进行K-ras和p53基因突变分析,探讨K-ras和p53基因突变与结肠癌临床分期及肝转移的关系.方法 大肠癌患者45例,取外周血、手术前后门静脉血及癌组织标本,用PCR-SSCP方法进行K-ras和p53基因突变分析,比较不同标本K-ras和p53基因突变率,并探讨K-ras和p53基因突变与大肠癌分期及肝转移的关系.结果 不同标本K-ras基因突变率:癌组织>术后门静脉>术前门静脉血>外周血.p53基因突变率:癌组织>术后门静脉>术前门静脉血>外周血.大肠癌不同分期术后门静脉血K-ras基因突变率:Duke C>Duke B>Duke A(P<0.05);p53基因突变率:Duke C>Duke B>Duke A(P<0.05).大肠癌术后肝转移组K-ras基因突变率78.6%(11/14).显著高于非肝转移组(P<0.05);肝转移组p53基因突变率71.4%(10/14),显著高于非肝转移组(P<0.05).术后门静脉血K-ras基因突变阳性对诊断大肠癌肝转移的敏感性和特异性分别为78.6%(11/14)和67.7%(21/31);p53基因突变阳性对诊断肝转移的敏感性和特异性分别为71.4%(10/14)和61.3%(19/31).结论 结肠癌术后门静脉血K-ras基因和p53基因突变均有较高的阳性率,术后门静脉血K-ras和p53基因突变与肿瘤分期呈正相关,对预测术后肝转移有一定的应用价值.     

定量RT-PCR方法检测大肠癌外周血CEAmRNA方法及临床应用

目的：介绍定量巢式反转录聚合酶链反应（Nested-RT-PCR)检测大肠癌外周血CEAmRNA方法及其临床应用,提高大肠癌及其转移的早期诊断率,方法：用竞争性Nested-RT-PCR方法检测了10例大肠癌患者术前和术后外周血CEAmRNA并进行定量。结果：成功建立了定量Nested-RT-PCR技术检测CEAmRNA方法。10例标本中8例为阳性,并且随着治疗的进展,CEAmRNA的量也逐渐变化。结论：定量巢式反转录聚合酶链反应检测技术检测大肠癌患者外周血CEAmRNA的方法稳定可靠,可进行量化,对大肠癌及大肠癌术后转移的早期诊断有重要意义。     

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目的　介绍定量巢式反转录聚合酶链反应 (Nested RT PCR)检测大肠癌病人外周血CEAmRNA含量及临床意义。方法　 1999年 4月至 2 0 0 1年 6月用竞争性Nested RT PCR方法检测 2 0例大肠癌病人手术前后CEAmRNA值 ,并将 1998年 12月至 2 0 0 1年 6月的 30例术后大肠癌病人分 3个治疗组 (5 FU MMC组、5 FU CF L OHP组和 5 FU CF 放疗组 )对治疗前后的外周血进行定量检测CEAmRNA含量 ,并进行对比性研究。结果　 2 0例大肠癌术后外周血CEAmRNA含量均有不同程度下降 ,平均降低 1 0 9× 10 5倍。术前与术后CEAmRNA含量差异有显著性 (P <0 0 1)。 3组术后大肠癌经不同放、化疗方案治疗后外周血CEAmRNA含量均降低且差异有显著性 (P <0 0 1) ,其中以 5 FU CF 放疗组CEAmRNA含量降低最明显 (P <0 0 5 )。结论　通过定量检测大肠癌病人外周血CEAmRNA含量 ,表明手术仍然是最有效的治疗方法 ,而术后联合化疗放疗的辅助治疗是十分必要的。     

