脊髓胶质纤维酸性蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶在慢性神经痛发病中的作用

目的:探讨慢性坐骨神经挤压损伤大鼠脊髓组织中胶质纤维酸性蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶表达的改变。方法:实验于2003-06/09在军事医学科学院毒物药物研究所一室完成。雄性SD大鼠12只,随机分为2组,假手术组和慢性坐骨神经挤压损伤组,每组6只。按Bennett法,大鼠腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg后,假手术组暴露右侧坐骨神经不结扎,慢性坐骨神经挤压损伤组在该神经主干部位,用4-0铬制羊肠线松结扎4道。两组术后7和14d以von-Freyfilaments和冰水测定触痛及冷刺激反应,采用免疫组化法测定慢性坐骨神经挤压损伤大鼠脊髓组织中胶质纤维酸性蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶表达的改变。结果:12只大鼠全部进入结果分析。①术后7和14d,慢性坐骨神经挤压损伤组(术侧)触痛阈值分别下降80.3%和84.8%,冷刺激反应分别升高309.4%和336.2%,组间比较差异有显著性(P<0.01)。②术后14d,慢性坐骨神经挤压损伤大鼠双侧脊髓背角胶质细胞胶质纤维酸性蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶表达均有增加,手术侧分别增加246.4%和173.6%,与假手术组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:慢性坐骨神经损伤后,中枢神经系统胶质细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶通路激活,可能参与慢性神经痛的发病过程。     

神经干细胞移植治疗大鼠恢复期脊髓损伤

背景：研究发现,脊髓损伤后细胞外信号调节激酶在反应性胶质细胞中存在上调现象,且磷酸化的细胞外信号调节激酶急剧增多.目的：验证神经干细胞移植对恢复期脊髓损伤大鼠的功能影响及其在病灶局部的分化及机制.方法：90只SD大鼠被随机分为3组,每组30只.对照组大鼠造模但不进行神经干细胞移植;静脉移植组及局部移植组造模后分别进行神经干细胞移植,分别于移植后的1,2,4,12,24周对各组随机抽取的6只动物后肢功能进行BBB评分及免疫组织化学染色.结果与结论：神经干细胞移植后,静脉移植组和局部移植组病灶局部可见 Brdu 阳性细胞;大鼠 BBB评分逐渐提高,移植4周后静脉移植组和局部移植组BBB评分明显高于同期对照组;大鼠脊髓胶质纤维酸性蛋白、细胞外信号调节激酶1/2逐渐提高,4周达最大值,移植12周后胶质纤维酸性蛋白、细胞外信号调节激酶1/2较同期减少（P〈0.05）;微管相关蛋白2逐渐提高,4周达最大值,4周以后呈下降趋势,12周后不再有明显变化,但微管相关蛋白2较同期对照组增多（P〈0.01）.结果提示,神经干细胞移植后可在病灶局部增殖分化为神经元和神经胶质细胞;两种移植方式的作用没有明显区别;神经胶质细胞再生的过程和细胞外信号调节激酶通路密切相关.     

