高效液相色谱法测定华细辛中马兜铃酸A含量

 目的测定华细辛中马兜铃酸A的含量。方法建立高效液相色谱方法,采用Agilent Zorbax SB-C₁₈色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-1%冰醋酸水溶液(39:61)为流动相,流速为0.8mL·min^-1,检测波长为317nm,分别测定20个华细辛样品中马兜铃酸A的含量。结果高效液相色谱法的回收率为98.9%,RSD为2.1%,标准曲线回归方程为y=2.40x+0.267, 在5.2～68ng内呈良好线性关系。结论华细辛中马兜铃酸A含量在6.8～45.4μg·g^-1。     

冠心苏合制剂中马兜铃酸A的含量

目的:建立马兜铃酸的含量测定方法,并测定不同厂家冠心苏合制剂中马兜铃酸A的含量,用于指导临床用药。方法:用高效液相色谱法进行分析,色谱柱为Alltech C₁₈,流动相甲醇-水-醋酸(68∶32∶1),流速1.0 mL.min^-1,柱温35℃,检测波长390 nm。成药用甲醇-10%甲酸水提取。结果:马兜铃酸A在0.119～1.89μg,有良好的线性关系;平均加样回收率为99.0%,RSD 0.63%。不同厂家冠心苏合丸(胶囊、滴丸)中,以北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂(滴丸)中马兜铃酸A的含量最低(0.148 mg.g^-1);以三九企业集团(胶囊)中马兜铃酸A的含量最高(0.516 mg.g^-1)。结论:本方法简便,准确,可用来测定冠心苏合制剂中马兜铃酸A的含量测定。     

关木通及其马兜铃总酸对小鼠肾脏毒性的研究

目的:以马兜铃酸A为剂量标准比较了关木通醇提物和关木通马兜铃总酸对小鼠的急性毒性,探讨关木通致毒的剂量关系。方法:小鼠单次灌胃关木通醇提物及其马兜铃总酸后,测定LD₅₀、肝、肾功能及观察了肝、肾组织形态学变化。结果:小鼠给予关木通醇提物的LD₅₀值为4.4g·kg^-1,折合成马兜铃酸A为40mg·kg^-1,与小鼠灌胃给予马兜铃总酸后的LD₅₀值(折合成马兜铃酸A为♂33mg·kg^-1,♀37mg·kg^-1)相近。给予关木通醇提物剂量折合成马兜铃酸A为4.5mg·kg^-1以上时,可引起血尿素氮和肌酐水平增高,同时可见肾脏组织形态学改变;折合成马兜铃酸A25mg·kg^-1以上时可引起AST增高和肝脏组织形态学改变;以上病变程度均与马兜铃酸A的剂量成正比。结论:关木通除了有明显的肾脏毒性外,还有肝脏毒性,致肾毒剂量较致肝毒剂量低,肾脏毒性是关木通致死的主要原因,马兜铃酸是主要的致肾毒成分。关木通的致死和致肾毒作用与马兜铃酸A的剂量成正比例。     

龙胆泻肝丸中马兜铃酸I的液质联用法检测分析

目的 建立龙胆泻肝丸中马兜铃酸I的检查方法,以了解市场上是否存在关木通替代替木通使用或者混用的问题,更好地保障本品用药安全。方法 采用Agilent SB-C18 (2.1 × 50 mm,1.8 μm) C₁₈色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸（含5 mmol?L^-1乙酸铵）溶液为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL?min^-1,以正离子多反应监测模式,母离子m/z 359.0,子离子m/z 298.0（定量）,m/z 296.0（定性）,建立了龙胆泻肝丸中马兜铃酸I的HPLC-MSn检测方法,同时对9家企业51批次龙胆泻肝丸样品进行检测。结果 51批次龙胆泻肝丸样品中有2批检出马兜铃酸I成分,涉及1家生产企业,检测结果分别为0.66 μg?g^-1、2.13 μg?g^-1;其余样品均未检出马兜铃酸I。结论 研究建立的HPLC-MS方法准确、可靠,可用于龙胆泻肝丸中马兜铃酸I的检测分析;同时,检测结果表明可能存在木通混入关木通的现象,鉴于马兜铃酸I对人体的危害性,已申请龙胆泻肝丸中马兜铃酸I检查项补充检验方法,从而为后续工作提供基础数据与科学依据,以更好地保障人民用药安全。     

