过氧化物酶增殖体激活受体α、氧固醇7α羟化酶及雌激素受体间调控关系及其与孕鼠肝内胆汁淤积发生的相关性

目的 探讨过氧化物酶增殖体激活受体α(PPARα)、氧固醇7α羟化酶(CYP7B1)、雌激素受体(ER)α及ERβ之间的调控关系与孕鼠肝内胆汁淤积发生的相关性.方法 选择清洁级SD孕鼠80只,随机分为4组,每组20只,自孕第13天起:对照组孕鼠皮下注射精制植物油2.0ml·kg-1·d-1;低剂量组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇(1.0 mg·kg-1·d-1);中剂量组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇(1.25 mg·lg-1·d-1);高剂量组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇(1.5 mg·kg-1·d-1).4组孕鼠于妊娠第21天处死后提取肝脏组织.应用酶联免疫吸附试验检测各组孕鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)、总胆酸(TBA)及胆红素(BIL)水平;应用实时定量PCR技术检测各组孕鼠肝脏组织中PPARα mRNA、CYP7B1 mRNA、ERα mRNA及ERβ mRNA的表达水平.结果 (1)生化指标:对照组孕鼠ALT、AST、TBA及BIL水平分别为(41.1±2.8)U/L、(44.4±3.6)U/L、(26.4±5.6)μmol/L、(2.8±0.2)U/L,低剂量组孕鼠分别为(48.2±3.4)U/L、(47.9±3.7)U/L、(36.4±4.2)μmol/L、(4.2±0.2)U/L,中剂量组孕鼠分别为(70.4±5.3)U/L、(68.4±5.6)U/L、(64.3±3.8)μmol/L、(6.2±1.2)U/L,高剂量组孕鼠分别为(72.4±7.6)U/L、(70.2±3.8)U/L、(72.4±7.8)μmol/L、(8.2±2.2)U/L.低剂量组、中剂量组、高剂量组孕鼠ALT、AST、TBA、BIL水平明显高于对照组(P<0.05);中剂量组、高剂量组孕鼠各生化指标水平明显高于低剂量组(P<0.05).(2)ERαmRNA及ERβmRNA表达水平:ERαmRNA的表达水平在低剂量组(0.76±0.02)、中剂量组(0.99±0.04)和高剂量组(1.21±0.01)孕鼠肝脏组织中呈逐渐升高趋势(P<0.05),并明显高于对照组(0.65±0.01),分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);ERβ表达水平在4组孕鼠间分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(3)CYP7B1 mRNA及PPARα mRNA表达水平:CYP7B1 mRNA的表达水平在低剂量组(0.93±0.01)、中剂量组(0.99±0.06)和高剂量组(1.22±0.04)孕鼠肝脏组织中呈逐渐升高趋势(P<0.05),并明显高于对照组(0.75±0.02),分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);PPARα mRNA表达水平在低剂量组(0.83±0.05)、中剂量组(0.71±0.02)和高剂量组(0.64±0.03)孕鼠肝脏组织中呈逐渐降低趋势(P<0.05),并明显低于对照组(1.35±0.05),分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 随着雌激素剂量的增加,PPARα表达水平降低,对CYP7B1表达的抑制作用解除,而导致CYP7B1表达水平升高;而CYP7B1有促进ERα高表达的作用,最终由ERα介导了雌激素诱导的肝内胆汁淤积的发生.提示PPARα、CYP7B1及ER的异常表达,是调控雌激素诱导孕鼠肝内胆汁淤积的发生机制之一.     

