四君子汤对脾气虚证大鼠脑肠CaM/CaMKⅡ干预效应研究

目的:观察脾气虚证大鼠脑肠中CaM信号通路关键基因的时相性动态表达及四君子汤干预作用。方法:Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组(14,21,28 d)、四君子汤组(14,21,28 d),除对照组外,其余各组均以苦寒破气法(大黄枳实厚朴制剂液7.5 g·kg^-1·d^-1)、游泳力竭法双因素法复制脾气虚证模型,各四君子汤组造模7 d后,继续造模的同时,以四君子汤20 g·kg^-1·d^-1灌胃进行干预治疗,采用免疫组织化学方法、蛋白免疫印迹技术分别检测大鼠海马、小肠在不同时间阶段CaM信号转导通路关键基因CaM/CaMKⅡ表达水平,同时检测以益气健脾法为指导的四君子汤对脾气虚证大鼠的干预效应,并分析其作用机制。结果:脾气虚证大鼠相对于正常大鼠,小肠组织中CaM/CaMKⅡ表达升高,海马组织中CaM/CaMKⅡ表达降低(P<0.05,P<0.01)。四君子汤治疗后大鼠相对于脾气虚证大鼠,小肠组织中CaM/CaMKⅡ表达明显降低,海马组织中CaM/CaMKⅡ表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:脾气虚证证候的形成有可能与CaM/CaMKⅡ在小肠组织中的高表达、海马组织中的低表达有关,四君子汤对脾气虚证的治疗作用有可能是通过降低小肠组织并升高海马组织中CaM/CaMKⅡ的表达来实现的。     

丹参酮ⅡA对心肌梗死模型大鼠心肌钙调蛋白及心功能的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对心肌梗死模型大鼠心肌钙调蛋白(cardiac muscle, CaM)及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependentproteinkinase-Ⅱ, CaMKⅡ)mRNA 表达和心功能的影响。方法100只大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、丹参酮ⅡA组。模型组、丹参酮ⅡA组采用结扎左侧冠状动脉前降支45 min再灌注45 min,并反复3次阻断与再灌注的方法建立大鼠心肌梗死模型。丹参酮ⅡA组尾静脉注射丹参酮ⅡA磺酸钠注射液10 mg/kg,假手术组、模型组尾静脉注射等体积生理盐水。连续给药7 d后断头处死,取心脏用Langendorff离体心脏灌流器灌流离体心脏,测定各组大鼠给药前后离体心脏左室最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)、心肌收缩张力、心率等心功能指标;TTC染色观察心肌梗死面积;检测缺血区心肌组织CaM及CaMKII mRNA表达。结果与模型组比较,丹参酮ⅡA 组 CaM mRNA[(1.29±0.19)比(2.31±0.21)]及 CaMKⅡ mRNA[(1.10±0.07)比(2.13±0.18)]表达下调(P＜0.05),心肌梗死范围[(25.12±0.43)%比(35.15±0.64)%]缩小(P＜0.05),心肌收缩张力[(2.03±0.14)g比(1.06±0.12)g]及±LVdp/dtmax[(4701.2±135.3)mmHg/s比(3214.7±110.2)mmHg/s;(2518.7±65.4)mmHg/s比(1960.3±62.5)mmHg/s]增高(P＜0.05)。结论丹参酮ⅡA可下调急性心肌梗死模型大鼠心肌细胞CaM、CaMKⅡ mRNA表达,对心肌缺血有保护作用。     

