体外构建复合皮移植后对大鼠创面愈合的影响

目的：观察角质形成细胞和成纤维细胞与无细胞异种真皮基质构成的复合皮移植于全层皮肤缺损创面后的效果,寻找一种新的创面覆盖物。方法：54只SD大鼠作背部全层皮肤缺损创面后分为A、B、C三组,分别以A型复合皮（角质形成细胞＋成纤维细胞＋无细胞异种真皮基质）、B型复合皮（角质形成细胞＋无细胞异种真皮基质）和普通敷料进行移植,术后定期观察创面愈合情况并进行创面收缩率的计算,同时切取创面组织进行组织学检测。结果：三组中,A组的创面愈合及外观情况最好;A组创面收缩率明显低于B、C两组（P（0．05）;组织学检测提示A组复合皮上皮分化充分,胶原增生有序,表皮一真皮连接结构重建明显,未见明显的急性期免疫排斥反应。结论：角质形成细胞和成纤维细胞与无细胞异种真皮基质构成的复合皮移植后能改善创面愈合质量,是一种较理想的、可探索的皮肤替代物。     

嵌合体大鼠诱导异种皮肤移植免疫耐受的初步研究

目的 探讨嵌合体大鼠诱导异种皮肤移植免疫耐受的可行性。方法 采集兔骨髓干细胞，经行宫内胎鼠移植以及对新生子鼠行肝内注射，制作兔骨髓干细胞嵌合体大鼠模型。6周后将15只嵌合体大鼠分为A组（8只）、B组（7只）。将A组大鼠皮肤移植给供髓兔，将7只非嵌合体大鼠皮肤移植给非供髓兔作A组对照；将B组大鼠、7只非嵌合体大鼠（B组对照）皮肤同时移植给供髓兔。记录移植后皮片成活时间、创面愈合时间。结果A组对照移植皮片成活（9．3±1．8）d，创面于（20．9±2．1）d愈合；A组移植皮片成活（15．1±2．6）d，创面于（18．5±1．3）d愈合。B组及其对照移植皮片的成活时间、创面愈合时间与A组相似。与各自对照皮肤移植相比，A、B组皮片成活时间延长（P〈0．01），创面愈合时间缩短（P〈0．05或P〈0．01）。结论 嵌合体大鼠行异种皮肤移植后能诱导移植皮片免疫耐受．使其成活时间明显延长．创面愈合时间缩短。     

毛乳头细胞和表皮细胞构建带附属器的组织工程皮肤

目的根据毛囊形成原理,以人毛乳头细胞和表皮细胞为种子细胞,构建带附属器的组织工程皮肤替代物。方法分实验组和对照组,实验组皮肤替代物真皮层接种人毛乳头细胞和表皮细胞;对照组真皮层不接种任何细胞。在裸鼠背部作一圆形全层皮肤缺损,将两组皮肤替代物气-液界面培养5 d后移植到裸鼠背部。观察创面愈合情况,并在移植后第4、6、8周取材,进行组织学观察。结果皮肤替代物移植后2周,实验组创面已完全愈合,移植后4周对照组创面才完全愈合,并且对照组创面收缩比实验组明显。移植后6周,实验组真皮层内见到毛囊样结构和皮脂腺结构,对照组未见毛囊样结构和皮脂腺样结构。结论将人的毛乳头细胞和表皮细胞共同种植在皮肤替代物的真皮层,可以构建出带附属器的组织工程皮肤替代物,这种替代物对创面的修复能力更强。     

人表皮细胞与无细胞异种真皮复合移植的实验研究

目的 观察人表皮细胞与无细胞异种真皮复合移植全层皮肤缺损创面后的效果,寻找一种新的创面覆盖物。方法 42只裸鼠作背部全层皮肤缺损创面,分别进行复合皮移植（复合皮组）和单纯表皮细胞膜片移植（对照组）,术后定期观察创面愈合情况并进行创面愈合率及创面收缩率的计算,同时留取创面组织进行组织学检查。结果 与对照组相比较,复合皮组的创面愈合及外观情况良好,两组创面愈合率及收缩率的差异有显性意义（P＜0．05）;组织学检测提示复合皮上皮分化充分,胶原增生有序,表皮－真皮连接结构重建明显,未见明显的急性期免疫排斥反应。结论 人表皮细胞与无细胞异种真皮复合移植能改善创面愈合质量,可作为一种新的皮肤代用品。     