结直肠癌患者CEAmRNA表达与血清CEA及相关蛋白联合检测的临床意义

为探讨结直肠癌患者外周血癌胚抗原信使核糖核酸（CEAmRNA）的表达与血清癌胚抗原（CEA）联合CA19—9、CA242和CA724蛋白检测的临床意义,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和化学发光法,检测125例术前和96例术后结直肠癌患者及150名健康对照者外周血中CEAmRNA表达和血清CEA、CA19-9、CA242和CA724蛋白水平。结果结直肠癌患者血清CEA及相关蛋白联合检测的阳性率为79．1％,高于CEAmRNA（53．6％）和健康对照者（2．7％）,有显著性差异（P〈0．01）。两种方法阳性检出率与肿瘤Dukes分期、淋巴结及脏器转移明显相关。血清CEA及相关蛋白联合检测阳性率在分化程度低的患者组中为74．3％,明显高于高分化组（52．8％）,有显著性差异（P〈0．01）,而CEAmRNA表达与肿瘤细胞分化程度无关。术后随访中发现CEAmRNA和血清CEA及相关蛋白水平明显增高的患者,均发生肝、肺和盆腔等远处转移。结果表明,外周血CEAmRNA和血清CEA联合CA19—9、CA242和CA724的检测可作为判断结直肠癌恶性程度、转移及监测疗效的重要指标,血清CEA及相关蛋白联合检测的敏感度优于外周血CEAmRNA表达。     

大肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达及其意义

目的　探讨大肠癌患者外周血CK2 0mRNA的表达及其意义。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 4 2例大肠癌患者术前、术后外周血及 2 0例大肠癌患者新鲜癌组织标本中CK2 0mRNA的表达 ,另以 2 0例健康成年自愿者作对照。结果　 4 2例大肠癌患者外周血CK2 0mRNA呈阳性表达者术前为 19例(45 .2 4 % ) ,术后为 14例 (33.33% ) ;2 0例大肠癌患者新鲜癌组织中CK2 0mRNA表达均为阳性。而正常对照组2 0例外周血CK2 0mRNA表达均为阴性。且大肠癌外周血CK2 0mRNA阳性表达与组织学类型无关 (P >0 .0 5 ) ,但与有无淋巴结转移、肝转移及Dukes分期有关 (P<0 .0 5 )。结论　检测外周血中CK2 0mRNA表达将有助于大肠癌的早期诊断、预后的判断及治疗方案的制定。     

胆囊胆汁中CEA mRNA的表达与大肠癌肝转移关系的研究

目的 研究胆囊胆汁中CEA mRNA测定对大肠癌肝转移早期诊断中的临床价值。方法 使用巢式RT－PCR方法,检测46例大肠癌患者胆囊胆汗中CEA mRNA的表达情况。结果 46例患者胆囊胆汁中查出CEAmRNA阳性表达者33例,阳性率74％,阳性检出率与肝脏转移存在显著相关性。胆囊胆汁中CEAmRNA扩增阳性者,术后发生肝转移率为33％。结论 胆囊胆汁中CEAmRNA的检出是肝转移的佐证,有助于临床早期诊断和预测大肠癌的肝脏微转移,对于指导临床的及时恰当治疗具有重要意义。     

大肠癌肿瘤细胞组织因子的表达及其临床意义

目的探讨组织因子在大肠癌肿瘤细胞的过度表达及其临床意义。方法免疫组化染色检测32例大肠癌手术切除标本中组织因子蛋白的表达，分析组织因子蛋白过度表达与大肠癌的临床分期、淋巴结转移以及肝转移等的关系。结果大肠癌肿瘤细胞中，组织因子蛋白的过度表达率为62．5％（20／32例）；Duke分期高的大肠癌病例，肿瘤细胞的组织因子蛋白过度表达率较高：肿瘤细胞的组织因子蛋白过度表达的病例倾向于发生大肠癌淋巴结转移和肝转移。结论组织因子在大肠癌肿瘤细胞中存在过度表达。并在大肠癌的发生发展中可能发挥重要作用。     