原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达

目的 探讨水通道蛋白8(AQP8)在原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中的表达.方法 收集2005年10月-2007年5月重庆医科大学附属第一医院和重庆市妇幼保健院行足月剖宫产分娩(孕37～40周)的原发性羊水过多产妇12例为羊水过多组,同期因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇12例为对照组.采用RT-PCR技术检测两组产妇胎膜和胎盘组织中的AQP8 mRNA表达水平;采用免疫组化技术检测两组产妇胎膜和胎盘组织中的AQP8蛋白表达水平.结果 (1)羊水过多组羊膜、绒毛膜和胎盘组织中的AQP8 mRNA表达水平分别为0.78±0.13、0.58±0.10、0.86±0.15,对照组分别为0.39±0.07、0.45±0.09、0.34±0.09,羊水过多组各组织中AQPS mRNA表达水平均高于对照组,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)羊水过多组羊膜、绒毛膜和胎盘组织中的AQP8蛋白表达水平分别为0.195±0.024、0.170±0.028、0.193±0.024,对照组分别为0.151±0.018、0.156±0.024、0.152±0.023,其中羊水过多组羊膜、胎盘组织中AQP8蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而羊水过多组绒毛膜组织中AQP8蛋白表达水平虽高于对照组,但两组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 原发性羊水过多产妇羊膜和胎盘组织中AQP8mRNA及蛋白的表达水平均显著高于正常产妇,提示AQP8在产妇羊水量的调节中发挥重要作用.     

熊去氧胆酸对肝内胆汁淤积孕鼠卵黄囊细胞膜流动性及胎盘组织谷光甘肽含量的影响

目的　探讨熊去氧胆酸 (ursodeoxycholicacid ,UDCA)的应用对胆汁淤积症 (ICP)孕鼠脏层卵黄囊细胞膜脂质流动性及胎盘组织谷光甘肽 (glutathione,GSH)含量的影响。　方法　选择妊娠SD大鼠 6 0只 ,随机分成三组 ,每组 2 0只 :(1)自妊娠第 13天起对照组孕鼠皮下注射精制植物油 2 .5ml/ (kg·d) ,ICP非治疗组和治疗组分别皮下注射孕酮 75mg/ (kg·d)和 17α 乙炔雌二醇1.2 5mg/ (kg·d) ,直至孕 17d。 (2 )自妊娠第 17天起 ,对照组、ICP非治疗组孕鼠行生理盐水 5ml/ (kg·d)灌胃 ,治疗组孕鼠UDCA 5 0mg/ (kg·d)灌胃。 (3)三组孕鼠均于妊娠第 2 1天处死 ,记录死胎数并计算死胎率 ,取出子宫 ,仔细分离胚胎脏层卵黄囊膜 ,制备脏层卵黄囊细胞悬液 ,应用 5 ,5’ 二硫代双(二硝基苯甲酸 )直接法测定GSH的含量 ;应用 1,6 二苯已三烯荧光标记法测定细胞膜脂质流动性。　结果　 (1)孕鼠胚胎脏层卵黄囊细胞膜脂质流动性及胎盘组织GSH含量 :ICP非治疗组GSH含量、偏振度P值分别为 :(1.12± 0 .0 2 )mmol/gprot、0 .32 2± 0 .0 0 2 ;对照组分别为 :(1.5 6±0 .0 7)mmol/ gprot、0 .2 81± 0 .0 0 3;治疗组分别为 :(1.38± 0 .0 3)mmol/gprot,0 .171± 0 .0 0 3。ICP非治疗组与对照组相比 ,GSH含量明显下降 (P <0 .0 5     