含bFGF和VitC的载体复合膜负载骨髓间充质干细胞修复兔创面的实验研究

目的含bFGF和VitC的载体复合膜负载骨髓间充质干细胞植入兔创面，探讨其对真皮新生、重建速度的影响和促进表皮修复速度的最佳阶段。方法抽取24只新西兰大耳白兔的骨髓间充质干细胞，体外分离、培养。每只兔的背部脊柱两侧做3个创面，深度直达深筋膜，面积约为3．14cm^2，随机分为A、B、C三组。A组创面置入含有MSCs、bFGF和VitC的羊膜载体复合膜。B组创面置入只含有MSCs的羊膜载体复合膜。C组创面只置入羊膜载体复合膜。计算出创面愈合率，采用大体观察、常规组织学观察（HE染色、Masson染色、Van Giesonr染色）、Ⅰ型胶原免疫组织化学观察、墨汁灌注法等化学染色动态观察创面愈合情况。结果A组在7d、14d、21d的新生真皮明显较B组相应时间点的厚度、活跃的Ⅰ型胶原阳性细胞数量、血管和胶原纤维均较B组的多。B组比C组的修复效果好：A组术后14d和21d新生真皮表面，表皮再生长入并覆盖真皮修复创面的速度均比B组的快；B组的表皮覆盖速度义比C组的快、对创面愈合率进行统计学处理，A组比B组好，B组比C组好，差异有统计学意义。结论羊膜载体复合膜植入全层皮肤缺损后,添加MSC、bFGF和VitC等因素，能加速真皮的修复和重建，并且在真皮修复过程中可能有表皮新乍和重建的最佳时期。     

复合骨髓间充质干细胞的组织工程皮肤修复烧伤创面的实验研究

目的：探讨用复合骨髓间充质干细胞（MSCs）的组织工程皮肤修复烧伤创面的可行性。方法：利用自行研制的烫伤仪制备烫伤创面，以MSCs为种子细胞构建组织工程皮肤修复烫伤创面，观察愈合时间和收缩率等。结果：移植2周后实验组创面基本愈合，表皮角质化，真皮层毛细血管增生，6周后创面收缩到原始面积的61％。结论：含有MSCs的组织工程皮肤移植后促进了烧伤创面的愈合，获得了较理想的愈合效果，为临床治疗提供了新的思路。     

组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的实验研究

目的 探索由人表皮干细胞、成纤维细胞与纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的可行性. 方法 将人全层皮肤采用胰蛋白酶消化法使表皮干细胞和真皮成纤维细胞分离后,分别在无血清培养基中行原代及传代培养.将体外扩增培养至第3、4代的表皮干细胞(5×104/mL)和真皮成纤维细胞(1×104/mL)共0.5 mL与纤维蛋白支架(0.5 mL)混合凝固构建组织工程皮肤.取4～5周龄雄性裸鼠45只,体重19.5～20.3 g,平均20.0 g,制备背部全层皮肤缺损模型.随机分为5组,每组9只,分别为空白对照组(C组),创面仅覆盖凡士林油纱,自然愈合;单纯支架组(F组),创面移植无细胞的纤维蛋白支架;表皮支架组(S组),创面移植含有表皮干细胞的纤维蛋白支架复合物;成纤维细胞支架组(Fb组),创面移植含有成纤维细胞的纤维蛋白支架复合物;组织工程皮肤组(T组),创面移植组织工程皮肤.术前及术后1、3、6、8周行全身及移植部位大体观察;移植后3、6、8周,取材行组织学、免疫组织化学及扫描电镜观察. 结果 细胞培养4周后,表皮干细胞培养皿内可见圆形细胞,在加有BrdU的培养液中培养6 d后可见BrdU染色阳性细胞;成纤维细胞培养皿内可见梭形细胞.构建的组织工程皮肤可见CK19免疫荧光染色阳性细胞、Nestin染色阳性细胞.移植后T组新生皮肤较其余各组生长快、瘢痕轻.术后6周,C、F、S、Fb及T组皮肤厚度分别为(0.460 ±0.049)、(0.480 ±0.055)、(0.540 ±0.043)、(0.510 ±0.032)及(0.60 ±0.047)mm,T组明显厚于其余各组,且差异有统计学意义(P＜0.05).术后3、6、8周,HE染色及扫描电镜示,T组新生表皮层数及真皮成纤维细胞、血管数量均多于其余各组,且T组真皮血管及胶原纤维排列均较其余各组整齐;术后3周,Ⅳ型胶原免疫组织化学染色显示,T组已形成连续的染色带,而其余各组均不连续;术后6周,CK14免疫组织化学染色显示,T组可见阳性细胞,其余各组均未见. 结论 用表皮干细胞、成纤维细胞及纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤移植后能使创面迅速愈合,可望成为一种较理想的组织工程皮肤.     