CK19/20检测对结直肠癌微转移的诊断意义

目的 探讨 CK19/20mRNART-PCR检测对结直肠癌微转移的诊断意义。方法 采用RT-PCR逆转录多聚酶链反应）方法检测42例结、直肠癌患者及对照组6例非恶性病变腹部手术患者骨髓血、门静脉血和外周血CK19mHNA及 CK20 mRNA的表达。结果 对照组6例患者无 CK19及 CK20阳性表达,CK19及CK20在42例结、直肠癌患者骨髓血、门静脉血及外周血中阳性表达分别为24/42、21/42、11/42及27/42、18/42、11/42,两间无显著差异（P>0.05）,骨髓和门静脉中表达比外周血高（P<0.01）,Dukes　C 期患者表达高于Dukes A、B期（P<0.05）。结论 CK19、CK20的RT-PCR检测是较敏感和特异的结、直肠癌微小转移指标,阳性表达患者有较高发生远处转移的危险。     

检测细胞角蛋白19和20对结直肠癌微转移的诊断意义

目的探讨检测细胞角蛋白19（CK19）和CK20的表达对结直肠癌微转移的诊断意义。方法采用RT-PCR方法检测44例结直肠癌患者（结直肠癌组）及18例非恶性病变腹部手术患者（良性病变组）门静脉血和外周血CK19和CK20的表达。结果良性病变组患者门静脉血和外周血均无CK19或CK20阳性表达。结直肠癌组患者外周血和门静脉血中CK19和（或）CK20均阳性表达者34例（77．3％）。与良性病变组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结直肠癌组外周血CK19和CK20的阳性表达率分别为36．4％和52．3％．门静脉血则分别为59．1％和72．7％,高于外周血的阳性表达率（P〈0．05）：Ⅲ期结直肠癌患者CK19和（或）CK20的阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者（P〈0．05）。外周血CK19和（或）CK20阳性表达者术后转移或复发率61．5％,明显高于仅在门静脉血中CK19和（或）CK20阳性者的25．0％（P〈0．05）。结论外周血和门静脉血中CK19和CK20的RT—PCR检测是判断结直肠癌患者有无血行微转移的敏感和特异性诊断方法之一。     

CD4+、CD8+和NK在结直肠癌中的表达及其与淋巴结微转移的关系

目的 检测不同Dukes分期结直肠癌患者淋巴结细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达及外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与NK细胞活性表达,探讨两者间关系.方法 采用常规苏木素.伊红(HE)染色病理切片检测21例结直肠癌患者281枚淋巴结转移癌灶及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者淋巴结CK20 mRNA表达;采用流式细胞仪检测患者外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞活性表达.结果 HE染色法检出有淋巴结转移者为16枚(6%,16/281),RT-PCR法检出有淋巴结转移者140枚(50%,140/281);按有淋巴结微转移重新Dukes分期后,手术前,A、B期患者血CD4+、CD4+/CD8+高于c期(P<0.05);A期患者血CD8+低于C期(P<0.05);B期患者血NK细胞活性高于C期(P<0.05).新Dukes分期与血CD4+呈负相关(r=-0.497,P<0.01);与CD4+/CD8+呈负相关(r=-0.714,P<0.01);与CD8+呈正相关(r=0.945,P<0.01).结论 RT-PCR方法对淋巴结微转移的检出率明显优于HE染色切片法,结直肠癌淋巴结微转移的发生与患者免疫功能明显低下密切相关.     

