肾炎病人肾组织中乙型肝炎病毒前-S_2蛋白的检测及意义

对经肾活检确诊的30例肾炎病人应用单克隆抗体、间接免疫酶标技术检测肾组织中的前-S_2(Pre-S_2)蛋白,同时对肾脏中的HBsAg、HBeAg及血清HBsag、HBeAg、抗HBs、抗HBe、抗HBc进行了观察。结果显示,7/22例原发性肾炎、6/8例狼疮性肾炎病人的肾小球中有Pre-S_2蛋白沉积,分布于毛细血管袢和(或)系膜区,其分布与肾炎类型、肾组织中免疫球蛋白、补体沉积的多少有关。肾脏中Pre-S_2蛋白的沉积与相同部位HBsAg的沉积有联系,与HBeAg的沉积无关。膜性肾病时,Pre-S_2蛋白的沉积与病毒血症有良好的相关性。狼疮性肾炎时Pre-S_2蛋白的沉积很可能是非特异性的。     

Pre-S_2蛋白与HBV其它血清学标志的关系

本文通过对154例临床肝炎患者同步检测Pre-S_2蛋白与HBV其它血清学标志结果的分析,证明Pre-S_2与HBsAg、HBeAg、抗-HBc IgM关系十分密切(P均<0.001),故可作为反映HBV复制的敏感标志之一.临床各型中,Pre-S_2蛋白的阳性率依次急性>慢性迁延型>慢性活动型>重型,但其差异均不显著(P>0.05).提示Pre-S_2蛋白主要与病毒复制活跃程度密切相关,而与肝脏损害程度似乎无关.病情严重的乙肝患者Pre-S_2缺失,可能提示预后不佳.     

HBV不同模式感染者血清HBV-DNA与Pre-S_2相关性研究

目的　探讨HBV感染者不同模式血清Pre S2 与HBV DNA之间的关系。方法　应用聚合酶链反应技术 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)对 742例HBV感染者血清 ,同时进行HBV DNA和Pre S2 检测。结果　HBeAg阳性血清中 ,HBV DNA和Pre S2 阳性率分别为 89.8%和 88 3 % ,均明显高于HBsAg阳性 (第二、三模式 )血清中HBV DNA(阳性率为 2 1 8%和 5 5 6 % )和Pre S2 (阳性率为 6 3 2 %和 81 2 % )的阳性率 (P <0 .0 1)。结论　HBeAg(+ )患者血清中 ,HBeAg ,HBV DNA和Pre S2 三者有较好的相关性 ,均可表示病毒复制活跃 ;HBsAg(+ )患者血清中 ,Pre S2 阳性率 (分别为 6 3 2 %和 81 2 % )明显高于HBV DNA阳性率 (2 1 8%和 5 5 6 % ) (P <0 .0 1) ,此时Pre S2 (+ )不能作为判断HBV复制活跃的确切指标。     

乙型肝炎病毒聚合酶片段的表达及其在血清学检测中的应用

目的建立乙型肝炎患者血清HBV病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的ELISA检测方法。方法构建HBV反转录酶/DNA聚合酶(HBV-Pol)基因原核表达载体pQE30-Pol,表达并纯化目的蛋白,用间接ELISA法检测274例乙型肝炎患者及50例正常人血清中的抗-HBp抗体,并与HBV-DNA实时荧光定量检测结果比较。结果成功将HBV-Pol基因插入原核表达载体pQE30,并在大肠埃希菌M15中获得了高效表达,表达产物以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白建立间接ELISA检测方法,在检测的274例乙型肝炎患者中,HBsAg+/HBeAg+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBe+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBc+患者血清中的抗-HBp抗体阳性率分别为97.8%、57.9%和13.2%,平均阳性率58.8%,而正常人血清抗-HBp均为阴性。运用此法测得的血清抗-HBp阳性率和实时定量PCR检测结果无统计学差异(P=0.359)。结论成功表达了HBV-Pol片段并且建立了血清抗-HBp抗体的检测方法,为进一步研究乙型肝炎患者血清HBV-Pol抗体的血清学意义奠定了基础。     