创伤愈合中有关真皮组织的研究进展

正常的皮肤含有分化良好的表皮和真皮层，理想的愈合创面应具有完整的表皮层及真皮层组织。随着人们对创面愈合质量要求的提高，真皮层组织在创伤愈合中的作用愈来愈受到重视。真皮为皮肤提供机械保护和外观特征，在创面愈合、生长、抵抗细菌及防御外伤方面发挥重要作用。     

大鼠微粒皮移植创面中角蛋白19及整合素β1的异位表达

目的了解大鼠微粒皮移植后创面角蛋白19、整合素β1表达特征的变化，初步探讨微粒皮移植创面的愈合机制。方法取20只大鼠制成全层皮肤缺损创面模型，分为自体皮组：创面移植占缺损皮肤表皮质量10％的自体微粒皮；混合皮组：创面混合移植自、异体微粒皮，其用量分别为缺损皮肤表皮质量的10％、40％。比较移植后2、3、4周2组大鼠创面的愈合率、收缩率，观察2、4周时角蛋白19、整合素β1的表达与分布特征。结果移植后2、3周，混合皮组大鼠创面愈合率分别为（85±5）％、（84±8）％，明显高于自体皮组的（53±10）％、（65±9）％（P〈0．01）。2组创面收缩率在移植后各时相点差异无统计学意义（P〉0．05）。移植后2、4周，2组大鼠创面新生表皮的颗粒层和棘层均可见角蛋白19、整合素β1阳性细胞；此期间未见角蛋白19在基底层有所表达。移植后2周，2组创面基底层未见整合素β1阳性细胞；4周时，部分创面标本中有整合素β1阳性细胞在基底层间断出现。结论自、异体微粒皮混合移植有助于创面愈合。自体微粒皮和自、异体微粒皮混合移植创面中，均存在角蛋白19和整合素β1阳性细胞的异位表达。     

同基因细胞源组织工程皮肤修复皮肤缺损的实验研究

目的利用近交系大鼠实验模型评价同基因细胞源组织工程皮肤修复大鼠全层皮肤缺损的效果,为其临床应用奠定基础。方法取近交系F344大鼠乳鼠皮肤,采用Dispase-胰蛋白酶两步消化法分离培养表皮细胞;取SD大鼠皮肤,按照高渗盐-SDS-胰蛋白酶化学处理法制备脱细胞真皮基质;依次利用浸没式培养和气液分离培养法将第2代表皮细胞与脱细胞真皮基质复合体外培养构建组织工程皮肤。取4～5周龄近交系F344大鼠36只,于大鼠背部两侧对称制备全层皮肤缺损,缺损面积为预实验确定的1.5 cm×1.5 cm。将72个创面随机分为3组(n=24),两侧移植不同修复材料:实验组移植组织工程皮肤、阴性对照组移植同种异体脱细胞真皮基质、阳性对照组移植自体全层皮肤(非原位移植)。术后行大体观察、皮片成活率、创面收缩率测量及组织学观察,评价修复效果。结果实验组术后4周创面可达到Ⅰ期愈合,与周围组织紧密连接,外观接近周围正常皮肤。术后4周,阴性对照组皮片成活率为0;实验组为62.5%(15/24),与阳性对照组91.7%(22/24)比较差异有统计学意义(χ2=5.779,P=0.016)。术后4周,实验组和阳性对照组创面收缩率显著低于阴性对照组(P<0.05),实验组与阳性对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。组织学观察示实验组术后1周有轻微炎性反应;术后2周真皮层小血管和成纤维细胞大量增生,表皮层逐渐分化成熟;术后4周时伴随新生胶原纤维沉积,移植物真皮层出现胶原改建。结论同基因细胞源组织工程皮肤能够有效修复大鼠全层皮肤缺损,在防止创面收缩和促进创面愈合等方面均可达到类似于自体全层皮肤移植的效果。     

