高通量测序和实时荧光定量PCR分析何首乌肝损伤与肠道微生物组的关系

目的采用Illumina高通量测序技术和实时荧光定量PCR（Real-Time PCR,RT-PCR）法研究何首乌（PM）致肝损伤与肠道微生物组间的关系,并验证两种定量方法的一致性。方法雄性SD大鼠随机分为5组：对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+对乙酰氨基酚（APAP）组、PM组和LPS+PM组;大鼠尾iv给予4.0 mg/kg LPS建立肝损伤模型,各组相应每天1次ig给予0.625 g/kg APAP和12 g生药/kg PM,记录大鼠体质量;分别于造模后2、14 h、5和8 d,对大鼠粪便中细菌16SrRNA基因的V4高变区进行Illumina高通量测序,根据测序结果得出的差异物种,采用RT-PCR进行验证;取造模后8 d大鼠肝脏组织,HE染色,光学显微镜观察。结果大鼠肝脏病理学检查结果显示,与对照组比较,LPS组大鼠存在肉芽肿,PM组无异常病变;与LPS组比较,LPS+PM大鼠肝细胞出现轻度变性和微小肉芽肿增多,LPS+APAP组可见微小肉芽肿和淋巴细胞浸润。Illumina高通量测序结果提示,与对照组比较,随着PM给药次数增加,单独给予PM的大鼠肠道微生物无显著变化;LPS+PM组表现为肠球菌科和毛螺旋菌科细菌逐渐增加,乳杆菌属细菌减少,且与LPS组有差异;RT-PCR结果显示,与对照组比较,随着PM给药次数的增加,单独给予PM的大鼠肠道微生物无显著变化;LPS+PM组肠球菌科、毛螺旋菌科细菌数显著增加（P<0.05）,乳杆菌属细菌数显著减少（P<0.05）,且与LPS组比较有显著差异。结论 PM肝损伤大鼠存在不同程度的菌群失衡,且Illumina高通量测序和RT-PCR检测结果具有良好的一致性,但Illumina高通量测序技术可获得更多的微生物信息,更具优势。     

何首乌乙醇提取液对LPS诱导大鼠肝脏CYP450酶的影响

目的 基于脂多糖(LPS)诱导大鼠肝脏损伤建立何首乌肝毒性模型,探究何首乌乙醇提取液(AEP)对大鼠细胞色素P450(CYP450)酶主要亚型活性及蛋白表达的影响。方法 雄性SD大鼠100只,随机分为6组:对照组、LPS组、对乙酰氨基酚(APAP)组、(LPS+APAP)组、AEP组和(LPS+AEP)组。尾iv 4 mg/kg LPS,2 h后,按组别分别ig 625 mg/kg APAP和6 g/kg AEP,每天1次,连续给药7 d,每天观察大鼠体质量变化。在建模过程中,取第2、14小时和5、8天4个不同时间点,分别对各组别动物麻醉后取血,检测肝功能生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性;解剖,记录肝脏质量;苏木精-伊红(HE)染色进行组织病理学检查;试剂盒法测定肝细胞中细胞色素CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1活性的变化;提取肝脏蛋白,应用Western blotting法检测CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1蛋白表达情况。结果 与对照组比较,第2和14小时,LPS组、(LPS+APAP)组和(LPS+AEP)组ALT、AST和ALP活性显著升高;组织病理学检查发现,肝细胞灶状坏死,伴炎细胞浸润;给药后第8天,LPS组组织病理学检查正常,但(LPS+AEP)组可见显著肝细胞变性,局部慢性炎性灶。第8天,AEP组大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1的活性明显降低;Western blotting法检测发现,AEP能显著降低大鼠肝脏CYP1A2蛋白的表达,而对CYP2E1和CYP3A1蛋白表达没有显著影响。结论 经LPS诱导,AEP对SD大鼠产生明显的肝脏毒性,毒性的发生及LPS诱发的免疫作用与抑制CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1的活性和抑制CYP1A2蛋白表达有关。     

