六味地黄丸对OLETF 鼠糖尿病发病的干预研究

目的通过观察六味地黄丸对自发性2型糖尿病OLETF大鼠脂肪组织脂联素的影响,探讨六味地黄丸对2型糖尿病发病的干预作用。方法自发性2型糖尿病大鼠OLETF鼠40只,随机分为六味地黄丸干预组和对照组,LETO鼠10只作为正常对照组。干预组从8周龄起以六味地黄丸2.4mg·kg-1·d-1灌胃给药,其余两组以等量清水灌胃。定期口服葡萄糖耐量试验。于8、32和40周龄时分批宰杀大鼠。采用半定量逆转录PCR方法,检测脂肪组织脂联素mRNA表达水平。结果六味地黄丸能够显著降低OLETF鼠血糖升高程度,延缓高血糖的出现。与对照组相比,干预组脂肪组织脂联素mRNA表达量明显增加。干预组糖尿病的发病率显著低于同时期对照组(P<0.01)。LETO组无IGT或糖尿病发生。结论六味地黄丸能明显增加OLETF鼠脂肪组织脂联素表达水平;六味地黄丸可显著降低2型糖尿病动物模型OLETF鼠糖尿病的发病率,有效预防糖尿病的发生。     

六味地黄丸对OLETF鼠胰岛素抵抗的影响

目的观察六味地黄丸对自发性2型糖尿病大鼠模型OLETF鼠胰岛素抵抗的影响。方法自发性2型糖尿病大鼠OLETF鼠40只,随机分为六味地黄丸干预组和对照组;LETO鼠10只作为正常对照组。干预组从8周龄起以六味地黄丸2.4mg/(kg.d)灌胃给药,其余两组以等量清水灌胃。定期OGTT试验,监测各组大鼠摄食及体重增长情况,每周称量大鼠体重和摄食量。于8,32和40周龄时分批宰杀大鼠。检测血浆胰岛素。结果对照组和干预组OLETF鼠摄食量显著高于LETO组(P<0.01)。对照组和干预组OLETF鼠体重从第6周开始显著高于LETO组(P<0.05)。干预组血浆胰岛素显著低于对照组(P<0.05),与LETO组相比差异无显著性(P<0.05)。结论六味地黄丸能够显著降低OLETF鼠血糖升高程度,延缓高血糖的出现;六味地黄丸能够显著降低血浆胰岛素。     

六味地黄丸对自发性2型糖尿病大鼠血浆脂联素水平的影响

目的 观察六味地黄丸对自发性2型糖尿病大鼠模型血浆脂联素水平的影响.方法 自发性2型糖尿病大鼠OLETF鼠40只,随机分为六味地黄丸干预组和对照组,LETO鼠10只作为正常对照组.干预组从8周龄起以六味地黄丸2.4 mg·kg-1·d-1灌胃给药,其余两组以等量清水灌胃.定期OGTT试验,监测各组大鼠摄食及体质量增长情况,每周称量大鼠体质量和摄食量.于8、32和40周龄时分批宰杀大鼠.检测血浆脂联素、血浆胰岛素水平.结果 与对照组相比,干预组的血浆脂联素水平均明显增加.对照组血浆脂联素水平与LETO组相比显著降低.结论 OLETF鼠血浆脂联素水平与胰岛素敏感性呈正相关.六味地黄丸早期干预能明显增加OLETF鼠血浆脂联素水平,改善OLETF鼠胰岛素抵抗.     

六味地黄丸对自发性糖尿病OLETF鼠脂代谢的影响

目的　观察六味地黄丸对自发性2型糖尿病大鼠模型OLETF鼠脂代谢的影响。方法 自发性2型糖尿病大鼠OLETF鼠40只,随机分为六味地黄丸干预组和对照组,LETO鼠10只作为正常对照组。干预组从8周龄起以六味地黄丸2.4mg•kg-1•d-1灌胃给药,其余两组以等量清水灌胃。定期OGTT试验。于8、32和40周龄时分批宰杀大鼠。检测血清甘油三酯、血清胆固醇、血清游离脂肪酸。结果　干预组的发病率显著低于同时期对照组(P<0.01) 。LETO组无IGT或糖尿病发生。干预组血清甘油三酯、胆固醇和血清游离脂肪酸显著低于对照组（P<0.05）,与LETO组相比无显著性差异（P<0.05）。结论　六味地黄丸可显著降低OLETF鼠2型糖尿病的发病率,有效预防糖尿病的发生;六味地黄丸能够显著降低血清甘油三酯、胆固醇和血清游离脂肪酸。     