曲马多对慢性压迫性坐骨神经损伤模型大鼠脊髓突触重塑的影响

目的：探讨曲马多对大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤脊髓星形胶质细胞突触重塑的影响。 方法：实验于2004-09／2005-02在广州军区武汉总医院中心实验室完成。选择雌性SD大鼠24只，随机分为4组，各组6只，慢性压迫性损伤组、假手术组、慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组、慢性压迫性损伤＋曲马多10mg／kg组。制作坐骨神经慢性压迫性损伤模型，大鼠麻醉后，暴露右侧坐骨神经，在最靠近坐骨神经分叉处，把神经从附着的组织中游离出来，套上4根4—0铬制羊肠线，将神经松弛地结扎，直到神经的外膜稍稍受压为止，每个结相距1．0mm。慢性压迫性损伤后4d开始每天腹腔注射曲马多，早晚各1次，剂量5或10mg／kg，持续10d。于慢性压迫性损伤前、损伤后4，7，14d观察大鼠机械痛阈的变化。所有大鼠在损伤后14d行组织灌注固定，应用免疫组织化学双重标记法同时显示胶质纤维酸性蛋白和突触体素在脊髓组织的表达。 结果：纳入动物24只，均进入结果分析。①慢性压迫性损伤组在损伤后4d痛阈与假手术组相比明显降低，此后痛阈一直稳定在较低水平即痛敏状态，慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组痛阈变化与慢性压迫性损伤组差别不大，而慢性压迫性损伤＋曲马多10mg／kg组痛阈变化与假手术组基本一致。②胶质纤维酸性蛋白和突触体素免疫阳性产物主要定位于脊髓患侧背角浅层，慢性压迫性损伤组、慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组突触体素和胶质纤维酸性蛋白免疫阳性产物与假手术组相比明显增多。③慢性压迫性损伤组损伤侧脊髓突触体素免疫阳性产物A值与假手术组手术侧相比高66％（分别为21．1&;#177;0.9，12．7&;#177;1．2，P〈0．01）；慢性压迫性损伤＋曲马多10mg／kg组损伤侧与慢性压迫性损伤组相比低38％，差异有显著性意义（分别为13.1&;#177;0．9，21．1&;#177;0．9，P〈0．01），而慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组损伤侧（19．2＋1．3）与慢性压迫性损伤组相比差异无显著性意义（P〉0．05）。④脊髓胶质纤维酸性蛋白免疫阳性产物A值慢性压迫性损伤组损伤侧与假手术组手术侧相比高43％（分别为5．7&;#177;0．4，4．0&;#177;0．5，P〈0．01）；慢性压迫性损伤＋曲马多10mg／kg组损伤侧与慢性压迫性损伤组相比低32％，差异有显著性意义（分别为3．9&;#177;0．4，5．7&;#177;0．4，P〈0．01），而慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组损伤侧（5．4&;#177;0．6）与慢性压迫性损伤组相比差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：慢性压迫性坐骨神经损伤后脊髓背角突触体素和胶质纤维酸性蛋白的表达均明显增多，曲马多10mg／kg对其有抑制作用。     

微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的作用

目的：观察脊髓损伤大鼠进行微囊化兔坐骨神经组织细胞移植后胶质纤维酸性蛋白表达的变化。 方法：实验于2004-03／2005—02在江西医学院人体解剖学教研室应用解剖研究室完成。①选取健康成年家兔10只，用于制备坐骨神经组织细胞。②选取健康成年SD大鼠130只，随机分为4组：正常对照组10只、损伤对照组40只、细胞悬液组40只、微囊组40只。③损伤对照组、细胞悬液组、微囊组大鼠均建立脊髓半横断伤模型，于损伤处分别植入明胶海绵、明胶海绵吸附的10μL细胞悬液、明胶海绵吸附的10μL微囊化坐骨神经组织细胞。移植前后均不使用免疫抑制剂。正常对照组未给予材料移植。④损伤对照组、细胞悬液组、微囊组大鼠分别于术后3。7，14，28d取材，每时相点10只，行免疫组织化学染色，观察胶质纤维酸性蛋白表达的变化。 结果：实验选取健康成年SD大鼠130只，全部进入结果分析。①术后各组脊髓切片炎性反应苏木精染色结果：脊髓损伤后3d，损伤对照组和细胞悬液组可见明显核固缩，部分神经元萎缩变小，神经元数量减少，细胞边界模糊不清，并有大量巨噬细胞浸润；第7天损伤对照组和细胞悬液组炎性反应进一步加剧，有大量的噬中性粒白细胞浸润，但微囊组少见；第14天损伤对照组和细胞悬液组胶质细胞明显增生、肥大，炎性反应减轻，神经元的形态有所恢复，而微囊组炎性反应较轻，胶质细胞增生减少。②术后各组脊髓切片胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色结果；正常对照组可见胶质纤维酸性蛋白染色阳性细胞，空白及阴性对照染色未见阳性反应。损伤对照组和细胞悬液组术后3，7，14d内胶质纤维酸性蛋白的表达呈进行性增高趋势，28d回落。微囊组术后7，14，28d胶质纤维酸性蛋白的表达显著低于损伤对照组、细胞悬液组（P〈0?     