乙型肝炎患者不同血清标志物HBV DNA的表达及意义

 目的探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBVM)表现模式的相关性.方法血清HBV DNA定量检测采用PCR ELISA法,HBVM采用ELISA法.结果在HBVM阳性的366例血清中,有199例HBV DNA阳性,占54.4%.血清HB-/ml占65.2%;HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者HBV DNA-HBc阳性者HBV DNA阳性率占95.2%,≥106 copiessAg、HBeAg、抗阳性率占29.1%,≥106 copies/ml占17.6%.结论血清HBVM阳性患者中约55.0%的血清HBV DNA阳性,且HBeAg阳性患者中HBV DNA含量及阳性率均明显高于抗-HBe阳性者;在抗-HBs、抗-HBc阳性或HBsAg阴性者血清内也有HBV DNA阳性者.     

222例乙型肝炎病毒感染者血清多聚白蛋白受体的检测

以血凝法测定222例乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清多聚白蛋白受体(pHSA-R)结合活性。其中166例慢乙肝pHSA-R结合活性阳性率为39.8％;56例携带者翔7.5％。另50例健康对照者为2.0％(P<0.001)。pHSA-R阳性者中有92.6％患者的HBsAg≥1:256。HBsAg≥1:256的患者pHSA-R的几何平均滴度±标准差(GMT±SD)为58.83±5.04;HBsAg<1:256者为11.31±0.55。83.1％pHSA-R阳性患者的血清HBV DNA亦为阳性(P<0.001)。72.2％HBeAg阳性患者的pHSA-R为阳性(P<0.001)。结果提示,pHSA-R结合活性的检测充分反映了HBV的复制活性和HBV感染者血清的感染性。     

某部干部乙型肝炎病毒感染情况调查

目的：了解某部干部的乙型肝炎病毒感染情况，为防治乙型肝炎提供依据。方法：采静脉血3ml，分离血清后均用ELISA法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc。结果：HBsAg阳性116例(5．1％)，抗-HBs阳性708例(31．29／6)，HBeAg阳性47例(2．1％)，抗-HBe阳性132例(5．8％)，抗-HBc阳性136例(6．0％)，HBV感染标志阳性299例(13．2%)。HBsAg阳性116例中，合并HBeAg和抗-HBc阳性(“大三阳”)58例(50．0％)；合并抗-HBe和抗-HBc阳性(“小三阳”)30例(25．9%)；合并抗-HBc阳性19例(16．4％)；合并HBeAg阳性4例(3．5％)；HBsAg单项阳性5例(4．3％)。结论：HBV血清学5项(“两对半”)中，除HBeAg阳性率女性显著高于男性外，HBsAg、抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性率男性均显著高于女性，“两对半”阳性率有随年龄增长而上升的趋势，其中抗-HBs和抗-HBs上升趋势更为明显。     

IgA抗-HBc检测对病毒性肝炎的临床意义

应用单克隆抗体建立的ELISA检测各型HBV感染者179例血清IgA抗-HBc。急性乙肝14例和重肝7例均为阳性,慢活肝50例阳性率为94％,慢活肝并肝硬化12例为83.3％,慢迁肝46例为56.5％,HBsAg无症状携带者50例为4％。提示IgA抗-HBc与肝损程度和范围密切相关,在乙肝诊断、鉴别诊断及预后判断上有一定实用价值。此外,IgA抗-HBc在慢性肝炎中与HBeAg呈正相关。     

HBcAg ELISA法测定的临床分析

目的研究ELISA法测定HB cAg在HBV感染者中的阳性检出率、分布规律及与其他乙肝标志物的关系,探讨其在反映HBV复制及传染性和观察疗效方面的临床价值。方法采用ELISA法对416例HBV感染者进行血清乙肝6项指标测定,按其不同阳性结果分9种模式对比分析。结果416例HBV感染者中HB cAg ELISA法测定阳性总检出率达56.7%,而70例未感染者及65例抗-HB s单项阳性者中无阳性检出。结论ELISA测定血清HB cAg在HBV感染者中的阳性检出具有特异性,并可作为疑有抗-HBe阳性“逆转”为HBeAg阳性者的筛选检测,对判断HBV复制程度、病程、疗效及预后评估均有临床价值。     