妊娠期肝内胆汁淤积症对胎鼠肺脏形态的影响

目的 探讨孕鼠发生肝内胆汁淤积症(ICP)时对胎鼠肺脏形态学的影响.方法 将妊娠15 d的20只SD孕鼠随机分为实验组和对照组,每组10只.实验组孕鼠皮下注射17α-乙炔雌二醇和孕酮,连续5 d,成功建立ICP大鼠模型;对照组孕鼠皮下注射精制植物油,连续5 d.分别测定两组孕鼠模型建立前、后血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)的水平.于妊娠第21天处死孕鼠,取出孕鼠肝脏组织;处死孕鼠后立即行剖宫取胎术,对取出的胎鼠肺组织和孕鼠肝脏组织进行光镜和电镜的病理学检查.结果 (1)生化指标:模型建立前,实验组孕鼠血中ALT、AST及TBA水平分别为(55±15)U/L、(146±16)U/L及(13±4)μmol/L;对照组分别为(49±12)U/L、(145±20)U/L及(14±4)μmol/L,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05).模型建立后(于妊娠第21天断颈处死孕鼠),实验组孕鼠血中ALT、AST及TBA水平分别为(94±12)U/L、(245±26)U/L及(44±16)μmol/L;对照组分别为(59±17)U/L、(163±27)U/L及(17±3)μmol/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)孕鼠肝脏病理学检查:大体所见,实验组孕鼠肝脏边缘钝厚,色泽灰暗;对照组孕鼠肝脏边缘锐利,色泽红润.光镜下所见,实验组孕鼠中有部分肝细胞肿胀变性,胞质疏松化,肝血窦受压变窄,部分胆管扩张,偶见肝细胞坏死;对照组孕鼠则肝细胞形态及肝小叶结构均正常.(3)胎鼠肺脏组织学检查:实验组胎鼠肺脏色泽灰暗,对照组胎鼠肺脏外观红润.光镜下所见,实验组胎鼠肺组织已发育成熟,但肺间质毛细血管明显扩张、充血,大部分肺泡间隔增宽,肺泡内少量炎性渗出物,灶状肺泡内出血.电镜下所见,肺泡Ⅱ型细胞微绒毛减少,线粒体空泡变性,部分细胞质崩解,板层小体排空增多;对照组为正常肺组织病理表现,肺组织结构清晰,肺泡壁薄,肺泡腔内偶见巨噬细胞,未见炎性细胞浸润.结论 联合应用雌、孕激素能够有效地建立ICP孕鼠模型,且ICP孕鼠的高胆汁酸血症对胎鼠肺组织有明显的毒性损伤作用,导致肺组织发生严重的病理改变.     

InsR/FoxO1信号通路对妊娠胆汁淤积症子代大鼠下丘脑中POMC表达的影响

目的:探讨胰岛素受体(InsR)/胰岛素调节转录因子(Fox O1)信号通路对妊娠肝内胆汁淤积症出生后6个月子代大鼠下丘脑中阿片-促黑素细胞皮质素原(POMC)表达的影响。方法:40只清洁级SD孕鼠随机分为2组,每组20只。孕第13天时,对照组孕鼠皮下注射精制植物油2.0ml/(kg·d),ICP组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇1.0mg/(kg·d),直至孕21天。从ICP组和对照组出生子代中各随机选取雌性20只喂养至6月龄。分别在出生后1个月、3个月、6个月断尾取血。6月龄时进行糖耐量实验,检测血糖水平的变化。6月龄处死子代提取下丘脑组织,PCR法检测InsR、Fox O1及POMC mRNA表达。应用免疫组化法检测POMC在下丘脑弓状核的表达。结果:ICP组子代大鼠在出生时、1个月时体重明显低于对照组(P0.05),6个月时体重与对照组比较无明显差异。6月龄时进行糖耐量实验,ICP 6月龄子代血糖水平在不同时间段均高于对照组子代水平,差异有统计学意义(P0.05)。ICP组6月龄子代大鼠下丘脑中InsR、Fox O1A、POMC mRNA相对含量与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示,ICP子代鼠下丘脑中POMC阳性细胞数明显低于对照组。结论:ICP组由于存在高胆酸水平和不良的胎儿宫内生长环境,引发子代下丘脑调控能量稳定的信号通路改变,抑制食欲细胞减少,表现为饥饿状态,导致体重增加和血糖变化明显。     

水通道蛋白3、9在特发性羊水过多产妇胎盘和胎膜中的表达变化及意义

目的 探讨水通道蛋白(AQP)3、9在特发性羊水过多产妇胎盘和胎膜中的表达、分布及其在特发性羊水过多发病巾的作用.方法 2006年6月至2008年3月,选择在温州医学院附属第二医院产科住院并分娩的21例特发性羊水过多的足月产妇为研究组,同期分娩的30例羊水量正常的足月产妇为对照组.采用实时荧光定量PCR技术,检测两组产妇胎盘、胎膜中AQP3、9 mRNA的表达及分布,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白.过氧化物酶(SP)连接法枪测两组产妇胎盘、胎膜中AQP3、9蛋白的表达及分布.结果 (1)两组产妇羊膜、绒毛膜、胎盘中均可检测到AQP3、9 mRNA的表达.AQP3、9主要表达于羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘滋养细胞.(2)研究组羊膜上皮细胞AQP3、9 mRNA的表达分别为对照组的5.00倍和3.25倍,而研究组绒毛膜滋养细胞AQP3、9 mRNA的表达分别为对照组的2.03倍和2.08倍,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但是研究组胎盘滋养细胞AQP3、9 mRNA的表达均明显低于对照组,差异也有统计学意义(P<0.01).(3)AQP3、9蛋白在研究组羊膜上皮细胞的表达强度为7.5±2.0、11.1±1.8,对照组为5.3 ±1.6、5.6±2.3,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);AQP3、9蛋白在研究组绒毛膜滋养细胞的表达强度为7.5±2.0、10.0±1.6,对照组为5.4±2.2、5.6±2.1,分别比较,差异也有统计学意义(P<0.05),但是AQP3、9蛋白在胎盘滋养细胞的表达强度(3.5±1.4、4.0 ±2.5)较对照组(5.6±1.3、7.1±2.9)明显下调(P<0.05).结论 AQP3、9在特发性羊水过多产妇胎盘和胎膜中的表达变化可能为羊水增加后的代偿性反应,其调节机制尚待进一步研究.     