以关木通为例探讨不同入药形式对中药中有毒成分含量的影响

目的:以关木通为例,探讨中药不同入药形式对其毒性成分含量的影响。方法:以3.7mmol·L^-1磷酸缓冲液(pH2.55)-乙腈为流动相,260nm为检测波长,采用RP-HPLC-DAD方法测定以粉末、水煎液2种形式入药的关木通中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ、马兜铃酸Ⅳa的含量情况。结果:关木通水煎液中马兜铃酸Ⅰ,Ⅱ,Ⅳa的煎出率分别为药材粉末中含量的53.4%,75.5%,61.9%;而在水煎后的药渣中马兜铃酸Ⅰ,Ⅱ和Ⅳa的残余量分别相当于粉末中含量的22.3%,15.7%和30.3%;3种马兜铃酸其余的约10%-25%可能在水煎过程中被破坏了;马兜铃酸Ⅰ在水煎液中仍为主要的马兜铃酸类成分。结论:不同入药形式对关木通中的毒性成分含量有很大的影响;应根据毒性成分的性质而选择合适的入药形式,以此来减少中药毒性成分对人体的损害。     

UPLC-MS/MS测定追风透骨丸中马兜铃酸类成分含量

目的 建立超高效液相色谱-质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定追风透骨丸中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ、马兜铃酸Ⅲ和马兜铃内酰胺Ⅰ的含量。方法 采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；以乙腈-0.1%甲酸水溶液（含5 mmol·L^–1甲酸铵）为流动相梯度洗脱，流速为0.3 mL·min^–1，用电喷雾离子源，在多反应监测模式下采用外标法测定。结果 4个成分在2~250 ng·mL^–1线性关系良好，r均大于0.999，在20 ng·mL^–1添加水平的平均回收率分别为104.2%、75.7%、112.0%、105.4%，RSD为2.8%~6.1%，方法定量限为0.002~0.100 μg·g^–1。7批样品中均未检出马兜铃酸Ⅱ、马兜铃酸Ⅲ，马兜铃酸Ⅰ检出量为0.09~0.41 μg·g^–1，马兜铃内酰胺Ⅰ检出量为0.62~1.30 μg·g^–1。结论 该方法专属性好、灵敏度高、结果准确，可为追风透骨丸中马兜铃酸的质量控制提供参考。     

脑灵片对关木通减毒作用的初步研究

目的本实验通过研究脑灵片对关木通中马兜铃酸A含量的影响,以初步探讨关木通的减毒问题.方法关木通与脑灵片共煎后用RP-HPLC法测定马兜铃酸A,观测其含量的变化情况.结果加入脑灵片后,关木通中马兜铃酸A的含量明显降低.结论脑灵片可显著降低关木通中马兜铃酸A的含量.     

利用炮制技术去除关木通毒性成分的方法学研究

目的:根据马兜铃酸的化学性质,借鉴传统中药炮制经验,对去除马兜铃酸的炮制方法学进行研究。方法:以关木通为研究对象,马兜铃酸A为指标,采用正交试验等方法对关木通的碱制和醋制工艺进行优化。结果:确定了关木通的炮制工艺为以0.1mol·L^-1碳酸氢钠多次浸泡后醋制的方法。炮制过程中温度对毒性成分的去除率影响较大。不同含量的关木通在实验室小试炮制中,毒性成分去除率在90%以上,10批中试毒性成分的去除率在80%以上,使马兜铃酸A的含量降低到0.35-0.60mg·g^-1。马兜铃酸在药材中部分是盐的形式存在的。结论:该炮制新工艺能够选择性的去除关木通中的绝大部分毒性成分,达到了去毒的目的。     

六味地黄丸对关木通减毒作用的初步研究

目的:本实验通过研究六味地黄丸对关木通中马兜铃酸A含量的影响,以初步探讨关木通的解毒问题。方法:关木通与六味地黄丸共煎后用RP-HPLC法测定马兜铃酸A的吸收值,观测其含量的变化情况。结果:加入六味地黄丸后,关木通中马兜铃酸A的含量明显降低。结论:六味地黄丸可显著降低关木通中马兜铃酸A的含量。     

拆方研究当归四逆汤中马兜铃酸A含量的影响

目的:观察比较关木通及当归四逆汤各拆方组中马兜铃酸A的变化趋势,探讨中药配伍对马兜铃酸A含量的影响。方法:参照当归四逆汤原方比例将供试样品分6组:关木通组、全方组、关木通+补气补血组、关木通+散寒组、关木通+甘草组、阴性对照组(全方去关木通);采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,以甲醇—水—冰乙酸(体积比74∶24∶1)为流动相,以DiamonsilTM(钻石)C18(250 mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,检测波长237 nm,测定各组中马兜铃酸A的含量。结果:与关木通组相比,当归四逆汤全方中马兜铃酸A含量最低;关木通+补血组马兜铃酸A含量也有明显降低。结论:在方剂配伍理论指导下,通过合理配伍降低关木通的毒性是可行的。     