六味地黄丸对自发性糖尿病大鼠胰腺的保护作用

目的 通过观察六味地黄丸对自发性2型糖尿病OLETF大鼠胰腺形态学的影响,探讨六味地黄丸预防糖尿病的可能机制.方法 自发性2犁糖尿病大鼠OLETF鼠40只,随机分为六味地黄丸干预组和对照组,LETO鼠10只作为正常对照组.干预组从8周龄起以六味地黄丸2.4 mg·kg-1·d-1灌胃给药,其余两组以等量清水灌胃.定期OGTT试验.于8、32和40周龄时分批宰杀大鼠.分离胰腺.HE染色观察胰岛结构;Masson 三色染色观察胰岛纤维化程度.结果 随着周龄的延长,对照组大鼠胰岛逐渐出现纤维化,萎缩;干预组的胰岛结构保存明显好于对照组.通过Masson染色,可见干预组胰岛纤维化程度明显轻于同周龄对照组.LETO组大鼠胰腺结构随着周龄延长无明显变化.十预组从30周龄开始出现糖尿病.至40周糖尿病发病率28.6%,显著低于对照组(P<0.01).结论 六味地黄丸早期干预能明显保护OLETF大鼠胰岛结构减少其纤维化,可能是其预防糖尿病的机制之一.     

OLETF鼠内脏脂肪沉积与脂肪组织脂联素mRNA水平的关系

目的探讨OLETF大鼠内脏脂肪沉积与脂肪组织脂联素(APN)mRNA水平的关系。方法自发性2型糖尿病大鼠OLETF鼠20只,同系健康对照LETO鼠10只作为正常对照组。监测体质量,定期口服葡萄糖耐量试验(OGTT),于8、32和40周分批处死大鼠,检测血糖(BG)、胰岛素、血清甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、胆固醇(CHOL)和血浆APN水平。分离并称量腹部脂肪,并检测脂肪组织APN的mRNA水平。结果随病程进展,OLETF鼠体质量和内脏脂肪/体质量逐渐高于LETO组(P<0.05),并表现出糖耐量受损。血浆胰岛素、TG、FFA、CHOL显著高于LETO鼠(P<0.05),血浆APN水平不同周龄均显著低于LETO组(P<0.05)。脂肪组织APN的mRNA水平8周龄与LETO组无显著差异(P>0.05),在32和40周龄显著降低(P<0.01)。结论血浆APN水平可较好地反映OLETF鼠胰岛素抵抗和内脏脂肪含量。内脏脂肪APN转录水平降低不是初期血浆APN降低的主要原因。     

Chemerin基因在自发性2型糖尿病大鼠脂肪组织中表达的研究

目的：研究网膜及皮下脂肪组织中Chemerin在自发性2型糖尿病OLETF大鼠中的基因表达水平,探讨Chemerin与肥胖、胰岛素抵抗及2型糖尿病发病关系的机制。方法：4周龄正常不出现糖尿病的LETO大鼠10只作为对照组,4周龄OLETF大鼠10只,2型糖尿病的OLETF大鼠9只,于42周时处死。取网膜及皮下脂肪组织,以实时荧光定量法检测网膜及皮下脂肪组织Chemerin基因的表达水平。皓果：模型组的网膜及皮下脂肪组织Chemerin的基因表达明显高于LETO对照组（P〈0．01）;模型组大鼠网膜脂肪组织Chemerin的基因表达明显高于皮下脂肪组织（P〈0．01）。结论：脂肪因子Chemerin基因表达水平的变化是肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病发病的机制之一。     

六味地黄丸对OLETF大鼠胰腺凋亡相关基因bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨六味地黄丸对自发性2型糖尿病大鼠胰腺组织凋亡相关基因bcl-2和Bax表达的影响.方法:OLETF大鼠(自发性2型糖尿病)40只,随机分为六味地黄丸治疗组和模型组,每组20只;另同系LETO大鼠(非糖尿病)10只作为正常对照组.六味地黄丸治疗组于大鼠8周龄起,用六味地黄丸按2.4 g·kg-1·d-1灌胃,余组用等量蒸馏水灌胃.每周记录大鼠体质量;采用口服葡萄糖耐量试验监测血糖;定期处死大鼠,分离胰腺并称重;采用逆转录-聚合酶链反应检测bcl-2和Bax在胰腺组织中的表达.结果:大鼠40周龄时,六味地黄丸治疗组bcl-2 mRNA的表达水平为(1.25±0.07),较模型组(1.01±0.16)明显增高(P<0.01);Bax mRNA的表达水平为(0.57±0.11),较模型组(1.18±0.28)有明显降低(P<0.01).六味地黄丸治疗组的胰腺/体重比,较模型组增高,但差异无统计学意义.六味地黄丸治疗组的糖负荷能力明显高于模型组(P<0.05或P<0.01).结论:六味地黄丸在转录水平可上调bcl-2 mRNA的表达,下调Bax mRNA的表达,可能具有抗细胞凋亡的作用.     