血清HBsAg阴性和HBsAg阳性慢性活动性肝炎患者肝内HBV DNA的研究

用原位杂交法和ABG法对慢性活动性肝炎患者(以下称CAH)血清HBsAg阴性34例和阳性30例对比进行了肝内HBV DNA、HBcAg和HBsAg的检测。上述检出率在34例HBsAg阴性CAH者中分别为23.5％,23.5％和32.4％,30例HBsAg阳性者中分别为63.3％、56.7％和83.3％。结果表明,在我国,血清HBsAg阴性、HBV相关抗体阳性或阴性的CAH中,仍有少部分人肝内存在HBV DNA和HBV抗原表达,并与肝病发病机理有关。血清HBsAg阳性的CAH者中,无论血清HBeAg阳性,或抗HBe阳性、或HBeAg阴性,均有较高比例的肝内HBV DNA和HBV抗原检出。肝内HBcAg与肝内HBV DNA关系密切,可作为反映HBV活跃复制指标;肝内HBsAg则不然。     

重叠甲型肝炎病毒感染对慢性乙型肝炎影响的对比研究

应用ELISA法对126例CHB患者检测血清抗－HAV－IgM，同时应用肝穿刺活检、荧光定量PCR及免疫组化技术对重叠与未重叠HAV感染者进行了临床与病理学对比。具有可比性的重叠与未重叠感染者8例、16例1年后做第2次肝穿活检；HBeAg阴性重叠感染者9例做HAV感染急性期、 恢复期血清HBeAg定性、HBV－DNA含量对比。结果发现重叠HAV感染者22例。重叠感染者较未重叠感染者ALT、TBIL增高、PTA降低，但A／G、γ－EP无显著差别；血清HBeAg、肝组织HBcAg阳性率及血清、肝组织HBV－DNA含量低；肝组织炎症活动度重，但纤维化程度无明显差别。重叠与未重叠感染者1年前肝脏病变无显著差别，1年后仍无显著差别。HAV感染恢复期血清HBeAg阳性率、HBV－DNA含量高于急性期。提示重叠HAV感染加重CHB肝脏炎症活动度， 但并不加重纤维化程度及加速进展；抑制HBV复制，但并不持久。     

病毒性乙型肝炎与PHSAR相关性探讨

采用ELISA法对1344例临床血清标本进行乙肝病毒(HBV)标志物和多聚人血清白蛋白受体(PHSAR)检测,在HBV标志物阳性者314例中,PHSAR阳性107例占34.1％,在HBsAg、HBeAg、抗-HBc三者同时阳性的81例中,PHSAR阳性54例占66.67％;在HBsAg、抗-HBe、抗-HBc同时阳性的125例中,PHSAR阳性15例占12.0％;在HBsAg、抗-HBc阳性的67例中,PHSAR阳性25例占37.3％;而在HBsAg阴性1030例标本中PHSAR均为阴性,提示PHSAR可作为HBV感染急性期及病毒复制的标志之一,其存在表明HBV在体内复制活跃,传染性较强。     