皮肤源祖细胞-透明质酸复合物对糖尿病大鼠创面愈合的影响

目的研究皮肤源祖细胞（SKP）-透明质酸（HA）复合物的构建方法，观察其对糖尿病（DM）大鼠创面愈合的影响。方法分离培养SD大鼠SKP，以HA为载体构建复合物，观察复合物中SKP的分化特性。选取60只SD大鼠腹腔注射链脲菌素诱导成DM模型．背部对称制作2个直径1cm全层皮肤缺损创面，随机分为SKP-HA组，创面涂布100μl SKP-HA；HA组，创面涂布100μl HA；对照组，创面涂布DMEM／F12培养基。每组20只。各组大鼠于伤后1、2、3、4周检测创面愈合率，留取创面组织标本检测羟脯氨酸（Hyp）含量，并观察SKP在创面愈合过程中的迁移。结果大鼠SKP与HA共培养后生长良好，复合物中的SKP可保持其特性：向神经元细胞、神经胶质细胞、脂肪细胞分化。伤后2周SKP-HA组、HA组的创面愈合率分别为（72．1±2．8）％、（53．7±2．9）％，均明显高于对照组的（42．5±1．5）％（P＜0．05）；伤后3周SKP—HA组高于HA组及对照组（P＜0．05或0．01）；伤后4周SKP—HA组、HA组创面完全愈合，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．01）。伤后1周各组Hyp含量差异无统计学意义（P＞0．05）；伤后2～4周，SKP-HA组、HA组Hyp含量均高于对照组（P＜0．01）；伤后3、4周SKP-HA组高于HA组（P＜0．01）。SKP在创面得以成活并随时间的延长逐渐向真皮层迁移。结论SKP-HA复合物可促进DM大鼠创面愈合。     

组织工程微粒真皮的构建及其动物实验研究

目的：将人成纤维细胞和York猪脱细胞真皮基质（ADM）微粒复合构建的？组织工程微粒真皮应用于SD大鼠损伤模型，观察其修复组织创伤能力。方法：用PKH26标记的人成纤维细胞，与猪ADM微粒复合构建微粒真皮，将其注射到SD大鼠皮下，用荧光显微镜和HE观察ADM微粒真皮对皮下组织的修复；将54只SD大鼠随机分成3组，分别移植自体全厚皮肤、ADM微粒和ADM微粒皮真皮。大体、荧光显微镜和HE观察伤口愈合情况、计算创面愈合时间和收缩率。结果：皮下注射ADM微粒真皮2周时可见单核细胞、成纤维细胞和血管长入，以后单核细胞减少，荧光观察可见红色荧光，8周时注射的微粒真皮基本被自身组织改建利用、体积稳定，胶原粗大整齐；ADM微粒真皮移植能够使创面愈合时间、创面收缩率与自体全厚皮肤移植相比无统计学意义（P〉0．05），与ADM微粒移植相比差异显著（P〈0．01）。结论：皮下注射ADM微粒真皮可参与皮下组织改建，修补皮下组织缺损；ADM微粒真皮可促进SD大鼠损伤模型的愈合和瘢痕挛缩。     

