不同成熟时期山羊卵母细胞冷冻保存研究

目的比较山羊卵母细胞在不同成熟时期解冻后体外成熟、体外受精及胚胎发育能力。方法收集山羊生殖泡（GV）期未成熟卵和成熟卵,分5组行开放式拉细麦管（OPS）法玻璃化冷冻,Ⅰ组：直接冷冻GV期卵;Ⅱ组：GV期卵在体外培养（IVC）8h后冷冻;Ⅲ组：GV期卵在IVC16h后冷冻;Ⅳ组：GV期卵体外培养成熟（IVM）后冷冻;Ⅴ组：直接冷冻体内成熟卵。解冻后比较各组卵受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率。结果Ⅰ组（GV期卵）冷冻解冻后存活率达56.8%,显著高于Ⅱ组（33.3%）、Ⅲ组（31.6%）、Ⅳ组（28.9%）及Ⅴ组（30.4%）,差异有高度统计学意义（均P〈0.01）。各组体外受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论采用OPS法玻璃化冷冻山羊GV期卵较冷冻其他成熟时期卵效果好。     

不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻

目的 比较显微授精治疗周期中剩余的生发泡(GV)期不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻效率.方法 将显微授精(ICSI)周期剩余的GV期卵母细胞随机分为3组:①在GV期玻璃化冷冻,解冻后进行体外成熟培养;②体外成熟培养至MII期后行玻璃化冷冻;③对照组:直接进行体外成熟培养(IVM).观察体外培养成熟卵母细胞及不同成熟阶段卵母细胞冷冻后的受精和发育潜力.结果 对照组的成熟率为71.6%(53/74),其中16枚行显微授精(ICSI),受精率为87.5%(14/16),卵裂率为85.7%(12/14),囊胚形成率为14.3%(1/7);组1与组2的存活率分别为97.5%(39/40)和87.5%(35/40),差异没有显著性;但是组1的成熟率28.2%(11/39)显著低于(P<0.01)对照组的成熟率71.6%(53/74);组2的受精率74.1%(20/27)与对照组的受精率87.5%(14/16)相比,差异没有显著性.结论 ICSI周期剩余的GV期卵母细胞能在体外培养成熟并具有良好的发育潜力,将GV期卵母细胞体外成熟培养至MⅡ期更适合于玻璃化冷冻保存.     

玻璃化冷冻与慢速程序冷冻法保存人MⅠ期卵母细胞的效果比较

目的:探讨玻璃化冷冻与慢速程序冷冻法对人未成熟卵母细胞的存活及胚胎发育潜能的影响。方法:体外受精-胚胎移植中获得的251个MⅠ期卵母细胞随机分3组,第1组94个先玻璃化冷冻保存,第2组63个先慢速程序冷冻保存,两组冻融后的未成熟卵母细胞再进行IVM,用ICSI技术对成熟卵母细胞完成授精,并进行体外胚胎培养。第3组94个MⅠ期卵母细胞先进行IVM,再进行玻璃化冷冻保存,与第1组先玻璃化冷冻保存再IVM的顺序不同,冻融后同样用ICSI技术对获得的成熟卵母细胞完成授精,并进行体外胚胎培养。结果:玻璃化冻融组复苏存活率、体外成熟率、受精率、及卵裂率均高于慢速程序冻融组(P均<0.05);先玻璃化冷冻再IVM与先IVM再玻璃化冷冻的复苏存活率、体外成熟率、可用卵比率、受精率及卵裂率无统计学意义(P均>0.05)。结论:玻璃化冻融人未成熟卵母细胞能获得更好的冷冻保存效果;玻璃化冷冻与IVM的顺序不影响未成熟卵母细胞的利用。     