招飞体检乙型肝炎病毒筛查方法及其意义

目的 调查招飞学生HBV血清标志物模式及分布特点,探讨聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)荧光探针法与酶联免疫吸咐测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)在招飞体检HBV筛查中的应用价值. 方法 对象为参加本区招飞体检的学生(包括应届高中生、大学生)3843名.按出生年分为1992年前和1992年后(包括1992年)两个年龄组;根据户籍种类分为农村和城市学生.乙肝血清标志物采用ELISA法进行HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb共5项定性检测,按随机数字法随机抽取不同模式(除单项HBsAb阳性外)标本365例,采用PCR荧光探针法进行HBV-DNA定量检测. 结果 ①共检出13种HBV血清标志物模式,主要为HBsAb(+)模式;其次为5项全阴模式,HBsAb(+)、HBcAb(+)模式,HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式,HBcAb(+)模式;HBsAg阳性以HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)及HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式为主,分别占HBsAg阳性总数的38.75％和46.25％.②两个年龄组HBsAb(+)模式,HBsAb(+)、HBeAb(+)模式和HBcAb(+)模式检出率差异有统计学意义(x2 =9.350、8.563,P＜0.01);其他模式检出率差异无统计学意义(P＞0.05).③农村与城市学生相比,除HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式和HBcAb(+)模式外,其他5种常见模式检出率差异有统计学意义(x2=4.592～34.838,P＜0.01或P＜0.05).④HBV-DNA定量检测病毒载量＞1000 copies/ml者62例,其中HBsAg阳性者占77.42％,其他模式占22.58％.HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)者HBV-DNA检出率为95.45％(21/22),病毒载量为9.16×106～9.81×107copies/ml.HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)者HBV-DNA检出率为45.71％(16/35),病毒载量为1.24×104～7.95×105 copies/ml.HBsAg(+)、HBeAg(+)者均检出HBV-DNA,病毒载量为(2.39～5.34)×107 copies/ml. 结论 ELISA法检测HBV血清标志物与PCR定量检测HBV-DNA相结合,有助于解决招飞体检HBV携带者误诊和漏检问题.     

乙肝病毒外膜大蛋白检测的临床意义

目的:探讨乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)检测的临床意义.方法:随机选取203例乙肝患者血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV-LP、Pre-S1蛋白及HBV M,实时定量PCR方法检测HBV DNA.结果:LP的检出阳性率与HBV DNA的检出阳性率相关性具有统计学意义,且HBV DNA 拷贝数的对数值与HBV-LP 表达具有相关关系(r＝0.902);LP检出阳性率与Pre-S1蛋白检出阳性率差异具有统计学意义;不同HBV M模式检测LP检出阳性率差异不具有统计学意义,但26例HBeAg阴性患者血清LP检测为阳性.结论:血清中HBV-LP的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性;血清中HBV-LP的检测是对HBV M检测的补充.     

中国流行株C基因型HBV稳定复制表达小鼠模型的建立

目的 构建稳定复制中国流行株C基因型HBV的小鼠模型.方法 将携带1.3倍C基因型HBV基因组(adr血清型)的重组腺相关病毒rAAV8-1.3HBV-C转导人肝癌细胞HuH7,采用ELISA法评估HBV抗原(HBsAg、HBeAg)在肝癌细胞中的表达.筛选高表达的重组病毒,经尾静脉注射入6～8周龄C57BL/6小鼠体内,建立HBV-C复制小鼠模型(实验组,n=8);同时建立文献已报道HBV-D复制小鼠模型(对照组,n=7,rAAV8-1.3HBV-D,ayw血清型).动态监测两组小鼠血清(眼底静脉丛采血)HBV DNA载量和HBsAg、HBeAg的抗原表达量;于第9周处死小鼠,HE染色观察肝组织病理改变,免疫组化染色分析HBsAg和HBcAg的表达.结果 重组病毒rAAV8-1.3HBV-C体外转导人肝癌细胞HuH7,72h后细胞上清中可检测到HBsAg和HBeAg的表达.小鼠注射重组病毒后第2、3、5、7、9周,血清HBV DNA存在稳定复制,血清HBeAg表达水平较稳定,但血清HBsAg表达存在波动.两组小鼠肝组织未见明显的炎性细胞浸润及组织结构异常,但可检测到HBsAg和HBcAg蛋白.结论 利用高嗜肝性重组8型腺相关病毒载体携带1.3倍C基因型HBV基因组体内转导C57BL/6小鼠,成功地建立了稳定复制并持续表达C基因型HBV的小鼠模型.     