含小鼠表皮干细胞的真皮替代物体内移植追踪实验

目的追踪种植于真皮替代物中的小鼠表皮干细胞（epidermal stem cells，ESCs）移植到同基因受者体内后的转归。方法在体外诱导胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES细胞）分化为ESCs，采用荧光染料Hoechst 33342染色后，种植到含有成纤维细胞的胶原一明胶海绵真皮替代物内，移植到与ES细胞同基因的129／J小鼠皮下，采用HE染色、免疫组化和Van Gieson染色等观察这些细胞的存活和分化情况。结果移植后至少3周内仍可以在荧光显微镜下清晰观察到ESCs。这些细胞能够存活并分化形成毛囊样、腺管样结构，形成与天然真皮相似的结构。在这些结构中有CD29（整合素口，业单位）和细胞角蛋白18等表皮干细胞特异性标志物的表达。在移植后至少10周内未观察到明显排斥反应或严重毒副反府。结论ESCs能够在所构建的真皮支架内存活并分化形成毛囊样和腺管样结构，提示这些来源于ES细胞的ESCs可以作为种子细胞，用于研究制备含有皮肤附属器的真皮替代物。     

小鼠皮肤表皮和真皮细胞共移植诱导毛囊再生实验研究

目的探讨绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的C57小鼠皮肤表皮和真皮细胞共移植诱导裸鼠毛囊重建的实验研究。方法取C57-GFP新生及成年小鼠分离表皮与真皮,分别制备成年小鼠原代真皮-表皮混合细胞(按1∶1比例混合)、成年小鼠原代真皮细胞、新生小鼠第3代真皮细胞,荧光显微镜观察细胞激发绿色荧光情况,免疫细胞化学检测培养的新生小鼠第3代真皮细胞毛囊干细胞标志。取Balb/c裸鼠,分别将成年小鼠原代真皮-表皮混合细胞(A组)、成年小鼠原代真皮细胞(B组)、新生小鼠第3代真皮细胞(C组)及生理盐水(D组)移植至裸鼠皮下,术后4、5、6周行大体观察,6周时取移植部位皮肤行GFP免疫组织化学染色观察各组毛囊形成情况。结果荧光显微镜观察示,分离、培养的C57-GFP新生及成年小鼠表皮及真皮细胞均能激发绿色荧光;免疫细胞化学检测培养的第3代真皮细胞中毛囊干细胞标志,显示波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白强阳性,表明细胞多为真皮鞘细胞;部分细胞表达毛乳头细胞标志CD133、多能聚糖及毛囊隆突部标志角蛋白15。裸鼠皮下移植实验:大体观察示A组可见接种部位皮下呈灰黑色,但未见毛发穿出皮肤表面;B、C、D组裸鼠皮肤均无着色。免疫组织化学染色示,A组形成新的、完整的毛囊结构或参与形成毛囊;B组GFP阳性细胞多表达于毛囊真皮鞘、外根鞘;C组GFP阳性细胞主要分布于毛囊真皮鞘、外根鞘、毛乳头,在汗腺中也有表达;D组GFP染色呈阴性。结论小鼠皮肤的表皮和真皮细胞在裸鼠体内相互作用可形成完整的毛囊结构,而仅移植新鲜分离或培养的真皮细胞则主要参与毛囊形成,无法形成完整的毛囊结构。     