调控人羊膜上皮细胞AQP8表达的cAMP-PKA信号转导通路研究

目的:研究调控人羊膜上皮细胞AQP8表达的cAMP-PKA信号转导通路。方法:用RNA转录抑制剂ACT-D、蛋白合成抑制剂Cycloheximide(CHX)及蛋白激酶A抑制剂H-89处理被8-Br-cAMP诱导的WISH细胞。采用Western blot技术定量WISH细胞AQP8蛋白表达水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测WISH细胞AQP8 mRNA的表达。结果:8-Br-cAMP处理组WISH细胞AQP8 mRNA和蛋白表达水平分别为0.083±0.007和0.144±0.008,与对照组的0.026±0.003;0.027±0.004比较,差异有统计学意义(P0.05)。ACT-D处理组WISH细胞AQP8 mRNA的表达水平为0.021±0.004,低于对照组的0.026±0.003,差异有统计学意义(P0.05)。ACT-D+8-Br-cAMP处理组WISH细胞的AQP8 mRNA表达水平为0.031±0.006,明显低于8-Br-cAMP处理组,但高于ACT-D处理组,差异均有统计学意义(P0.05)。H-89处理组WISH细胞AQP8 mR-NA和蛋白表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。H-89+8-Br-cAMP处理组WISH细胞AQP8 mRNA和蛋白表达水平均明显低于8-Br-cAMP处理组,但高于H-89处理组,差异均有统计学意义(P0.05)。CHX处理组WISH细胞AQP8 mRNA和蛋白的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。CHX+8-Br-cAMP处理组WISH细胞AQP8 mRNA和蛋白表达水平均明显低于8-Br-cAMP处理组,但高于CHX处理组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:ACT-D、CHX和H-89抑制cAMP诱导的人羊膜上皮细胞AQP8 mRNA和蛋白表达增加的效应,cAMP可能是通过PKA信号转导途径在基因转录、蛋白合成等多个水平调控人羊膜上皮细胞AQP8表达。     

妊娠期糖尿病患者羊水量变化与其胎膜和胎盘组织中AQP8、AQP9表达关系的研究

目的:研究患有妊娠期糖尿病(GDM)产妇的胎膜和胎盘中水通道蛋白8(AQP8)、水通道蛋白9(AQP9)的表达变化,探讨其在GDM患者异常羊水量中的调节作用.方法:选择GDM患者羊水过多、羊水量正常及正常足月产妇各20例为研究对象,剖宫产术后取胎膜(羊膜和绒毛膜)和胎盘组织;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测AQP8、AQP9mRNA在各组胎膜和胎盘组织中的表达水平;采用Western免疫印迹技术半定量检测AQP8、AQP9蛋白在各组胎膜和胎盘中的表达水平.结果:①在羊膜和胎盘组织中,GDM羊水量过多组AQP8、AQP9mRNA及其蛋白表达水平均高于GDM羊水量正常组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);GDM羊水量正常组AQP8、AQP9mRNA及其蛋白表达水平与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).②在绒毛膜组织中,GDM羊水量过多组AQP8、AQP9mRNA及其蛋白表达水平与GDM羊水量正常组和正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论:羊膜和胎盘组织中AQP8、AQP9的表达可能在妊娠期糖尿病孕妇羊水量调节中发挥重要作用.     

