三对引物聚合酶链反应扩增检测肝细胞癌肝组织中乙型肝炎病毒…

用聚合酶链反应技术检测了１６例肝细胞癌患者癌灶和癌旁肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸。所用三对引物Ｓ１／Ｓ２、Ｃ１／Ｃ２、Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２分别选自ＨＶＢＤＮＡ的Ｓ区，前Ｃ和Ｃ区，以及Ｘ区，以质粒提取ＨＢＶＤＮＡ作灵敏度测定，ＰＣＲ－ＥＢ可达１０＾－２ｐｇ，ＰＣＲ－ＳＢＨ可达１０＾６Ｐｇ，以Ｓ，Ｃ和Ｘ引物扩增，阳性率分别为４３．８％（１４／３２），７１．９％（２３／３２）和７１．９％（２３／３     

宫颈鳞癌细胞中HPV和C-erbB-2基因扩增的检测

应用ＰＣＲ和差别ＰＣＲ方法，平行检测４０例宫颈鳞癌和６例宫颈炎细胞中的ＨＰＶ感染和Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增。结果宫颈鳞癌中ＨＰＶ混合型别（ＨＰＶＳ）感染阳性率为６５．０％（２６／４０），其中，ＨＰＶ１６占３７．５％（１５／４０），ＨＰＶ１８仅占５．０％（２／４０）；而宫颈炎中仅１例ＨＰＶｓ感染，两者具有显著性差异（χ２＝５．０１，Ｐ＜０．０５），所有宫颈癌和宫颈炎中均不见Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增。结果表明：ＨＰＶ感染与宫颈鳞癌的发生关系密切，但与Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因扩增没有直接联系。     

原发性肝癌患者血清中庚型肝炎病毒基因的检测

用逆转录－聚合酶链反应法（ＰＴ－ＰＣＲ）检测了６７例原发性肝癌（ＰＬＣ）患者血清中的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ，以ＰＣＲ－双脱氧末端终止法分析了ＰＣＲ产物的核苷酸序列。结果显示，ＨＧＶＲＮＡ的检出率为１９．４％（１３／６７），其在ＨＢｓＡｇ阳性组和ＨＢｓＡｇ／抗ＨＣＶ阴性组中的阳性率分别是１２．２％（６／４９）和５０％（７／１４）；５’非编码区（５’－ＮＣＲ）扩增片段的核苷酸序列与美国株ＧＢＶ－Ｃ的同源性为９１．７％，提示在我国ＰＬＣ患者中存在ＨＧＶ感染。     

原发性肝癌丙肝病毒基因及其抗体的检测

本文报道运用巢式ＰＣＲ，ＥＬＩＳＡ等方法检测我国原发性肝癌，癌旁组织和外周血中ＨＣＶ－ＲＮＡ抗－ＨＣＶ，同时监测了ＨＢｓＡｇ。所用引物位于ＨＣＶ基因５＇－端非编码区域。结果７６例肝癌病人血清中抗－ＨＣＶ阳性９．２％（７／７６），ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１３．２％（１０／７６）；３４例肝癌组织中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１１．８％（４／３４），１例抗ＨＣＶ阴性的病人在癌及癌旁组织中检测到ＨＣＶ－ＲＮＡ，提示我国Ｈ     

HBV,HCV在原发性肝癌发生中的相互作用研究

为了解河南省原发性肝癌（ＰＨＣ）发生中ＨＢＶ、ＨＣＶ的相互作用，我们应用ＥＬＩＳＡ法和ＰＣＲ法对ＰＨＣ患者及其１：１对照进行了ＨＢＶ标志物（ＨＢＶＭ）和ＨＣＶ标志物（ＨＣＶＭ）检测。结果：ＰＨＣ患者ＨＢＶＭ阳性率为８１．２５％，对照组ＨＢＶＭ阳性率为９．６０％，Ｐ〈０．０１，ＯＲ＝７０（２５．３６，１９３．２３）；ＰＨＣ患者ＨＣＶＭ阳性率为１９．７９％，对照组ＨＣＶＭ阳性率为８．３３％，Ｐ〈０．０     

