灰色关联度分析法评价半枝莲药材质量

目的:基于灰色关联度分析法,建立不同产地半枝莲药材的质量评价方法.方法:以14个不同产地半枝莲药材样品作为研究对象,测定其总黄酮、野黄芩苷、野黄芩素、木犀草素、芹菜素、浸出物的含量,建立半枝莲药材的灰色关联度及其质量评价的模型.结果:14个产地半枝莲药材样品的相对关联度在0.267～0.653之间,其中2个产地半枝莲药...     

土鳖虫药材的灰色关联度质量评价研究

目的:建立土鳖虫药材质量评价方法。方法:采用灰色关联度法,对不同地区土鳖虫药材中5种主要成分的含量,以定义的相对关联度为测度,构建质量评价模型。结果:应用该方法建立了土鳖虫不同商品药材的质量评价模型。结论:该方法及模型可用于土鳖虫药材质量评价。     

灰色关联度分析法评价北豆根药材质量研究

目的:建立北豆根药材质量评价方法。方法:采用灰色关联度分析法,对不同地区北豆根药材商品中4种主成分的含量,以相对关联度为测度,构建灰色关联度分析质量评价模型。结果:应用该方法建立了北豆根药材商品的质量评价模型。结论:该方法及模型可用于北豆根、药材商品质量评价。     

基于灰色关联度法评价西红花饮片质量

目的依据灰色关联度法评价西红花饮片质量。方法测定20批不同产地、商品等级样品中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ、醇浸出物、水浸出物、总灰分、酸不溶性灰分、干燥失重7种主要指标。采用灰色关联度法,以相对关联度为评价指标,构建饮片的质量评价模型。结果各批饮片的相对关联度在0.309 6～0.639 6之间,0.50的有10批,来自上海的较高,表明该产区饮片质量相对较优,与实地调查情况相一致。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于西红花饮片的等级划分和综合质量评价。     

基于灰色关联度法评价栀子药材质量

目的:依据灰色关联分析方法评价栀子药材质量。方法:收集20份不同产地栀子药材样品,测定其栀子苷,京尼平1-β-D-龙胆二糖苷,绿原酸,西红花苷-Ⅰ,京尼平苷酸,西红花苷-Ⅱ6种主要成分的含量,采用灰色关联度法,以定义的相对关联度为测度,构建栀子药材质量评价模型。结果:应用该方法建立了栀子药材商品的质量评价模型,收集栀子代表产区的20批栀子商品药材进行客观地评价,得到各评价单元序列的相对关联度在0.309 7~0.524 4,单元序列的相对关联度0.450的样本有7批,这些批次样本的质量评价较高,其中1,2,7,12,19批样品质量排在前5,说明该样品产区的栀子质量相对较好,同时观察实际栀子商品药材质地,这与目前栀子商品规格划分标准(成熟程度、是否饱满和色泽深浅)情况相一致,充分说明了运用灰色关联分析结果与药材的实际情况相符。结论:该研究为栀子药材商品的综合质量评价提供了一种新方法。     

灰色关联度法评价麸炒白术质量

目的:依据灰色关联度分析方法评价麸炒白术质量。方法:收集15份不同产地麸炒白术样品,测定其白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、5-羟甲基糠醛、东莨菪内酯5种主要成分的含量,采用灰色关联度法,以定义的相对关联度为测度,构建麸炒白术质量评价模型。结果:应用该方法建立了麸炒白术的质量评价模型,收集白术代表产区的15批麸炒白术进行客观评价,得到各评价单元序列的相对关联度为0.320～0.706,其中第12、13、14批次样品质量排在前3,说明该样品产区的麸炒白术质量相对较好。结论:该研究为麸炒白术的综合质量评价提供了一种新方法。     

灰色关联度分析法评价僵蚕药材质量研究

目的:建立僵蚕药材质量评价方法。方法:采用灰关联度法,对不同地区僵蚕药材中5种主要成分的含量,以定义的相对关联度为测度,构建质量评价模型。结果:应用该方法建立了僵蚕不同商品药材的质量评价模型。结论:该方法及模型可用于僵蚕药材质量评价。     