注射用丹参多酚酸治疗发病48h～14d的缺血性脑卒中的疗效及对患者血Lp-PLA2及ox-LDL的影响

目的 探讨注射用丹参多酚酸对发病48 h～14 d的缺血性脑卒中患者的疗效及对患者血脂蛋白相关性磷脂酶A₂（Lp-PLA₂）及氧化修饰型低密度脂蛋白（ox-LDL）的影响。方法 选择2020年1月—2022年6月安阳市人民医院收治的发病48 h～14 d入院的260例缺血性脑卒中患者,按照治疗方案不同分为对照组和试验组,每组各130例,两组均给予缺血性脑卒中的常规治疗,对照组在常规治疗基础上给予注射用血塞通（冻干）,每次400 mg加入0.9%氯化钠注射液250 mL,静脉滴注,每天1次;试验组在对照组基础上给予注射用丹参多酚酸,每次取0.13 g加入0.9%氯化钠注射液250 mL,静脉滴注,每天1次。两组疗程均为14 d。比较两组临床疗效,分别于治疗前及治疗14 d后采用美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分量表进行神经功能缺损评估,采用日常生活能力量表（ADL）评分进行日常生活能力评估,采用改良Rankin量表（mRS）评分评价神经功能恢复情况,治疗前及治疗14 d后测定两组患者血浆Lp-PLA₂及血清ox-LDL水平。观察治疗期间两组患者不良反应发生情况。结果 试验组总有效率为93.85%,显著高于对照组的87.69%（P＜0.05）。治疗前两组NIHSS、mRS、ADL评分比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）;治疗14 d后两组NIHSS、mRS评分均较本组治疗前显著降低（P＜0.05）,且试验组显著低于对照组（P＜0.05）;治疗后,两组ADL评分均较本组治疗前显著升高（P＜0.05）;且试验组显著高于对照组（P＜0.05）。治疗前两组Lp-PLA₂及ox-LDL水平比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）;在治疗14 d后两组Lp-PLA₂及ox-LDL水平均较本组治疗前显著降低（P＜0.05）,且试验组显著低于对照组（P＜0.05）。治疗期间,两组均未发生明显不良反应。结论 注射用丹参多酚酸能有效降低发病48 h～14 d的缺血性脑卒中患者血Lp-PLA₂及ox-LDL水平,能够改善临床症状,提高生活质量,且安全性好。     

五子衍宗丸调控睾丸线粒体融合蛋白2减轻内质网应激改善肥胖大鼠生精功能

目的 观察五子衍宗丸对高脂饮食诱导肥胖大鼠生精功能的影响,并从睾丸内质网应激角度探讨可能机制。方法 30 只雄性 SD 大鼠随机分为对照组、模型组和五子衍宗丸低、中、高剂量（0.5、1.0、2.0 g·kg^-1）组。对照组给予普通饮食,其余组给予高脂饲料喂养,16 周后各组 ig 给予相应剂量药物,连续 4 周;取附睾进行精子功能分析;血清 ELISA 分析性激素水平变化;苏木素-伊红染色观察睾丸组织病理改变;透射电镜观察睾丸支持细胞线粒体和内质网结构改变;免疫荧光染色检测睾丸线粒体融合蛋白 2（Mfn2）及内质网应激标识蛋白葡萄糖调节蛋白 78（GRP78）的定位及表达;Western blotting 检测睾丸组织 Mfn2 和蛋白激酶 R 样内质网激酶（PERK）通路 相 关 蛋 白 相 对 表 达 。结果 与对照组比较, 模型组大鼠体质量明显增加（P＜0.01）,血清雌二醇水平明显升高（P＜0.01）,睾酮水平明显降低（P＜0.01）;睾丸生精细胞排列稀疏,细胞变性;精子活力明显降低（P＜0.05）,精子畸形率明显升高（P＜0.01）;睾丸支持细胞内质网和线粒体肿胀,呈空泡状,部分网膜断裂,Mfn2 表达明显降低,GRP78 荧光表达明显增加;PERK、 活 化 转 录 因 子 -4 （ATF4） 和 CHOP 蛋白量明显升高（P＜0.01）。与模型组比较,五子衍宗丸高剂量组体质量减轻明显（P＜0.05）;中、高剂量组血清雌二醇水平明显降低（P＜0.05、0.01）,睾酮水平明显升高（P＜0.05、0.01）;高剂量组精子活力明显升高（P＜0.05）,精子畸形率明显降低（P＜0.05）;睾丸病变减轻,排列较致密,支持细胞内质网和线粒体肿胀改善;Mfn2 荧光表达逐渐增强,蛋白相对表达明显增加 （P＜0.05、0.01）,GRP78 荧光表达逐渐减弱;低剂量组 ATF4 蛋白量明显降低 （P＜0.01）,中剂量组PERK、ATF4 蛋白量明显降低（P＜0.05、0.01）,高剂量组 PERK、ATF4 和 CHOP 蛋白量均明显降低（P＜0.01）。结论 五子衍宗丸可改善高脂饮食诱导肥胖引起的大鼠生精障碍,其机制可能与调控睾丸支持细胞Mfn2表达,减轻内质网应激有关。     