冷冻对人类成熟及未成熟卵发展潜能的影响

目的：探索冷冻卵子的成熟时期，方法：将153个生发泡期(GV期)人类卵子分为3组，对照组：体外培养至成熟(MⅡ期)，行单精子胞浆内注射(ICSI)，MⅡ期冷冻组：体外成熟至MⅡ，然后将MⅡ期卵子进行冷冻，解冻后将存活的卵子行ICSI；GV期冷冻组：将GV期卵子进行冷冻，解冻后体外培养至MⅡ，然后再行ICSI．用慢速冷冻快速解冻的方法对成熟的和未成熟的卵子进行冷冻和解冻，观察体外成熟情况、解冻后的存活情况、受精情况及胚胎发育情况，结果：体外成熟率：GV期冷冻组51.2％，对照组为70．0％，有显差异；受精率：3组分别为68、0％、33、3%、42.1％，有显差异．对照组的发展潜能要显优于试验组；GV期冷冻组的存活率、受精率优于MⅡ期冷冻组。结论：冷冻会对卵子的发育潜能有1定的损伤，在GV期进行冷冻可降低这种伤害。     

山羊卵泡大小对卵母细胞体外发育能力的影响

目的比较不同大小山羊卵泡的卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育的能力。方法收集不同大小山羊卵泡的卵母细胞,分3组进行体外培养。Ⅰ组：卵泡直径≥5.0mm;Ⅱ组：卵泡直径3.0～4.9mm;Ⅲ组：卵泡直径〈3.0mm。观察各组卵母细胞体外成熟率、体外受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果3组卵母细胞体外成熟率与受精率差异无统计学意义（均P〉0.05）。Ⅲ组卵母细胞的卵裂率及囊胚形成率分别为53.8%和28.6%,均显著低于Ⅰ组和Ⅱ组（均P〈0.01）。结论在进行山羊未成熟卵体外成熟培养时,卵泡直径≥3mm的卵母细胞体外发育潜能较卵泡直径〈3mm的卵母细胞好。     

冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究

目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片（A）组、冷冻小钩（B）组、电镜铜环（C）组、自制冷冻叶片（D）组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.01）;D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。     

蔗糖浓度对GV和MⅡ期冻融卵母细胞纺锤体结构的影响

目的 探讨蔗糖浓度对GV期和MⅡ期冻融卵母细胞纺锤体质量的影响.方法 运用纺锤丝观测仪(PolScope)、免疫荧光标记技术和激光共聚焦显微镜.对不同蔗糖浓度(0.1-0.6 mol/L)下GV期和MⅡ期冻融卵母细胞体外成熟后的纺锤体分别进行检测,以未冷冻处理的卵母细胞作为对照组.结果 与对照组比较,冻融组卵母细胞纺锤体的排列明显受到影响.蔗糖浓度为0.3 mol/L时,GV期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P＜0.05);蔗糖浓度为0.5 moL/L时,MⅡ期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P＜0.05);当蔗糖浓度继续升高时,冻融组GV期和MⅡ期卵母细胞纺锤体的正常率则显著下降(P＜0.05).冻融组卵母细胞纺锤体的正常率,MⅡ期显著高于GV期(P＜0.05).结论 一定浓度范围的蔗糖可提高冻融卵母细胞纺锤体正常率;MⅡ期冻融卵母细胞的渗透耐受性及其在渗透耐受范围内的冷冻效率均高于GV期卵母细胞.     

蔗糖浓度对GV和MⅡ期冻融卵母细胞纺锤体结构的影响

目的 探讨蔗糖浓度对GV期和MⅡ期冻融卵母细胞纺锤体质量的影响.方法 运用纺锤丝观测仪(PolScope)、免疫荧光标记技术和激光共聚焦显微镜.对不同蔗糖浓度(0.1-0.6 mol/L)下GV期和MⅡ期冻融卵母细胞体外成熟后的纺锤体分别进行检测,以未冷冻处理的卵母细胞作为对照组.结果 与对照组比较,冻融组卵母细胞纺锤体的排列明显受到影响.蔗糖浓度为0.3 mol/L时,GV期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P＜0.05);蔗糖浓度为0.5 moL/L时,MⅡ期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P＜0.05);当蔗糖浓度继续升高时,冻融组GV期和MⅡ期卵母细胞纺锤体的正常率则显著下降(P＜0.05).冻融组卵母细胞纺锤体的正常率,MⅡ期显著高于GV期(P＜0.05).结论 一定浓度范围的蔗糖可提高冻融卵母细胞纺锤体正常率;MⅡ期冻融卵母细胞的渗透耐受性及其在渗透耐受范围内的冷冻效率均高于GV期卵母细胞.     