CaM/CaMKⅡ在肠易激综合征大鼠脑肠互动中的表达及大建中汤干预效应研究＊

目的研究大建中汤对肠易激综合征(Irritable bowel syndrome,IBS)内脏痛大鼠脑肠互动中钙调蛋白(Calmodulin,CaM)信号通路关键基因表达及大建中汤干预作用。方法 IBS内脏痛将采用母婴分离、鸡卵清白蛋白腹腔注射、乙酸灌肠等方法制备,大鼠随机分为正常对照组(生理盐水),模型组(生理盐水),大建中汤高、中、低剂量(2.16、1.08、0.62 g·kg^-1)治疗组,匹维溴铵(13.39mg·kg^-1)对照组。每组8只,连续灌胃14天。评估大鼠内脏敏感性采用腹壁撤退反应(Abdominal withdrawal reflex,AWR);采用HE染色方法观察各组大鼠结肠黏膜形态;采用Western Blot、RT-PCR等技术分别检测大鼠下丘脑、结肠CaM和CaMKⅡ表达水平,同时探讨大建中汤对IBS内脏痛大鼠的干预效应机制。结果与正常组比较,模型组60、40、2.0 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)压力下AWR评分明显升高,下丘脑、结肠组织中CaM和CaMKⅡ表达升高(P <0.01);与模型组比较,大建中汤高剂量组(40、2.0 mmHg压力),大建中汤中剂量组(60、40、2.0 mmHg压力)的AWR评分降低(P <0.05),结肠、下丘脑组织中CaM和CaMKⅡ表达明显降低(P <0.01)。结论脑肠互动中CaM信号传导通路关键基因CaM、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)与IBS内脏痛有关,大建中汤通过影响其表达对肠易激综合征内脏痛起到干预作用。     

白芍提取物对PMS肝气郁证大鼠下丘脑Cav1.2介导的CaM/CaMK Ⅱ/BDNF信号通路的影响

目的：本文主要探讨白芍提取物对PMS肝气郁证大鼠下丘脑Cav1.2钙通道关键蛋白CACNA1C及其下游信号通路中CaM、BDNF蛋白表达和对CaMK Ⅱ磷酸化的影响,从而明确白芍提取物治疗肝气郁结证的分子作用靶点。方法：利用慢性束缚应激法制备PMS肝气郁证大鼠模型,使用白芍提取物进行药物干预。模型制备成功后检测下丘脑CACNA1C蛋白表达,以及下游信号通路中CaM、BDNF蛋白表达和CaMK Ⅱ的磷酸化水平。离体培养海马原代神经元,通过KCl激活L型钙通道,检测白芍提取物中的有效成分单体芍药苷对细胞内钙超载的影响。结果：PMS肝气郁证大鼠下丘脑CACNA1C蛋白表达增加,CaMK Ⅱ磷酸化水平提高,BDNF表达减少,说明白芍提取物可显著改善上述蛋白表达异常的现象,抑制KCl激活的L型钙通道引起的细胞内钙离子浓度的增加。结论：白芍提取物可能是通过调控细胞内Cav1.2,抑制其下游CaM/CaMK Ⅱ信号通路的活化发挥治疗PMS肝气郁证的作用。     

丹参酮对肾血管性高血压患者钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ信号通路及心律失常的影响

目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对肾血管性高血压患者钙调蛋白(CaMK)及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA信号通路表达及心律失常的影响。方法按入院先后顺序将310例肾血管性高血压病例按随机数字表法分为对照组、丹参酮组各155例。对照组根据诊断做相应治疗措施如应用降压药及对症治疗;丹参酮组在对照组治疗基础上静脉滴注丹参酮ⅡA磺酸钠注射液治疗14 d,比较治疗前后患者静脉血CaMK及CaMKⅡ mRNA表达,记录患者收缩压、舒张压、心率、心电图中病理性Q波出现次数及棘波波幅等指标,并比较总有效率以评定临床疗效。结果与对照组比较,丹参酮组在治疗14 d后,CaMK、CaMKⅡ mRNA表达及病理性Q波出现次数及棘波波幅明显优于对照组(P0.05);丹参酮组总有效率为95.49%,高于对照组的87.10(P0.05)。结论丹参酮可能通过下调肾血管性高血压患者CaM及CaMKⅡ mRNA表达,阻断Ca~(2+)/CaM-CaMKⅡ信号传导通路,抑制病理性Q波出现而达减少心律失常的发生,对肾血管性高血压有明确的治疗作用。     