水通道蛋白1和水通道蛋白3在羊水过少孕妇胎盘和胎膜的表达及其意义

目的 研究水通道蛋白1(AQP1)和AQP3在羊水过少孕妇胎盘、胎膜中的表达及分布,探讨其在羊水平衡途径中的作用. 方法 选取30例孤立性羊水过少的足月孕妇为研究组,同期分娩的30例正常羊水量的足月孕妇为对照组.分别采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学SP法,检测两组胎盘、胎膜组织中AQP1和AQP3 mRNA和蛋白的表达及分布. 结果 AQP1mRNA在研究组羊膜组织中的表达为对照组的0.31,AQP1蛋白在研究组羊膜组织中的表达为0.14±0.02,较对照组的0.25±0.03明显下调(P<0.05).而在胎盘、绒毛膜中的分布及表达强度两组间差异无统计学意义(P>0.05).AQP3 mRNA在研究组羊膜和绒毛膜中的表达分别为对照组的0.31和0.37,而胎盘中的表达为对照组的7.36.AQP3蛋白在研究组羊膜和绒毛膜中的表达分别为0.18±0.05和0.18±0.04,均较对照组的0.26±0.03和0.29±0.06明显下调(P<0.05),而在胎盘组织中的表达研究组为0.47±0.09,较对照组0.28±0.01明显上调(P<0.05). 结论 AQP1和AQP3在羊水过少孕妇胎盘、胎膜组织中表达的改变为羊水减少后的代偿性反应.     

妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇胎盘合体滋养细胞OATP8基因表达及意义的研究

目的:探讨有机阴离子转运多肽8(OATP8)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)孕妇胎盘组织中的表达及其意义。方法:研究对象分为ICP轻度组(8例)、ICP重度组(8例)和正常对照组(8例)。采用免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测胎盘组织中OATP8蛋白定位表达;采用逆转录(RT)-PCR技术检测OATP8mRNA表达;蛋白印迹法检测OATP8蛋白表达水平。结果:①OATP8蛋白定位在胎盘合体滋养细胞膜上。②3组孕妇胎盘组织中OATP8mRNA的表达:ICP重度组明显高于对照组和ICP轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05),ICP轻度组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);③3组孕妇胎盘组织中OATP8蛋白的表达:ICP重度组高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05),ICP轻度组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ICP孕妇胎盘合体滋养细胞OATP8基因表达水平上调,可能有助于胎盘对胆汁酸或胆红素的清除作用。     

SAMe对雌激素诱导的肝内胆汁淤积症孕鼠的胎盘多药耐药相关蛋白-谷胱甘肽共转运体系的影响

目的:探讨S-腺苷蛋氨酸(SAMe)对雌激素诱导的肝内胆汁淤积症(ICP)孕鼠的胎盘多药耐药相关蛋白(MRP)-谷胱甘肽(GSH)共转运体系的影响。方法:将妊娠第13天的大鼠随机分成对照组(孕15～19天腹腔注射生理盐水)、EE(孕15～19天皮下注射17-α-乙炔雌二醇溶液)组、EE+SAMe组(孕15～19天皮下注射17-α-乙炔雌二醇溶液,孕17～19天腹腔注射SAMe溶液)。17-α-乙炔雌二醇诱导孕鼠发生肝内胆汁淤积,建立ICP模型,测定3组血清总胆酸(TBA)、甘胆酸(CG)、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST);ELISA检测GSH,逆转录实时荧光定量PCR和免疫组化法检测MRP1、MRP2、MRP5的表达。结果:EE组的TBA、CG、ALT、AST水平显著增高,胚胎存活率显著降低(P0.001);经SAMe治疗,TBA、CG、ALT、AST水平显著下降,增加了胚胎存活率(P0.01)。EE组胎盘的MRP1 mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05),而胎盘MRP2、MRP5 mRNA和蛋白的表达显著下调(P0.01),GSH显著下降(P0.001);经SAMe治疗,胎盘MRP1 mRNA和蛋白表达显著下调(P0.05),胎盘MRP2、MRP5 mRNA和蛋白的表达显著上调(P0.05),GSH显著上升。结论:胎盘存在MRP-GSH共转运体系;SAMe可通过调节胎盘MRP-GSH共转运体系影响胆汁酸的转运,从而治疗大鼠妊娠期ICP。     

