三对引物聚合酶链反应扩增检测肝细胞癌肝组织中乙型肝炎病毒…

用聚合酶链反应技术检测了１６例肝细胞癌患者癌灶和癌旁肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸。所用三对引物Ｓ１／Ｓ２、Ｃ１／Ｃ２、Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２分别选自ＨＶＢＤＮＡ的Ｓ区，前Ｃ和Ｃ区，以及Ｘ区，以质粒提取ＨＢＶＤＮＡ作灵敏度测定，ＰＣＲ－ＥＢ可达１０＾－２ｐｇ，ＰＣＲ－ＳＢＨ可达１０＾６Ｐｇ，以Ｓ，Ｃ和Ｘ引物扩增，阳性率分别为４３．８％（１４／３２），７１．９％（２３／３２）和７１．９％（２３／３     

聚合酶链反应检测原发性肝癌患者血清HBVDNA

乙型肝炎病毒(HBV)与原发性肝癌(PHC)的关系一直是PHC病因学领域的一个重要课题。以往根据放射免疫或酶联免疫吸附试验检测HBV标志远未达到血清最低感染水平。聚合酶链反应(PCR)可以测出ag(10~(-18))水平的HBV DNA,大致与血清传染性浓度相当。本文作者应用PCR检测PHC患者血清HBV DNA,可能为研究HBV感染与PHC的关系提供一些新的线索。     

肝细胞癌组织中乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的检测

目的检测肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）组织中乙型病毒性肝炎（virus hepatitis type B）表面抗原（HB—sAg）和丙型病毒性肝炎（virus hepatitis type C）核心抗原（HCVAg）的表达。方法应用免疫组织化学法检测78例HCC及癌旁肝组织HBsAg和HCVAg的表达。同时比较患者的HBsAg和HCVAg血清学检测结果。结果HCC及癌旁肝组织中HBsAg和HCVAg阳性及HBsAg和HCVAg双重阳性表达率分别为9.1％、6．4％、2．6％和80．8％、44．9％、29．5％。HCC与癌旁肝组织HBsAg和HCVAg阳性及HBsAg和HCVAg双阳性表达率相互比较有非常显著性差异（P〈0．01）。合并肝硬化组和无肝硬HCC组中HCC与癌旁肝组织HBsAg和HCVAg阳性、HBsAg及HCVAg双阳性表达率相互比较也有非常显著性差异（P〈0．01）。HCC的HBsAg和HCVAg血清学检测的结果与手术标本HBsAg和HCVAg免疫组织化学检测的结果相吻合。结论HCC的发生与HBV和HCV的感染密切相关。     

肝细胞癌血清、肝组织中HCV和HBV感染状况的研究

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原发性肝细胞癌患者的乙型肝炎病毒基因分型研究

目的：研究原发性肝细胞癌（HCC）患者乙型肝炎病毒（HBV）基因型分布及其特点。方法：采用聚合酶链式反应结合TaqmanMGB探针技术对70例HCC患者和57例慢性乙型肝炎（CHB）患者进行HBV基因分型。结果：HCC患者中C基因型占74.29%,B型占24.29%%,BC型占5.71%,未发现A、D、E、F、G基因型。HCC患者中C型所占比例明显高于CHB患者（P〈0.05）,B型所占比例明显低于CHB患者（P〈0.05）。B基因型HCC患者的年龄、性别、血清e抗原阳性率、e抗体阳性率、e系统阴性（HBeAg-、HBeAb-）率及HBVDNA水平与C基因型比较差异均无显著性（P均〉0.05）。结论：C型为南京地区HCC的主要基因型。HCC患者的年龄、性别、e抗原表达状态以及HBVDNA复制水平与基因型之间均无明显相关性。     

β-catenin基因多态性与乙型肝炎病毒相关肝细胞癌易感性的关系

背景与目的：Wnt信号通路在乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus,HBV）相关肝细胞癌（肝癌）发生发展中起重要作用,β—catenin基因编码的β-catenin是该通路的关键因子,已在肝癌组织检测到β—catenin基因变异且存在于exon3的condons32～45之间。本研究旨在探讨β—eatenin宿主基因多态性与人肝癌易感的关系。方法：对162例有慢性HBV感染的肝癌患者进行肝癌家系和流行病学调查后,对有和无肝癌家族史病例按匹配条件进行1：1配对。采用DNA聚合酶链反应-基因测序方法对入选患者进行β-catenin基因exon3扩增及序列检测,并结合肝癌家系调查结果比较分析SNP rs28931588、rs28931589和eodons31～46基因序列。结果：162例中有肝癌家族史者16例（9．87％）。选择24例（包括有肝癌家族史12例和与之匹配的无肝癌家族史12例）进行基因exon3扩增及测序。24例患者在SNP rs28931588、rs28931589位点均为“G”,其中3例exon3的codons32～46序列有差异,存宿主基因多态性。但是未能见到明确的突变规律和特异性热点突变位点。结论：β-catenin基因exon3中SN Prs28931588、m28931589和codons31～46序列可能不是HBV相关肝癌的遗传学标志。     