注射用丹参多酚酸恢复脑缺血早期血流改善远期运动功能的作用研究

目的 考察注射用丹参多酚酸（SAFI）对脑缺血大鼠急性期用药的可行性,明确大鼠脑缺血再灌注后脑血流的变化及其与远期运动功能恢复之间的相关性。方法 将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及SAFI （21 mg·kg^-1）组。SAFI组根据不同给药时机又分为3个亚组,分别是再灌后立即给药组（SAFI 0周）、再灌后1周给药组（SAFI 1周）、再灌后2周给药组（SAFI 2周）,每组每天给药1次,连续ip 7 d,为保持一致性,其余时间均ip生理盐水,假手术组及模型组分别ip等量生理盐水。采用线栓法构建大鼠脑缺血再灌注模型,假手术组仅分离血管。通过观测大鼠一般状态、评估大鼠神经功能和脑梗死体积百分比考察SAFI急性期给药的药效作用;利用激光多普勒技术检测大鼠局部脑血流量（rCBF）;通过转棒实验和步态实验分析大鼠的运动能力;通过Pearson相关性分析方法评估不同时间点的脑血流变化与远期运动功能恢复之间的相关性。结果 与模型组比较,SAFI 0周组大鼠的神经功能评分显著降低（P＜0.01）,脑梗死体积百分比显著降低（P＜0.01）,rCBF显著提升（P＜0.05、0.01）,死亡率明显下降;与模型组比较,SAFI 0周组大鼠在转棒仪上跌落潜伏期显著增加（P＜0.05、0.01）,SAFI 0周组大鼠在步态仪上运动速度显著增加（P＜0.01）,四肢的摆动时间、站立时间和步态周期显著下降（P＜0.05、0.01）,四肢（除左后肢外）的步幅显著增加（P＜0.05、0.01）。与SAFI 1、2周组比较,SAFI 0周组脑梗死体积百分比显著降低（P＜0.01）,死亡率降低,rCBF显著升高（P＜0.05、0.01）,明显促进了神经行为学功能及运动功能的恢复。Pearson相关性分析结果表明脑缺血再灌注损伤后早期的脑血流恢复与远期运动功能呈线性相关。结论 SAFI在缺血急性期给药具有一定的可行性;脑缺血后梗死周边区域血流恢复对远期运动功能的恢复至关重要。     

注射用丹参多酚酸对MCAO/R大鼠Nrf2/Keap1/HO-1信号通路的影响

目的 采用大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注（MCAO/R）模型考察注射用丹参多酚酸（SAFI）对脑缺血再灌注大鼠核因子E2相关因子2（Nrf2）/Kelch样ECH相关蛋白（Keap1）/血红素氧合酶-1（HO-1）信号通路的影响。方法 线栓法构建大鼠MCAO/R模型,于术后24 h进行神经功能评分,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丁苯酞（5 mL·kg^-1）组和SAFI低、中、高剂量（5.76、11.51、23.02 mg·kg^-1）组,尾iv给药,连续14 d。考察给药后各组大鼠神经功能缺损评分;ELISA法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、脑源性神经营养因子（BDNF）水平;TTC染色法检测脑梗死体积;HE染色观察脑组织病理变化;Western blotting法检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达。结果 与模型组比较,SAFI中、高剂量组和丁苯酞组大鼠的神经功能缺损评分显著降低（P＜0.05、0.01） ;SAFI各剂量组和丁苯酞组脑梗死体积显著减少（P＜0.01、0.001）,血清BDNF、SOD水平均显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,MDA水平显著降低（P＜0.05、0.01）,脑组织病理变化明显减轻,水肿减轻; SAFI高、中剂量组及丁苯酞组Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,SAFI低剂量组Keap1、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.01、0.001）。结论 SAFI可以减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,可能是通过促进Nrf2/Keap1/HO-1信号通路,抑制氧化损伤实现的。     