支气管动脉灌注治疗肺癌对患者肺功能和酸碱血气的影响

对２５例支气管肺癌患者共３０例次，经支气管动脉ＤＳＡ，加抗癌药物灌注治疗前后的肺功能和酸碱、血气观察。结果表明，经化疗药物灌注治疗后，肺通气功能指标ＦＶＣ、ＦＥＶ１、ＭＭＦ、ＰＥＦＲ、Ｖ７５、Ｖ５０、Ｖ２５无显著改变，Ｐ＞０．０５；酸碱、血气指标ＨＢ、ＰＨ、ＰａＣＯ２、ＰａＯ２、ＨＣＯ３、ＴＣＯ２、ＡＢＥ、ＳＢＥ、ＳＢＣ、ＳＡＴ、Ｋ和Ｃ－Ｏ２也无显著改变，Ｐ＞０．０５。但Ａ－ａＤＯ２改变显著，Ｐ＜０．０５。     

自体外周血干细胞移植支持下超大剂量化疗治疗非何杰金氏淋巴瘤的初步报告

目的：报告４例非何杰金氏淋巴瘤（ＮＨＬ）在外周血干细胞移植（ＰＢＰＣＴ）支持下接受超大剂量化疗（ＨＤＣ）的初步经验并评价所用ＰＢＰＣ动员方案的动员效果，预处理方案的耐受性以及ＰＢＰＣ回输后造血重建情况。方法：４例高危ＮＨＬ经常规化疗获首次缓解后，采用ＣＴＸ３５００ｍｇ／ｍ２＋Ｇ－ＣＳＦ３．５－５μｇ／（ｋｇ·次）＋Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ１０ｍｇ作动员方案，经ＣＢＶ＋Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ（ＣＴＸ３６００ｍｇ／ｍ２，ＶＰ－１６１２００ｍｇ／ｍ２．ＢＣＮＵ３００ｍｇ／ｍ２和Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ１００ｍｇ／ｍ２）或ＴＢＩ８Ｇｙ＋ＶＰ－１６１２００ｍｇ／ｍ２治疗后回输ＰＢＰＣ。结果：每例患者分离２次，分别采集到ＭＮＣ１．７－４．３×１０８／ｋｇ，ＣＦＵ－ＧＭ１．５－２．８×１０４／ｋｇ和ＣＤ＋３４细胞３．１－８．８×１０６／ｋｇ。回输ＰＢＰＣ后，均获快速重建造血功能，ＡＮＣ＞０．５×１０９／Ｌ和Ｐｔ＞５．０×１０９／Ｌ的时间为８～１２天和８～１６天。非造血系统毒性包括心脏毒性反应，恶心呕吐，轻度肝功能异常和粘膜炎等。结论：ＰＢＰＣＴ支持下超大剂量化疗是治疗ＮＨＬ安全可行的临床手段，值得进一步研究探索。     

应用原位PCR法检测肝癌组织中的HBV DNA

目的 探讨乙型肝为病毒（ＨＢＶ）与肝细胞癌（ＨＣＣ）的关系。方法 采用直接原位聚合酶链反应（ｉｎｓｉｔｕＰＣＲ，ＩＳＰＣＲ）对６４例福尔马林固定石蜡包埋的ＨＣＣ组织（其中６１例附癌周组织）切片中的ＨＢＶＤＮＡ进行检测，与并传统的免疫组织化学原位杂交和组织抽提酸ＰＣＲ法进行了比较。结果 ＩＳＰＣＲ对石蜡包埋的ＨＣＣ组织中ＨＢＶＤＮＡ检测高度敏感，检出率为７１．９％（４６／６４），而相应组织应用免疫组     

支气管动脉灌注治疗疗肺癌对肺患者肺功能和酸碱血气的影响

对２５例支气肺癌患者共３０例次，经支气管动脉ＤＳＡ，加抗癌药物灌注治疗前后的肺功能和酸碱、血气观察。结果表明，经化疗药物灌注治疗后，肺通气功能指标ＦＶＣ、ＦＥＶ１、ＭＭＦ、ＰＥＦＲ、Ｖ７５、Ｖ５０、Ｖ２５无显著改变，Ｐ＞０．０５；酸碱、血气指标ＨＢ、ＰＨ、ＰａＣＯ２，ＰａＯ２，ＨＣＯ３，ＴＣＯ２，ＡＢＥ，ＳＢＥ，ＳＢＣ，ＳＡＴ，Ｋ和Ｃ－Ｏ２也显著改变，Ｐ＞）．０５。但Ａａ－ＤＯ２resume     

