补阳还五汤冻干粉对HFL1细胞HMGB1/RAGE/CDc42信号通路的干预作用

目的观察补阳还五汤冻干粉对高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group box-1 Protein,HMGB1)诱导的HFL1细胞中晚期糖基化终产物受体(receptor of advanced glycation end-product,RAGE)/细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,CDc42)信号通路的影响。方法采用MTT法检测补阳还五汤冻干粉对A549、HFL1增殖的影响;采用Western blot法检测细胞总蛋白中CDc42的表达,采用ELISA法检测细胞外RAGE、TNF-α的表达。结果补阳还五汤冻干粉对HFL1细胞的IC50为11%。在HFL1细胞中,5%、10%、15%冻干粉均能下调CDc42、RAGE、TNF-α的表达,以5%冻干粉组下调最明显。结论补阳还五汤冻干粉可通过对HFL1细胞中HMGB1/RAGE/CDc42信号通路的干预从而调节肺纤维化的发生发展。     

HMGB1对人肺成纤维细胞ERK1/2-NF-κB信号通路的影响及补阳还五汤含药血清的干预作用

目的:观察肺纤维化中诱导免疫损伤的高迁移率族蛋白Box-1(high mobility group Box-1 protein,HMGB1)刺激人肺成纤维细胞(HFL1)后细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2),核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路的活化情况,以及补阳还五汤含药血清对HMGB1刺激HFL1后以上信号通路的干预作用。方法:采用含药血清药理学的实验方法,以5%,10%,15%,20%的补阳还五汤含药血清和空白血清来干预HMGB1诱导刺激的HFL1细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞总蛋白中ERK1/2,胞浆胞核中NF-κB p65蛋白的表达。结果:与空白组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P0.05,P0.01);与20%空白血清预培养加HMGB1组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P0.05);与HMGB1刺激组比较,补阳还五汤含药血清各组能够降低ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达,其中15%和20%补阳还五汤含药血清组降低ERK1/2的表达(P0.05);胞浆10%补阳还五汤含药血清组和胞核20%补阳还五汤含药血清组降低NF-κB p65蛋白的表达(P0.05);15%补阳还五汤含药血清组降低IL-1β的含量(P0.05)。结论:补阳还五汤含药血清在体外实验中,可抑制HMGB1引起的人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路的活化,减少IL-1β等炎症因子分泌。提示补阳还五汤可能通过调控人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路,防治肺纤维化的发生发展。     

补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞间质转化的影响

目的:研究补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)间质转化(End MT)的调控作用,并从Jagged1/Notch1信号传导进一步分析其作用机制。方法:以53. 36 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清。体外培养HPAEC细胞,转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立End MT模型,设立空白组(10%空白血清),模型组(10%空白血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清高剂量组(10%含药血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清中剂量组(5%含药血清+5%空白血清+TGF-β1)和补阳还五汤含药血清低剂量组(2. 5%含药血清+7. 5%空白血清+TGF-β1) 5组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力,transwell和划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光观察内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子1(CD31),血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和间质细胞标志物成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Notch1,Jagged1及CBF1蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞增殖能力、迁移能力均显著增强(P 0. 01),CD31和VE-cadherin表达呈下降趋势,FSP1和α-SMA表达呈上升趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达显著上调(P 0. 01)。补阳还五汤含药血清干预后,与模型组比较,细胞增殖能力、迁移能力均明显减弱(P 0. 05,P 0. 01),且CD31和VE-cadherin表达呈上升趋势,FSP1和α-SMA表达呈下降趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01),随着含药血清浓度的增加,作用越明显。结论:补阳还五汤含药血清可部分抑制人肺动脉内皮细胞发生间质转化,这一过程可能与调控Jagged1/Notch1信号有关。     