3种不同载体对卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响

目的以小鼠成熟卵母细胞(MⅡ期)为试验对象,应用3种不同载体对其行玻璃化冷冻,旨在分析载体对冷冻效果的影响。方法采用玻璃化冷冻技术冻存昆明种小鼠成熟卵母细胞,设新鲜对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又分为开放式脉管(OPS)组、自制麦管组和Cryoleaf组。比较冻融后鼠卵的存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果新鲜对照组和玻璃化冷冻组的受精率、卵裂率差异无统计学意义,但囊胚形成率差异有统计学意义(P<0.05);OPS组与自制麦管组的鼠卵存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;OPS组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;自制麦管组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义。结论载体的不同会对卵母细胞玻璃化冷冻效果形成一定程度的影响。     

Effect of three different loadings on vitrification of oocyte

目的 以小鼠成熟卵母细胞(MⅡ期)为试验对象,应用3种不同载体对其行玻璃化冷冻,旨在分析载体对冷冻效果的影响.方法 采用玻璃化冷冻技术冻存昆明种小鼠成熟卵母细胞,设新鲜对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又分为开放式脉管(OPS)组、自制麦管组和Cryoleaf组.比较冻融后鼠卵的存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果 新鲜对照组和玻璃化冷冻组的受精率、卵裂率差异无统计学意义,但囊胚形成率差异有统计学意义(P<0.05);OPS组与自制麦管组的鼠卵存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;OPS组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;自制麦管组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义.结论 载体的不同会对卵母细胞玻璃化冷冻效果形成一定程度的影响.     

三种不同来源人未成熟卵母细胞的体外成熟

目的：探讨三种不同来源的人未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）的差异。方法：共获得未成熟卵母细胞1055枚,包括卵丘复合物（OCC）613枚和裸卵（DO）442枚。其中OCC分为自然周期组、孕晚期组和IVM纽;DO分为自然周期组、孕晚期组和超促排卵纽。所有未成熟卵母细胞在IVM培养体系体外培养成熟后,卵母细胞胞浆内单精子注射（ICSI）受精序贯培养,除IVM组行第2或第3天胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段。分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率;自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率。结果：OCC：自然周期组、孕晚期组及IVM组的未成熟卵母细胞体外成熟率分别为79．5％、74．3％和82．2％,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;3组成熟卵母细胞受精率、卵裂率及自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率相比无统计学差异,IVM组的移植周期妊娠率为20％。DO：自然周期组、孕晚期组及超促排卵组未成熟卵母细胞体外成熟率超促排卵组最高（86．0％）,明显高于自然周期组（74．5％）和孕晚期组（72．7％）,（P〈0．05和〈0．01）。3组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率、囊胚形成率相比未见统计学差异。结论：孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外同样具有发育潜能;孕晚期的卵母细胞可作为一种供卵来源。     

艾灸百会穴对AD大鼠学习记忆能力及海马区CaMKⅡ mRNA表达的影响

目的:观察艾灸百会穴对阿尔茨海默氏病(AD)大鼠学习记忆能力和海马区钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA表达的影响。方法:用Morris水迷宫进行筛选建立AD大鼠模型。将符合模型标准的20只AD大鼠随机分模型组、艾灸组,每组10只。另外随机选取10只正常老年大鼠为对照组。艾灸组用特制艾条在百会穴施温和灸,共治疗6个疗程。治疗结束后进行Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,并用RT-PCR法检测大鼠左侧海马组织CaMKⅡ表达水平。结果:模型组平均逃避潜伏期较对照组和艾灸组明显延长(P<0.05,P<0.01),有效区停留时间较对照组和艾灸组明显缩短(P<0.05,P<0.01);上述二指标艾灸组与对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。三组之间平台停留次数无显著性差异(P>0.05)。模型组左侧海马区CaMKⅡmRNA相对表达量较对照组和艾灸组显著下降(P<0.05,P<0.01),艾灸组与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:艾灸百会穴可通过上调海马区CaMKⅡmRNA表达以提高AD大鼠学习记忆能力。     