逍遥散对抑郁大鼠运动能力和肝脏线粒体的影响

目的 研究逍遥散对抑郁大鼠运动能力及肝脏线粒体结构和功能的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、文拉法辛（给予盐酸文拉法辛胶囊35mg·kg^-1）组和逍遥散（生药21.2g·kg^-1）组,除对照组外,采用慢性不可预知温和应激（CUMS）建立抑郁模型,于造模同时ig给药,连续28d,每周称体质量。造模结束后进行旷场实验、糖水偏好实验、爬杆实验和转棒实验行为学测试;通过透射电镜观察肝脏线粒体超微结构;通过试剂盒测定血清睾酮、皮质酮水平和线粒体腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）和线粒体呼吸链复合体（MRCC）I、III、IV、V水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量增长缓慢（P＜0.01）,糖水偏爱率、旷场实验的穿越格数及直立次数、爬杆实验得分和转棒实验在棒时间均显著下降（P＜0.05、0.01）;血清皮质酮水平显著增加（P＜0.05）,睾酮水平和睾酮-皮质酮比值（T/C）显著降低（P＜0.05、0.01）;大鼠肝脏线粒体数目减少,外膜模糊,基质疏松;肝脏线粒体ATP水平及MRCCⅠ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性降低（P＜0.05、0.01）。与模型组比较,逍遥散组大鼠体质量显著增加（P＜0.05）,旷场实验穿越格数和直立次数增加（P＜0.05、0.01）,糖水偏好率显著增高（P＜0.05）,爬杆实验得分显著增加（P＜0.01）,转棒实验的在棒时间显著延长（P＜0.05）;血清睾酮水平显著升高（P＜0.05）,皮质酮水平显著降低（P＜0.05）,T/C显著升高（P＜0.01）;大鼠肝脏线粒体嵴清晰,结构较为完整;肝脏线粒体ATP水平和MRCCⅠ、Ⅴ活性显著增加（P＜0.05）。结论 逍遥散能够显著改善CUMS大鼠肝脏线粒体形态和功能,提高其运动能力,发挥抗抑郁作用。     

利福平在胆汁淤积模型中对多药耐药相关蛋白2表达的影响

目的：探究利福平对肝内胆汁淤积模型大鼠肝组织中多药耐药相关蛋白2表达的影响。方法：通过使用α-萘异硫氰酸酯（ANIT）诱导大鼠肝内胆汁淤积后,给予大鼠利福平和熊去氧胆酸治疗,其分组为空白对照组（NC组）、模型对照组（M组）、利福平治疗组（R组）、熊去氧胆酸治疗组（U组）、利福平+熊去氧胆酸治疗组（R+U组）。通过对各组大鼠血清中肝损伤相关指标进行检测、大鼠胆汁流速对比、肝组织HE染色,观察大鼠的肝脏损伤情况,再使用RT-PCR和Western-blot对大鼠肝脏组织中多药耐药相关蛋白2（MRP2）的mRNA表达水平及蛋白表达水平进行检测。同时将大鼠的肝脏组织进行体外培养24 h后使用MTT法和PI单染流式细胞术检测其细胞活性及细胞周期。结果：M组相对于NC组血清中肝损伤的相关指标谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、γ-谷氨酰转移酶（γ-GGT）明显升高（P<0.05）,同时治疗组各组与M组相比ALT、ALP、AST、TBIL、γ-GGT显著降低（P<0.05）;各组大鼠胆汁流速进行比较,M组 < R组 < U组 < R+U组 < NC组（P<0.05）;从大鼠的肝脏组织HE染色结果显示,M组大鼠肝细胞受损严重,肝细胞发生肿胀且出现中性粒细胞浸润现象,在给予治疗后,治疗组大鼠的肝细胞有不同程度的改善,细胞肿胀和浸润现象消失。在使用RT-PCR和Western-blot对各组大鼠肝脏组织中MRP2进行检测后发现,M组大鼠相对于NC组肝脏组织中MRP2 mRNA表达水平和MRP2蛋白表达水平明显下降,在经过利福平和熊去氧胆酸治疗后,R组、U组及R+U组与M组进行比较,肝脏组织中MRP2 mRNA表达水平和MRP2蛋白表达水平显著上升（P<0.05）。使用MTT法和PI单染流式细胞术对体外培养的各组大鼠肝脏组织细胞活力检测后发现,M组大鼠细胞存活率相对于NC组明显下降（P<0.05）,细胞大量停滞于G₀/G₁期,G₂/M期细胞基本消失,治疗组大鼠肝脏细胞与M组相比存活率上升,G₀/G₁期细胞比例下降（P<0.05）。结论：利福平对于ANIT诱导的大鼠肝内胆汁淤积有一定的治疗效果,同时会上调肝脏组织中MRP2的mRNA表达水平及蛋白表达水平。     

