斑点金免疫渗滤试验检测血清中抗-HAV抗体

0　引言　抗 - HAV是甲型肝炎既往感染的标志 ,抗 - HAV阳性率是甲型肝炎流行病学调查的主要指标 .目前检测抗 -HAV常用的方法有 RIA和 EL ISA法 ,两方法所需时间长 ,操作步骤多 ,且需特殊仪器设备 .斑点金免疫结合试验是 2 0世纪 80年代发展起来的一种简便快速的免疫检测新技术 ,已成功地用于检测抗人类免疫缺陷病毒抗体[1 ,2 ] .我们建立了检测抗 - HAV的快速斑点金免疫渗滤试验 ,经初步试验 ,效果满意 .1　材料和方法1.1　材料　 1抗人 Ig G抗体购于 Dako公司 ;2甲型肝炎病毒抗原为本室细胞培养抗原 ;3抗 - HAV单克隆抗体单克…     

斑点金免疫滤渗试验快速测丙型肝炎病毒抗体方法的初步研究

建立胶体金虑虎试验用于快速检测丙型肝炎ＩｇＧ抗体，将丙型肝炎抗原固相在硝酸纤维素薄膜上，用来捕获血清标本中的抗ＨＣＶＩｇＧＡ，通过胶体金标记ＳｐＡ而显色。整个试验过程仅需２－４ｍｉｎ。用本法与ＥＩＡ对比检测血清标本１３１份，两法均阳性４９份，阴性７８份，总符合率为９７％。     

斑点金免疫渗滤法快速检测乙肝表面抗原

目的：建立斑点金免疫渗滤法检测乙肝表面抗原的快速方法。方法：将兔抗乙肝表面抗原的抗体点子硝酸纤维素薄膜上,用来捕获血清中的乙肝表面抗原,通过胶体金标记的抗表面抗原单克隆抗体来直接显色。     

斑点金免疫渗滤试验同步检测抗斯氏狸殖吸虫IgM和IgG抗体的研究

目的:寻求简便、快速、可靠的方法,用于斯氏狸殖吸虫病早期诊断及疗效考核.方法:建立检测抗斯氏狸殖吸虫抗体的斑点金免疫渗滤试验(DIGFA),并对48例患者在治疗前和治疗后血清中特异抗体水平的动态变化进行研究.结果:斯氏狸殖吸虫病患者经有效药物治疗后3月、6月、1年、1.5年连续采血,经DIGFA检测连续观察的结果表明,IgM抗体出现较早,阴转较为明显和迅速,治疗后3月的阴转率就达47.9%(23/48),1年的阴转率可达89.6%(43/48);而IgG抗体则出现较晚,阴转缓慢,治疗后1.5年的阴转率仅为18.8%(9/48).结论:DIGFA为检测抗斯氏狸殖吸虫抗体的有效方法,检测IgM抗体可用于早期诊断及疗效考核,IgG抗体的检测主要用于回忆性诊断,却不能用来判断治愈或诊断再感染.     

快速斑点免疫金渗滤法检测结核杆菌特异性抗体

斑点免疫金渗滤法检测结核杆菌特异性抗体比传统痰涂片抗酸染色检测结核杆菌的方法临床检出率高，方法简便，快速准确。     

用快速斑点免疫金渗滤法检测抗双链DNA抗体

目的为了提供一种简便、快速、可靠的检测抗双链ＤＮＡ（ｄｓ－ＤＮＡ）抗体的新方法。方法将生物素化的质粒ｄｓ－ＤＮＡ结合于包被了亲和素的硝酸纤维素（ＮＣ）膜上，以胶体金标记的葡萄球菌蛋白Ａ（ＳＰＡ）作为显示剂，建立了一种检测抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体的快速斑点免疫金渗滤法（ＤＩＧＦＡ）。结果ＤＩＧＦＡ对未经选择的系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）和活动性ＳＬＥ的阳性率分别为６７．２％和９５．９％；对非ＳＬＥ的自身免疫病患者的阳性率仅为２．９％；正常人未见假阳性。与短膜虫免疫荧光法（ＣＬ．ＩＦＡ）、放射免疫法（Ｆａｒ）、酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）和斑点免疫结合法（ＤＩＢＡ）四种方法比较，ＤＩＧＦＡ的敏感性优于ＣＬ．ＩＦＡ、ＥＬＩＳＡ和ＤＩＢＡ，特异性优于Ｆａｒ和ＥＬＩＳＡ。结论ＤＩＧＦＡ快速、简便，整个检测过程只需２分钟，不需特殊设备，是一种值得推广的检测抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体的常规方法。     