曲马多对慢性压迫性坐骨神经损伤模型大鼠脊髓突触重塑的影响

目的:探讨曲马多对大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤脊髓星形胶质细胞突触重塑的影响。方法:实验于2004-09/2005-02在广州军区武汉总医院中心实验室完成。选择雌性SD大鼠24只,随机分为4组,各组6只,慢性压迫性损伤组、假手术组、慢性压迫性损伤 曲马多5mg/kg组、慢性压迫性损伤 曲马多10mg/kg组。制作坐骨神经慢性压迫性损伤模型,大鼠麻醉后,暴露右侧坐骨神经,在最靠近坐骨神经分叉处,把神经从附着的组织中游离出来,套上4根4-0铬制羊肠线,将神经松弛地结扎,直到神经的外膜稍稍受压为止,每个结相距1.0mm。慢性压迫性损伤后4d开始每天腹腔注射曲马多,早晚各1次,剂量5或10mg/kg,持续10d。于慢性压迫性损伤前、损伤后4,7,14d观察大鼠机械痛阈的变化。所有大鼠在损伤后14d行组织灌注固定,应用免疫组织化学双重标记法同时显示胶质纤维酸性蛋白和突触体素在脊髓组织的表达。结果:纳入动物24只,均进入结果分析。①慢性压迫性损伤组在损伤后4d痛阈与假手术组相比明显降低,此后痛阈一直稳定在较低水平即痛敏状态,慢性压迫性损伤 曲马多5mg/kg组痛阈变化与慢性压迫性损伤组差别不大,而慢性压迫性损伤 曲马多10mg/kg组痛阈变化与假手术组基本一致。②胶质纤维酸性蛋白和突触体素免疫阳性产物主要定位于脊髓患侧背角浅层,慢性压迫性损伤组、慢性压迫性损伤 曲马多5mg/kg组突触体素和胶质纤维酸性蛋白免疫阳性产物与假手术组相比明显增多。③慢性压迫性损伤组损伤侧脊髓突触体素免疫阳性产物A值与假手术组手术侧相比高66%(分别为21.1±0.9,12.7±1.2,P<0.01);慢性压迫性损伤 曲马多10mg/kg组损伤侧与慢性压迫性损伤组相比低38%,差异有显著性意义(分别为13.1±0.9,21.1±0.9,P<0.01),而慢性压迫性损伤 曲马多5mg/kg组损伤侧(19.2±1.3)与慢性压迫性损伤组相比差异无显著性意义(P>0.05)。④脊髓胶质纤维酸性蛋白免疫阳性产物A值慢性压迫性损伤组损伤侧与假手术组手术侧相比高43%(分别为5.7±0.4,4.0±0.5,P<0.01);慢性压迫性损伤 曲马多10mg/kg组损伤侧与慢性压迫性损伤组相比低32%,差异有显著性意义(分别为3.9±0.4,5.7±0.4,P<0.01),而慢性压迫性损伤 曲马多5mg/kg组损伤侧(5.4±0.6)与慢性压迫性损伤组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:慢性压迫性坐骨神经损伤后脊髓背角突触体素和胶质纤维酸性蛋白的表达均明显增多,曲马多10mg/kg对其有抑制作用。     

睫状神经营养因子对坐骨神经切断吻合后大鼠脊髓前角胶质纤维酸性蛋白表达的影响

背景:睫状神经营养因子具有多种生物活性,在神经系统发育、分化和损伤修复中具有重要意义.目的:观察睫状神经营养因子对坐骨神经切断吻合后大鼠相应脊髓节段前角星形胶质细胞的特异标记物胶质纤维酸性蛋白表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、生理盐水组及药物组.除对照组外,对所有大鼠实施双侧坐骨神经切断吻合术,药物组手术区局部注射睫状神经营养因子100 ng/kg,1次/d,生理盐水组局部注射等量生理盐水.术后1,3,7,14,21,28 d取相应脊髓节段,免疫组织化学染色观察胶质纤维酸性蛋白的表达,苏木精伊红染色、TUNEL染色对脊髓前角神经元进行计数.结果与结论:大鼠坐骨神经切断吻合后相应脊髓节段星形胶质细胞胞体大,突起分枝多且粗大,神经元数目逐渐减少,凋亡神经元增多,胶质纤维酸性蛋白表达增高.与模型组和生理盐水组比较,药物组神经元存活数目增多,凋亡减少,胶质纤维酸性蛋白表达明显增加(P<0.05或P<0.01).同时,药物组大鼠的运动功能障碍较轻,恢复较快.说明睫状神经营养因子可以通过促进大鼠脊髓前角胶质纤维酸性蛋白的表达起到神经保护作用.     