血栓通注射液抗博来霉素致大鼠肺纤维化药效学研究

目的 研究血栓通注射液抗博来霉素诱导肺纤维化模型大鼠的药效学。方法 将180只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮（阳性药,50 mg · kg^-1）组和血栓通注射液低、中、高剂量（注射液原液1、2、4 mL·kg^-1）组,每组30只,采用气管内注射博来霉素方法制备肺纤维化大鼠模型,于造模24 h后各给药组ip给药,并分别在造模7、14、28 d取材。观察大鼠一般状态、体质量、肺系数;应用DSI/BUXCO监测系统检测肺功能指标潮气量、气道阻力及肺顺应性变化;进行HE与Masson染色,光镜下观察肺组织病理变化;并采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠肺组织中I型胶原（COL-Ⅰ）和纤维黏连蛋白（FN）的水平。结果 通过对大鼠的一般情况观察,发现给予血栓通注射液后,肺纤维化模型大鼠的活动和精神状态均有改善。与模型组比较,吡非尼酮组、血栓通注射液组大鼠体质量显著增加（P＜0.01、0.001）,大鼠肺系数显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。肺功能结果显示,与模型组比较,造模7 d时血栓通注射液中剂量显著上调动态肺顺应性（P＜0.01）;造模14 d时血栓通注射液高剂量显著降低气道阻力（P＜0.05）和上调动态肺顺应性（P＜0.01）;造模28 d时吡非尼酮和血栓通注射液中剂量均显著上调动态肺顺应性（P＜0.01）。HE及Masson结果显示,吡非尼酮组、血栓通注射液组的肺纤维化程度明显轻于模型组。ELISA结果显示,与模型组比较,造模7 d时吡非尼酮组、血栓通注射液高剂量组大鼠肺组织中的FN显著降低（P＜0.01、0.001）,吡非尼酮组COL-Ⅰ水平显著降低（P＜0.001）;造模14 d时吡非尼酮组和血栓通注射液中、高剂量组大鼠肺组织中的COL-Ⅰ水平显著降低（P＜0.05、0.01）,吡非尼酮组FN显著降低（P＜0.05）;造模28 d时吡非尼酮组和血栓通注射液中、高剂量组大鼠肺组织中的COL-Ⅰ、FN水平显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 血栓通注射液可改善肺纤维化模型大鼠肺功能与肺部形态学病变,降低肺组织中COL-Ⅰ和FN水平,对肺纤维化大鼠产生保护作用。     

经鼻靶向给予降钙素基因相关肽对蛛网膜下腔出血后海马区细胞凋亡的影响

目的 探讨经鼻靶向中枢给予降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）对海马细胞凋亡和脑损伤的作用。方法 枕大池2次注血法制作蛛网膜下腔出血（subarach-noid hemorrhage,SAH）模型。将48只♂ Wistar大鼠随机分为正常对照组、SAH组、生理盐水（NS）+SAH组（经鼻给予NS）、CGRP+SAH组（经鼻给予CGRP）,每组12只。于第2次注血3 d后,采用免疫荧光技术检测海马组织中bcl-2和caspase-3的蛋白表达。结果 免疫荧光染色显示bcl-2和caspase-3在正常对照组大鼠海马组织中只观察到极少量表达;SAH组、NS+SAH组bcl-2和caspase-3蛋白表达明显增多;与SAH组和NS+SAH组相比较,经鼻给予CGRP治疗后,bcl-2表达显著升高,caspase-3表达水平显著降低,差异均具有统计学意义（P<0.01）。结论 CGRP经鼻靶向中枢给药能有效抑制SAH大鼠海马组织细胞凋亡,对脑损伤具有显著保护作用。     

Effects of bosentan, an endothelin receptor antagonist, on bile salt export pump and multidrug resistance-associated protein 2