人类白细胞抗原G蛋白在胎盘组织中的表达及其基因多态性与妊娠肝内胆汁淤积症发病的关系

目的探讨人类白细胞抗原G（HLA-G）蛋白在胎盘组织中的表达及其基因多态性与妊娠肝内胆汁淤积症（ICP）发病的关系。方法选取2004年4月至10月间,在四川大学华西第二医院产科及四川省妇幼保健院产科行剖宫产分娩的晚孕妇女60例,其中ICP孕妇30例（ICP组）,根据妊娠期是否接受过地塞米松治疗又将ICP组分为治疗组（15例）和非治疗组（10例,因未治病例少）;正常晚孕妇女30例为对照（根据检测指标不同分为对照1组,15例;对照2组,30例）。采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法,检测HLA-G蛋白在对照1组、治疗组及非治疗组孕妇胎盘组织中的表达情况（以平均吸光度值表示）;同时采用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）法,检测HLA-G基因外显子8上14bp缺失多态性在ICP组及对照2组孕妇外周血及新生儿脐血中的分布。结果（1）非治疗组胎盘组织中,HLA-G蛋白的平均吸光度值为56±8,明显低于对照1组的70±10及治疗组的66±9,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;治疗组与对照1组胎盘组织中HLA-G蛋白的平均吸光度值比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）HLA-G基因外显子8上14bp缺失多态性检测结果显示,对照2组及ICP组母儿的等位基因频率及基因型频率比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论ICP患者胎盘组织中HLA-G蛋白表达下调可能是ICP发病机制之一;地塞米松对胎盘组织中HLA-G蛋白的表达具有上调作用;HLA-G基因外显子8上14bp缺失多态性可能与ICP的发病无关。     

熊去氧胆酸对肝内胆汁淤积孕鼠肝组织中谷胱甘肽、脂质流动性及雌、孕激素受体的影响

目的　探讨熊去氧胆酸对肝内胆汁淤积孕鼠肝组织中谷胱甘肽含量、肝细胞膜脂质流动性以及肝细胞雌、孕激素受体的影响。方法　选择清洁级妊娠SD大鼠 6 0只 ,随机分成 3组 ,每组2 0只 :(1)自妊娠第 13天起 ,正常组孕鼠开始每天皮下注射精制植物油 2 5ml/kg ;对照组和治疗组孕鼠每天皮下注射孕酮 75mg/kg体重和 17 α 乙炔雌二醇 1 2 5mg/kg体重 ,直至孕第 17天。 (2 )自孕第17天起 ,正常组及对照组孕鼠每天行生理盐水 5ml/kg体重灌胃 ;治疗组孕鼠每天行熊去氧胆酸 5 0mg/kg体重灌胃。 (3) 3组孕鼠均于孕第 2 1天处死 ,提取肝组织 ,应用 5 ,5′ 二硫代双直接法测定肝组织中谷胱甘肽含量 ;应用 1,6 二苯已三烯荧光标记法测定肝细胞膜脂质流动性 [以偏振度 (P)的比值表示 ];应用流式细胞技术测定肝细胞雌、孕激素受体 (以平均荧光强度表示 )。结果　 (1)肝组织中谷胱甘肽含量及肝细胞膜脂质流动性比值 :正常组孕鼠分别为 (2 11± 0 0 7)mmol/g蛋白及 0 132±0 0 0 4 ;对照组孕鼠分别为 (1 13± 0 0 3)mmol/g蛋白及 0 14 9± 0 0 0 8;治疗组孕鼠分别为 (1 82± 0 0 4 )mmol/g蛋白及 0 14 1± 0 0 0 6。肝组织中谷胱甘肽含量 ,对照组明显低于正常组 (P <0 0 5 ) ,治疗组高于对照组 ;肝细胞膜脂质     