基于灰色关联度方法评价不同产地大黄质量

目的:利用灰色关联法评价不同产地大黄的质量差异。方法:采用灰色思维概念构建基于相对灰色关联度的中药质量评价方法,选取大黄中没食子酸、表儿茶素等14个评价指标评价27个不同产地大黄质量。结果:依据相对灰色关联度的大小,其中相对关联度0.439的样本量有9批,这些样本主要集中在四川和甘肃陇南,品质较优,均具有"红肉白筋,体重质坚,星点环列,味苦"的优良性状特征;相对关联度0.359的样本主要集中在四川若尔盖、四川平武、四川巴中、西藏林芝等地,样品的排名相对靠后,样品的性状与"药材个头普遍较小,体轻质松,内部有糠心"等劣药特征相一致。结论:本方法使用简单,易于计算,能客观反映大黄药材的质量,也可对基于多种化学成分指标的其他中药材的质量进行综合全面的评价,结果更为客观、科学、准确。     

基于熵权法和灰色关联度分析法的不同加工方式诃子药材质量评价

目的：通过测定浸出物、粉末色差值、灰分、水分、鞣质和没食子酸含量,结合熵权法和灰色关联度分析法评价不同方式加工的诃子药材的质量。方法：按照《中华人民共和国药典》 2020年版方法对诃子进行浸出物、粉末色差值、灰分、水分和鞣质含量测定;采用高效液相色谱法测定没食子酸含量。采用熵权法计算浸出物等6个指标的权重,同时结合灰色关联度分析法计算各指标的相对关联度,对21份诃子的质量进行排序。结果：诃子药材浸出物、粉末色差值、灰分、水分、鞣质质量分数和没食子酸质量分数分别为38.68%～62.04%、33.87%～47.30%、3.39%～4.20%、7.10%～12.55%、9.60%～22.56%、2.25%～5.54%;权重分别为0.169 3、0.166 4、0.168 5、0.168 5、0.165 3、0.162 0;相对关联度为0.301 0～0.598 5,其中17号样品的关联度最高（0.598 5）。结论：以浸出物、粉末色差值、灰分、水分、鞣质含量和没食子酸含量为评价指标,采用熵权法和灰色关联度法可评价诃子药材的质量。     

滇龙胆居群遗传多样性和遗传结构分析

目的 揭示不同分布区滇龙胆Gentiana rigescens的遗传多样性与遗传结构。方法 基于GBS(genotyping-by-sequencing)简化基因组(reduced-representation genome sequencing,RRGS)技术对采自云南、四川和贵州的19个居群147株滇龙胆进行测序;利用样本SNPs数据集结合聚类树分析、主成分分析、遗传结构分析、Mantel检验等方法,从基因组水平研究滇龙胆居群的遗传多样性与遗传结构;结果 聚类树分析、主成分分析及遗传结构分析显示,不同分布区采集的样品有明显的基因型差异;依据样品地理来源,19个居群大致可分为横断山区(分布于滇西北和川西南的居群)及云贵高原(分布于滇西、滇中、滇东南及贵州的居群)2个亚群。通过观测观测杂合度(observed heterozygosity,Ho)、期望杂合度(expected heterozygosity,He)、多态信息含量(polymorphic information,PIC)、Shannon多样性指数(shannon’s diversity index,I)、Nei’s多样性指...     

滇龙胆化学成分和药理作用研究进展

滇龙胆Gentiana rigescens为传统中草药,主产于中国云南、四川等地,具有悠久的药用历史,作为民间重要药物使用并记载。滇龙胆为龙胆科Gentianaceae多年生草本植物,主要化学成分为环烯醚萜苷类、三萜类、木脂素类、黄酮类、生物碱类、苯甲酸酯类和其他类化学成分,其主要药理作用包括保肝、利胆、镇痛、抗炎、抗氧化、促神经活化等。该文对滇龙胆中化学成分及其药理活性进行归纳总结,为滇龙胆的进一步开发和利用提供参考。     

栽培滇龙胆药材不同极性部位紫外吸收光谱特征与判别分析

目的:建立滇龙胆药材不同极性部位的紫外指纹图谱,分析不同栽培模式下药材光谱特征的差异。方法:采用紫外分光光度法检测样品的紫外吸收光谱数据,经过4点平滑和一阶求导对光谱数据进行预处理,建立紫外指纹图谱。运用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法对不同栽培模式下滇龙胆药材的指纹特征及相似性进行评价,通过判别分析评价紫外指纹图谱区分药材栽培模式的能力。结果:不同栽培模式滇龙胆紫外指纹图谱在221~247 nm图谱重叠率低,呈现明显指纹特征;相同栽培模式下,滇龙胆醇提液与水提液紫外指纹图谱有差异,呈现药材不同极性部位的指纹特征。荒坡栽培和龙胆与木瓜间作2种模式下,药材化学成分的光谱特征较接近;荒坡栽培和龙胆与旱冬瓜间作模式下,药材化学成分变化较大,二者光谱特征具明显差别。来自不同栽培模式的滇龙胆样品90%能被正确识别。结论:滇龙胆药材不同极性部位紫外指纹图谱可协助区分药材栽培模式,为不同栽培模式下药材质量的等同性研究提供相关数据信息。     