微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的作用

目的:观察脊髓损伤大鼠进行微囊化兔坐骨神经组织细胞移植后胶质纤维酸性蛋白表达的变化。方法:实验于2004-03/2005-02在江西医学院人体解剖学教研室应用解剖研究室完成。①选取健康成年家兔10只,用于制备坐骨神经组织细胞。②选取健康成年SD大鼠130只,随机分为4组:正常对照组10只、损伤对照组40只、细胞悬液组40只、微囊组40只。③损伤对照组、细胞悬液组、微囊组大鼠均建立脊髓半横断伤模型,于损伤处分别植入明胶海绵、明胶海绵吸附的10μL细胞悬液、明胶海绵吸附的10μL微囊化坐骨神经组织细胞。移植前后均不使用免疫抑制剂。正常对照组未给予材料移植。④损伤对照组、细胞悬液组、微囊组大鼠分别于术后3,7,14,28d取材,每时相点10只,行免疫组织化学染色,观察胶质纤维酸性蛋白表达的变化。结果:实验选取健康成年SD大鼠130只,全部进入结果分析。①术后各组脊髓切片炎性反应苏木精染色结果:脊髓损伤后3d,损伤对照组和细胞悬液组可见明显核固缩,部分神经元萎缩变小,神经元数量减少,细胞边界模糊不清,并有大量巨噬细胞浸润;第7天损伤对照组和细胞悬液组炎性反应进一步加剧,有大量的噬中性粒白细胞浸润,但微囊组少见;第14天损伤对照组和细胞悬液组胶质细胞明显增生、肥大,炎性反应减轻,神经元的形态有所恢复,而微囊组炎性反应较轻,胶质细胞增生减少。②术后各组脊髓切片胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色结果:正常对照组可见胶质纤维酸性蛋白染色阳性细胞,空白及阴性对照染色未见阳性反应。损伤对照组和细胞悬液组术后3,7,14d内胶质纤维酸性蛋白的表达呈进行性增高趋势,28d回落。微囊组术后7,14,28d胶质纤维酸性蛋白的表达显著低于损伤对照组、细胞悬液组(P<0.01)。结论:微囊化异种坐骨神经组织细胞移植能抑制损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白的表达,减轻由反应性胶质化所形成的胶质瘢痕。     

异体骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

背景:脊髓损伤的修复目前尚无良好的治疗手段,细胞移植能促进神经轴突再生及脊髓功能恢复,为治疗脊髓损伤提供了可能,但因脊髓损伤模型及移植方式不同,其治疗效果并不相同.目的:验证异体骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤的治疗作用.方法:全骨髓贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞.健康SD大鼠随机分为3组,细胞移植组、对照组和假手术组.细胞移植组和对照组采用改良Allen重物打击法制造大鼠脊髓损伤模型,假手术组仪暴露脊髓.术后4周,每周进行运动功能评分,ELISA检测脊髓损伤组织中脑源性神经营养因子、神经生长因子表达;免疫荧光染色检测脊髓组织中NF200和胶质纤维酸性蛋白表达.结果与结论:与对照组比较,细胞移植组大鼠运动功能明显改善,脊髓组织中脑源性神经营养因子、神经生长因子蛋白含量明显增高(P<0.05);移植组大鼠脊髓囊腔较小,NF200表达明显增加,胶质纤维酸性蛋白表达减少.提示异体骨髓间充质干细胞移植能增加损伤脊髓神经生长因子含量,抑制胶质瘢痕形成,促进神经轴突再生,改善大鼠脊髓损伤后运动功能恢复.     