卡托普利抗大鼠肺纤维化的作用及机制

目的探讨卡托普利对肺纤维化的治疗作用及可能的机制。方法将64只雄性SD大鼠随机分为对照组、博莱霉素模型组、卡托普利治疗组、地塞米松组治疗组,每组16只。采用HE染色、Masson染色行肺泡炎、肺纤维化程度分级,分别测定各组大鼠血浆AngⅡ、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA含量以及羟脯氨酸、超氧化物歧化酶、丙二醛含量,并作各组间的对比分析。结果（1）第14天时：与对照组比较,其他3组大鼠肺泡炎评分、HYP含量、AngⅡ含量、MDA含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显升高（P〈0.05或0.01）,SOD含量均显著降低（均P〈0.01）,仅模型组肺纤维化评分显著高于对照组（P〈0.01）;与模型组比较,卡托普利组及地塞米松组肺泡炎、肺纤维化评分及HYP含量、AngⅡ含量、MDA含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显降低（P〈0.05或0.01）,SOD含量均显著升高（均P〈0.01）;地塞米松组显著高于卡托普利组（P〈0.01）,卡托普利组AngⅡ含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显低于地塞米松组（P〈0.05或0.01）。（2）第28天时：与对照组比较,其他3组大鼠肺泡炎及肺纤维化评分、HYP含量及TGF-β1 mRNA表达水平均显著升高（均P〈0.01）,模型组和地塞米松组AngⅡ含量显著升高（均P〈0.01）,仅模型组SOD含量显著降低、MDA含量显著升高（均P〈0.01）;与模型组比较,卡托普利组及地塞米松组肺泡炎及肺纤维化评分、HYP含量、MDA含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显低于模型组（均P〈0.05或0.01）,SOD含量均显著升高（均P〈0.01）,卡托普利组AngⅡ含量显著降低（P〈0.01）,地塞米松组AngⅡ含量显著升高（P〈0.01）;卡托普利组TGF-β1 mRNA表达水平明显低于地塞米松组（P〈0.05）。结论卡托普利可能是通过抑制AngⅡ的生成、减少TGF-β1 mRNA的表达以及纠正氧化／抗氧化失衡而博莱霉素诱导的大鼠     

新诊断EH与胰岛素抵抗及糖脂代谢异常相关性研究

目的探讨新诊断原发性高血压（EH）与胰岛素抵抗及糖脂代谢异常的相关性,以期临床上予以关注,进行适当的早期干预治疗。方法将62例EH分Ⅰ级EH组和Ⅱ级EH组,根据空腹血糖、胰岛素、HOHA-IR、ISI及TC、TG分别进行此两组间及对照组比较。结果Ⅱ级EH组FPG、FINS、HOMA-IR增加均大于Ⅰ级EH组及对照组（P〈0．01）。ISI：Ⅱ级EH组小于Ⅰ级EH组和对照组（P〈0．05）。Ⅰ级EH组中IFG发生率为78．1％;Ⅱ级EH组中IFG发生率为43．3％,DM发生率为56．7％。Ⅰ级EH组中高TC、高TG发生率分别为31．3％和37．5％,Ⅱ级EH组中高TC、高TG发生率分别为53．3％和63．3％（组间分别比较均P〈0．01）。结论新诊断原发性高血压与胰岛素抵抗及糖脂代谢异常有相关性,Ⅱ级EH组较Ⅰ级EH组显著。     

含左氧氟沙星加微卡化疗方案治疗耐多药肺结核疗效观察

目的：观察和评估含左氧氟沙星加微卡的化疗方案在耐多药肺结核治疗中的疗效。方法：80例耐多药肺结核患者随机分为治疗组和对照组各40例,治疗组含左氧氟沙星、微卡化疗方案,对照组不含左氧氟沙星、微卡化疗方案治疗,疗程18个月,观察两组近远期疗效。结果：完成疗程后,治疗组和对照组痰菌阴转率（78.9%vs 56.8%）,病灶吸收率（81.6%vs 59.5%）,空洞闭合率（57.7%vs 39.1%）的各项观察结果均表明治疗组优于对照组,两组间差异均有统计学意义（P〈0.05）;而症状改善率（92.1%vs 59.4%）治疗组优于对照组,两组差异有极显著统计学意义（P〈0.01）;治疗组和对照组药物不良反应发生率分别为31.6%、35.1%,1年随访细菌学复发率分别为5.3%、10.8%,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：采用左氧氟沙星联合微卡治疗耐多药肺结核近期疗效确切,可进一步应用于临床。     