补阳还五汤干预缺氧预适应成纤维细胞促间充质干细胞迁移的机制

目的:探讨补阳还五汤干预缺氧预适应心脏成纤维细胞促间充质干细胞迁移的相关机制。方法:以6.5,13,26 g·kg~(-1)补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠7 d后,制备补阳还五汤含药血清及空白血清。0.56,1.12,2.25 g·m L~(-1)含药血清干预缺氧预适应的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CFs培养液中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α),单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)及肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的含量,mRNA及蛋白表达情况,并将补阳还五汤干预缺氧预适应CFs的培养液干预间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)后,检测MSC的细胞迁移能力。结果:与常氧组比较,缺氧可以显著促进CFs分泌HIF-1α,MCP-1及HGF(P0.01),同时给予缺氧预处理的CFs培养液干预MSC后,HIF-1α,MCP-1及HGF的水平亦显著升高(P0.01),当给予不同剂量的补阳还五汤含药血清干预后,与缺氧组比较,它们的表达进一步升高(P0.05,P0.01);而给予HIF-1α抑制剂YC-1处理后,补阳还五汤各组可升高MCP-1,HGF的表达(P0.05)。结论:补阳还五汤协同缺氧预适应CFs旁分泌效应能够促进MSC迁移,其可能机制是通过上调HIF-1α的表达,提高迁移因子MCP-1,HGF的表达而实现的。     

补阳还五汤对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7重度内质网应激Caspase12、Fas-Fasl、Bcl-2信号通路的影响

目的:研究补阳还五汤对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞RAW264.7重度内质网应激(ERS)的抗凋亡作用及其机制。方法:Western bolt法检测不同浓度、不同时间LPS诱导下巨噬细胞RAW264.7 ERS的标志蛋白GRP78的表达,建立重度ERS模型。将细胞分别分为空白对照组(20%胎牛血清)、模型对照组(20%胎牛血清+LPS 40μg/ml)、空白血清组(20%空白血清+LPS 40μg/ml)、15 g/kg补阳还五汤5%、10%、20%含药血清组、2 mmol/L 4-苯基丁酸组、2 mmol/L 4-苯基丁酸联合15 g/kg补阳还五汤20%含药血清组。用流式细胞术、荧光素FITC标记的AnnexinV与碘化丙啶(PI)结合染色检测细胞凋亡情况。Western bolt检测补阳还五汤含药血清对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7重度ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、内切核糖核酸酶肌醇需要酶1(IRE1)表达的影响。用RT-PCR实验方法检测补阳还五汤含药血清对凋亡通路中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(Caspase12)、Fas、Fas配体(Fasl)、B-淋巴细胞瘤2(Bcl-2)表达的影响。结果:与空白对照组比较,模型对照组早凋率、晚凋率及总凋亡率均显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,15 g/kg补阳还五汤10%、20%含药血清组与2 mmol/L 4-苯基丁酸组均能明显降低重度ERS时引起的细胞凋亡(P<0.01);与空白对照组比较,模型对照组GRP78、IRE1、PERK蛋白表达均有显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,15 g/kg补阳还五汤各含药血清组可不同程度降低GRP78的蛋白表达(P<0.05或P<0.01),15 g/kg补阳还五汤10%、20%含药血清组可不同程度下调PERK、IRE1的蛋白表达(P<0.01);2 mmol/L 4-苯基丁酸组可有效下调GRP78、IRE1、PERK的蛋白表达(P<0.01);与空白对照组比较,模型对照组中Caspase12、Fas、Fasl的mRNA表达显著上调(P<0.01),Bcl-2的mRNA表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,补阳还五汤各含药血清组及2 mmol/L 4-苯基丁酸组能显著下调Fas的mRNA表达,上调Bcl-2的mRNA表达,15 g/kg补阳还五汤10%、20%含药血清组能显著下调Caspase12、Fasl的mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。结论:补阳还五汤改善巨噬细胞RAW264.7重度ERS的状态,通过Caspase12、Bcl-2、Fas-Fasl信号通路调控细胞在重度ERS状态下出现的细胞凋亡。     