术前给予巴氯酚延迟坐骨神经松结扎神经病理痛的形成

目的研究术前鞘内注射GABAB受体激动剂巴氯酚（Bac）对慢性神经病理痛大鼠痛阈的影响，探讨脊髓GABA能系统在神经病理痛调节中的作用。方法建立慢性坐骨神经结扎损伤模型（CCI），SD大鼠32只随机分成4组：假手术组，大鼠左侧坐骨神经分离，但不结扎，术前鞘内注射生理盐水10μL；神经结扎组，大鼠左侧坐骨神经松结扎，术前鞘内注射生理盐水10μL；Bac1组，大鼠左侧坐骨神经松结扎前10min，鞘内注射Bac0．03旭；Bac2组，大鼠左侧坐骨神经松结扎前10min，鞘内注射Bac0．3,ug。术后第1、3、5．7、10、14天测大鼠机械刺激缩足反射阈值（MWT）和热刺激缩足反射潜伏期（TWL）以及运动功能。结果术后第1～14天神经结扎组大鼠MWT和个TWL较假手术组大鼠明显降低（P〈0．05）；术前给Bac0．3越的坐骨神经结扎大鼠与术前给生理盐水的坐骨神经结扎大鼠比较，术后第1～5天MWT和TWL明显升高（P〈0．05）。结论坐骨神经结扎前鞘内注射Bac0．3μg可延缓大鼠神经病理性疼痛的形成。     

电针任脉腧穴对脑缺血大鼠海马星形胶质细胞的调节效应

目的：观察电针任脉腧穴对于局灶性脑缺血大鼠损伤侧海马星形胶质细胞的转归是否有特异性的正面影响。方法：实验于2004—06／2005-06在中山大学北校区人体解剖教研室完成。Wistar雄性大鼠42只，以随机数字表随机分为假手术组（n=6）、电针组（n=18）和模型组（n=18）。①假手术组：麻醉后仅暴露右侧颈总动脉，不插入尼龙线，手术后不针刺。②电针组：制备大脑中动脉闭塞模型，2h后再灌注。造模成功后第2天开始施加电针任脉腧穴。③模型组：造模方法同电针组，造模成功后并不针刺。各组大鼠相应于造模后7，14，28d麻醉下处死取脑。在激光共聚焦显微镜（Olympus FV 500）下观察并计算各组大鼠损伤侧海马胶质纤维酸性蛋白／神经元特异性烯醇化酶免疫荧光双标及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶阳性细胞。结果：实验动物42只均进入结果分析，中途无脱落。④电针组与模型组造模后7d的胶质纤维酸性蛋白／神经元特异性烯醇化酶荧光双标及胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数并无差异（P〉0．05），假手术组胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数明显较少（P〈0．01），3组神经元特异性烯醇化酶双标细胞数两两相比，差异均无统计学意义（P〉0．05）。②造模后14d，电针组的胶质纤维酸性蛋白／神经元特异性烯醇化酶荧光双标细胞数明显多于模型组（P〈0．01），而胶质纤维酸性蛋白细胞数则明显少于模型组（P〈0．01），两组神经元数量差异并无统计学意义（P〉0．05）。③造模后28d，电针组神经元特异性烯醇化酶阳性细胞数及胶质纤维酸性蛋白／神经元特异性烯醇化酶荧光双标细胞数均明显较模型组多（P〈0．01），而胶质纤维酸性蛋白细胞数则明显较模型组少（P〈0．01）。④假手术组可见散在分布的胶质纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞，胞体较小。突起细长；模型组与电针组缺血侧海马均可见大量胶质纤维酸性蛋白呈强阳性的星形胶质细胞，突起变粗，变短。3组均可见卵圆形、多角形或扇形的神经元；模型组与电针组偶见极少数的胶质纤维酸性蛋白／神经元特异性烯醇化酶双标细胞，丽假手术组则未见。结论：电针任脉腧穴可调节脑缺血后大鼠海马增殖的星形胶质细胞，抑制其过度增殖。促进其多潜能化。有利于脑缺血后的神经修复。     