乙型肝炎病毒前S_2蛋白活力与病毒复制的关系

本文通过用ELISA法检测了122例各型乙型肝炎病人血清中的Pre-s_2蛋白:研究其与HBV复制的各种标志的关系,并讨论了其临床意义。 前s_2蛋白(Pre-s_z蛋白)测定以单克隆抗Pre-s_2抗体为主要试剂,采用夹心法原理,检测患者血清中Pre-s_2蛋白,具体操作方法按试剂盒说明书进行,S/N比值≥2.1及血清滴度>1∶10为阳性;HBV标志(HB_sAg,抗-HB_s、HB_eAg、抗-HB_e、抗-HB_c)均采用ELISA法     

孕妇乙型肝炎血清病毒标志物和HBVDNA测定及临床意义

目的探讨孕妇乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清病毒标志物（HBV～M）组合与HBV DNA的关系以便指导免疫干预而阻断母婴传播。方法采用ELISA检测乙肝病毒血清学标志物（HBsAg、HBsAbHBeAgHBeAbHBcAb）,实时荧光定量PCR（FQ—PCR）对268例孕妇检测感染者血清中HBV DNA含量。结果HBsAg阳性组HBVDNA阳性率为49．4％（83／168）,HBsAg阴性组HBV DNA阳性率为11．10％（11／100）,两者差异显著（P〈0．01）,但HBsAg（-）组HBV DNA阳性数占总数中的11．7％（11／94）。结论临床仅根据HBV血清标志物抗原抗体的检测来判断病人的传染性是不全面的,应重视HBsAg阴性低水平HBV复制患者,结合HBV DNA的检测结果进行综合判断,以免造成宫内HBV感染。进行预防接种阻断HBV母婴传播。     

乙型肝炎26510例病毒血清学标志物分析

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)血清学标志物表现模式的临床意义。方法　应用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测 2 65 1 0例受检者血清标本中HBsAg、抗 HBs、HBeAg、抗 HBe、抗 HBcIgM。 结果　HBV血清学标志物的表现模式共 1 9种 ,其中常见模式 1 2种 ,罕见模式 7种。结论　HBV血清学标志物的表现模式在乙型肝炎的诊断、疗效评价及预后具有重要意义 ,但如何正确判断罕见模式的临床意义 ,需进一步研究与探讨。     

血清HBV-DNA检测在招收飞行学员筛选中的意义

目的 调查在ELISA方法检测血清HBsAg阴性飞行学员中，血清HBV-DNA的检出情况。方法 用ELISA法检测2224名应招飞行学员血清HBsAg。其中阴性者进一步检测抗-HBs、抗-HBc、HBeAg、抗-HBe，并用聚合酶链反应（PCR）检测HBsAg阴性者HBV-DNA。结果 在2224名应招飞行学员中HBsAg阳性158例，阳性率7.1%；HBsAg阴性者中，除单项抗-HBs阳性血清模式外，其他各模式均有不同例数的人检测到HBV-DNA。结论 本研究表明，仅检测血清中HB-sAg的表达状况。不足以将所有感染有HBV者筛选出去，应由灵敏度更高的分子生物学方法取代。     

HBV感染者IL-18基因转录水平及其血清中含量检测的临床意义

目的探讨白细胞介素18(IL-18)在乙型肝炎病毒(HBV)感染中的作用。方法从68例HBV感染者(无症状携带者15例,慢性肝炎患者35例,重型肝炎患者18例)和24例健康体检者血液中分离出外周血单个核细胞(PBMC)及血清,应用RT-PCR及ELISA分别对IL-18基因的转录和血清中IL-18的含量进行检测。结果不同临床类型HBV感染者之间IL-18基因转录水平的差异均有非常显著统计学意义(P<0.01),重型肝炎组IL-18基因转录水平高于正常对照组(P<0.01),无症状携带者组低于正常对照组(P<0.05),慢性肝炎组与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。随着病情加重,IL-18水平上升。肝组织炎症活动度不同的慢性肝炎患者之间IL-18基因转录及其血清中的含量表达水平的差异均有显著统计学意义(P<0.05),肝组织炎症程度越重,IL-18含量越高。结论IL-18可能参与了宿主对HBV的免疫应答,与肝脏炎症程度相关。