树突状细胞与超抗原联合诱导抗肿瘤免疫的研究

目的 建立体外培养扩增树突状细胞（DC）的方法，并利用DC和超抗原高聚金葡素（HAS）诱导产生高效特异性抗肿瘤免疫。方法 用GM－CSF和IL－4联合刺激诱导外周血单个核细胞分化为树突状细胞。HAS活化的淋巴细胞称为HASL。将DC与同源淋巴细胞或HASL共培养，分别称为DC－L和DC－HASL。用FCS分析细胞表型，MTT法测定细胞杀伤活性，并观察对裸鼠移植瘤的生长抑制作用。结果 在体外，DC－HASL对GLC－82细胞具有相对特异的杀伤作用，HASL和DC－L则无明显特异性。这三种效应细胞对荷瘤鼠的肿瘤生长都有不同程度的抑制，DC－HASL抗瘤活性最强。结论 将DC和HAS结合可诱导产生一种高效并具有相对特异性的抗肿瘤免疫活性细胞。     

多西他赛诱导乳腺癌Bcap37细胞凋亡作用的研究

目的：探讨多西他赛（≤10μmol／L）体外对人乳腺癌Bcap37细胞凋亡的作用及其机制。方法：采用琼脂糖凝胶电泳观察Bcap37细胞凋亡情况；原位末端标记（TUNEL）法测定Bcap37细胞凋亡指数（apoptotic index，AI）；流式细胞仪检测Bcap37细胞周期。结果：与对照组相比，实验组琼脂糖凝胶电泳显示凋亡特有的梯状图谱；实验组显示细胞核染成棕色的凋亡细胞，且AI较对照组显著增大，具有量效依赖性，P〈0．001。实验组G2／M期细胞比例较对照组显著升高，G1、S期细胞比例显著降低，P〈0．01。结论：多西他赛（≤10μmol／L）诱导人乳腺癌Bcap37细胞凋亡，细胞周期阻滞在G2／M期。     

树突状细胞疫苗治疗肿瘤的研究

携带肿瘤抗原的树突状细胞疫苗作为一种新型的肿瘤疫苗引起了肿瘤学界和免疫学界的重大关注，全文对树突状细胞疫苗的基础研究和临床应用进展进行了综述。     

树突状细胞与抗肿瘤免疫

树突状细胞（ＤＣ）是一种重要的专职抗原提呈细胞（ＡＰＣ）,在抗肿瘤免疫中发挥重要作用。目前有关ＤＣ在白血病和其它肿瘤治疗中作用的研究已成为该领域的研究热点,有望在肿瘤免疫治疗中取得新的突破。     

树突状细胞疫苗治疗肺癌血源性转移的实验研究

目的 探索应用树突状细胞肿瘤疫苗治疗肺癌血源性转移的可能性。方法 将Ｌewis肺癌细胞经尾静脉注射给Ｃ５７ＢＬ/６j纯系小鼠建立肺癌血源性转移模型,应用树突状细胞负载合成的抗原多肽ＭＵＴ－１,作为肿瘤疫苗进行免疫治疗。存活的小鼠再用１０倍数量的癌细胞皮下攻击,观察其免疫保护效应。这些小鼠的脾脏Ｔ淋巴细胞经纯化后进行体外抗原致敏,然后测定其特异性细胞毒效应。结果 尾静脉注射Ｌewis肺癌细胞可引起多脏器肿瘤播     

树突状细胞与肿瘤免疫治疗

树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ，ＤＣ）作为一种专职性抗原加工呈递的细胞，在免疫应答中起着重要作用。近年来，肿瘤的免疫治疗方法一直得到广泛的研究，有关树突状细胞在肿瘤免疫治疗研究已取得了一系列重要进展。１树突状细胞概述ＤＣ因其细胞膜上具有膜样或...     