慢性压迫性脊髓损伤后神经前体细胞的增殖

背景：关于成年哺乳类动物脊髓损伤后神经前体细胞的增殖特征和来源以及星形胶质细胞在其中的作用尚无肯定性结论。目的：通过分析成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白表达的变化，探讨神经前体细胞的增殖特征和来源以及星形胶质细胞在其中的作用。设计：完全随机对照实验。单位：兰州大学第二医院骨科研究所。材料：实验于2003-03／10在兰州大学第二医院骨科研究所完成，选择成年健康Wistar大鼠50只。随机分为正常对照组、慢性压迫性脊髓损伤中度组（压迫物占椎管矢状径的40％）、重度组（压迫物占椎管矢状径的60％）及重度压迫损伤24h后减压3d、10d组，每组10只。主要观察指标：①各组大鼠压迫临近段（距压迫边缘至5mm）脊髓灰质和白质内nestin的阳性表达并测量其灰度值。②各组大鼠脊髓内胶质纤维酸性蛋白的表达。结果：50只大鼠均进入实验分析。①中度压迫组（白质235.33&;#177;6.48，灰质196．28&;#177;6．55）、重度压迫组（白质190．45&;#177;4．91，灰质173．15&;#177;5．98）及重度压迫损伤减压后3d组（白质198．39&;#177;3．24，灰质180．38&;#177;4．51）和减压后10d组白质（202．55&;#177;3．54）中巢蛋白均有明显表达（P〈0．05），以重度压迫组最为显著（P〈0．01）。减压10d组的灰质和脊髓中央管室管膜细胞的巢蛋白表达与正常对照组相比，差异无显著性意义（P〉0．05）。②与正常对照组相比，各损伤组脊髓内胶质纤维酸性蛋白表达增强，胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数目增多、胞体肥大，突起增粗、增长。结论：成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后早期存在神经前体细胞的增殖。星形胶质细胞参与神经前体细胞的增殖与迁移，对脊髓具有重要的营养修复作用。     

脊髓损伤模型大鼠神经胶质细胞增殖与胶质纤维酸性蛋白的表达

背景:星形胶质细胞可以通过细胞裂解释放各种神经营养因子,并可促进损伤脊髓的修复。目的:观察脊髓损伤模型大鼠神经胶质纤维酸性蛋白的表达及对其后肢功能恢复的影响。方法:将SD大鼠采用Allen’s法撞击T9～10节段致脊髓损伤,造模成功后蛛网膜下腔移植骨形态发生蛋白7,并设置仅蛛网膜下腔移植His蛋白的正常SD大鼠做对照。用BBB评分法评估两组大鼠后肢的运动功能,用免疫组织化学染色法和Western-blot法观察各组神经胶质纤维酸性蛋白的表达。结果与结论:BBB评分结果显示,模型组大鼠脊髓损伤后下肢功能自行恢复率达68%。模型组脊髓损伤3和7d,损伤区域神经胶质纤维酸性蛋白表达逐渐增加(P<0.05),随后逐渐下降,于脊髓损伤28d后逐渐恢复到对照组水平(P>0.05)。脊髓损伤后1～14d两组胶质纤维酸性蛋白表达逐渐升高(P>0.05)。结果证实,脊髓损伤后蛛网膜下腔移植骨形态发生蛋白7可诱导星形胶质细胞增殖,神经胶质纤维酸性蛋白的表达增强,进而促进脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复。     

脊髓损伤模型大鼠神经胶质细胞增殖与胶质纤维酸性蛋白的表达

背景：星形胶质细胞可以通过细胞裂解释放各种神经营养因子,并可促进损伤脊髓的修复。目的：观察脊髓损伤模型大鼠神经胶质纤维酸性蛋白的表达及对其后肢功能恢复的影响。方法：将SD大鼠采用Allen＇s法撞击T9～10节段致脊髓损伤,造模成功后蛛网膜下腔移植骨形态发生蛋白7,并设置仅蛛网膜下腔移植His蛋白的正常SD大鼠做对照。用BBB评分法评估两组大鼠后肢的运动功能,用免疫组织化学染色法和Western-blot法观察各组神经胶质纤维酸性蛋白的表达。结果与结论：BBB评分结果显示,模型组大鼠脊髓损伤后下肢功能自行恢复率达68%。模型组脊髓损伤3和7d,损伤区域神经胶质纤维酸性蛋白表达逐渐增加（P〈0.05）,随后逐渐下降,于脊髓损伤28d后逐渐恢复到对照组水平（P〉0.05）。脊髓损伤后1～14d两组胶质纤维酸性蛋白表达逐渐升高（P〉0.05）。结果证实,脊髓损伤后蛛网膜下腔移植骨形态发生蛋白7可诱导星形胶质细胞增殖,神经胶质纤维酸性蛋白的表达增强,进而促进脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复。     