自发性2型糖尿病大鼠血浆低脂联素血症导致胰岛素抵抗

目的观察自发性2型糖尿病大鼠血浆脂联素(APN)与胰岛素抵抗的关系。方法自发性2型糖尿病大鼠OLETF鼠20只,同系健康对照LETO鼠10只作为正常对照组。饲养13和40周后,行口服葡萄糖耐量试验;于8、32和40周分批宰杀,检测血糖、血浆脂联素、胰岛素、血清甘油三酯、游离脂肪酸和胆固醇水平。结果 8周龄时OLETF鼠血浆APN水平显著低于LETO组(P<0.05),并进行性降低。32周龄和40周龄时OLETF组大鼠血浆胰岛素水平和甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸显著高于LETO组(P<0.01)。结论 OLETF鼠血浆APN水平与胰岛素抵抗显著负相关,且先于胰岛素抵抗和葡萄糖耐量受损发生;低脂联素血症可能是导致胰岛素抵抗的重要原因。     

罗格列酮对OLETF大鼠肺组织TGF-β1／JNK信号转导途径的影响

目的 探讨罗格列酮对自发性2型糖尿病OLETF大鼠肺组织转化生长因子-1β（TGF-β1）／c—Jun氨基末端激酶（JNK）信号转导途径的影响。方法将16只30周龄成模OLETF大鼠分为OLETF组和罗格列酮治疗组（OLETF／L纽）,设LETO大鼠8只为对照组。免疫组织化学分析肺组织TGF—p1、磷酸化（P）-JNK、I型胶原表达。结果与LETO组大鼠相比,OLETF组大鼠肺组织TGF—β1、P—JNK表达（7．4438±0,6397vs1．1844±0．2066、5．7025±0．5530VS1．5875±0．1727）及Ⅰ型胶原的阳性面积比、平均光密度（0．1705±0．0110VS0．0550±0．0048、0．0597±0．0066VS0．0292±0．0019）均显著增加（P〈0．05）。与OLETF组大鼠相比,OLETF／L组大鼠肺组织TGF-β1、PJNK表达（1．8398±0．3591VS7．4438±0．6397、1．7500±0．1690vs5．7025±0．5530）及Ⅰ型胶原的阳性面积比、平均光密度（0．0856±0．0068VS0．1705±0．0110、0．0351±0．0059VS0．0597±0．0066）均显著减少（P〈0．05）。结论罗格列酮可能通过调控TGF-β1／JNK信号转导途径改善糖尿病肺纤维化。     

饲料脂肪酸组分与OLETF大鼠胰岛素抵抗的关系

目的研究不同脂肪酸组分与OLETF大鼠胰岛素抵抗的关系。方法以标准饲料喂养40只雄性OLETF大鼠和10只雄性LETO大鼠至14周,随后将40只OLETF大鼠随机均分为4组,分别以标准饲料(A组)、高脂饲料(C组)、高脂富含n-6多不饱和脂肪酸(PUFA)饲料(D组)和高脂富含n-3 PUFA饲料(E组)喂养至24周,同时10只LETO大鼠以标准饲料喂养至24周(作为对照组)。第24周禁食10～14 h后,行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),采血测定C肽和免疫反应性胰岛素(IRI)等生化指标。采用正常血糖高胰岛素钳夹技术,评价其胰岛素抵抗状态。结果24周时,对照组大鼠空腹血糖、葡萄糖负荷后120 min血糖和IRI与E组大鼠的差异无显著性(P>0．05),但均明显低于A、C、D组大鼠(P值均<0．05)。各组大鼠间空腹和葡萄糖负荷后120 min的C肽水平的差异均无显著性(P值均>0．05)。对照组和E组大鼠的葡萄糖输注率均明显高于C组和D组大鼠(P值均<0．05)。结论OLETF大鼠较LETO大鼠的血糖水平高,而胰岛素敏感性差。进食高脂富含n-3 PUFA饲料可改善OLETF大鼠的糖代谢和胰岛素抵抗。     