济川煎对CaMKⅡγ沉默及过表达结肠平滑肌细胞的影响及机制研究

目的:观察济川煎对钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(Calmodulin-dependent protein kinases Ⅱγ,CaMKⅡγ)沉默及过表达大鼠结肠平滑肌细胞的影响及机制。方法:基于慢病毒介导构建原代大鼠结肠平滑肌细胞CaMKⅡγRNA干扰载体，建立CaMKⅡγ沉默及过表达结肠平滑肌细胞模型。将模型成功并计数的细胞悬液，随机分为空白对照组、阴性载体对照组、CaMKⅡγ沉默及过表达组、莫沙必利+CaMKⅡγ沉默及过表达1.88 mg/kg组、济川煎+CaMKⅡγ沉默及过表达4.31 g/kg组。每组细胞给药后培养24 h,采用流式细胞仪检测胞内钙离子(Ca²⁺)浓度变化；采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测胞内钙调蛋白(CaM)、CaMKⅡγ、L型钙离子通道Cav1.2、SR钙离子依赖性ATP酶1(SERCA1)、兰尼碱受体(RYR2)的表达情况。结果:与空白对照组比较，模型对照CaMKⅡγ沉默组CamkⅡγ mRNA表达下调，Ca²⁺浓度显著降低(P<0.01),CaM、...     

黄芪对乳鼠肥大心肌细胞钙瞬变及钙调蛋白激酶Ⅱ的影响

目的:研究黄芪注射液对体外培养乳鼠肥大心肌细胞内钙瞬变及钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何干预因素)、模型组(AngⅡ刺激心肌细胞肥大)、黄芪组(AngⅡ+黄芪注射液)。MTT法确定最佳检测时间,激光共聚焦显微镜检测单个心肌细胞(给予KN-93前后)钙瞬变。Western blot法检测CaMKⅡδ蛋白含量。结果:①AngⅡ作用48h后乳鼠心肌细胞存活率下降(P<0.05);②与对照组相比,模型组总蛋白含量显著增加,黄芪组较模型组显著下降;③与对照组相比,模型组钙瞬变荧光强度变化率降低,达峰时间、峰回落时间显著增高,黄芪治疗后钙瞬变荧光强度变化率回升,并降低峰回落时间与达峰时间;④与对照组相比,模型组CaMKⅡδ的蛋白含量显著增加,黄芪组较之模型组则显著下降。⑤与对照组相比,给予KN-93后模型组仅使峰回落时间显著增加,黄芪组较模型组可显著降低峰回落时间。结论:黄芪注射液可抑制心肌细胞肥大,其机制可能与抑制钙调蛋白激酶途径中CaMKⅡδ的表达改善收缩功能有关,并可能通过其他机制而改善舒张功能。     

脾虚证大鼠模型胃组织cAMP-PKA信号传导通路变化的研究

目的:探讨脾气虚证和脾阳虚证大鼠胃组织的改变与c AMP-PKA信号通路的相关性。方法:将24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、脾气虚组、脾阳虚组,脾气虚采用饱食1 d、禁食2 d、游泳15 d,脾阳虚采用脾气虚证加灌服番泻叶造模,造模后检测大鼠胃组织c AMP活性及PKA、CREB mRNA和蛋白的表达。结果:脾气虚组和脾阳虚组胃组织c AMP活性及PKA、CREB mRNA和蛋白表达均减弱。结论:脾气虚证和脾阳虚证大鼠胃组织的改变与c AMP-PKA信号传导通路有一定的相关性。     

CaM/CaMK Ⅱ在脾气虚证大鼠脑肠微环境中的表达及四君子汤干预效应研究

目的:从Ca M信号通路关键基因揭示脾气虚证发生及益气健脾法干预作用机制。方法:脾气虚证大鼠为研究对象,采用实时荧光定量RT-PCR、Western Blot技术检测不同阶段大鼠脑、肠Ca M信号通路关键基因Ca M/Ca MKⅡmRNA和蛋白的动态表达,并分析四君子汤干预效应机制。结果:从大鼠小肠组织看,脾气虚证大鼠相对于正常大鼠Ca M/Ca MKⅡmRNA和蛋白表达升高,经四君子汤治疗后明显降低;从大鼠脑组织看,脾气虚证大鼠相对于正常大鼠Ca M/Ca MKⅡmRNA和蛋白表达降低,经四君子汤治疗后明显升高。结论:脑肠微环境中Ca M信号传导通路关键基因Ca M/Ca MKⅡ的动态表达与脾气虚证形成有关,四君子汤通过影响其表达对脾气虚证起到时相性动态干预。     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马钙调蛋白表达的影响