AG1478对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生的影响

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生的影响。方法:SD大鼠60只,随机分为对照组,AG1478组和假手术组,各组20只。观察AG1478对大鼠脊髓损伤后磷酸化表皮生长因子受体(pEGFR)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达、髓鞘脱失、神经功能恢复及体重的影响。结果:AG1478组大鼠pEGFR和GFAP的表达较对照组明显减弱(P0.01),损伤区脱髓鞘范围明显较对照组减小(P0.01),BBB评分明显高于对照组(P0.01),体重较对照组增加更明显(P0.05)。结论:AG1478可能通过阻断星形胶质细胞上的EGFR通路抑制胶质增生,促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复。     

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的：探讨大鼠慢性压迫性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化，并研究GFAP与压迫程度的关系．以及对脊髓功能恢复的影响。方法：通过制作Wistar大鼠CCSCI模型，分成A组（假手术对照组）、B组（椎管侵占率25％压迫组）和C组（椎管侵占率50％压迫组），结合大鼠的生物行为评分，应用免疫组织化学SABC法，分别于术后1、2、3、5、8、12周检测各组脊髓组织中GFAP蛋白表达的灰度值差异。结果：GFAP表达在3周时达高峰，同时间点A组表达最低，C组最高。BBB评分显示术后3周内压迫组脊髓功能恢复较快。结论：GFAP在CCSCI中的表达水平与压迫程度有关，适度的GFAP表达增高和胶质化反应有助于大鼠脊髓功能的恢复。     

重复经颅磁刺激对神经病理性疼痛大鼠脊髓内星形胶质细胞的抑制作用

目的观察低频和高频重复经颅磁刺激（rTMS）对大鼠神经病理性疼痛的疗效及其对大鼠脊髓内星形胶质细胞标志物胶质酸性纤维蛋白（GFAP）的影响,探讨rTMS治疗神经病理性疼痛的机制。 方法28只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、假治疗组、低频rTMS组(1Hz)、高频rTMS组(20Hz),每组7只。假手术组仅暴露游离大鼠坐骨神经,不予结扎;其余3组经手术结扎坐骨神经制作神经病理性疼痛模型。术后第3天开始进行rTMS治疗,连续10d,刺激疼痛对侧大脑初级运动皮质。并于造模前、rTMS治疗前和治疗后测定疼痛行为学表现、机械痛觉和热痛觉,并于治疗结束后测定腰段脊髓内GFAP的表达。 结果造模后3d,假治疗组、低频rTMS组、高频rTMS组大鼠均出现明显的疼痛行为学表现,热痛潜伏时较假手术组均明显降低(P<0.05)。rTMS治疗后,高频rTMS组热痛潜伏时较假治疗组升高(P<0.05),而低频rTMS组无明显变化。与假手术组比较,假治疗组和低频rTMS组损伤侧脊髓背角内GFAP阳性表达细胞数量和染色强度均明显增加(P<0.05)。与假治疗组比较,高频rTMS组脊髓背角GFAP的表达显著下调（P<0.05）,而低频rTMS无此改变。高频rTMS组大鼠疼痛改善程度与脊髓背角中GFAP的表达呈负相关。 结论坐骨神经结扎导致的神经病理性疼痛伴有脊髓背角内星形胶质细胞增殖;高频rTMS可以通过抑制脊髓内星形胶质细胞的增殖和活性而缓解疼痛,低频rTMS则无明显效果。     

慢性坐骨神经痛大鼠脊髓和海马组织脑源性神经生长因子表达的改变

目的：探讨慢性坐骨神经挤压损伤(chronic constriction injujry，CCI)大鼠脊髓和海马组织中脑源性神经生长因子(brain—derived neurotrophic factor，BDNF)表达的改变。方法：雄性SD大鼠12只，随机分为2组，按Bennett和Xie法制作CCI模型，以von-Frey filament和冰水测定触痛及冷水阈值，采用免疫组化法测定CCI大鼠脊髓和海马组织中BDNF表达。结果：术后14d，CCI大鼠脊髓背角(手术侧)BDNF免疫阳性表达增加153.3％，双侧海马CA3区锥体细胞BDNF表达均有增加，手术同侧增加65．7％，手术对侧增加203．8％。结论：慢性坐骨神经损伤后，脊髓和海马CA3区BDNF表达增加，提示内源件BDNF可能参与了慢性半骨神经痛的发病过程。     