广西抗－HCV阴性肝癌病人血清及肝癌组织丙型肝炎病毒核酸检测

１９９２年曾用Ａｂｂｏｔｔ公司第二代酶免疫试剂盒检测１８６例广西肝癌病人抗－ＨＣＶ抗体，结果阳性率仅５．４％，但抗－ＨＣＶ阴性并不能排除丙型肝炎病毒感染，为了更确切地了解广西肝癌病人中的丙肝病毒感染状况，本研究用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）对５９例抗－ＨＣＶ阴性肝癌病人血清及１７例石蜡包埋肝癌组织进行了丙肝病毒核酸（ＨＣＶＲＮＡ）检测，结果５９例血清中检出ＨＣＶＲＮＡ阳性６例（１０．２％）．但１７例肝癌组织中无１例检出ＨＣＶＲＮＡ。又用ＰＣＲ方法检测这１７例肝癌组织之ＨＢＶＤＮＡ，结果７例显示阳性。以上结果表明，抗－ＨＶＶ加检ＨＶＶＲＮＡ可以提高丙肝病毒感染的检出率。尽管如此，与其他国家和地区相比，广西肝癌中总的丙肝病毒感染率（估计为１５．０％）仍然是较低的。     

恶性淋巴瘤患者外周血肿瘤浸润检测及其临床意义

探讨恶性淋巴瘤（ＭＬ）患者外周血肿瘤浸润（ＩＰＢ）检测方法及与临床分期和疗效的关系。方法以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）基因扩增技术，检测２１例外周血形态学，检查ＭＬ患者ＩＰＢ。结果１．２１例ＭＬ患者外周血标本，ＩｇＨ阳性率５２．４％（１１／２１），ＴＣＲγ阳性率４２．９％（９／２１），双阳性率（ＩｇＨ和ＴＣＲγ均阳性）３３．３％（７／２１）。ＩＰＢ检出率为６１．９％（１３／２１）；２例霍奇金氏病（ＨＤ）和１０例非淋巴系肿瘤外周血ＩＰＢ均阴性；２．Ⅲ、Ⅳ期ＭＬ患者ＩＰＢ检出率显著高于Ⅱ期（Ｐ＜０．０５），初诊未治及复发患者也显著高于部分或完全缓解患者（Ｐ＜０．０５）。结论ＰＣＲ方法检测ＩＰＢ有助于估价ＭＬ患者克隆起源、病情、疗效，其敏感性明显高于常规形态学方法。     

恶性肿瘤病人血清SIL－2R与红细胞免疫功能测定及临床意义

本文对９１例恶性实体瘤病人的血清ＳＩＬ－２Ｒ、ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ、ＲＢＣ－ＩＣＲ进行测定，结果显示：恶性肿瘤病人血清ＳＩＬ－２Ｒ增高，ＲＢＣ－ＩＣＲ增多，而ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ降低（Ｐ＜０．００１）；不同类型恶性肿瘤病人之间，血清ＳＩＬ－２Ｒ、ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ及ＲＢＣ－ＩＣＲ相比无显著差异性（Ｐ＜０．０５）；血清ＳＩＬ－２Ｒ水平与ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ呈负相关（ｒ＝－０．５１，Ｐ＜０．０５），与ＲＢＣ－ＩＣＲ呈正相关（ｒ＝０．４８，Ｐ＜０．０５）。这表明：恶性肿瘤病人血清ＳＩＬ－２Ｒ升高，红细胞免疫功能低下，其两者的变化可能与恶性肿瘤的发生、发展有密切关系，值得临床进一步研究。     