含银异种脱细胞真皮基质的实验研究

目的了解含银异种脱细胞真皮基质(Xeno-ADM)的多项生物学性状,观察其移植效果。方法制备单纯xeno-ADM,再用2 g／L硝酸银浸泡,制成含银xeno-ADM。检测两种xeno-ADM对笔者单位烧伤患者创面常见菌的抑菌效果,并进行组织学观察;测量含银xeno-ADM的Ag+含量。在27只家兔背部制作全层皮肤缺损创面,分为A、B、C组,每组9只。A组移植自体刃厚皮,B组移植单纯xeno-ADM+自体刃厚皮,C组移植含银xeno-ADM+自体刃厚皮。术后2、4、6周取移植部位皮肤标本作形态学观察,并计算创面收缩率;术后2周计算移植皮片(未)成活率,并检测各组家兔淋巴细胞增殖活性。结果(1)含银xeno-ADM对创面常见菌的抑菌效果明显优于单纯xeno-ADM (P<0．05)。两种xeno-ADM中的表皮已完全除去,胶原纤维粗细均匀、排列规则、无明显变性,真皮中无细胞及细胞碎片。含银xeno-ADM的Ag+含量为(2．7±0．7)mg／g。(2)术后6周,A组家兔移植皮片呈暗红色,挛缩明显,易破溃,胶原纤维排列紊乱;B、C组移植皮片颜色接近周围正常皮肤,光滑无瘢痕,质地良好,胶原纤维排列有序,表皮-真皮连接结构和基底细胞桥粒、半桥粒结构以及基底膜重建明显。术后2、4、6周,A组家兔创面收缩率均明显高于B、C组(P<0．05);B、C两组创面收缩率相似(P>0．05)。术后2周,C组皮片完全成活率为91．7％,显著高于A组(77．8％)及B组(80．6％);3组家兔淋巴细胞增殖活性相似(P>0．05)。结论含银xeno-ADM脱除了基质中有免疫原性的细胞成分,保留了组织的基本结构和完整的胶原纤维支架,且具有较好的局部抗菌效果,不失为一种良好的真皮替代物。     

自体表皮细胞-纤维蛋白膜创面移植治疗大鼠烧伤

目的：观察自体表皮细胞-纤维蛋白膜移植到大鼠烧伤创面治疗皮肤缺损的效果。方法：健康Wistar大鼠20只,随机分成烧伤皮肤缺损造模组和自体表皮细胞-纤维蛋白膜移植治疗组,治疗后计算表皮细胞在纤维蛋白膜上最佳接种密度,观察移植后的各组创面愈合情况、创面伤口的收缩比例等。结果：在纤维蛋白膜上接种表皮细胞的最佳密度为5×10^4／cm2,烧伤皮肤缺损造模组创面完全愈合时间平均22．3d,自体表皮细胞-纤维蛋白膜移植治疗组为18．1d,造模组创面收缩率为（70±5）％,移植组为（20±5）％（均P〈0．05）。结论：自体表皮细胞-纤维蛋白膜可用于覆盖大面积烧伤造成的皮肤缺损,预防创面伤口瘢痕化的形成,减轻创面收缩率,加速皮肤缺损创面的愈合速度。     

骨髓间充质干细胞在糖尿病模型创面中向表皮细胞分化的初步研究

目的：探讨糖尿病皮肤创面微环境中的骨髓间充质干细胞分化为表皮细胞的可能性。方法：从大鼠骨髓中分离纯化骨髓间充质干细胞。选取第3—4代细胞,应用5-溴脱氧尿嘧啶（5-BrdU）标记技术进行细胞标记;同时采用一次性腹腔内注射链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型。2周后,在大鼠背部人工造成圆形创面,将已标记的骨髓间充质干细胞以注射方式回植入糖尿病大鼠创面组织周围,分别于注射后2、3周取材,常规石蜡包埋、连续切片,行BrdU和角蛋白免疫组织化学染色。结果：BrdU阳性细胞出现在表皮、真皮及皮下组织各层,连续切片表皮层中部分阳性细胞同时也表达角蛋白。结论：在糖尿病渍疡愈合过程中,骨髓间充质干细胞具有向表皮细胞分化的潜能。     

胎鼠表皮干细胞的分离培养及毛囊再生研究

目的：分离培养胎鼠的表皮干细胞及毛囊乳头层细胞，通过动物模型观察两者复合移植后，上皮形成及毛囊的再生情况。方法：采用IV型胶原分离培养胎鼠表皮干细胞，检测β1整合素及角蛋白15的表达水平，测定其细胞周期及克隆形成率（以角质细胞为对照）；分离培养毛囊乳头层细胞，并接种在纤维蛋白胶中，与表皮干细胞膜片复合形成全层皮肤等同物，移植在裸鼠全层皮肤缺损创面作为实验组，同时将胎鼠成纤维细胞替代乳头层细胞作为对照组，8－10周后观察创面及囊的组织学变化。结果：胎鼠表皮干细胞表达高水平的β1整合素及角蛋白15；细胞周期分析显示，G1期细胞百分率为94．9％，S期为3．5％，提示为慢循环细胞周期；角质细胞的G1期细胞有百分率为74．1％，S期为17．5％；表皮干细胞的克隆形成率为15．3％，明显高于对照组的6．7％；裸鼠创面愈合后8－10周，实验组可见新生毛囊形成，对照组未见到此现象。结论：能初步实现对胎鼠表皮干细胞的体外分离培养；在毛囊乳头层细胞的诱导下，胎鼠表皮干细胞可参与形成新的毛囊结构。     