补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏肌成纤维细胞异常转化的机制研究

目的:通过观察补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏TGF-β_1/Smads通路信号分子的表达作用,阐释补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏肌成纤维细胞异常转化,延缓肾脏病理损伤的作用。方法:将20只雄性盐抵抗大鼠(dahl salt resistant rat,SS)随机分为正常对照组,中药对照组,20只雄性dahl盐敏感大鼠(dahl salt sensitive rat,DS)随机分为模型组和中药治疗组,每组10只。高盐饲料喂养12 d后,中药对照组和中药治疗组予以补阳还五汤灌胃治疗,每日1次,共治疗5周。治疗结束后取大鼠左肾组织检测TGF-β_1Smad2 Smad7及α-SMA的mRNA表达和P-Smad2蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β_1Smad2和α-SMA的mRNA表达升高(P0.05),Smad7mRNA表达降低(P0.05),P-Smad2蛋白表达升高(P0.05);补阳还五汤治疗后,与模型组比较中药治疗组TGF-β_1Smad2和α-SMA的mRNA表达降低(P0.05);Smad7mRNA表达升高(P0.05),P-Smad2蛋白表达降低(P0.05)。结论:补阳还五汤可能是通过调节肾脏TGF-β_1/Smads通路相关信号分子的表达抑制肌成纤维细胞异常转化,延缓肾脏病理损伤。     

补阳还五汤通过调节血管平滑肌细胞Cx43作用于动脉粥样硬化的研究

目的:研究补阳还五汤抗同型半胱氨酸(Hcy)诱导血管平滑肌细胞(HUVSMC)增殖的作用及其机制。方法:以14.9g/kg补阳还五汤剂量连续灌胃SD大鼠1周,提取补阳还五汤含药血清,并与胎牛血清(FBS)按一定比例,配置成20%(20%补阳)、10%(10%补阳+10%FBS)、5%(5%补阳+15%FBS)补阳还五汤含药血清组组。血管平滑肌细胞长满培养瓶或培养板后,用同型半胱氨酸分组造模,将细胞随机分为10组:空白组、模型组、乙酰半胱氨酸(NAC)组、20%、10%、5%补阳还五汤含药血清组、NF-kB阻断剂PDTC组、MAPK阻断剂SB20组、ERK阻断剂PD98组、PKC阻断剂Stau组。蛋白质印迹法(Western blot)测定血管平滑肌细胞Cx43蛋白的表达量;RT-PCR技术检测各组血管平滑肌细胞Cx43 mRNA水平;建立血管内皮-平滑肌细胞共培养体系,Western blot分别检测内皮细胞和平滑肌细胞内Cx43的表达;电镜检测血管内皮-平滑肌细胞共培养体系细胞缝隙连接的变化。结果:Western blot实验中,平滑肌细胞与共培养体系中的内皮细胞、平滑肌细胞的Cx43蛋白表达水平,模型组与空白组比较,模型组中Cx43蛋白表达量均显著升高;乙酰半胱氨酸组,20%、10%、5%补阳还五汤含药血清组与模型组比较,Cx43蛋白表达显著下调。RT-PCR实验中,模型组与空白组比较,模型组中Cx43mRNA表达量显著升高;乙酰半胱氨酸组、20%、10%、5%补阳还五汤含药血清组与模型组比较,Cx43mRNA表达量显著降低。电镜检测细胞缝隙连接实验中:模型组与空白组比较,内皮-平滑肌细胞之间形成的缝隙连接遭到破坏,而20%补阳还五汤含药血清组却能形成与正常组相似的连接。结论:补阳还五汤可能通过下调Cx43蛋白以及其mRNA的表达,改善细胞之间的缝隙连接,减少血管平滑肌细胞增殖而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