妊娠肝内胆汁淤积症患者血清甘胆酸水平变化与胎盘细胞凋亡调节基因表达的关系

目的　探讨妊娠肝内胆汁淤积症 (ICP)患者血清甘胆酸水平变化与胎盘细胞凋亡的关系 ,进一步分析ICP患者胎盘功能减退的可能机制。方法　应用放射免疫方法 ,测定 30例ICP患者(ICP组 )及 2 7例正常孕妇 (对照组 )分娩前血清甘胆酸水平 ,应用免疫组化方法测定两组孕妇胎盘细胞凋亡调节基因bax和bcl 2的表达。结果　 (1)ICP组甘胆酸水平为 (5 1 8± 5 9) μmol/L ,对照组为(9 4± 5 6 ) μmol/L ,两组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。 (2 )ICP组胎盘合体滋养细胞bax阴性 2例 ,弱阳性 9例 ,中等阳性 11例 ,强阳性 8例 ;bcl 2弱阳性 12例 ,中等阳性 12例 ,强阳性 6例。对照组bax阴性 9例 ,弱阳性 13例 ,中等阳性 4例 ,强阳性 1例 ;bcl 2弱阳性 3例 ,中等阳性 4例 ,强阳性 2 0例。两组比较 ,ICP组bax表达阳性率显著高于对照组 (P <0 0 0 0 5 ) ,而bcl 2的表达阳性率又显著低于对照组 (P <0 0 0 0 5 )。 (3)孕妇血甘胆酸水平与胎盘bax表达阳性率呈线性正相关 (P <0 0 0 5 ) ,与胎盘bcl 2表达呈线性负相关 (P <0 0 0 5 )。结论　ICP患者血中高水平的甘胆酸使胎盘合体滋养细胞bax基因过度表达 ,这可能是ICP患者胎盘功能减退的机制之一。     

妊娠肝内胆汁淤积症患者雌孕激素水平及免疫功能的变化

目的探讨雌孕激素水平及免疫功能变化与妊娠肝内胆汁淤积症（ＩＣＰ）的关系。方法采用放射免疫法、单向免疫扩散法、碱性磷酸酶及抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）检测ＩＣＰ孕妇５０例（ＩＣＰ组）及正常妊娠妇女５０例（对照组）雌孕激素水平的变化、体液免疫和细胞免疫功能的水平。结果ＩＣＰ组雌激素水平（２５．８９±６．８５μｇ／Ｌ）较对照组（１６．９２±４．９８μｇ／Ｌ）明显升高,（Ｐ＜０．０１）,孕激素水平差异无显著性（Ｐ＞０．０５）;ＩＣＰ组细胞毒性抑制性Ｔ细胞（ＣＤ８＋）水平（１９．０６±１．９３％）较对照组（２６．４３±２．８９％）降低（Ｐ＜０．０５）,辅助性诱导性Ｔ细胞（ＣＤ４＋）与ＣＤ８＋比值（２．２３±０．３８）较对照组（１．７３±０．２３）升高（Ｐ＜０．０５）;雌激素水平与ＣＤ８＋呈负相关,与ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值呈正相关。结论ＩＣＰ患者雌激素水平增高,雌激素通过ＣＤ８＋上的雌激素受体而发挥作用,导致免疫功能的改变,而引起ＩＣＰ的发生     

熊脱氧胆酸对抗乙炔雌二醇诱发孕大鼠肝内胆汁淤积的作用机制

目的:研究熊脱氧胆酸(ursodeoxycholicacid,UDCA)对雌激素诱发孕鼠肝内胆汁淤积肝脏胆盐输出泵(bilesaltexportpump,BSEP)及肝脏法尼醇受体(farnesoidXreceptor,FXR)表达的影响,探讨UDCA治疗妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatischolesta-sisofpregnancy,ICP)的作用机制。方法:随机将孕15d的大鼠40只分成4组,1,2-丙二醇(propyleneGlycol,PG)组,17-α-乙炔雌二醇(ethinylestradiol,EE)组,UDCA组和UDCA+EE组。用药前,用药后5d测血浆中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),总胆酸(TBA)。同时观察肝脏形态学变化及胎鼠生长发育情况;应用免疫组化法分析肝脏BSEP及FXR的表达。结果:用药后EE组的孕鼠ALT、AST、ALP、TBA比用药前显著升高(P<0·05),PG组无明显变化(P>0·05),UDCA组,UDCA+EE组ALT,AST,ALP无明显变化(P>0·05),但TBA明显升高(P<0·05)。EE组孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积表现,其余3组肝脏形态结构正常。EE组胎仔身长,尾长,体重,死胎数,活胎数,孕天数与其余3组比较有显著差异(P<0·05)。EE组BSEP表达降低,FXR表达升高,与PG组,UDCA组,UDCA+EE组差异均有显著性(P<0·05)。结论:UDCA对雌激素诱发孕鼠肝内胆汁淤积肝脏具有保护作用,能改善胎仔预后,可能是通过恢复肝脏BSEP的表达促进胆汁分泌,而不是通过影响FXR表达调节胆汁酸的合成。     