The bile salt export pump (BSEP/Bsep/ABCB11) and multidrug resistance-associated protein 2 (MRP2/Mrp2/ABCC2) are involved in bile acid-dependent and -independent bile secretion, respectively. It has been reported that bosentan, an endothelin receptor antagonist, inhibits Bsep, which may lead to cholestatic liver injury due to the intracellular accumulation of bile salts, while increasing bile salt-independent bile flow. Thus, in this study, the effects of bosentan on BSEP/Bsep and MRP2/Mrp2 were evaluated using membrane vesicles derived from Spodoptera frugiperda (Sf) 9 cells, which express these transporters. The adenosine 5'-triphosphate (ATP)-dependent uptake of (3)H-taurocholic acid into membrane vesicles for BSEP/Bsep was inhibited by bosentan, and its IC(50) values were 76.8 and 101 microM for BSEP and Bsep, respectively. In contrast, bosentan stimulated the MRP2/Mrp2-mediated ATP-dependent vesicular transport of (3)H-estradiol 17beta-glucuronide by shifting the sigmoidal dependence of transport rate on substrate concentration to a more hyperbolic one. Collectively, these results suggest that bosentan inhibits BSEP in humans with a similar potency to rats, and that increased bile salt-independent flow in rats by bosentan is at least partly attributable to the activation of Mrp2.     

Gene Expression Profiles of ABC Transporters and Cytochrome P450 3A in Caco-2 and Human Colorectal Cancer Cell Lines

Purpose. The mRNA levels of MDR1 (P-glycoprotein), multidrug resistance-associated proteins (MRP1, MRP2), cytochrome P450 3A (CYP3A) and villin in human colorectal cell lines (HCT-15, LoVo, DLD-1, HCT-116 and SW620) were quantitatively compared with those in Caco-2 cells. Methods. The mRNA levels were determined by real time quantitative polymerase chain reaction and expressed as the relative concentrations of MDR1 mRNA to glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) mRNA. Results. MDR1 mRNA was expressed in HCT-15 LoVo and DLD-1 cells at similar or lower level to Caco-2. The expression of MRP1 mRNA in the cell lines tested was comparable with Caco-2. MRP2 mRNA was detected only in HCT-116 and SW620 at significantly lower level than Caco-2. CYP3A mRNA was detected in HCT-15, LoVo, DLD-1 and SW620 at similar level to Caco-2. Conclusions. HCT-15 LoVo and DLD-1 cells express proteins important for regulating the intestinal absorption of drugs, i.e., MDR1, MRP1 and CYP3A, whereas HCT-116 and SW620 cells were not acceptable for evaluation of absorption properties of drug candidates.     

乌头碱调控miR-150-5p表达对心力衰竭模型大鼠心功能及心室重构的影响

目的 探究乌头碱对心力衰竭模型大鼠心功能及心室重构的影响及对miR-150-5p的调控作用。方法 将SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组、乌头碱组、乌头碱+antagomir-NC组、乌头碱+miR-150-5p antagomir组,每组15只。除假手术组外,其余组均利用结扎左前降支冠状动脉法建立心力衰竭大鼠模型。测定各组大鼠心功能指标左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF);ELISA检测各组大鼠心肌损伤指标心肌肌钙蛋白I(CTnI)、脑钠肽(BNP)和N末端B型脑钠肽前体(NT-pro BNP)的水平;测定各组大鼠心脏和左心室质量指数;Masson染色观察各组大鼠心肌组织形态;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率;RT-qRCR检测各组大鼠心肌组织中miR-150-5p和细胞周期蛋白D2(CCND2)的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与CCND2的靶向关系;Western blotting检测心肌细胞中CCND2蛋白的表达。结果 与模型组相比,乌头碱组大鼠心功能指标LVEDD、LVESD、...     