目的:探索电针对脑缺血再灌注大鼠大脑受损神经元的保护作用及其钙调蛋白信号转导机制.方法:随机将25只SD大鼠均分为假手术组、模型组、电针组、TFP组和电针+TFP组.采用改良Longa线栓法制作局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型.电针组取“百会”“大椎”穴,选用疏密波,持续电刺激30 min.TFP组腰穿缓慢注入钙调蛋白阻滞剂三氟拉嗪(TFP) 40 μL/kg.电针+TFP组腰穿注射TFP并电针,其用药方法及取穴均同TFP组和电针组.假手术组和模型组不予治疗干预.依据Julio氏神经行为学评分法对各组大鼠进行评分,采用免疫组织化学染色法观察不同干预下模型大鼠海马钙调蛋白(CaM)的表达.结果:①神经行为学评分:与模型组(6.90±1.66)相比,电针组(14.50±1.08)、TFP组(11.70±1.06)、电针+TFP组(14.30±1.06)均显著升高(均P＜0.01),但仍低于假手术组(17.60±0.52)(均P＜0.01);其中电针组又优于TFP组(P＜0.01).②大鼠海马CaM的蛋白免疫阳性表达评分:与假手术组(0.080±0.045)相比,模型组(1.680±0.268)显著升高(P＜0.01);与模型组(1.680±0.268)相比,电针组(0.880±0.179)、TFP组(0.720±0.179)和电针+TFP组(0.420±0.249)均明显下调(均P＜0.01);其中电针+ TFP组又明显低于TFP组(P＜0.05).结论:电针可减轻脑缺血再灌注大鼠大脑神经元的损伤,促进损伤修复,这一作用可能与其影响缺血再灌注后钙调蛋白信号有关.     

刺五加钙调蛋白基因的克隆及内生真菌对其表达的影响

目的:克隆刺五加的钙调蛋白(calmodulin,CaM)基因,并分析内生真菌对其表达的影响。方法:采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆刺五加CaM基因的全长cDNA序列。通过RT-PCR法检测可显著提高刺五加皂苷含量的内生真菌菌株P116-1a,P116-1b,P109-4,P312-1对CaM表达的影响。结果:刺五加CaM基因的cDNA全长为856 bp,开放阅读框长450 bp,编码149个氨基酸的蛋白,与人参Panax ginseng和胡萝卜Daucus carota等物种的CaM同源性均高达100%。RT-PCR的结果显示,内生真菌可显著提高刺五加CaM基因的表达量(P<0.05),最大表达量出现在菌株P109-4回接90 d时,达对照的2.96倍。结论:首次克隆并报道了刺五加CaM的cDNA全长序列,并证实内生真菌可显著提高刺五加CaM基因的表达量,为阐明内生真菌提高刺五加三萜皂苷含量的机制奠定了基础。     