树突状细胞诱导抗人肝癌细胞系的肿瘤免疫

目的 以树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导抗肝瘤免疫。方法 自肝癌患者外周血中分离ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素－４（ＩＬ－４）联合刺激ＤＣ;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒素性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ对ｅｐＧ２细胞,ＢＥＬ－７４０２细胞、ＳＧＣ－７９０１细胞、ＬＯＶＯ细胞及ＨＯＳ－     

脐血来源树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫特异性

[目的]研究脐血来源树突状细胞(DC)体外诱导特异性抗卵巢癌细胞的免疫效应.[方法]①从脐血中分离单个核细胞(MNCs)后,获得单核细胞(Mo).粒单集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导分化,培养7天后应用流式细胞仪进行细胞表型分析.②诱导单核细胞分化的第3天加入人卵巢癌细胞株3AO的冻融抗原,共培养4天后获得负载肿瘤抗原的成熟DC;将致敏DC与从脐血中分离的同种异体T淋巴细胞共培养3天,获得细胞毒T淋巴细胞(CTL);四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL及上清对人卵巢癌细胞株3AO、人胚肾细胞株293T(对照细胞)、人肝癌细胞株HCCC-9810的细胞毒作用.[结果]①脐血来源单核细胞(Mo)在GM-CSF和IL-4作用下,7天后可分化生成成熟的DC,高表达DC特异性抗原CDla、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、HLA-DR、CD83.②DC可负载并递呈肿瘤抗原,激活同种异体T淋巴细胞,诱导肿瘤特异性CTL产生.不同浓度CTL及上清对卵巢癌细胞3AO有特异性杀伤、抑制作用(P＜0.05).[结论]脐血中单核细胞可体外分化扩增为成熟的功能性DC,并诱导出特异性杀伤卵巢癌细胞的免疫效应.     

树突状细胞疫苗研究进展

近十年来,随着对细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）形成机制、作用及其和ＭＨＣⅠ、Ⅱ类分子关系的揭示,ＣＤ８＋ＣＴＬ细胞在抗肿瘤免疫反应中的核心地位已明确奠定。因此,树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌ,ＤＣ）疫苗在肿瘤免疫治疗中的研究正引起人们的广泛关注。ＤＣ是体内最重要的抗原递呈细胞［１］,其在激发免疫反应中起核心作用。ＤＣ是骨髓来源的白细胞,也可由血液中的单核细胞、中性粒细胞及组织巨噬细胞衍生而来。与巨噬细胞相比,ＤＣ膜表面的ＭＨＣ分子数量多近５０倍,这样有可能形成较多的与Ｔ细胞受体结合的肽／Ｍ…     

肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞对大鼠卵巢上皮癌免疫治疗的体内研究

目的：研究树突状细胞（dendritic cells,DC）与肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞（tumor-associated antigen／dendritic cells,TAA／DC）对荷瘤大鼠的免疫治疗效果。方法：建立大鼠卵巢癌皮下移植瘤模型;于成瘤后2周分别用PBS、DC或TAA／DC进行免疫治疗,比较治疗效果。结果：TAA／DC抑制肿瘤细胞的增殖与转移,对荷瘤大鼠治疗后8周,局部肿瘤无明显增长,P=0．355,无转移灶出现;TAA／DC可明显改善大鼠免疫状况,对荷瘤大鼠治疗后3周,使已经下降的CD8^＋ T细胞百分比又明显上升,P=0．000;TAA／DC对荷瘤大鼠单次免疫治疗的效果具有时限性,在对荷瘤大鼠治疗后8周,CD8^＋ T细胞百分比再次出现明显下降,P=0．000。结论：TAA／DC可改善荷瘤大鼠的细胞免疫状态,抑制肿瘤细胞的增殖与转移。     