斑点免疫金渗滤试验同步检测血清中抗登革病毒IgM和IgG抗体

建立用斑点免疫金渗滤试验同步检测血清中抗登革病毒IgM和IgG抗体的方法，与MacELISA比较抗登革病毒IgM抗体检测符合率为93.8％,与DIBA比较抗登革病毒IgG抗体检测符合率为94．7％。本法简便、快速，适于在各级实验室推广应用。     

建立甲型肝炎病毒IgM抗体的斑点免疫渗滤试验检测方法

目的：建立斑点免疫渗滤试验检测甲型肝炎病毒IgM抗体的实验方法．方法：用抗人IgMμ链包被硝酸纤维素膜，捕获血清中的IgM抗体，以甲肝抗原为桥，连接胶体金标记的抗HAV IgG，阳性反应有红色斑点出现．并通过比较不同试剂用量条件下的检测结果的符合率确定试剂最佳用量．结果：与国际公认的金标准相比，本检测方法的灵敏度为93．5％，特异度为98．0％，符合率为95．8％．结论：本检测方法较灵敏特异，成本低廉，较适合于筛检和流行病学调查．     

多重斑点金免疫测定法快速检测HAVHBV和HCVIgM的初步研究

多重斑点金免疫测定法快速检测ＨＡＶＨＢＶ和ＨＣＶＩｇＭ的初步研究肖乐义，阎小君，陈远鑫，李陕区，郭宴海，苏成芝，侯瑜，刘君（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词斑点金免疫结合试验；甲型肝炎病毒；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；免疫球蛋白Ｍ中...     

斑点免疫金渗滤法的改进

目的 :改进斑点免疫金渗滤法的渗滤装置 ,降低成本 ,使之更适用于现场操作。方法 :用自制的圆形渗滤片替代塑料渗滤盒 ,并比较二者的效果。结果 :自制的渗滤片体积更小 ,成本更低 ,为一次性使用材料 ;检测抗体的效果与塑料渗滤盒法一致。结论 :自制的渗滤片优于常用的塑料渗滤盒     

斑点免疫金渗滤法检测抗荚膜组织胞浆菌抗体的研究

目的 研究快速检测荚膜组织胞浆菌抗体的方法.方法 荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物(P-HTPM)为包被抗原,以葡萄球菌A蛋白(SPA)标记的免疫胶体金为检测标记物,采用斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)检测荚膜组织胞浆菌(HC)免疫小鼠血清中抗HC抗体以及其他真菌免疫血清中抗体.结果 DIGFA检测20份HC小鼠免疫血清,结果全为阳性,与ELISA检测结果一致,敏感性为100%.检测8份正常小鼠血清出现1份假阳性,特异性为87.5%.检测其他真菌免疫血清结果为:念珠菌属和马尔尼菲青霉菌免疫血清结果全为阴性;8份皮炎芽生菌血清出现1份阳性,9份副球孢子菌血清出现2份阳性.结论 斑点免疫金渗滤法检测抗HC抗体有较高的敏感性和特异性,快速简便.经临床标本扩大验证后将对荚膜组织胞浆菌病的快速诊断有应用价值.     

免疫胶体金渗滤斑点试验对抗精子抗体的检测

目的 :建立一种快速鉴定抗精子抗体的新方法。方法 :用化学试剂提纯精子抗原 ,将其结合于硝酸纤维素膜上 ;以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体 ,建立检测人血清抗精子抗体的免疫胶体金渗滤斑点试验。结果 :抗原抗体通过渗滤在膜上反应 ,10min肉眼即可观察到结果 ,10 0例临床血清标本的检测结果 ,本法与ELISA法基本相符。结论 :免疫胶体金渗滤斑点试验可快速测定抗精子抗体 ,具有推广使用的价值     