细胞周期依赖的蛋白激酶抑制剂Olomoucine对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖表达的影响

目的探讨细胞周期抑制剂Olomoucine对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响及意义。方法建立大鼠脊髓半切损伤模型,随机分为假手术组、损伤对照组和Olomoucine干预组,采用免疫印迹分析脊髓损伤后CSPGs的表达;应用免疫荧光技术检测损伤区域胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CSPGs的表达;采用改良Gale联合评分法对大鼠瘫痪后肢进行运动功能评估。结果脊髓损伤后星形胶质细胞明显活化增殖,GFAP和CSPGs的表达显著高于假手术组(P<0.05),010moucine干预可有效下调GFAP和CSPGs的表达(P相似文献   

脊髓损伤模型大鼠星形胶质化形成与Akt/mTOR/p70S6K信号通路的激活

背景:既往研究集中于如何促进大鼠脊髓损伤后的神经再生,但对于如何抑制脊髓损伤后星形胶质细胞过度增殖反应的因素、从而改善神经再生的环境研究尚少。目的:观察Akt/m TOR/p70S6K蛋白激酶信号转导通路对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质化形成的影响,从而为改善脊髓损伤后神经再生环境、修复脊髓损伤提供分子学机制依据。方法:建立SD大鼠轻型脊髓损伤模型,分为4组:实验组造模后行ATP治疗7 d;对照组造模后行等量生理盐水治疗7 d;干预组造模后行等量的ATP联合雷帕霉素治疗7 d;假手术组椎板切除后行等量生理盐水治疗7 d。分别于造模后1,3,7,14 d采用免疫组化、Western blot法检测Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、p70S6K、p-p70S6K、胶质纤维酸性蛋白表达变化,并采用BBB运动功能评分评价大鼠脊髓损伤后经不同方法治疗后运动功能的恢复情况。结果与结论:假手术组大鼠脊髓中Akt/m TOR/p70S6K信号通路分子呈低水平表达,在脊髓损伤后其表达增加。外源性ATP可显著增强大鼠受损脊髓中Akt/m TOR/p70S6K信号分子的表达,而雷帕霉素可明显抑制ATP诱导的表达上调。激活的Akt/m TOR/p70S6K信号通路可显著减弱受损脊髓组织中胶质纤维酸性蛋白的表达、抑制脊髓损伤后过度的星形胶质细胞增生反应,促进脊髓损伤后BBB运动功能评分增加,而雷帕霉素阻碍了由ATP诱导的上述效应。结果证实,ATP通过诱导Akt/m TOR/p70S6K信号通路激活抑制大鼠脊髓损伤后星形胶质瘢痕的形成,具有改善脊髓损伤后神经再生环境、促进脊髓损伤修复和改善神经功能的潜能,此信号通路是治疗脊髓损伤的重要干预环节。     

腺病毒介导细胞外信号调节激酶2表达对去分化软骨细胞增殖及胞外基质合成的影响

目的：观察腺病毒介导细胞外信号调节激酶2的过度表达对去分化软骨细胞增殖和细胞外基质合成的影响，以及腺病毒介导细胞外信号调节激酶2用于修饰去分化软骨细胞的可行性。 方法：实验于2004-09／2005-05在暨南大学组织移植与免疫研究中心进行。SD大鼠5只，周龄为3-5周，此处请核对体质量为（150&;#177;20）g，分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞，利用Adeasy系统构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体。流式细胞仪检测不同感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率，Western blot检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1／2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达，^3H-TdR,^3H-proline和^35 S-sulfate同位素掺入检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染对大鼠肋生长板软骨细胞增殖、胶原和蛋白多糖合成的影响。 结果：①成功构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体重组腺病毒。②100感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率大于90％。③携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染的第5代大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1／2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达均显著增加，分别是Ad-CMV组的15．58和1．85倍。④同位素检测结果表明携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体的感染促进^3H-TdR、^3H-proline和^35S-sulfate的掺入，分别是对照组的2．52，1.61和1．53倍（P〈0．05）。 结论：腺病毒介导细胞外信号调节激酶2基因的过度表达促进去分化大鼠肋生长板软骨细胞的增殖和细胞外基质成分的合成。