补阳还五汤对肺纤维化小鼠中介导细胞自噬的mTOR蛋白的调控机制探讨

目的:观察肺纤维化中介导自噬的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达、自噬在肺纤维化形成中的作用,探索补阳还五汤对肺纤维化的治疗机制。方法:144只C57BL/6小鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,强的松组,补阳还五汤高、中、低剂量组,每组24只,假手术组小鼠给予气管注入等量的0. 9%生理盐水,其余各组采用博莱霉素(bleomycin,BLM)气管注入法复制肺纤维化模型,造模后假手术组、模型组给予0. 9%生理盐水(0. 01 g·kg~(-1)·d~(-1)),补阳还五汤高剂量组给予补阳还五汤(28. 08 g·kg~(-1)·d~(-1)),补阳还五汤中剂量组给予补阳还五汤(14. 04 g·kg~(-1)·d~(-1)),补阳还五汤低剂量组给予补阳还五汤(7. 02 g·kg~(-1)·d~(-1)),强的松组给予强的松(0. 455 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,于造模后第7,14,28天分批提取样本。采用苏木素-伊红(HE)及马松(Masson)染色观察小鼠肺泡炎和纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织mTOR,核糖体S6,微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associate protein 1 light chain 3,MAP1LC3-Ⅱ)的表达;电镜检测观察小鼠肺组织自噬情况。结果:与假手术组比较,模型组小鼠在7,14,28 d肺泡炎及肺纤维化显著(P 0. 01);与模型组比较,给药组各时间点肺泡炎和肺纤维化程度均有不同程度的改善(P 0. 05),补阳还五汤高剂量组下降最明显(P 0. 05)。与假手术组比较,模型组小鼠肺组织mTOR,S6蛋白表达水平显著上调(P 0. 01),与模型组比较,各给药组mTOR,S6蛋白表达下调(P 0. 01);与假手术组比较,模型组小鼠肺组织LC3-Ⅱ表达水平下调(P 0. 01),与模型组比较,各给药组LC3-Ⅱ上调(P 0. 01)。假手术组细胞形态良好,未见自噬。模型组细胞形态最差,存在个别自噬。各给药组细胞形态及自噬数量好于模型组,其中补阳还五汤高、中剂量组自噬数量最多。结论:在BLM所致小鼠肺纤维化形成的过程中,小鼠肺组织中mTOR蛋白被激活,自噬抑制,mTOR蛋白通过抑制自噬参与了肺纤维化的发病;补阳还五汤对BLM所致小鼠肺纤维化有一定的治疗作用,其机制可能与其下调介导细胞自噬的mTOR蛋白表达有关。     

黄芪糖蛋白对肺纤维化小鼠肺组织中α-SMA表达的影响

目的观察黄芪糖蛋白(Huang Qi Glycoprotein,HQGP)对肺纤维化小鼠肺组织病理形态、细胞因子及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。方法将80只雌性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、HQGP组,每组20只。空白组鼻腔滴注生理盐水,其余3组鼻腔滴注博来霉素(15 mg/kg)诱导肺纤维化,造模后第1天起,各组小鼠给予相应药物腹腔注射,连续治疗14 d。给药后的第7、28天分两批取材,用HE染色和ELISA测定肺组织TNF-α和IL-1β含量来观察对肺泡炎程度的影响;Masson染色评价对肺纤维化程度的影响;采用免疫组化和Western Blot法分别检测肺组织中α-SMA蛋白表达。结果与模型组比较,第7、28天HQGP组小鼠的肺泡炎、肺纤维化程度明显减轻;第7、28天HQGP组小鼠肺组织中α-SMA蛋白表达显著降低(P0.01)。结论 HQGP对肺纤维化的干预机制可能与抑制肺组织中α-SMA的表达有关。     

补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及细胞周期的影响。方法:以6.5,13,26 g·kg~(-1)补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠1周,制备3种补阳还五汤含药血清和空白血清。将BMSCs分为补阳还五汤6.5 g·kg~(-1)组(用含10%6.5 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤13 g·kg~(-1)组(用含10%13 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤26 g·kg~(-1)组(用含10%26 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),空白组(用含10%空白血清培养)。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组BMSCs的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)和磷酸化丝(苏)氨酸蛋白酶(p-Akt)(Ser473)蛋白的表达。结果:13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用BMSCs 48,72 h后,细胞增殖活性较空白组明显升高(P0.05);3种补阳还五汤含药血清作用48 h后,BMSCs在S期的细胞比率随着药物浓度的升高而升高,与空白组比较有统计学意义(P0.05);13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用48 h后,PI3K和p-Akt(Ser473)蛋白表达较空白组显著增强(P0.01)。结论:13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清可能通过活化PI3K/Akt信号通路促使细胞进入S期,增强BMSCs增殖活性。     