高效液相色谱-电喷雾质谱法分析青木香及其发酵品中马兜铃酸类成分（英文）

目的：建立高效液相色谱-电喷雾高分辨质谱法（HPLC-ESI-TOF-MS）,鉴定青木香及其灵芝菌发酵品中马兜铃酸类成分。方法：采用Hanbon Phecda C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,以乙腈（A）和0.2%醋酸水溶液（B）为流动相进行梯度洗脱,0-25min（15%→30%A）,25-45min（30%→50%A）,45-55min（50%→60%A）,55-75min（60%→80%A）75-80min（80%→15%A）,流速：1.0mL·mL-1。利用样品的色谱保留时间及质谱数据进行分离和分析,对其中马兜铃酸类成分的结构进行了鉴定。结果：7种马兜铃酸类成分分别被鉴定为马兜铃酸I（6）、马兜铃酸II（4）、马兜铃酸III（5）、马兜铃酸Ia或IIIa（1）、马兜铃酸IVa、Va、VIIa或VIIIa（3）、马兜铃酸IV或VII（7）和马兜铃酸VIa（2）。与青木香原药材相比,发酵品中这7种马兜铃酸类成分峰面积均有所下降,其中化合物1、2、4-7的下降率分别为93.5%、87.2%、94.1%、42.2%、86.2%和69.5%;而化合物3未能检出。与此同时,发酵品在色谱保留时间0-20min的范围内,明显出现了大量新的色谱峰（可能为马兜铃酸类成分经发酵转化后产生的极性物质）。结论：本方法对青木香及其发酵品中马兜铃酸类成分的指认有很大帮助,提示青木香通过灵芝菌发酵,可大大降低其中导致肾毒性问题的马兜铃酸类成分的含量。     

HPLC测定五味渣驯丸中羟基红花黄色素A、没食子酸和马兜铃酸A的含量

目的:建立五味渣驯丸中羟基红花黄色素A、没食子酸、马兜铃酸A的含量测定方法.方法:采用HPLC对制剂中主要成分羟基红花黄色素A、没食子酸、马兜铃酸A进行定量分析.CAPCELL PAK C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),甲醇-0.4％磷酸(30∶70)、甲醇-0.2％磷酸(7∶93)、甲醇-0.05％冰醋酸(79∶21)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长为403,273,390 nm.结果:羟基红花黄色素A、没食子酸、马兜铃酸A的线性范围分别为0.116 ～1.740 μg(r=0.999 97),0.067～0.673 μg(r =0.999 95).0.024～0.247 μg(r =0.999 99);平均回收率分别为98.62％ (RSD 2.15％),100.01％( RSD 2.03％),96.83％ (RSD 1.74％).结论:本方法简便、结果准确可靠,可有效控制制剂质量.     

测定天王补心丸和归脾丸中细叶远志皂苷的含量

目的：建立含远志中成药中细叶远志皂苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法,Alltima C18色谱柱 (4.6 mm × 250 mm,5 μm),流动相甲醇- 0.05%磷酸溶液(65∶35),检测波长202 nm,流速1.0 mL·min^-1。结果：细叶远志皂苷的理论塔板数为2 500。回归方程Y = 5.239 ×10⁶ X-6.247×10⁵（ r² = 0.999 4）,线性范围10～500 μg·mL^-1,平均回收率为97.5% (RSD均小于3.0%),最低检出浓度为5.50 μg·mL^-1。结论：检测含远志中成药中细叶远志皂 苷含量方法简便,结果准确,重现性好,可作为含远志的复方制剂质量控制标准。     

RP-HPLC测定茅苍术中β-桉叶醇的含量

目的：采用RP-HPLC测定茅苍术中β-桉叶醇的含量,为茅苍术质量标准研究提供依据。方法：采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相乙腈-水(68∶32)；流速1.0 mL·min^-1；检测波长200 nm；柱温为25 ℃。结果：测得10批茅苍术药材中β-桉叶醇含量为0.833～4.466 mg·g^-1,β-桉叶醇为0.048～1.200 μg,r=0.999 9,平均回收率99.3%,RSD 1.4%(n=9)。结论：建立了高效液相色谱法测定茅苍术中β-桉叶醇含量的方法,该方法准确,可靠,可用于茅苍术药材的测定。     

RP-HPLC测定木通中木通苯乙醇苷B的含量

目的：建立木通药材中木通苯乙醇苷B的HPLC分析方法。方法：采用Phenomenex Luna C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱,以甲醇-水-磷酸(35∶65∶0.05)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长330 nm,柱温35 ℃。结果：木通苯乙醇苷B在0.04～0.86 μg呈良好的线性关系,r=0.999 8,平均回收率97.2%。对3个基源(三叶木通、五叶木通、白木通)的木通药材及其他部位(根、叶、果实)共39个样品进行了含量测定,各样品含量在0.021%～0.745%。结论：方法简单,重复性好,适合用于木通药材的质量控制。     