坚龙胆抗炎活性部位筛选及抗炎机制探讨

目的:筛选坚龙胆抗炎作用的活性部位,并研究其抗炎机制。方法:分别选用ICR小鼠180只,随机分为18组,分别为正常组,模型组,醋酸地塞米松组(5mg·kg-1),坚龙胆乙醇粗提物、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水各层低、中、高剂量组(6,3,1.5g·kg-1),除正常组外,采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性模型,分别ig给予相应药物,正常组和模型组给予等体积的5%聚山梨酯-80,每天1次,连续7d,检测小鼠的耳肿胀度及小鼠腹腔毛细血管通透性。取180只SD大鼠,同上方式分组及给药,采用角叉菜胶致大鼠足跖肿胀造模,进行抗炎活性筛选;另取大鼠50只,随机分为5组,分别为空白组,模型组,阳性药醋酸地塞米松组(5mg·kg-1),乙醇粗提物组(6g·kg-1),水部位组(6g·kg-1)。每日ig1次,连续7d,采用角叉菜胶致大鼠胸腔炎症造模,测定胸膜炎大鼠胸腔渗出液丙二醛(MDA),前列腺素E2(PGE2),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量以及肺组织一氧化氮(NO),PGE2,TNF-α,IL-1β和MDA含量。结果:与模型组比较,各模型组小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性、大鼠足跖肿胀、大鼠胸腔及肺组织的炎症因子NO,PGE2,TNF-α,IL-1β,MDA均明显增高(P<0.01);与空白组比较,水部位高、中剂量(6,3g·kg-1)对二甲苯致小鼠耳廓肿胀,急性炎症导致的腹腔毛细血管通透性,角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀均有显著抑制作用(P<0.05,P<0.01),其余部位活性弱或基本无活性,坚龙胆水部位组(6g·kg-1)能抑制胸腔液MDA,PGE2,TNF-α,IL-1β含量升高(P<0.01),坚龙胆水部位组(6g·kg-1)能抑制肺组织NO,MDA,PGE2,TNF-α,IL-1β含量升高(P<0.01)。结论:坚龙胆水部位为抗炎活性部位,抗炎机制可能与影响炎症介质产生和抗氧化作用有关。     

滇龙胆GrGPPS基因的克隆及其序列分析与原核表达

目的 从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆单萜化合物合成的关键酶牻牛儿基焦磷酸合成酶基因GrGPPS,进行序列特征分析和原核表达。方法 根据三年生滇龙胆转录组GrGPPS基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增得到GrGPPS cDNA序列,并进行TA克隆、测序及序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrGPPS,转入Escherichia coli Rosetta（DE3）中,在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下进行表达。结果 GrGPPS cDNA全长1 107 bp,编码369个氨基酸;序列分析表明,GrGPPS基因是异戊烯基合成酶家族的成员;氨基酸序列系统发育分析表明,GrGPPS与金鱼草AmGPPS亲缘关系最近;构建pGEX-4T-1-GrGPPS重组质粒,获得稳定的pGEX-4T-1-GrGPPS原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论 克隆了GrGPPS基因,建立pGEX-4T-1-GrGPPS稳定的原核表达体系,为进一步纯化和鉴定GPPS蛋白并研究其结构和功能奠定基础。     

坚龙胆主要次生代谢产物及分子差异的研究

目的:通过含量测定与DNA条形码分析,探讨坚龙胆主要次生代谢产物及分子的差异。方法:采用HPLC测定不同居群坚龙胆根及根茎、茎、叶、花中主要次生代谢产物龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷及苦龙胆酯苷含量,建立其指纹图谱共有模式,用单因素方差分析对主要次生代谢产物间的差异进行评价;并采用DNA条形码技术对不同居群坚龙胆样品进行ITS2测序。结果:不同居群坚龙胆根及根茎、茎、叶、花中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷及苦龙胆酯苷含量具有极显著差异(P0.01);同时ITS2序列结果显示不同居群坚龙胆分子差异较小。结论:不同居群坚龙胆主要次生代谢产物有一定差异,但分子间差异较小,亲缘关系较近。     