三七总皂苷提取物Rg1对CsA慢性肾毒性大鼠肾组织TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对环孢素A(Cs A)引起的肾间质纤维化的保护作用。方法:雄性SD大鼠24只,随机分为正常组、模型组、G-Rg1干预组,采用低盐饮食及Cs A灌胃的方法建立Cs A慢性肾纤维化的模型。观察Rg1对大鼠尿量、肾功能、肾脏病理及纤维化指标TGF-β1、α-SMA表达的影响。结果:Rg1能减轻肾组织的病理改变,并下调TGF-β1、α-SMA在肾组织的表达。结论:Rg1通过抑制TGF-β1及α-SMA的表达而发挥保护肾脏的作用。     

二苯乙烯苷对糖尿病大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌炎症因子的影响

目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌炎症因子的影响。方法:分别以正常糖(NG)、高糖(HG)、糖基化终产物(AGE)及过氧化氢(H2O2)孵育大鼠肾小球系膜细胞,CCK细胞计数法检测大鼠系膜细胞的OD值,判断细胞增殖情况。比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH-Px)的活性、丙二醛(MDA)含量的变化。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测方法检测培养细胞上清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)蛋白浓度,Western Blot检测系膜细胞中环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:HG、AGE和H2O2能明显诱导系膜细胞增殖和氧化应激增强,而TSG可明显改善系膜细胞增殖和氧化应激状态,同时三种诱因均可使肾小球系膜细胞MCP-1、ICAM-1和COX-2蛋白分泌增加;TSG预处理后可抑制上述因素诱导的炎症因子分泌。结论:TSG可抑制糖尿病大鼠系膜细胞增殖和调控炎症因子表达,从而在防治糖尿病肾病发生发展过程中发挥重要作用。     

电针“丰隆”穴对高脂血症大鼠腹腔巨噬细胞炎性反应因子表达的影响

目的:观察电针"丰隆"穴对高脂血症大鼠腹腔巨噬细胞炎性反应因子表达的影响,探讨电针治疗高脂血症的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、高脂组、高脂+普通组、高脂+电针组及高脂+普通+电针组,每组8只。采用高脂饮食饲料饲喂法造模,造模28d后,高脂+普通组、高脂+普通+电针组改用普通饲料喂养,高脂+电针组及高脂+普通+电针组电针"丰隆"穴,治疗30min,每天1次,连续治疗28d。治疗结束后,检测各组大鼠血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,流式细胞术及酶联免疫吸附法检测各组大鼠腹腔巨噬细胞中单核趋化因子-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素-1γ(interleukin-1γ,IL-1γ)的表达。结果:高脂组大鼠血浆TC、LDL-C较正常对照组明显上升(P0.01);高脂+普通组大鼠血浆TC、LDL-C与高脂组比较明显下降(P0.01);电针治疗后,高脂+电针组及高脂+普通+电针组大鼠血浆TC、LDL-C明显下降(P0.01),TG、HDL-C变化不明显(P0.05)。高脂组大鼠腹腔巨噬细胞内MCP-1、ICAM-1及IL-1γ的表达较正常对照组显著升高(P0.01);高脂+普通组大鼠腹腔巨噬细胞内MCP-1、ICAM-1及IL-1γ的表达较高脂组明显下降(P0.05);高脂+普通+电针组大鼠腹腔巨噬细胞内MCP-1、ICAM-1及IL-1γ的表达较高脂+普通组显著下降(P0.01)。结论:电针"丰隆"穴能够明显下调高脂血症大鼠血脂中TC、LDL-C水平,可能与其下调高脂血症大鼠巨噬细胞中MCP-1、ICAM-1及IL-1γ的表达有关。     

三参方对慢性萎缩性胃炎大鼠血浆ET-1和6-k-PGF1α含量的影响

目的:观察三参方对慢性萎缩性胃炎大鼠血浆内皮素-1 (ET-1)和6-酮-前列腺素F1α(6-k-PGF1α)含量的影响,以探讨其慢性萎缩性胃炎的作用机制.方法:将实验大鼠随机分为正常组、模型组、三参方高剂量组、低剂量组和维霉素对照组、三九胃泰对照组,采用复合因素造模法复制大鼠慢性萎缩性胃炎模型,实验8周后,测定各组大鼠血浆ET-1和6-k-PGF1α的含量变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠血浆ET-1明显升高、6-k-PGF1α明显降低(P＜0.01).与模型组比较,各治疗组大鼠血浆ET-1明显降低、6-k-PGF1α含量明显升高(P＜0.01).高剂量组ET-1的含量低于三九胃泰组和维霉素组(P＜0.05);6-k-PGF1α的含量高于三九胃泰组和维霉素组(P＜0.01或P＜0.05).结论:三参方通过降低ET-1、升高6-k-PGF1α的含量、保护血管内皮功能、改善胃黏膜的血液循环治疗慢性萎缩性胃炎.     