甲状旁腺激素1-34促进尾悬吊再负重大鼠骨质量恢复

以往研究中已经证实甲状旁腺激素1-34（PTH1-34）抗骨质疏松效果,然而PTH1-34对于拟失重再负重大鼠骨量的恢复是否有促进作用尚未见报道。目的：观察尾悬吊大鼠再负重骨量的变化及PTH1-34干预对该过程的影响及机制。方法：5月龄大鼠24只分为4组,每组6只：对照组（Control组）、尾悬吊（Unloading）4周组（Unloading）, UL组）、尾悬吊2周再负重（Reloading）2周组（UL+RL组）、尾悬吊2周再负重加PTH1-34干预2周组（20ug/kg/d, 5 days/week, UL+RL+PTH组）;4周后处死大鼠,分离左侧胫骨制备硬组织切片,行骨组织形态计量学分析;检测左侧股骨骨密度;取右侧胫骨制备组织匀浆,提取蛋白和RNA,分别采用Western blot和Realtime PCR检测骨钙素（OCN）的表达;三点弯曲试验分析右侧股骨最大载荷和弹性模量。结果：1、骨密度：CL组显著高于其余三组（P < 0.05）,UL+RL组和UL+RL+PTH组均显著高于UL组（P < 0.05）;UL+RL+PTH组显著高于UL+RL组（P <0.05）; 2、骨组织形态计量学：BV/TV：CL组显著高于UL、UL+RL、UL+RL+PTH组（P < 0.05）,UL组显著低于UL+RL组和UL+RL+PTH组（P < 0.05）;UL+RL+PTH组显著高于UL+RL组（P <0.05）;Tb.N：CL组显著高于其余三组（P < 0.05）,UL+RL+PTH组显著高于UL组（P < 0.05）;Tb.Th：任意两组间比较,差异无统计学意义（P >0.05）;Tb.Sp：CL组显著低于UL、UL+RL、UL+RL+PTH（P < 0.05）,UL组显著低于UL+RL组和UL+RL+PTH组（P < 0.05）; 3、生物力学分析结果：最大载荷：UL组显著低于其余三组,UL+RL组显著低于CL组（P < 0.05）;弹性模量：CL组显著高于其余三组（P < 0.05）,UL+RL+PTH组显著高于UL组、UL+RL组（P < 0.05）;4、Western blot： OCN蛋白表达在CL组和UL+RL+PTH组显著高于UL组（P < 0.05）;5、Realtime PCR检测结果：各组间的mRNA表达水平无显著差别。结论：尾悬吊2周可诱发大鼠下肢骨量丢失、力学性能下降、OCN含量减少,再负重2周后上述改变可得到部分恢复,PTH1-34干预能促进这一过程。     

血管生成素2在大鼠内毒性急性肺损伤中的作用与机制研究

目的 探讨血管生成素-2(Ang-2)在脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)时的表达及其机制。方法 48只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组、1 mg/kg LPS组、5 mg/kg LPS组和10 mg/kg LPS组,每组12只。LPS组尾静脉注射不同剂量LPS复制ALI模型,对照组注射同等体积生理盐水,留取肺组织标本,观察肺湿/干重(W/D)比值、HE染色光镜观察肺组织标本病理改变并进行肺损伤评分,各组ELISA法检测血浆中Ang-2与血管内皮生长因子(VEGF)的表达,Westernblot方法检测肺组织中Ang-2的蛋白表达情况。结果 LPS注射进入大鼠尾静脉6 h后,光镜下可见肺组织内的炎性细胞浸润,肺泡隔增宽,肺间质水肿和肺结构破坏等病理改变;LPS各组的肺损伤评分与W/D比值明显高于对照组(P<0.05);LPS不同剂量组血浆中Ang-2与VEGF的表达水平较对照组明显增高(P<0.05),血浆中Ang-2的表达与VEGF、肺损伤评分呈正相关(r=0.826,P<0.05;r=0.775,P<0.05);LPS不同剂量组与Ang-2蛋白的表达水平呈现剂量效应关系(P<0.05)。结论 Ang-2参与大鼠ALI的发病过程,且Ang-2水平增高与ALI严重程度有关。     