HPLC测定胆南星中猪去氧胆酸的含量

目的：建立胆南星中猪去氧胆酸含量测定方法,为其质量控制提供方法。方法：用HPLC-蒸发光散射检测测定样品的猪去氧胆酸含量。色谱和检测条件：Diamonsil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),柱温35 ℃；流动相甲醇-水-冰醋酸(75∶25∶0.01),流速1 mL·min^{-1；漂移管温度85 ℃,空气流速3.0 L·min-1。结果：猪去氧胆酸进样量在2.4～24 μg,进样量和峰面积的对数呈线性(r= 0.999 8)。平均加样回收率为97.1%,RSD 3.0%(n=5)。结论：方法简便,测定准确,且重复性好,可用于胆南星的质量控制。}     

高效液相色谱-荧光检测法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量

目的:建立桑叶药材中1脱氧野尻霉素(DNJ)的高效液相色谱荧光检测法的含量测定方法。并对不同生长季节和生长环境桑叶药材的DNJ含量进行测定。方法:桑叶经0.05mol·L^-1盐酸提取,在pH8.5的硼酸盐缓冲液条件下,用芴甲氧酰氯(FMOC Cl)与DNJ反应生成荧光产物,然后用高效液相色谱荧光检测器测定。液相条件为HiQSiLC₁₈分析柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈0.1%醋酸(55∶45),流速1.0mL·min^-1,柱温25℃,荧光检测器激发波长254nm,发射波长322nm。结果:DNJ与其他组分分离效果较好,线性范围为0.567～34μg·mL^-1(r=0.9998),加样回收率为97.2%。结论:桑叶中DNJ含量与环境因素、温度及生长季节有关,该方法可作为桑叶药材的质量控制方法。     

HPLC法测定不同产地大叶冬青叶中4种三萜类成分的含量

目的建立HPLC法测定大叶冬青叶中羽扇豆醇、豆甾醇、α-香树脂素和苦丁冬青苷D含量的方法,对比分析26批来自不同产地及不同采收期大叶冬青叶中4种成分的含量,为其质量标准的完善提供参考。方法采用YMC-ODS C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B)为流动相等度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长205 nm,柱温30℃,进样量20μL,建立同时测定羽扇豆醇、豆甾醇、α-香树脂素含量的方法;以乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)为流动相等度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量10μL,建立测定苦丁冬青苷D含量的方法。结果在上述色谱条件下羽扇豆醇、豆甾醇、α-香树脂素分离度良好,分别在质量浓度18.88~906.00μg·mL^-1(r=1.000 0,n=6)、15.06~723.00μg·mL^-1(r=0.999 9,n=6)、22.75~1 092.00μg·mL^-1(r=0.999 9,n=6)呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)分别为100.43%(RSD=1.96%)、98.72%(RSD=0.88%)、102.86%(RSD=2.47%)。苦丁冬青苷D在质量浓度9.55~573.00μg·mL^-1(r=0.9999,n=6)呈良好的线性关系,平均加样回收率为101.35%(RSD=0.25%)。结论所建立的测定方法简单方便、结果准确、重复性好,可用于测定大叶冬青叶中羽扇豆醇、豆甾醇、α-香树脂素和苦丁冬青苷D的含量,为大叶冬青质量标准的建立提供理论依据。不同产地及不同采收时期大叶冬青叶中4种三萜类成分含量存在明显差异。     

路路通药材中桦木酮酸定性定量方法的研究

目的:建立路路通药材中桦木酮酸的鉴别和含量测定方法。方法:薄层色谱法鉴别。药材用醋酸乙酯提取,在以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,用石油醚(60～90℃)-丙酮(17∶3)展开,磷钼酸显色;高效液相色谱法进行含量测定。样品用无水乙醇超声提取。DiamonsilC₁₈柱,甲醇水冰醋酸(87∶13∶0.1)为流动相,流速1.0mL·min^-1,柱温35℃,蒸发光散射检测器蒸发管温度82℃,气体流速1.25L·min^-1。结果:薄层色谱鉴别重现性好;在上述液相色谱条件下,桦木酮酸获较好分离,进样量在0.65～3.25μg其对数与峰面积对数呈线性关系(r=0.9997),加样回收率为98.0%,重复性为2.5%。对收集的11批商品药材进行了定性鉴别和含量测定。结论:本研究为路路通质量标准的建立提供可借鉴的方法。