舒郁胶囊对PMDD肝气郁证模型大鼠Cav1.2介导的CaM/CaMKⅡ信号通路的影响

目的:观察舒郁胶囊对强迫游泳应激诱导的经前烦躁障碍(premenstrual dysphoric disorder,PMDD)肝气郁证大鼠的影响,探讨L型钙通道(L-type calcium channel,LTCC)Cav1.2亚型介导的钙调蛋白(CaM)/CaMKⅡ信号通路在PMDD肝气郁证发生中的机制。方法:动情周期规律的大鼠进行3次强迫游泳实验,筛选出48只雌性Wistar大鼠进入实验,两次非接受期和接受期悬浮不动时间差值绝对值平均值最小的12只为正常组,其余36只分为模型组、舒郁胶囊组(0.408 g·kg-1·d-1),氟西汀组(2.7 mg·kg-1·d-1)。给药组连续给药2个动情周期,模型组和正常组给以等量纯水。采用旷场实验、强迫游泳悬浮不动时间及悬浮不动次数评价模型和药物干预效果。免疫荧光、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组大鼠海马脑区中L型钙通道α1C亚型(CACNA1C),CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的分布及表达。结果:CACNA1C蛋白主要分布在细胞膜上,CaMKⅡ蛋白主要分布在的细胞质内;与正常组比较,模型组大鼠体质量、旷场总路程显著下降(P0.05,P0.01),强迫游泳悬浮不动时间、悬浮不动次数显著升高(P0.05,P0.01),海马脑区细胞排列散乱,CACNA1C和CaMKⅡ表达升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,氟西汀和舒郁胶囊组大鼠体质量、旷场总路程明显升高(P0.05,P0.01),强迫游泳悬浮不动时间、悬浮不动次数明显降低(P0.05,P0.01),海马脑区细胞排列整齐,CACNA1C和CaMKⅡ表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论:利用强迫游泳可成功诱导出PMDD肝气郁证大鼠模型。舒郁胶囊可能通过Cav1.2介导的CaM/CaMKⅡ信号通路发挥治疗作用,显著改善PMDD肝气郁证大鼠的行为学变化。     

疲劳大鼠经疏肝补肾方用药后海马CaMK Ⅱ水平的变化

目的研究疏肝补肾方药对于疲劳大鼠海马CA1区钙/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ（CaMKⅡ）水平的变化。方法成年雄性Spargue-Dawley大鼠36只,随机分为模型组、对照组、疏肝补肾组。应用大鼠游泳运动结合睡眠剥夺建立疲劳大鼠复合模型,以Y迷宫实验评定其学习记忆能力。取大鼠海马CA1区以Western Blot定量检测,并以Real-time PCR技术分析海马CA1区CaMKⅡ的mRNA表达。结果 Y迷宫实验显示用药后大鼠的学习和记忆能力优于模型组,而疏肝补肾组大鼠在正确反应率和错误反应次数皆与模型组比较有统计学意义（P〈0.01）。Western Blot结果显示,模型组CaMKⅡ磷酸化的蛋白表达明显低于对照组（P〈0.01）,疏肝补肾组高于模型组（P〈0.01）。Real-time PCR结果显示,在mRNA水平上模型组及疏肝补肾组与对照组比较均有统计学意义（P〈0.01）,疏肝补肾组CaMKⅡmRNA表达高于模型组（P〈0.05）。结论疲劳引起大鼠海马CA1区的CaMKⅡ水平下调,而使用疏肝补肾方药可改善之,提示可由疏肝补肾法对抗疲劳引起的学习记忆损伤。     

艾灸干预肝郁脾虚型抑郁大鼠海马CaMKⅡ表达研究

目的:探讨艾灸对抑郁症模型大鼠大脑海马组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的影响,以阐释艾灸治疗肝郁脾虚型抑郁症的作用机制。方法:选择72只雄性Wistar大鼠,体质量(150±20)g。随机分为正常组、抑郁模型组、艾灸预防组、氟西汀预防组、艾灸治疗组和氟西汀治疗组,每组12只。适应性喂养后,进行抑郁症造模。氟西汀预防组和艾灸预防组从第7天~18天在造模前1 h给予预防治疗;氟西汀治疗组和艾灸治疗组在成模后即19天~31天进行治疗。取大鼠海马组织,qPCR方法检测大鼠海马CaMKⅡ基因表达,WB检测大鼠CaMKⅡ及其磷酸化蛋白表达。结果:与正常组相比,模型组CamkⅡ的基因表达、蛋白含量及磷酸化蛋白表达均明显降低;与模型组相比,氟西汀预防组、艾灸预防组、氟西汀治疗组和艾灸治疗组基因表达、蛋白含量及磷酸化蛋白表达均显著升高;艾灸治疗组CamkⅡ基因及蛋白磷酸化水平均明显低于艾灸预防组。结论:艾灸可以特异性增高肝郁脾虚模型大鼠海马CaMKⅡ基因表达,促进CaMKⅡ蛋白磷酸化,在治疗与延缓抑郁症发生发展过程中均起到显著的作用,且基于"治未病"思想指导下的艾灸在抑郁症预防方面具有明显优势。     