人原发性肝内管细胞癌及其癌旁肝组织内乙型肝炎病毒基因的表…

为了从分子水平探讨乙型肝炎病毒与肝内胆管细胞癌的发病关系，应用原位分子杂交技术，在４０例肝内胆管细胞癌及其癌旁肝细胞内检测ＨＢＶ ＤＮＡ，ＨＢＶ的ｐｒｅ－Ｓ基因，Ｓ基因，Ｘ基因和Ｃ基因。结果显示，在４０例中，３３例ＨＢＶ ＤＮＡ呈阳性信号占８２．５％；Ｘ基因阳性为３１例，占７７．５％；ｐｒｅ－Ｓ基因阳性２６例，占６５．０％，Ｓ基因阳性２４例，占６０．０％；Ｃ基因阳性２７例，占６７．５％。在后４种基     

广州地区肝细胞癌与HCV,HBV感染关系的病例对照研究

在肝细胞癌（ＨＣＣ）中度流行区广州地区，对６４例ＨＣＣ患者抗－ＨＣＶ和ＨＢｓＡｇ状况按性别、年龄配对和１：２数量比设对照组进行了病例对照研究。结果表明：ＨＣＣ组抗－ＨＣＶ和ＨＢｓＡｇ阳性率分别为１８．７５％（１２／６４）和８４．３８％（５４／６４），分别显著高于对照组的２．３４％（３／１２８，Ｐ＜０．００１）和１４．０６％（１８／１２８，Ｐ＜０．００１）。与抗－ＨＣＶ、ＨＢｓＡｇ双阴性组比较，仅抗－ＨＣＶ阳性，仅ＨＢｓＡｇ阳性时发生ＨＣＣ的相对危险度分别为４６．７１和４３．７９，二者双阳性时上升至７０．０７。显示ＨＣＶ、ＨＢＶ均与ＨＣＣ显著相关，两者重叠感染具有协同致癌作用。作者提出预防和控制ＨＢＶ、ＨＣＶ感染对降低ＨＣＣ发病率意义重大。     

肝细胞癌患者和献血员中庚型肝炎病毒感染检测分析

调查庚型肝炎病毒在肝细胞癌患者中的感染情况,方法采用蛋白酶Ｋ裂解法提取血清中ＨＧＶＲＮＡ,逆转录为ｃＤＮＡ后进行巢式聚合酶链反应,获得２３８ｂｐ的特异性片段者为阳性结果。用此技术对１４５例ＨＣＣ患者、６９例献血员和３０４例体检者血清进行了检测分析。     

肝组织和外周血中AFP mRNA定量分析及临床应用的研究

目的：通过检测AFP mRNA在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者肝组织和外周血中的基因表达，探讨AFP mRNA相对定量值作为HCC微转移指标的可能性，建立HCCAFP mRNA相对定量分析法。方法：建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系(Nested-RT-PCR)，对肝组织和外周血中的AFP mRNA进行相对定量值分析。结果：在49例HCC及其癌旁和远癌组织、12例非肝肿瘤组织和8例正常肝组织中AFP mRNA相对定量值阳性分别为35例(71．4％)、20例(40．8％)、3例(6．1％)、0例、0例；35例肝癌患者中有23例术前外周血AFP mRNA相对定量值为阳性(65．7％)，明显高于肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎患者和正常人外周血；HCC患者外周血术后72hAFP mRNA相对定量值的阳性率22．9％(8／35)，与术前比较差异有统计学意义，P＜0．01。结论：肝组织和外周血中AFP mRNA相对定量分析可提高HCC阳性诊断率，并可作为HCC微转移的早期检测指标。治疗前后的变化对指导临床治疗及评价HCC治疗效果有重要参考价值。     