滇龙胆环烯醚萜氧化酶基因及启动子的克隆与生物信息学分析

目的从滇龙胆叶片中克隆单萜合成关键酶环烯醚萜氧化酶(GrIDO)基因及其启动子序列,并进行序列分析。方法根据滇龙胆转录组GrIDO基因序列设计基因特异性引物,使用RT-PCR方法克隆GrIDO基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,基于在线软件对GrIDO基因序列进行生物信息学分析。同时,根据GrIDO基因ORF序列,设计特异性引物,采用PCR法对该基因启动子序列进行扩增,并进行序列分析。结果 GrIDO基因(GenBank登录号KP722034)ORF全长1 557 bp,编码518个氨基酸;GrIDO蛋白相对分子质量58 920,理论等电点8.40,属于细胞色素P450超家族成员,可能定位于叶绿体;无信号肽,为亲水不稳定蛋白,主要由α-螺旋(51.07%)和环(42.69%)构成;GrIDO蛋白与长春花CrIDO蛋白具有较高的相似性(85.83%),且亲缘关系较近。GrIDO基因启动子(GenBank登录号KT428570)长720 bp,具有TATA-box和CAAT-box,还具有参与脱落酸和茉莉酸甲酯应答的顺式作用元件、光应答元件和MYB结合位点。结论GrIDO基因表达受多种因素调控。克隆了GrIDO基因ORF及其启动子,为GrIDO基因的功能验证奠定基础。     

云南野生抚育粗茎秦艽药材的品质评价

目的: 研究野生抚育粗茎秦艽药材的有效成分和化学指纹图谱,以期评价其质量,为粗茎秦艽药材的GAP种植提供科学依据。 方法: 采用Zorbax SB C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相甲醇-水,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长238 nm,柱温为25 ℃。利用国家药典委员会出版的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004 A版软件,对15批3年生野生抚育粗茎秦艽药材进行指纹图谱分析。 结果: 15批粗茎秦艽药材环烯醚萜苷类有效成分及浸出物含量符合2010年版《中华人民共和国药典》要求,各样地药材化学指纹色谱相似度>0.981,质量均一性好。 结论: 方法具有良好的精密度、重复性、稳定性,可用于粗茎秦艽药材的质量综合评价。野生抚育模式药材可作为粗茎秦艽主要种植发展模式,对云南建设"云药之乡"和发展道地药材具有重要的现实意义。     

滇龙胆3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因克隆、表达及分析

目的:从药用植物滇龙胆中克隆得到3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase,HMGR)基因的c DNA全长,构建原核表达载体使其在大肠埃希菌中表达,对其进行定量表达并进行生物信息学分析。方法:利用PCR扩增克隆得到滇龙胆HMGR基因c DNA全长。构建p EASY-E1-HMGR表达载体,IPTG诱导表达。利用生物信息学方法分析克隆到的c DNA序列并预测结构和功能。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分析滇龙胆根、茎、叶在4个不同发育时期的HMGR表达情况。结果:克隆出两组HMGR基因,其中一组HMGR c DNA全长1 747 bp,开放阅读框长1 697 bp,编码565个氨基酸,定名为GRHMGR-1;另一组HMGR c DNA全长1 731 bp,开放阅读框长1 572 bp,编码523个氨基酸,定名为GRHMGR-2。SDS-PAGE显示重组质粒成功表达目的蛋白。Blastp发现,GRHMGR-1,GRHMGR-2与同属植物黄龙胆、秦艽的亲缘关系最为相近。结构分析显示都含有2个HMG-CoA结合位点,2个NADPH结合位点,预测都定位于内质网上。HMGR在滇龙胆根、茎、叶这4个不同发育期均有表达,表达量最高的是叶。结论:首次从滇龙胆中克隆到可能编码HMGR酶的基因,可为深入探讨滇龙胆龙胆苦苷生物合成奠定基础。     

基于熵权法和灰色关联度法的消炎镇痛膏质量评价

目的：将熵权法与灰色关联度法相结合构建模型,对消炎镇痛膏进行多指标综合质量评价。方法：测定来源于18个企业的36批消炎镇痛膏样品中樟脑、薄荷脑、冰片、水杨酸甲酯、麝香草酚、盐酸苯海拉明6个指标成分的含量,采用灰色关联度法,以熵权法所得权重作为分辨系数（ρ）,构建消炎镇痛膏质量评价模型。结果：麝香草酚、冰片权重最大,提示含量测定可能需要增加更有标志性的指标成分;不同企业的36批消炎镇痛膏相对关联度值为0.145～0.849,说明不同企业间的产品质量存在较大差异,编号为11、12、36、35、16、15的样品质量较优。结论：基于熵权法分别赋权后提高了灰色关联度法的可靠性及科学性,所建立的模型具有通用性,可用于消炎镇痛膏的质量评价,可为其质量控制提供参考。