胶原-壳聚糖真皮支架原位诱导修复猪全层皮肤缺损的研究

目的 观察胶原-壳聚糖真皮支架移植于猪皮肤缺损创面后支架的血管化及血管化支架上皮肤移植的成活情况.方法 将双层人工皮肤支架移植于10只猪全层皮肤缺损创面,在植入后1、2、3周对真皮支架血管化、创面、血管化支架上皮肤移植愈合情况进行观察;同时用免疫组织化学方法,对CD34阳性信号(新生血管数目)进行检测.结果 支架植入后1周支架内可见细胞浸润和少量新生微血管形成;植入后2周,垂直于创面的新生微血管明显增多;植入后3周,大部分支架被血管化.CD34阳性信号在支架植入后3周比植入后2周明显增多,植入后2周比植入后1周明显增多.在支架植入后1、2、3周创面植中厚皮,植皮2周后皮片存活率分别为10%、70%和100%.在支架植入后1周和2周创面植表皮,1周和2周后移植表皮存活良好.结论 胶原-壳聚糖真皮支架可以诱导血管长入,明显促进创面愈合.在支架上移植表皮,可较好修复创面,在皮肤移植中有良好的应用前景.     

自体表皮细胞悬液移植修复全层皮肤缺损创面的动物实验研究

目的探讨自体表皮细胞悬液移植技术用于全层皮肤缺损创面修复的适宜密度。方法取健康清洁级成年SD大鼠40只,雌雄不限,体质量210~230 g;根据细胞移植密度不同,随机分为高、中、低细胞密度及空白组(分别为A、B、C、D组,n=10)。取大鼠背部皮肤培养表皮细胞,并制作大鼠全层皮肤缺损创面抗挛缩模型。其中A、B、C组分别将0.2 mL密度为1×10~6、1×10~5、1×10~4个/cm~2的自体表皮细胞悬液移植至创面处,D组给予等量限制性角质形成细胞无血清培养基;取成年Wistar大鼠背部皮肤制备同种异体皮,覆盖各组创面。术后观察大鼠存活情况,于术后7、14、21 d大体观察同种异体皮成活、脱落及创面愈合情况,同种异体皮脱落后计算创面愈合率;21 d时取材行组织学及免疫组织化学染色,观察创面修复情况。结果术后大鼠均存活至实验完成。各组大鼠同种异体皮随时间延长逐渐成活,干燥并开始脱痂;至21 d同种异体皮基本脱落后A、B组创面可见成片上皮,C组创面可见少量菲薄上皮,D组创面无上皮形成。术后21 d同种异体皮脱落后,A、B、C、D组创面愈合率分别为62.9%±9.6%、64.2%±9.1%、38.5%±5.7%、22.7%±5.5%,A、B组创面愈合率显著高于C、D组(P0.05),C组高于D组(P0.05),A、B组间比较差异无统计学意义(P0.05)。组织学观察示,A、B、C组愈合的创面上皮层可见鳞状上皮细胞,A、B组表皮分层明显,C组表皮层薄、可见炎性细胞浸润,D组为肉芽组织。免疫组织化学染色观察示,A、B、C组表皮-真皮连接层Ⅳ型胶原和Ⅶ型胶原表达呈阳性,D组无表皮层呈阴性;A、B组Ⅳ、Ⅶ型胶原表达阳性细胞百分比显著高于C组(P0.05),A、B组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论自体表皮细胞悬液移植技术在大鼠全层皮肤缺损创面修复中可重构皮肤,1.0×10~5个/mL为创面修复的适宜移植密度。