AFP与HBsAg混合多肽负载树突状细胞治疗HBV阳性肝癌的研究

目的：以AFP和HBsAg为双靶标,以树突状细胞（DCs）为抗原载体与佐剂,探讨其激发特异性（CTL）反应的能力及其在HBV阳性肝癌（HCC）患者应用的可行性。方法：采集20例HLA—A201＋HBV＋AFP＋HCC患者外周血,分离单核细胞（Mo）和外周淋巴细胞（PBLs）,将Mo诱导为成熟DCs（mDC）;人工合成AFP和HBsAg多肽,负载mDC后体外致敏,检测其体外杀伤活性;同时于患者皮内注射负载AFP和HBsAg混合多肽的DCs,监测接种前后患者外周血中细胞因子和特异性CTL水平变化,并进行DTH试验,治疗后跟踪检测患者AFP水平和乙肝两对半水平的变化。结果l患者外周PBLs经DCs致敏后,对负载AFP和HBsAg多肽的T2靶细胞杀伤率明显增高,P〈0．05。接种负载AFP和HBsAg多肽的DCs后,血清中IL-2、IL-12、IFN-γ水平较治疗前显著升高,P〈0．05,TNF-a和IL-10水平较治疗前均差异不大,P〉0．05;DTH试验阳性率为41．7％（5／12）,患者外周血中特异性CTLs比例明显上升的有4例（4／12）。治疗后有4例患者AFP水平下降,9例HBeAg阳性的患者中有3例HBeAg下降,2例患者出现血清学应答。结论：负载AFP和HBsAg多肽的Dcs体内、体外均具有激发特异性cTLs反应能力,可诱导Thl型细胞因子的分泌,有望成为一种HCC治疗的新方法。     

肿瘤源性血管内皮细胞RNA转染树突细胞体外诱导特异性CTL的研究

目的:探讨转染肿瘤血管内皮细胞RNA的树突细胞(DC)能否诱导特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法:采用肿瘤细胞的培养上清诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖,从而制备肿瘤源性血管内皮细胞(Td-EC)。用RT-PCR检测肿瘤内皮标志1(TEM1)在Td-EC上的表达。制备Td-EC的总RNA,转染从人外周血中扩增的未成熟DC,用流式细胞仪检测DC表型的变化,用LDH法检测DC诱导的CTL对Td-EC、HUVEC和人脐静脉内皮细胞株CRL-1730的杀伤率。结果:Td-EC特异性表达TEM1。转染RNA的DC组CD83、CD86表达率分别为(85.22±7.73)%和(88.38±8.02)%,而未成熟DC组CD83、CD86表达率分别为(51.58±9.49)%和(61.77±2.91)%,两组差异有统计学意义,P<0.05。在效靶比为20∶1、10∶1和5∶1时,CTL对Td-EC的杀伤率分别为(34.15±1.14)%、(27.02±1.31)%和(13.12±1.63)%;CTL对HUVEC杀伤率分别为(11.35±0.97)%、(8.24±0.37)%和(5.30±0.73)%;CTL对CRL-1730杀伤率分别为(13.24±1.76)%、(8.41±0.91)%和(5.31±0.94)%;CTL对Td-EC杀伤率均显著高于对HUVEC和CRL-1730的杀伤率,P<0.05。结论:转染Td-EC RNA的DC可在体外诱导CTL特异性地杀伤Td-EC。     

HIFU治疗后肿瘤抗原对树突状细胞的活化及其抗肿瘤效应

目的：探讨HIFU治疗小鼠H22抑制性肝癌后产生的肿瘤抗原对机体抗肿瘤免疫功能增强的机制。方法：正常小鼠骨髓中提取骨髓细胞,在rmIL-4、rmGM-CSF奈件下培养7d,制备小鼠骨髓树突状细胞,用HIFU治疗小鼠移植性肝癌后产生的肿瘤抗原活化树突状细胞,再用活化后的树突状细胞激活T淋巴细胞为细胞毒性T细胞,用MTT法检测CTL在体外特异性杀伤肿瘤靶细胞的能力。结果：B16肿瘤HSP70-肽复合物组和H22肿瘤HSP70-肽复合物组的脾淋巴细胞的增殖率均高于阴性对照组、H22肿瘤粗提物组和HIFU后H22肿瘤粗提物组,P〈0．001;但两组之间差异无统计学意义,P〉0．05。H22肿瘤HSP70-肽复合物组CTL对H22肿瘤细胞的杀伤率为70．0％,明显高于阴性对照组、H22肿瘤粗提物组和HIFU后H22肿瘤粗提物组（P〈0．001）,但对非靶细胞B16肿瘤的杀伤率与上述各组的差异无统计学意义;B16肿瘤HSP70-肽复合物组CTL对B16肿瘤细胞的杀伤率为78．5％,对H22细胞的杀伤率为21．4％,表明CTL对肿瘤细胞的杀伤作用具有特异性。结论：HIFU治疗后坏死肿瘤组织中的HSP70-肽复合物作为肿瘤疫苗,通过活化DC和刺激T淋巴细胞增殖为CTL,发挥特异性抗肿瘤免疫功能。     