应用滴金法检测孕妇TORCH感染

[目的 ]了解大连地区孕妇TORCH各病原体的感染情况及与不良孕史的关系 ,评价滴金法临床应用的可行性。 [方法 ]应用滴金法 ,对 2 4 0例孕妇和 4 6例咨询病人进行了弓形体、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒 4种病原体血清特异性IgM与IgG抗体的检测。IgG抗体的检测同时采用ELISA法对照。 [结果 ]2 4 0位孕妇血清中四种病原体特异性IgM抗体阳性率分别为1 .2 5 %、2 .0 8%、3.75 %、1 .2 5 % ;滴金法检测特异性IgG抗体阳性率分别为 6 .6 7%、87.92 %、79.5 8%、6 0 .4 1 % ;4 6例咨询病人IgM抗体阳性率分别为 6 .5 %、8.7%、1 9.6 %、6 .5 % ;ELISA法的阳性率分别为 6 .2 5 %、86 .2 5 %、77.0 8%、5 9.1 7%。两种方法检测TORCH -IgG阳性率无明显差异 (P >0 .0 5 )。 [结论 ]孕妇TORCH感染的筛选对优生优育是非常有用的指标 ;滴金法为一种灵敏、快速、简便检测孕妇TORCH感染的方法     

人自身抗原U1RNP 70K的酵母重组分泌表达及斑点免疫金渗滤检测法的建立

目的人自身抗原U1RNP 70K通常采用组织提取法或原核表达获得。文中用基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人U1RNP 70K自身抗原,并建立斑点免疫金渗滤检测法。方法 PCR扩增U1RNP 70K基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-U1RNP 70K。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western b lot)鉴定。用所表达的蛋白包被硝酸纤维素膜,建立检测U1RNP抗体的斑点免疫金渗滤法(dot immuogold filtrationassay,D IGFA)。结果 PCR产物约为1300 bp,接近于预期的1314 bp,pPIC9k-U1RNP 70K重组阳性克隆测序结果与Gen-Bank中的U1RNP 70K序列完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物U1RNP 70K的相对分子质量约70 000。W estern b lot证实表达产物具有天然U1RNP 70K分子的免疫原性,阴性对照菌无目的条带表达。D IGF...     

应用PCR-反向斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种

目的：应用聚合酶链反应-反向斑点杂交法（PCR-RDBHA）快速鉴定分枝杆菌至种的水平。方法：以分枝杆菌rpoβ基因编码序列为靶基因,应用PCR-RDBHA检测126株分枝杆菌临床分离株。以PCR-DNA测序为对照,对经PCR-RDBHA鉴定为非结核分枝杆菌（NTM）的临床分离株进行PCR-DNA测序。结果：126株临床分离株中,经鉴定115株（91.3%）为结核分枝杆菌复合群（MTC）,11株（8.7%）为NTM。NTM中,4株胞内分枝杆菌,1株堪萨斯分枝杆菌,1株戈登分枝杆菌,2株瘰疬分枝杆菌,3株脓肿分枝杆菌。11株NTMPCR-RDBHA与PCR-DNA测序结果一致。结论：PCR-RDBHA能鉴定分枝杆菌临床分离株至种的水平,方法简便、快速,结果准确,具有良好的临床应用价值。     

快速斑点免疫金染色法与二种免疫金银染色法检测抗囊尾蚴抗体的比较研究

目的 建立敏感性高，特异性强，方法简便和经济实用的快速诊断囊尾蚴病的免疫学检测方法。方法 将猪囊尾蚴液抗原点加于微孔滤膜，经预作用和封闭后，依次加入待检测血清和金标记二抗，建立快速斑点免疫金染色法（F-Dot-IGS)以检测囊尾蚴病患者血清抗体，同时用快速微量斑点免疫金银染色法（RMDot-IGSS)和斑点免疫金银染色法（Dot-IGSS)检测作为对照。结果 检测40例囊尾蚴病患者血清抗体，阳性率100%；检测40例健康人血清均为阴性；除包虫病患者外，10例肝吸虫病患者，10例血吸虫病患者和10例肺吸虫病患者血清未见交叉反应。结论 F-Dot-IGS敏感特异，快速简便，有较高的实用价值。适于囊尾蚴病的流行病学调查和临床快速诊断。