加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马CaMK信号转导通路的影响

目的 探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马钙调素依赖蛋白激酶(CaMK)信号转导通路的影响.方法 128只SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、西药组,每组32只.采用孤养结合慢性不可预见性应激造模抑郁大鼠,从造模第1天开始中药组给予加味温胆汤12g/(kg·d),西药组予氟西汀1.8mg/(kg·d),模型组、空白组给予生理盐水2ml/(kg·d),各组均灌胃给药,连续28天.实验第7、14、21、28天时采用Western印迹法检测各组大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDA-NR1)、钙调素(CaM)、CaMKⅡ蛋白表达变化.结果 第7、14天,各组大鼠海马NMDA-NR1、CaM、CaMKⅡ蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).21、28天时,与空白组比较,模型组大鼠海马NMDA-NR1、CaM、CaMKⅡ蛋白表达增多(P＜0.01);与模型组比较,中、西药组大鼠海马NMDA-NR1、CaM、CaMKⅡ蛋白表达减少(P＜0.05或P＜0.01);中、西药组同时间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 加味温胆汤可通过抑制CaMK信号转导通路的活性发挥其抗抑郁效应.     

电针“足三里”穴对脾气虚大鼠小肽转运体表达的影响

目的:探讨电针"足三里"穴对脾气虚模型大鼠小肠黏膜组织内的小肽转运体(PepT1)的蛋白及基因表达的影响。方法:将40只SD雄性大鼠按照随机数字表法随机分为正常组、脾气虚组、足三里组、非经非穴组,每组10只。大鼠均统一饲养于SPF级动物实验中心。正常组给予正常饮食,其余3组均采用不规则饮食和劳倦过度复合法建立脾气虚证大鼠模型。造模成功之后,对足三里组进行电针"足三里"穴、非经非穴组大鼠电针非经非穴点干预处理7 d。观察各组大鼠免疫器官胸腺指数及脾脏指数的变化;观测各组大鼠小肠推进率;采用HE染色法观察各组大鼠小肠黏膜组织形态的变化;采用蛋白质免疫印迹法检测大鼠小肠黏膜组织内的PepT1的蛋白含量变化;采用荧光定量PCR法检测大鼠小肠黏膜组织的PepT1的mRNA表达水平。结果:脾虚组大鼠的胸腺和脾脏质量以及小肠推进率都明显低于正常组,足三里组相比于脾虚组有所升高;HE染色结果示:与正常组相比,脾气虚组大鼠小肠黏膜组织有萎缩、糜烂等改变,足三里组的组织形态较脾气虚组大鼠相比有所恢复;WB及PCR结果示:与正常组相比,脾气虚组大鼠小肠黏膜组织内的PepT1蛋白和基因表达水平均明显低于正常组(P0.05);与脾气虚组相比,足三里组大鼠小肠黏膜组织内的PepT1蛋白和基因表达水平有所升高(P0.05),非经非穴组未见显著性差异(P0.05)。结论:电针"足三里"穴可以调控脾气虚大鼠小肠黏膜组织内的PepT1蛋白及基因的异常表达,参与小肠对蛋白质的吸收作用,进而改善脾气虚证。     

小檗胺类化合物对黑色瘤细胞内钙调蛋白水平的影响

目的：研究5种小檗胺类化合物对恶性黑色瘤细胞内钙调蛋白Calmodulin(CaM)水平的影响。方法：收集不同浓度不同药物作用后的细胞，通过反复冻融法破碎细胞，并用磷酸二酯酶（PDE）法测CaM含量。结果：5种化合物均能不同程度地降低细胞内CaM的水平，IC50（μmol/L）值分别为：B0＝10．83，B2＝9．1，B4＝7．4，BB＝6．15，EBB＝1．55。结论：小檗胺衍生物降低细胞内CaM的能力大于小檗胺，其中EBB的效果最为突出。     