负载HER-2/neu多肽的树突状细胞激发特异性CTL反应

目的:探讨以HER-2/neu为靶抗原、树突状细胞(dendritic cell,DC)为抗原载体激发特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)反应的能力及研制治疗型乳腺癌疫苗的可行性。方法:采集17例HLA-A201+HER-2/neu+乳腺癌患者外周血,分离单个核细胞与外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),并诱导为成熟DC(mature dendriticcell,mDC);人工合成HER-2/neu多肽[E75(KIFGSLAFL)和GP2(IISAVVGIL)2条]负载mDC后体外反复致敏PBL(3次,每周1次),检测其激发HER-2/neu特异性CTL的能力与CTL的杀伤活性。同时于患者腹股沟淋巴结富集区皮内注射负载HER-2/neu多肽的DC,每周1次,共接种4次,检测接种前后患者外周血细胞因子和特异性的CTL水平变化,并进行DTH试验。结果:患者外周PBL经过负载HER-2/neu多肽DC共3轮致敏后,HER-2/neu多肽特异的CTL平均比例比对照组(未负载HER-2/neu多肽DC组)明显增高[(5.41±1.44)%vs(0.41±0.12)%,P<0.05];致敏后PBL对负载HER-2/neu多肽T2靶细胞的杀伤率明显高于对照组(未负载DC诱导的CTL)[效靶比为30∶1时,(35.5±4.7)%vs(11.2±1.4)%,P<0.05]。接种负载HER-2/neu多肽的DC后,患者体内血清中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ水平较治疗前显著升高[(409.09±89.39)vs(148.79±28.32)ng/ml,(56.23±14.08)vs(24.49±56.23)ng/ml,(146.57±25.97)vs(67.77±39.35)ng/ml;均P<0.05],TNF-α和IL-10水平较治疗前变化不大(P>0.05)。患者DTH试验阳性率为47%(8/17),DTH阳性患者外周血中特异性CTL比例明显上升。结论:负载HER-2/neu多肽的DC体内、外均具有激发特异性CTL反应能力,可诱导Th1型细胞因子的分泌,未发生临床不良反应。     

自体热休克凋亡细胞负载树突状细胞治疗大肠癌的疗效观察

目的：探讨自体热休克凋亡细胞负载的树突状细胞（dendritic cells,DC）治疗大肠癌的临床疗效。方法：采用酶消化法从手术切除的14例大肠癌新鲜组织获得单细胞悬液,热休克处理后用桦脂酸诱导其凋亡制备成细胞抗原;采集外周静脉血,分离单个核细胞,经GM-CSF与IL-4体外诱导成未成熟树突状细胞,负载细胞抗原后制备成DC肿瘤疫苗;对14例大肠癌患者进行4个疗程的DC免疫治疗,观察患者不良反应、敏感程度、生存质量、生存时间、癌胚抗原等临床指标。结果：DC治疗大肠癌未出现明显不良反应,5例患者的DTH检测阳性;14例患者的平均CEA水平由治疗前的99.5ng/ml降至治疗后的71.4ng/ml（P〈0.05）;治疗后血清中IL-2、IL-12及IFN-γ浓度均显著高于治疗前,具有统计学差异（P〈0.05）;所有患者均生存1年,其中1例患者出现了短暂的后腹膜淋巴结缩小,持续3个月,第2年由于肿瘤的进展生存率下降,由80%降至20%;患者的KPS评分上升,与治疗前比较有所改善（P〈0.05）。结论：自体热休克凋亡细胞负载的DC治疗大肠癌在临床治疗中具较高安全性,可改善患者免疫功能,临床观察显示患者近期临床效果明显;为大肠癌的临床综合治疗提供了一种新方法。     