脂联素在OLETF大鼠脂肪组织中的表达及意义

目的观察自发2型糖尿病动物模型OLETF大鼠脂肪组织脂联素mRNA表达的变化。方法选择4周龄的雄性OLETF大鼠20只,LETO大鼠10只作为对照组,饲养28周后,行口服葡萄糖耐量试验(OGTT);取空腹血清测甘油三酯、游离脂肪酸、胆固醇和血浆胰岛素水平;取大网膜脂肪组织,RT-PCR检测脂联素mRNA表达。结果OGTT试验结果显示,OLETF组大鼠负荷后0.5h和1h血糖明显高于LETO大鼠(P<0.05);OLETF组大鼠血清甘油三酯和血浆胰岛素水平显著高于LETO组(P<0.05)。OLETF组大鼠脂肪组织脂联素mRNA表达量明显低于LETO组(P<0.05)。结论OLETF大鼠脂肪组织脂联素mRNA表达水平明显降低。     

自发2型糖尿病模型OLETF大鼠肾周脂肪组织水通道蛋白7的表达

目的：观察自发2型糖尿病动物模型OLETF（Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty）大鼠不同糖尿病病程阶段肾周脂肪组织水通道蛋白7 mRNA和蛋白表达的变化,探讨其在肥胖和糖尿病发生中的作用。方法：以OLETF大鼠30只为实验组,同种系非糖尿病LETO（Long- Evans Tokushima Otsuka）大鼠18只为正常对照。8周（基线）时两组大鼠各处死6只。随后OLETF大鼠分为未治疗组（OLETF组）12只及盐酸二甲双胍治疗组（OLETF/M组）12只。观察各组大鼠8、18、28周时的体重、血清甘油三酯、胆固醇、丙三醇、葡萄糖耐量试验的血糖与胰岛素水平以及肾周脂肪组织水通道蛋白7（aquaporin7,AQP7）mRNA和AQP7蛋白含量的变化。用Real time PCR测定AQP7 mRNA水平, Western blotting测定AQP7蛋白含量。结果：（1）OLETF组18周均发展为糖尿病［60分钟血糖（25.67±6.78）mmol/L,120分钟血糖（16.19±2.98）mmol/L］。OLETF组大鼠随周龄增加,其体重、血糖、胰岛素、血清甘油三酯均明显增加。血清丙三醇水平先增高后下降,8、18和28周的水平分别为（52.61±11.80）、 （156.03±39.56） 和（130.84±25.46）μmol/L。（2）OLETF/M组18周时达糖尿病标准［60分钟血糖（18.64±6.67）mmol/L,120分钟血糖（14.13±5.21）mmol/L］,但血糖水平低于OLETF组;28周时血糖下降均恢复为糖耐量异常［60分钟血糖（11.72±3.06）mmol/L,120分钟血糖（12.42±2.30）mmol/L］。OLETF/M组的甘油三酯、胆固醇和丙三醇浓度较OLETF组降低。OLETF/M组与OLEFT组比较具体值为：甘油三酯18周（0.88±0.14） vs. （1.09±0.44）mmol/L,28周（1.06±0.51） vs. （2.20±1.51）mmol/L;胆固醇18周（2.18±0.14） vs. （2.30±0.21）mmol/L,28周（1.90±0.19） vs. （2.36±0.35）mmol/L,P<0.05;丙三醇18周（77.28±9.06） vs. （156.03±39.56）μmol/L,P<0.05, 28周（58.44±14.03） vs. （130.84±25.46）μmol/L,P<0.01。（3）增加肾周脂肪组织AQP7 mRNA及蛋白表达：随周龄及肥胖增加,18及28周OLETF组AQP7 mRNA表达较同组8周龄大鼠分别上调了67.5％和41.7％,AQP7蛋白表达较同组8周龄大鼠分别上调了21.9％和8.9％;18及28周OLETF/M组AQP7 mRNA表达较同组8周龄大鼠分别上调了25％及8.3％,AQP7蛋白表达较同组8周龄大鼠分别上调了14.6％及1.6％。OLETF及OLETF/M组均呈先增高而后下降的趋势,于18周时增高,28周下降,与血清丙三醇变化趋势一致。OLETF/M组AQP7 mRNA及蛋白表达水平低于同周龄OLETF组,但两组差异无统计学意义。OLETF/M组的体重、胰岛素与OLETF组差异无统计学意义。OLETF/M组AQP7 mRNA及蛋白表达水平低于同周龄OLETF组,但两组差异无统计学意义。结论：内脏脂肪AQP7参与了糖脂代谢,与2型糖尿病和肥胖发病相关。二甲双胍可改善OLETF大鼠的脂代谢和糖代谢紊乱,但对AQP7 mRNA及蛋白表达未见明显影响。     