莱菔硫烷诱导HepG-2细胞G2/M期阻滞及其对Cdk1和CyclinB1蛋白表达的影响

目的：研究莱菔硫烷（SFN）在体外对人肝癌HepG-2细胞G2/M期的阻滞作用,并探讨其分子作用机制。方法：10、20、40μmol·L-1的SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48h后,采用流式细胞仪检测SFN对HepG2细胞周期的影响;WesternBlot法检测SFN对HepG2细胞内Cdk1、p-Cdk1（Thr14）和CyclinB1蛋白表达的影响。结果：SFN作用于HepG-2细胞48h后,随着SFN浓度的增大,G2/M期细胞比例逐渐升高,当SFN浓度达到40μmol·L-1时,G2/M期细胞比例达到31.95%,且出现凋亡峰;随SFN浓度的增大,细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达量显著降低（P〈0.01或P〈0.05）,同时p-Cdk1（Thr14）的表达显著升高（P〈0.01或P〈0.05）。结论：SFN可诱导人肝癌HepG-2细胞发生G2/M期阻滞;SFN可通过下调HepG-2细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达、上调p-Cdk1（Thr14）的蛋白表达水平,进而抑制Cdk1-CyclinB1复合物的形成和活化使人肝癌HepG-2细胞阻滞在G2/M期。     

复方丹参饮对胰岛素抵抗大鼠血管内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达的研究

目的:探讨复方丹参饮对胰岛素抵抗(IR)大鼠血清中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达。方法:将60只Wistar雄性大鼠适应性的喂养1周,随机分为生理盐水组、胰岛素抵抗组、复方丹参饮预防组(中药预防组)复方丹参饮治疗组(中药治疗组)、罗格列酮组(西药对照组),每组分为12只。采用高脂高糖高胆固醇饮食喂养,建立大鼠IR模型。喂养16周以后采用酶联免疫法检测各组Wistar大鼠血清中ICAM-1、VCAM-1的含量。结果:与生理盐水组比较,除复方丹参饮预防组差异无统计学意义外(P>0.05),其余各组大鼠血清中ICAM-1、VCAM-1的含量均升高(P<0.05),有统计学意义;与胰岛素抵抗组相比较,西药对照组、中药治疗组与中药预防组均能减少大鼠血清中ICAM-1、VCAM-1的含量(P<0.05)。结论:认为复方丹参饮具有抑制大鼠血清血管内皮细胞ICAM-1、VCAM-1的过度表达作用,对胰岛素抵抗大鼠的血管内皮细胞具有保护功效。     

防风通圣汤对乙肝慢加急性肝衰竭早期血清内毒素及程序性死亡因子-1/配体-1的影响

目的:明确防风通圣汤对乙肝慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)早期的血清内毒素(ET)及程序性死亡因子-1/配体-1(PD-1/PD-L1)的影响,深入了解防风通圣汤治疗乙肝慢加急性肝衰竭早期的作用机制。方法:入组69例HBV-ACLF早期患者,均给予常规抗病毒、护肝退黄及支持治疗。将患者随机分配至口服防风通圣汤的观察组35例,服用安慰剂的对照组34例,观察期3周。检测患者治疗前及治疗后1,2,3周的血清ET水平,血清CD4+,CD8+T细胞的PD-1/PD-L1的表达,肝功能[丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),白蛋白(Alb),总胆红素(TBIL),直接胆红素(DBIL)]及凝血功能[凝血酶原时间(PT),凝血酶原活动度(PTA)],前后比较以明确防风通圣汤作用效果。结果:与本组治疗前比较,两组患者在治疗3周后均出现血清ET显著下降(P0.01),血清CD4+PD-1+,CD4+PD-L1+,CD8+PD-1+,CD8+PD-L1+表达显著下降(P0.01),ALT,AST,TBIL,DBIL,PT显著下降(P0.01),Alb及PTA显著升高(P0.01)。与对照组同时间点比较,观察组治疗后第1,2,3周血清ET更低(P0.01);观察组第2,3周血清CD4+PD-1+,CD4+PD-L1+,CD8+PD-1+,CD8+PD-L1+表达降低(P0.05,P0.01);观察组第1,2,3周血清ALT,AST,TBIL,DBIL水平降低(P0.05,P0.01);观察组第2,3周血清PT明显下降(P0.05),观察组第2,3周PTA显著升高(P0.01)。结论:防风通圣汤可能通过降低患者血清ET水平和血清CD4+,CD8+T细胞PD-1/PD-L1表达水平,从而达到治疗HBV-ACLF早期作用。     