肝癌病人手术期间不同部位血液AFP mRNA定量检测及其意义探讨

目的 研究肝细胞性肝癌(HCC)病人手术期间不同部位血液甲胎蛋白信使核糖核酸(AFP mRNA)的水平变化，分析其与临床病理学特征和复发转移的关系。方法 18例HCC和6例非HCC肝肿瘤病人，于切除肿瘤前后抽取门静脉、肝静脉和外周静脉血各5m1，肝炎、肝硬化病人各10例取外周血5m1。应用TaqMan实时定量逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)检测AFP mRNA水平。结果 术前外周血AFP mRNA相对HCC的灵敏度为72．2％，特异性为76.9％，准确率为75．0％。HCC病人术后各部位血液AFP mRNA水平明显高于术前相应部位水平。血液AFP mRNA水平与肿瘤大小、分化程度、有无肝内播散、包膜完整性以及血清AFP浓度均无关，而有门静脉癌栓的病人术后肝静脉血AFP mRNA水平明显高于无癌栓者。术后2个月内复发者，术后门静脉和外周静脉血AFP mRNA水平明显高于末复发者。结论 TaqMan实时定量RT—PCR法检测HCC病人血液AFP mRNA有较高的敏感性和特异性。手术可能促进部分HCC细胞和肝细胞脱落入血。动态监测外周血AFP mRNA水平对术后早期复发有预测价值。     

Carcinoembryonic antigen (CEA) levels of peripheral and portal blood and tumor histopathology in colorectal cancer

Correlation between CEA levels of peripheral and portal blood and 9 histopathologic variables were examined in 66 patients with colorectal cancer. CEA levels of portal blood (mean 26.6ng/ml and positive rate more than 5ng/ml, 59.1%) were significantly higher than those (8.1ng/ml and 33.3%) of peripheral blood. Elevation of CEA levels in portal and peripheral blood were most highly correlated with the grade of vein invasion and its location in the layer of colorectal wall, although the levels were related to the other 8 histopathologic variables such as tumor size, the grade of node metastases, Dukes stage and so on. CEA levels of portal blood elevated from 19.4ng/ml and 40% to 43.6ng/ml and 90.2% respectively following operative stimuli to cancer lesions with vein invasion, but the levels did not elevated in the lesions without its invasion. CEA levels of peripheral blood were as low as 5ng/ml in 3 out of 8 patients with liver metastases. However, the levels in portal blood were much higher than 5ng/ml in all the patients. These results suggested that CEA might be hematogenously drained by portal system from cancer cells in the invasive veins, but not by thoracic duct of lymphatic system, and also that the measurement of CEA in portal blood might be available to predict the vein invasion of cancer lesions and liver metastases in patients with colorectal cancer.     

大肠癌患者外周血中癌细胞检测的临床意义

目的探讨大肠癌患者外周血微转移的检测及临床意义。方法以CK20非同位素RT．PCR方法,检测54例大肠癌患者术前和术后不同时间外周血中结肠癌细胞。结果54例病人外周血中查出CK20阳性表达32例,阳性率59．63％,CK20阳性检出与Duke’s分期、淋巴转移存在差别有显著性。术后3天内外周血CK20阳性检出较术前多出3例,术后早期短程化疗结束后16例转阴。结论大肠癌在早期就可能已累及全身,外周血中CK20的检测可帮助综合判断疾病恶性程度及患者预后,为指导辅助化疗提供了理论依据。术后早期短程化疗对控制大肠癌微转移具有一定的作用。     

结直肠癌临床病理特征与复发和转移的相关性研究

目的探讨导致结直肠癌术后复发和转移的临床病理因素。方法通过单因素分析和多因素的Logistic回归分析方法,将结直肠癌根治术后复发或转移的104例患者(研究组)与未复发和转移患者(对照组)的临床资料进行对比分析。结果多因素的Logistic回归分析结果提示,只有Dukes分期与结直肠癌的复发相关(P=0.004);但在DukesC期中,研究组低分化腺癌和黏液腺癌比对照组显著增加(P<0.001),提示在DukesC期时,组织学类型与复发相关。Dukes分期(P=0.001)、微血管内有癌栓(P=0.020)和血清癌胚抗原(CEA)水平(P=0.010)与结直肠癌的转移相关(P值分别为0.001、0.020和0.010)。结论Dukes分期与结直肠癌术后的复发和转移均相关;而微血管内有癌栓、血清CEA水平则与结直肠癌的转移相关。