妊娠肝内胆汁淤积症患者脐带血管病变及血管活性物质的表达与胎儿窘迫发生的关系

目的 探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者脐带血管病理改变、脐带血管活性物质表达的变化与胎儿窘迫发生的关系.方法 应用HE染色法制片,光镜下观察25例ICP伴有胎儿窘迫(ICP窘迫组)、25例ICP不伴胎儿窘迫(ICP对照组)以及27例正常妊娠妇女(正常妊娠组)新生儿脐带血管病理改变;应用免疫组化辣根过氧化物酶-生物素标记(SABC)法测定内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及内皮素1(ET-1)蛋白在各组脐静脉内皮细胞中的表达量,以平均吸光度(A)值表示;应用循环酶法测定脐静脉血总胆酸水平并进行相关性分析.结果 (1)脐静脉血总胆酸水平:ICP窘迫组为(19.0±2.3)μmol/L,ICP对照组为(9.0±1.7)μmol/L,正常妊娠组为(4.4±1.5)μmol/L,各组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)脐静脉病理改变:ICP患者脐静脉内皮细胞单层扁平结构丧失,细胞向管腔耸立,梭形排列,细胞排列不均甚至脱落.ICP窘迫组患者脐静脉内皮细胞出现此病理改变的发生率(92%,23/25)明显高于ICP对照组(68%,17/25),差异有统计学意义(P＜0.05).(3)脐静脉内皮细胞中eNOS蛋白表达量:ICP窘迫组为0.09±0.06,ICP对照组为0.21±0.08,正常妊娠组为0.47±0.07,各组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).脐静脉内皮细胞中iNOS蛋白表达量:ICP窘迫组为0.20±0.04,ICP对照组为0.21±0.05,正常妊娠组为0.26±0.04,两ICP组分别与正常妊娠组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);而ICP窘迫组与ICP对照组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(4)脐静脉内皮细胞中ET-1蛋白表达量:ICP窘迫组为0.49±0.08,ICP对照组为0.32±0.07,正常妊娠组为0.14±0.06,两ICP组分别与正常妊娠组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).(5)脐静脉血总胆酸水平与其病理改变的关系:脐静脉血总胆酸水平升高是脐静脉病理改变的危险因素;且与脐血管内皮细胞eNOS、iNOS的蛋白表达量呈负相关关系(r1=-0.88、r2=-0.45,P＜0.01);与脐血管内皮细胞ET-1蛋白的表达量呈正相关关系(r3=0.79,P＜0.01).结论 ICP患者脐静脉血高胆酸状态可能损伤脐静脉内皮细胞,且与其eNOS、iNOS蛋白表达下调、ET-1蛋白表达上调有关,脐静脉的这些改变可能与ICP患者胎儿窘迫的发生有关.     

妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘组织中OATP-A基因表达的研究

目的:探讨有机阴离子转运多肽OATP-A在正常晚孕妇女及ICP孕妇胎盘组织的表达水平及意义。方法:收集正常晚孕胎盘组织(对照组)、轻度ICP胎盘组织及重度ICP胎盘组织各10例。采用免疫组化、Western blot分别检测胎盘组织中OATP-A的组织学定位及蛋白表达水平。结果:正常组及ICP组胎盘组织中OATP-A表达均定位于胎盘滋养细胞的细胞膜,血管内皮无表达。对照组、ICP轻度组及ICP重度组的OATP-A蛋白表达量分别为0.21±0.02、0.53±0.04、0.79±0.12,ICP轻度组及重度组OATP-A蛋白表达量均高于对照组,两两比较,均有统计学意义(P<0.05)。结论:ICP胎盘组织中OATP-A表达明显升高,可能是对抗胆汁淤积的一种保护性反应,对降低胎儿部分胆汁酸及胆红素水平有重要作用。