自体热休克凋亡细胞负载树突状细胞治疗大肠癌的疗效观察

目的:探讨自体热休克凋亡细胞负载的树突状细胞(dendritic cells,DC)治疗大肠癌的临床疗效。方法:采用酶消化法从手术切除的14例大肠癌新鲜组织获得单细胞悬液,热休克处理后用桦脂酸诱导其凋亡制备成细胞抗原;采集外周静脉血,分离单个核细胞,经GM-CSF与IL-4体外诱导成未成熟树突状细胞,负载细胞抗原后制备成DC肿瘤疫苗;对14例大肠癌患者进行4个疗程的DC免疫治疗,观察患者不良反应、敏感程度、生存质量、生存时间、癌胚抗原等临床指标。结果:DC治疗大肠癌未出现明显不良反应,5例患者的DTH检测阳性;14例患者的平均CEA水平由治疗前的99.5ng/ml降至治疗后的71.4ng/ml(P<0.05);治疗后血清中IL-2、IL-12及IFN-γ浓度均显著高于治疗前,具有统计学差异(P<0.05);所有患者均生存1年,其中1例患者出现了短暂的后腹膜淋巴结缩小,持续3个月,第2年由于肿瘤的进展生存率下降,由80%降至20%;患者的KPS评分上升,与治疗前比较有所改善(P<0.05)。结论:自体热休克凋亡细胞负载的DC治疗大肠癌在临床治疗中具较高安全性,可改善患者免疫功能,临床观察显示患者近期临床效果明显;为大肠癌的临床综合治疗提供了一种新方法。     

Immunotherapy with dendritic cells for prostate cancer

Radical prostatectomy for prostate cancer is followed by PSA recurrence in up to 40% of patients. One third of patients with biochemical relapse progress to uncurable metastatic disease. Therefore, alternative treatment modalities are needed both in the situation of PSA recurrence and in hormone‐refractory disease. Dendritic cells (DC) are the most powerful antigen‐presenting cells, able to prime naïve T‐cells and to break peripheral tolerance and thus induce tumor immune responses. More than 400 prostate cancer patients have been treated with DC‐based immunotherapy to date, and immune responses have been reported in two‐thirds of these, resulting in clinical responses in almost half of the patients treated. Most responses, however, were modest and transient. Therefore, mechanisms of treatment failure and possibilities to improve vaccination efficacy are being discussed. © 2007 Wiley‐Liss, Inc.     

Caspase-3抑制剂减弱紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡

目的 通过阻断Caspase途径，观察其对紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡的影响，研究Caspase途径在紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡中的作用机制。方法 采用MTT法、DNA凋亡梯状条带法及流式细胞仪法检测。用100μmol／L Caspase-3抑制剂(DEVD-CHO)预处理乳腺癌Bcap37细胞3小时后，加入不同浓度的紫杉醇，观察紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡的变化。结果 DEVD-CHO能减弱由紫杉醇诱导的肿瘤细胞凋亡。蛋白免疫印迹实验表明DE-VD-CHO能抑制由紫杉醇所诱导的PARP、原Caspase-3裂解。结论 在紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡过程中，Caspase途径起着重要的作用，能阻断该途径减弱紫杉醇所诱导的肿瘤细胞凋亡。     

A study on melanoma treatment using dendritic cells loaded with antigens purified from melanoma cell lines

Objective The aim of this study was to purify effective tumor peptide complexes from human melanoma cell lines to enhance the treatment effects on melanoma.Methods We purified heat shock protein 70(HSP70)-peptide complexes(PCs)from human melanoma cell lines A375,A875,M21,M14,WM-35,and SK-HEL-1.We named the purified product as M-HSP70-PCs and determined its immunological activities.Autologous HSP70-PCs purified from primary tumor cells of melanoma patients(9 cases)were used as controls.These two tumor antigenic complexes were loaded into dendritic cells(DCs)and used to stimulate an antitumor response against tumor cells in the corresponding patients.Results Mature DCs pulsed with M-HSP70-PCs stimulated autologous T cells to secrete the same levels of type I cytokines as the autologous HSP70-PCs.Moreover,DCs pulsed with M-HSP70-PCs endued CIK cells with an equal ability as autologous HSP70-PCs to kill melanoma cells in the patients.Conclusion M-HSP70-PCs may be used as an efficient and generalized tumor antigen in the treatment of DC-based malignant melanoma.