格列齐特对2型糖尿病大鼠心肌缺血预适应保护作用的影响

目的 探讨格列齐特对2型糖尿病大鼠离体心脏缺血预适应保护作用的影响。方法 将造模成功的2型糖尿病大鼠随机分为糖尿病缺血预处理组、糖尿病再灌注损伤组、糖尿病缺血预处理+格列齐特组、糖尿病再灌注损伤+格列齐特组。将对照组大鼠随机分为缺血预处理组、再灌注损伤组。分别于平衡灌注后、缺血再灌注开始及再灌注60 min末3个时间点分别收集冠脉流出液,测定乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）的释放量;在再灌注末,取左心室游离壁心肌组织,进行荧光定量PCR检测心肌ATP敏感性钾离子（KATP）通道组成亚基Kir6.2和SUR2A mRNA的表达;免疫组织化学技术检测其蛋白的表达水平。结果 对于糖尿病非药物治疗大鼠,糖尿病缺血预处理组与糖尿病再灌注损伤组比较,冠脉流出液中LDH、CK、CK-MB无明显差异;Kir6.2和SUR2A mRNA及蛋白表达也均无明显差异。而与糖尿病缺血预处理组、糖尿病再灌注损伤+格列齐特组比较,糖尿病缺血预处理+格列齐特组均降低了糖尿病大鼠心肌缺血预处理后缺血再灌注损伤冠脉流出液中LDH、CK、CK-MB释放量（P<0.05）;也使Kir6.2 mRNA及蛋白表达明显增加（P<0.05）;但SUR2A mRNA表达差异无统计学意义。与糖尿病再灌注损伤+格列齐特组比较,糖尿病缺血预处理+格列齐特组SUR2A蛋白表达水平也增加明显（P<0.05）。结论 格列齐特对心肌缺血预处理的保护作用无不利影响,反而能改善2型糖尿病大鼠心肌缺血预适应的保护作用。     

Expression of Multidrug Resistance-Associated Protein (MRP) in Human Retinal Pigment Epithelial Cells and Its Interaction with BAPSG,a Novel Aldose Reductase Inhibitor

Purpose. The objective of this study was to determine the expression and activity of multidrug resistance–associated protein (MRP) in the retinal pigment epithelial (RPE) cells and to further assess whether BAPSG, a novel anionic aldose reductase inhibitor, interacts with MRP. Methods. Functional and biochemical evidence for MRP was obtained in a human retinal pigment epithelial (ARPE–19) cell line and primary cultures of human retinal pigment epithelial (HRPE) cells. Fluorescein accumulation and efflux in the presence and absence of MRP inhibitors was used to obtain functional evidence for MRP. Western blots and RT–PCR were used to obtain biochemical evidence for MRP1. The influence of MRP inhibitors on BAPSG accumulation and efflux in ARPE–19 cells was determined to understand its interaction with MRP. Results. MRP inhibitors increased fluorescein accumulation and reduced efflux in RPE cells. Both cell types exhibited a 190–kDa western blot band corresponding to MRP1 protein and a 287 bp RT–PCR band corresponding to MRP1 mRNA. MRP inhibitors reduced BAPSG efflux and increased its accumulation in ARPE–19 cells. Conclusions. MRP is functionally and biochemically active in human RPE cells. Anionic BAPSG is a likely substrate for MRP.     

丁公藤注射液促进骨质疏松性大鼠骨折愈合的作用机制研究

目的 研究丁公藤注射液(injection erycibe，IE)对骨质疏松性大鼠骨折愈合的促进作用及其作用机制。方法 通过卵巢切除术和骨折术建立骨质疏松性骨折大鼠模型，50只健康SD大鼠(♀)随机分为假手术组、模型组和1，2，4mL·kg^-1 IE组，检测大鼠股骨骨密度、生物力学指标和血清钙、碱性磷酸酶含量，HE染色观察大鼠骨骼病理组织学变化。对分离的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)进行药物干预，分为对照组、5，10，20mg·L^-1 IE组、诱导组(成骨诱导培养基诱导分化)、NC siRNA组、NCK1 siRNA组、IE+NC siRNA组和IE+NCK1 siRNA组，采用MTT检测MSCs增殖，RT-qPCR检测成骨分化相关基因ALP、Runx2和Osterix mRNA水平，Western blotting检测NCK1和p-AKT蛋白表达水平，茜素红染色观察MSCs钙结节数量。结果 与模型组比较，2，4mL·kg^-1 IE组大鼠股骨骨密度、生物力学指标、血清生化指标均明显升高(P<0.05)，且呈剂量依赖性，4mL·kg^-1 IE组效果最佳。与对照组比较，10，20mg·L^-1IE组MSCs增殖和成骨分化相关基因表达量明显升高(P<0.05或P<0.01)，NCK1和p-AKT蛋白表达水平明显升高(P<0.05)，MSCs内钙结节量明显增加，且呈剂量依赖性，20mg·L^-1 IE组效果最佳。与IE+NC siRNA组比较，IE+NCK1 siRNA组成骨分化相关基因表达量明显降低(P<0.01)，NCK1和p-AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论 IE通过促进NCK1蛋白表达，激活AKT信号通路，对骨质疏松性大鼠骨折愈合起到一定促进作用。