电针对坐骨神经分支选择性损伤大鼠脊髓CaMK Ⅱ-CREB通路的影响

目的:通过观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)大鼠脊髓磷酸化钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)与环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)的变化和电针干预对其的影响,探讨电针干预神经病理性痛的脊髓机制。方法:SD大鼠随机分为5组,每组12只。假手术组仅分离坐骨神经,但不进行结扎和剪断;模型组采用SNI法制备神经病理性痛模型;电针组于造模术后第11~17天电针大鼠损伤侧"委中"穴与"环跳"穴,刺激时间30min,1次/d;AP-5(N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂)组和L-NAME(一氧化氮合酶抑制剂)组同样于术后第11~17天实施药物干预。于造模前、造模后10d和16d时测定机械痛阈。造模后17d时,采用Western blot法测定脊髓磷酸化CaMKⅡ(pCaMKⅡ)与磷酸化CREB(pCREB)蛋白的表达,采用荧光定量-聚合酶链反应法测定脊髓CREB mRNA的表达。结果:与基础值比较,除假手术组外的其余4组SNI后机械痛阈均降低(P0.01);与SNI后10d比较,电针组、AP-5组和L-NAME组SNI后16d时机械痛阈均升高(P0.01,P0.05);与假手术组比较,模型组机械痛阈降低(P0.01),其脊髓组织pCaMKⅡ与pCREB的蛋白印迹表达量均升高(P0.05),CREB mRNA的表达亦升高(P0.05);与模型组比较,电针组机械痛阈升高(P0.01),同时脊髓组织pCaMKⅡ与pCREB蛋白印迹及其CREB mRNA表达均被逆转(均P0.05),AP-5组和L-NAME组机械痛阈亦升高(P0.05),但脊髓组织pCaMKⅡ与pCREB蛋白印迹及其CREB mRNA表达均无明显变化(P0.05)。结论:电针减轻大鼠神经病理性痛的机制之一,可能与其有效地下调脊髓CaMKⅡ-CREB通路的功能有关。     

姜黄素对快速老化小鼠学习与记忆功能及海马Ca2+/CaMKⅡ水平的影响

目的 探讨不同浓度的姜黄素对快速老化小鼠（senescence-accelerated mouse, SAM）学习与记忆的影响和可能的机制。 方法 将小鼠随机分为SAMR1正常对照组, SAMP8模型对照组, SAMP8+溶剂（花生油）对照组以及SAMP8+低 、中、高浓度姜黄素处理组,灌胃持续25天。实验结束次日,通过Morris水迷宫测试各组小鼠学习和记忆成绩的变化;测定各组小鼠海马组织［Ca2+］i浓度;通过Western blot和RT-PCR观测Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ, CaMKⅡ）和钙调蛋白（calmodulin, CaM）mRNA在海马组织的表达情况。 结果 SAMP8模型对照组小鼠隐蔽平台的逃避潜伏期明显延长;海马组织［Ca2+］i明显增高;海马膜中CaMKⅡ表达量降低;海马组织CaM mRNA的水平明显降低（P<0.05, P<0.01）。经中、高浓度姜黄素处理的SAMP8小鼠隐蔽平台的逃避潜伏期显著缩短（P<0.01）。经低、中和高浓度姜黄素处理的SAMP8组小鼠海马组织［Ca2+］i均明显降低;海马组织膜中CaMKⅡ表达量均明显增加;海马组织CaM mRNA水平均明显增高（P<0.05, P<0.01）。     

桂枝加葛根汤含药血清对纤维环细胞CaM/CaMKⅡ信号通路的影响

目的观察桂枝加葛根汤含药血清对纤维环细胞CaM/CaMKⅡ通路影响。方法采用自制桂枝加葛根汤大鼠含药血清,对培养的椎间盘纤维环细胞进行不同浓度的药物干预,采用Western blot检测椎间盘纤维环中CaM、CaMKⅡ蛋白表达变化情况。结果中药高剂量组、中药中剂量组CaM、CaMKⅡ蛋白表达较空白对照组显著升高,变化有显著性差异(P<0.05)。结论中、高剂量组桂枝加葛根汤大鼠含药血清能增强纤维环细胞CaM和CaMKⅡ蛋白表达。桂枝加葛根汤通过上调CaM/CaMKⅡ通路影响纤维环细胞的修复。