应用原位PCR法检测肝癌组织中的HBV DNA

目的 探讨乙型肝为病毒（ＨＢＶ）与肝细胞癌（ＨＣＣ）的关系。方法 采用直接原位聚合酶链反应（ｉｎｓｉｔｕＰＣＲ，ＩＳＰＣＲ）对６４例福尔马林固定石蜡包埋的ＨＣＣ组织（其中６１例附癌周组织）切片中的ＨＢＶＤＮＡ进行检测，与并传统的免疫组织化学原位杂交和组织抽提酸ＰＣＲ法进行了比较。结果 ＩＳＰＣＲ对石蜡包埋的ＨＣＣ组织中ＨＢＶＤＮＡ检测高度敏感，检出率为７１．９％（４６／６４），而相应组织应用免疫组     

乙型肝炎病毒感染与肝细胞癌发生的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）的可能致癌机理，方法：采用免疫组化和原位分子杂交方法，对慢性乙型肝炎，肝硬化，癌旁肝硬化，肝细胞癌和正常肝组织中的乙型肝炎表面抗原（HBsAg)，核心抗原（HBcAg),HBV,DNA和甲胎蛋白（AFP）水平进行检测。结果：HBsAg,HBcAg和HBV DNA的阳性率在慢性乙型肝炎组中分别为61．9％（13／21），42．9％（9／21），75．0％（12／16），在肝硬化组中分别为64．0％（16／25），36．0（9／25），83．3％（15／18），在癌旁肝硬化组中分别为72．7％（16／22），61．1％（11／18），85．7％（12／14），在肝细胞癌组中分别为45．2％（14／31），50．0％（14／28），64．3％（9／14），慢性乙型肝炎，肝硬化和癌旁肝硬化组中HBV DNA阳性信号较肝细胞癌多而,AFP主在癌旁肝硬化（33．3％，9／27）和肝细胞癌（43．6％，17／39）组中表达，而在慢性肝炎和肝硬化组中不表达，癌旁肝硬化与不伴肝癌的肝硬化有非常显著性差异（P＜0．01），结论：大多数肝细胞癌的发生与HBV感染所致的慢性乙型肝炎和肝硬化密切相关，癌旁肝硬化可能是癌前肝硬化在癌周的残留。     

应用聚合酶链反应技术检测乳腺肿瘤中EB病毒整合

研究乳腺肿瘤与ＥＢ病毒感染之间的关系。方法应用聚合酶链反应检测１０９例乳腺癌组织中ＥＢ病毒ＤＮＡ整合情况。结果８２例乳腺癌中２５例有ＥＢ病毒整合，２０例乳腺纤维腺瘤和７例正常乳腺组织中均无ＥＢ病毒ＤＮＡ整合。乳腺癌组织中ＥＢ病毒整合阳性率为３０．５％，ＥＢ病毒整合与肿瘤淋巴细胞浸润程度无明确关系。结论ＥＢ病毒感染与乳腺癌有关。     

肝癌及癌旁组织中端粒酶检测的临床意义

目的研究端粒酶作为原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）肿瘤标志物的可能性。方法采用ＴＲＡＰ方法检测了３３例原发性肝细胞癌及其３３例癌旁组织、４例肝转移癌及其４例癌旁组织、６例肝良性肿瘤和６例正常肝组织中的端粒酶活性。结果３３例原发性肝细胞癌组织中，有３０例端粒酶表达阳性，其阳性率为９０．９％。３３例癌旁组织中，有９例端粒酶表达阳性，其阳性率为２７．３％。４例肝转移癌端粒酶活性均阳性，４例癌旁组织中，２例端粒酶表达阳性。６例肝良性肿瘤中，仅１例端粒酶表达阳性。６例正常肝组织端粒酶表达均阴性。肝癌组织端粒酶表达与肿瘤临床病理特征无关。结论肝癌组织中普遍存在端粒酶活性表达，而良性和正常肝组织中端粒酶活性较少表达。端粒酶有可能成为诊断原发性肝细胞癌的肿瘤标志物     