脂联素对自发性2型糖尿病大鼠肝脏脂代谢的影响

目的 探讨脂联素(APN)对自发性2型糖尿病大鼠肝脏脂代谢的影响及其分子信号机制.方法 自发性2型糖尿病大鼠20只(糖尿病组),同系健康对照鼠10只(对照组).于8、32和40周分批处死.检测不同鼠龄空腹血糖、血浆胰岛素和血脂水平.肝组织甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)含量以酶法检测,反转录-PCR检测肝组织乙酰辅酶A羧化酶(AAC)和同醇调节元件结合蛋白-1( SREBP-1) mRNA水平,ELISA法检测血浆和肝组织内APN蛋白水平.免疫沉淀后行Western印迹法检测肝组织胰岛素受体底物-2磷酸化( py-I RS2)表达水平.结果 32周开始糖尿病组大鼠表现出明显的胰岛素抵抗和脂代谢紊乱特征.糖尿病组大鼠肝组织TG和TC含量随鼠龄增加有增高趋势,显著高于对照组[40周TG( 1.88±0.11) mmol/L比(0.51±0.07) mmol/L,TC (0.94±0.17)比(0.69±0.14) mmol/L,P＜0.01].糖尿病组大鼠肝组织AAC和SREBP-1 mRNA水平在各鼠龄均显著高于对照组(P＜0.05).糖尿病组大鼠血浆APN水平在8周龄显著低于对照组[(2.38±0.23)ng/ml比(3.1±0.17) ng/ml,P＜0.05],随鼠龄增加而升高[32周(1.51±0.05) ng/ml比(2.84±0.34) ng/ml,40周(1.24±0.04) ng/ml比(2.64±0.49) ng/ml,P＜0.01].肝组织APN在不同鼠龄均显著低于对照组[8、32和40周分别为(2.24±0.18) μg/g比(2.68±0.13) μg/g,(2.04±0.19)μg/g比(2.51 ±0.14) μg/g,(1.76±0.12) μg/g比(2.47±0.21) μg/g,P＜0.05].肝组织py-IRS2表达水平显著低于同龄对照组(P＜0.05).肝组织APN水平与py-IRS2呈正相关(r=0.542,P＜0.001),与肝组织ACC、SREBP-1mRNA、TG、TC含量呈负相关(r=-0.431,- 0.396,-0.353,-0.349,P＜0.05).结论 APN可能通过调控糖尿病大鼠肝脏IRS-2磷酸化水平影响肝组织的胰岛素信号通路,调节肝脏的脂代谢功能.     

胰高血糖素样多肽-1对OLETF大鼠肺泡毛细血管基板的影响

目的:电镜观察并定量分析胰高血糖素样多肽-1(glucagon like peptide-1, GLP-1)对自发性2型糖尿病OLETF(Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty)大鼠肺泡毛细血管基板的影响.方法:将OLETF大鼠分为未治疗的OLETF组及GLP-1治疗组(OLETF/G组),对照为LETO(Long-Evans Tokushima Otsuka)组大鼠.用透射电镜观察及形态计量学方法测量肺泡毛细血管基板的超微结构及厚度.结果:与LETO组大鼠相比,OLETF大鼠肺泡毛细血管内皮细胞基板与Ⅰ型肺泡上皮细胞基板融合部(F-BL)及肺泡毛细血管内皮细胞基板(Cap-BL)均增厚,分别为 (110.60±14.14) nm vs (57.30±11.08) nm和 (118.40±19.12) nm vs (66.80±8.63) nm (P＜0.01).OLETF/G组大鼠肺F-BL及Cap-BL均比OLETF组大鼠明显变薄,分别为 (79.70±5.44) nm vs (110.60±14.14) nm和 (69.80±3.32) nm vs (118.40±19.12) nm (P＜0.01).结论:OLETF大鼠肺泡毛细血管基板发生明显的超微结构变化;GLP-1治疗能减轻OLETF大鼠肺泡毛细血管基板损伤.