眼针疗法对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠神经激肽1表达的影响

目的探讨眼针疗法对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)的治疗作用及机制。方法将40只Wistar大鼠随机分为4组,对照组、模型组、匹维溴铵组和眼针组,每组10只。采用慢性应激结合束缚方法建立D-IBS模型,眼针组采用眼针治疗,针刺下焦区、大肠区、肝区、脾区;匹维溴铵组用匹维溴铵灌胃治疗,两组均治疗7天。HE染色观察结肠组织病理学变化;实时定量PCR测定结肠组织神经激肽1(NK1)的mRNA表达变化;免疫组化法测定结肠组织NK1的蛋白表达变化。结果各组大鼠结肠组织病理学无差异。与对照组比较,模型组结肠组织中NK1的mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,眼针组结肠组织中NK1的mRNA表达水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,匹维溴铵组结肠组织中NK1的mR-NA表达水平无统计学意义(P>0.05)。NK1免疫反应阳性细胞在结肠黏膜层、腺腔内、肌间神经丛、黏膜下神经丛等部位。与对照组比较,模型组结肠组织中NK1的蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,眼针组和匹维溴铵组结肠组织中NK1的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论眼针能够降低D-IBS模型大鼠结肠组织中NK1的表达,从而对D-IBS起到治疗作用。     

人参皂苷Rg1诱导人肝HL-7702细胞糖皮质激素受体报告基因表达的作用

目的探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,G-Rg1)对人肝HL-7702细胞糖皮质激素受体(GR)的调节作用。方法将含有糖皮质激素受体反应元件(GRE)的荧光素酶报告基因的表达质粒载体pGRE-tk-LUC与内参照基因载体质粒pRL-SV40,通过脂质体介导瞬时转染至人肝HL-7702细胞中,利用双荧光素酶报告基因检测系统,观察报告基因的表达变化;利用Western blotting方法检测药物对细胞GR蛋白表达的影响。结果G-Rg1与地塞米松均可诱导pGRF-tk-LUC报告基因表达,且呈剂量依赖性,而且这种诱导作用可以被糖皮质激素受体阻断剂RU486(Mifepristone)所阻断,G-Rg1对细胞GR蛋白表达有显著的抑制作用。结论G-Rg1在体外能够表现出一些类似糖皮质激素样的生物活性,可能是GR的配体。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠细胞间黏附分子-1表达的影响

目的：研究电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠ICAM-1表达的影响。方法：采用SD大鼠80只,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、电针组,每组20只。采用大脑中动脉线栓法制备MCAO缺血再灌注模型,神经功能障碍评分参照Zea—Longa评分标准;分别应用免疫组化SABC方法检测脑缺血再灌注大鼠缺血脑区微血管内皮细胞ICAM-1的表达和ELISA法检测外周血中sICAM-1含量及电针对其的影响。结果：脑缺血再灌注后,缺血脑区微血管内皮细胞CAM-1表达水平和外周血中sICAM-1含量均增高（模型组与正常组、假手术组比较P〈0．01）;电针治疗后缺血脑区微血管内皮细胞ICM-1表达水平和外周血中sICAM-1含量下调（电针组与模型组比较P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注后缺血脑区微血管内皮细胞释放ICAM-1,对脑组织产生炎性损伤;电针治疗可减少ICAM-1的表达,从而发挥脑保护作用。