肝外消化道癌中乙型肝炎病毒产物表达的检测

 本研究对食管鳞癌、胃腺癌和结直肠腺癌组织中HBsAg和HBcAg的表达进行检测和评价 ,并与血清HBsAg阳性进行比较。1　材料与方法1 .1　病例选择　经内镜活检确诊的食管鳞癌病人1 0 0例 ,其中男 61例 ,女 39例 ,平均年龄 (61 .2 8±8.39)岁。同时选择经内镜活检确诊的胃肠腺癌病人 1 0 2例 ,其中胃癌 60例 ,平均年龄 (58.80±1 0 .0 1 )岁 ;结直肠癌 42例 ,男 2 7例 ,女 1 5例 ,平均年龄 (64 .1 4± 1 3 .1 8)岁。食管鳞癌及胃肠腺癌均在癌组织及癌旁组织各钳取组织 4～ 5块 ,活检标本均作HE染色病理检查及免疫组织化学检查HBsAg和HBcAg的表达。同时对患者抽血作血清HBsAg定性检测。1 .2　免疫组化检查　采用SP法。用单克隆I抗(鼠抗人 )HBsAg及多克隆I抗 (兔抗人 )HBcAg分别进行标记染色。以销售商提供的阳性切片作对照 ,以BPS代替一抗作空白对照。1 .3　HBsAg和HBcAg阳性结果判断　以细胞中出现染色清晰、强于背景染色的棕黄色颗粒为阳性细胞。染成黄色记 1分 ,染成棕褐色记 2分 ;阳性细...     

差别聚合酶链反应基因技术在新鲜癌组织标本检测中的应用

目的　探讨差别聚合酶链反应(dPCR)检测基因扩增技术在新鲜癌组织标本中的应用。　方法　新鲜癌组织标本(包括乳腺癌、食管癌和宫体癌)163份,乙醇保存,研磨制成细胞悬液,经基因释放剂处理后,直接用dPCR检测。　结果　163份癌组织标本中有152份获得了dPCR基因检测扩增带,检测成功率为93%。　结论　新鲜癌组织标本可直接用于dPCR检测,为临床应用提供了依据     

抗病毒治疗与病毒相关性肝细胞癌

随着医疗技术的进步,使肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的治疗得到较快发展,患者的总生存期和无瘤生存期明显延长,但复发率仍然较高。慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）和丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）感染被认为与HCC发生、发展及复发的关系密切,可能参与第二次致癌过程。目前抗病毒治疗在HCC的治疗中已取得一些进展,本文就此作一综述。     

肝细胞癌组织中MMP-2的表达与侵袭转移的关系

OBJECTIVE：To investigate the association between MMP-2 expression of hepatocellular carcinoma （HCC） and its invasion and metastasis. METHODS： Semi-quantitative RT-PCR and immunohistochemical analysis technology were used to detect MMP-2 mRNA expression and MMP-2 protein expression respectively in HCC, non-HCC liver tissue samples and normal liver tissue samples. RESULTS： The level of MMP-2 expression in HCC was higher than that in adjacent non-HCC liver tissue and in normal liver tissue and the difference was statistically significant, P〈0.05. and the difference of MMP-2 expression between adjacent non-HCC liver tissue and normal liver tissue had no statistical significance, P〉0. 05. MMP-2 expression in HCC had an inverse correlation with recurrence after surgical treatment, P=0.013, R^2=0.842, and a posi- tive correlation with pathological grade, P = 0. 000, R^2 = 0. 797. There was a positive correlation between MMP-2 expression in HCC and extrahepatie metastasis, P=0. 003, R^ =0. 834. Significant inverse correlation was found between MMP-2 expression in adjacent non-HCC liver tissue and extrahepatie metastasis, P=0. 021, R^2= 0. 877. CONCLUSIONS： MMP-2 has an association with degree of tumor differentiation, capability of invasion and metastasis and tendency of recurrence. MMP-2 way be one of indexes of differentiation, recurrence and metastasis.     

三种MAGE基因在广西肝细胞癌中的表达

目的检测癌-睾丸抗原(CTA)基因MAGE-1、-3和-4在广西地区肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨CTA作为疫苗对HCC治疗的可行性.方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对25例广西HCC患者癌组织中MAGE-1、-3和-4基因mRNA的表达进行检测;随机选择MAGE-1、-3和-4阳性的RT-PCR产物各2例进行DNA序列测定.结果 MAGE-1和-3表达率均为40%(10/25),MAGE-4表达率为16%(4/25).DNA测序结果表明RT-PCR产物为MAGE-1、-3和-4基因.统计学分析显示MAGE-1、-3和-4基因的表达与HCC组织分化程度及临床分期无相关性(P>0.05),与HBV感染有相关性(P<0.05);此外,MAGE-1和-3的表达与肿瘤大小及AFP水平均存在相关性(P<0.05).在所检测的标本中,56%的标本至少表达上述1种MAGE,24% 的标本至少表达2种MAGE;16% 的标本表达3种MAGE.结论 MAGE-1和-3在广西HCC中有一定频率的表达,能否用于HCC的免疫治疗值得深入探讨.