p53基因点突变与肝细胞癌侵袭性的关系

研究了Ｌ０２人肝细胞株、Ｂｅ１７４０２、ＳＭＭＣ７７２１人肝癌细胞株和１９例肝细胞癌标本及其癌周肝组织中ｐ５３基因第２４９密码子点突变的发生率及其与肝细胞癌侵袭性的关系。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增从细胞株、癌及非癌肝组织中提取的ＤＮＡ中的ｐ５３基因第７外显子，结合ＨａｅⅢ酶切研究ｐ５３基因点突变发现３种细胞株（ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性）中ｐ５３均无突变，１９例癌组织（８４．２％ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性）中，１０例有ｐ５３点突变（５２．６％），其中包膜不完整、有肝内播散或多发结节者ｐ５３突变率明显高于包膜完整（７０％ｖｓ３３．３％，Ｐ＜０．０５）、无肝内播散（７１．４％ｖｓ４１．６％，Ｐ＜０．０５）或单发结节者（８３．３％ｖｓ３８．５％，Ｐ＜０．０５）；而其癌周肝组织则均无突变。提示：第２４９密码子是中国大陆人肝癌ｐ５３基因的突变热点，可能与ＨＢＶ感染有关。ｐ５３突变可能与肝癌的侵袭性密切相关，可望成为防治肝癌复发的较理想的靶基因。     

差异竞争性PCR定量扩增胃癌及转移灶癌基因HER2和C-myc

目的 介绍差异竞争性多聚酶链反应（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ＰＣＲ，ＤＣ－ＰＣＲ），并分析癌基因ＨＥＲ２和Ｃ－ｍｙｃ变异与胃癌生物学行为的关系。方法 用ＤＣ－ＰＣＲ定量检测胃原发癌、癌旁、转移淋巴结及远处脏器转移癌中ＨＥＲ２和Ｃ－ｍｙｃ扩增。结果 ＨＥＲ２扩增频率在近端胃癌组中高于远端胃癌组（分别是８４．６％和２６．３％，Ｐ〈０．０５），侵及浆膜组明显高于未侵及浆膜组（     

PCR检测NHL患者骨髓重排基因及临床意义

目的：为研究非霍奇金氏恶性淋巴瘤（ＮＨＬ）的骨髓微小病灶及其临床意义。方法：采用ＰＣＲ技术联合检测４２例ＮＨＬ患者骨髓标本免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）、Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）ＶγＩ－Ｊｒ及ＴＣＲＶδ２－Ｄδ３重排基因。结果：３０．９％（１３／４２）存在ＩｇＨ重排，２３．８％（１０／４２）存在ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ重排，１９．０％（８／４２）存在ＴＣＲＶδ２－Ｄδ３重排；联合检测三个重排基因，总阳性率为４２．９％（１８／４２）。而骨髓形态学检查的阳性率仅为１９．０％（８／４２）。ＰＣＲ检测ＮＨＬ骨髓浸润的阳性率显著高于形态学检查（Ｐ＜０．０１）。对其中６例ＰＣＲ检测阳性而形态学检查阴性病例追踪观察发现，３～８月后病人形态学检查均发现骨髓浸润，ＰＣＲ检测阳性较形态学检查平均提前４．８３月。结论：ＰＣＲ检测ＮＨＬ患者骨髓重排基因能早期发现微小病灶且阳性率高，有助于预后判断。     

胃癌术前C—erbB—2癌基因研究的临床意义

应用ＰＣＲ技术结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分子杂交及免疫组合ＡＢＣ法检测８７例胃液脱落癌细胞及胃镜活检组织Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增及蛋白过度表达。结果显示：１１例（１２．６％）脱落癌细胞及１８例（２０．７％）活检组织Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增阳性；１５例（１７．２％）活检组织Ｃ－ｅｒｂＢ－２过度表达阳性；总阳性率为２５．３％（２２／８７），其中１０例（１１．５％）脱落癌细胞及活检组织基因扩增及过度表达均呈阳性反应。Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增及过度表达与胃癌进展程度、有无伴淋巴结及肝转移关系密切，结果表明Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因检测似可作为胃癌术前估计预后的一项指标，采用上述不同方法可提高检测阳性率。     

各种恶性肿瘤丙型肝炎病毒感染情况的分析

２１３例各种恶性肿瘤，常规检测丙型肝炎病毒抗体（抗－ＩＩＣＶ）。抗－ＨＣＶ阳性３６例，阳性率１６．９％（３６／２１３）。同期健康人抗－ＨＣＶ阳性率为２．７％（２２／８１６）。输血者抗－ＨＣＶ阳性率为４７．２％（３２／７２），不输血者抗－ＨＣＶ阳性率为２．８％（４／１４１），二者差异有显著意义。认为各种恶性肿瘤抗－ＨＣＶ阳性率高主要与输血有关。     