消抗灵Ⅱ号对小鼠解脲支原体感染及感染后血清中TNF-α的影响

目的：探讨消抗灵Ⅱ号对雌性小鼠解脲支原体（Uu）感染及感染后血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）的防治作用。方法：采用Taylor-Robinson等介绍的激素处理法造模,以阿奇霉素为西药对照组（西药组）,观察模型小鼠Uu生长变化及各组TNF-α值比较。结果：Uu经生殖道感染后,可引起TNF-α值升高。治疗后中药组的Uu转阴率（95%）高于西药组（60%）,有显著性差异（P〈0.05）;中药组、西药组与模型组比较,有显著性差异（P〈0.05）。对血清中TNF-α的影响,中药组与模型组比较,有极显著性差异（P〈0.01）,与空白组比较,无显著性差异（P〉0.05）;西药组分别与模型组和空白组比较,有极显著性差异（P〈0.01）,说明中药组与西药组对TNF-α均有疗效,但中药组优于西药组。结论：消抗灵Ⅱ号能消除解脲支原体,并可降低支原体感染引起的TNF-α高水平。     

Y型钢板内固定治疗SandersⅡ～Ⅲ型跟骨骨折的临床研究

目的评价Y型钢板内固定治疗SandersⅡ～Ⅲ型跟骨骨折的疗效。方法60例（68足）SandersⅡ～Ⅲ型跟骨骨折患者，分成观察组和对照组。观察组：切开复位Y型钢板内固定；对照组：骨圆针撬拨固定。结果观察组优秀率77．14％，高于对照组的54．55％，差异具有统计学意义（P〈0．05）。观察组平均住院时间（10．0±3．9）d，少于对照组平均住院时间（15．0±3．4）d，差异具有统计学意义（t=5．621，P〈0．01）。观察组肿胀1例（2．86％），未发现其他明显并发症；对照组肿胀2例（6．06％）、感染1例（3．03％），两组并发症发生率差异不显著（P〉0．05）。结论Y型钢板内固定治疗SandersⅡ～Ⅲ型跟骨骨折疗效佳，住院时间短，而且并发症发生率较低，值得临床推广应用。     

卵巢过度刺激综合征患者VEGF和NO的检测及临床意义

目的检测卵巢过度刺激综合征（OHSS）患者血管内皮生长因子（VEGF）和一氧化氮（NO）的含量,并探讨其临床意义。方法选取接受体外、受精-胚胎移植术（IVF-ET）或单精子卵浆内注射的39例不孕妇女,OHSS患者22例（观察组）,余17例为对照组。采用双抗体夹心ELISA法及硝酸盐还原酶法检测两组患者取卵日的血清及卵泡液中VEGF、NO含量;以免疫化学发光分析法测定月经周期第3天人体催乳素（PRL）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮（T）、雌二醇（E2）含量及人绒毛膜促性腺激素（hCG）注射日两组患者的血清LH和E2含量;比较两组患者的Gn用药量和用药时间、获卵数、成熟卵细胞数、受精率、卵裂率、移植胚胎数、冷冻胚胎数及妊娠率。结果（1）观察组患者血清VEGF、NO及卵泡液VEGF、NO含量均明显高于对照组（均P〈0.05）,两组患者卵泡液VEGF、NO含量均显著高于自身血清VEGF、NO含量（均P〈0.01）。（2）观察组多胎妊娠1例（3胎）,对照组生化妊娠1例,两组均未发现异位妊娠者。观察组临床妊娠率为72.73％（16／22）,对照组为41.18％（7／17）,差异有统计学意义（P〈0.05）。（3）两组患者在Gn用药时间和用药量、hCG用量、hCG注射日E2含量、获9月数、成熟卵子数、受精卵数、卵裂数、卵裂率、受精率、胚胎移植数及冷冻胚胎数的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论OHSS患者血清及卵泡液VEGF、NO含量明显升高,提示VEGF和NO在OHSS的发生中起着重要作用：OHSS的发生与临床妊娠率有关,提示妊娠是OHSS发生的高危因素。