原发性肝细胞癌组织中乙肝病毒整合与p53基因突变关系研究

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法检测１５例原发性肝细胞癌及癌旁组织乙肝病毒（ＨＢＶ）存在状态，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（Ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）银染技术研究其ｐ５３基因突变。结果癌组织中１３例（８６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，同时３例伴游离ＨＢＶＤＮＡ；癌旁４例（２６．７％）有ＨＢＶＤＮＡ整合，而游离的ＨＢＶＤＮＡ却有６例。癌组织中ｐ５３基因变异８例（５３．３％），１例位于第５外显子，各有２例位于第６、第７外显子，３例位于第８外显子，癌旁组织未见ｐ５３基因异常，ｐ５３基因异常的癌组织中均有ＨＢＶＤＮＡ整合。研究结果表明，ＨＢＶＤＮＡ整合与ｐ５３基因突变密切相关，ＨＢＶＤＮＡ可能通过整合基因组后导致抑癌基因突变失去抑癌作用而引发肝癌。     

140例HCC中抗转移抑制基因编码蛋白nm23／NDPK表达的研究

本文应用２种抗转移抑制基因编码蛋白ｎｍ２３／ＮＤＰＫ亚型（Ｈ１－Ｈ２和Ｈ１），免疫组化（ＩＨ）方法定位１４０例人肝细胞癌（ＨＣＣ）及癌旁组织。结果ｎｍ２３Ｈ１和Ｈ１－Ｈ２阳性检测率分别为６０．７１％（８５／１４０）和７６．４２％（１０７／１４０）。ｎｍ２３亚型均主要表达在细胞浆内，但在核内和胞膜上也可阳性。ＨＣＣ旁伴肝硬化和不典型增生肝细胞有２９％（４０／１４０）呈弱阳性反应。其表达形式呈明显的异质性，阳性细胞或片状或弥散或灶性单个散在分布。２种ｎｍ２３亚型与ＨＣＣ转移和存活期相关。与肿瘤大小，组织学分级，组织学类型，ＨＢＶ感染，ｐ５３蛋白表达无直接的相关性（Ｐ＞０．０５）。Ｈ１与ＨＣＣ复发关系密切（Ｐ＜０．０５），而Ｈ１－Ｈ２无相关性（Ｐ＞０．０５）。ＡＦＰ检测阳性病例与Ｈ１－Ｈ２表达相关（Ｐ＜０．０５）。     

肝细胞癌患者术前ＨＢＶ ＤＮＡ含量对术后肝功能影响的初步研究

目的　探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）患者术前ＨＢＶＤＮＡ含量对切除术后肝功能恢复的影响。方法　收集我科２００７年１月至２００７年６月行手术切除治疗的原发性肝癌患者共２１７例，应用实时荧光定量ＰＣＲ方法检测血清中ＨＢＶＤＮＡ，按照ＨＢＶＤＮＡ含量分为两组：Ａ组（ＨＢＶＤＮＡ≥１.０×１０^５拷贝／ｍｌ）６８例，Ｂ组（ＨＢＶＤＮＡ＜１.０×１０^５拷贝／ｍｌ）１４９例。严密观察患者术后肝功能变化情况，采用ＳＰＳＳ１３.０软件进行统计分析。结果　术后两组患者的肝功能变化存在着显著差异，Ａ组的肝功能损伤程度高于Ｂ组。术后第１、３、７天，丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）和天门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）数值Ａ组明显高于Ｂ组，而前白蛋白数值则Ｂ组高于Ａ组，两组差异有统计学意义（Ｐ＜００５）；术后第３、７天，总胆红素（ＴＢＩＬ）数值Ａ组明显高于Ｂ组，两组差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。除术前凝血酶原时间（ＰＴ）、前白蛋白、ＴＢＩＬ、ＡＳＴ和术中肝门阻断时间外，术前ＨＢＶＤＮＡ浓度对术后第７天的血清ＴＢＩＬ水平有显著影响。结论　ＨＣＣ患者术前ＨＢＶＤＮＡ含量对于术后肝功能恢复有明显影响，对术前ＨＢＶＤＮＡ含量较高的患者应在治疗肝癌的同时给予抗病毒治疗。