影响树突状细胞分化成熟的天然药物研究进展

树突状细胞是已发现的功能最强的专职性抗原提呈细胞,在诱导免疫应答过程中起着重要作用。对树突状细胞的研究为天然药物调节免疫功能的药理学研究提供了新的视角,即天然药物调节免疫的作用是否通过影响机体树突状细胞的发育状态来达到目的的。本文通过对近几年国内外相关文献进行归纳整理,得出结论:许多天然药物及其有效成分对树突状细胞发育成熟的不同阶段有着不同的作用,是通过促进或抑制树突状细胞的成熟状态而发挥调节免疫作用的。     

树突状细胞在感染性疾病免疫抑制中的作用

近年来越来越多的实验证明,DC不但有强大的免疫激活功能,而且在一些感染性疾病免疫抑制状态中DC发挥了重要作用,使感染向重症发展或病原体在体内广泛播散。本文将对DC在一些感染性疾病中免疫抑制方面的研究进展进行综述。     

黄芪多糖对小鼠树突状细胞分化及成熟的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)是否具有诱导小鼠髓源性树突状细胞(DC)分化和成熟的作用,以阐释APS药理作用的机制。方法APS分别取25(APS25组)、50(APS50组)、75(APS75组)、100 mg／L(APS100组)4种浓度,分别体外诱导小鼠髓源性DC前体和未成熟DC,采用倒置显微镜观察细胞生长状态,电子显微镜检测细胞形态,流式细胞仪检测CD11C、主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ类分子及协同刺激分子CD80、CD86表达水平。结果APS、APS 白介素(IL)-4及空白对照组诱导的DC前体细胞,培养结束时大部分细胞已经死亡。粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-csF) IL-4诱导小鼠髓源性DC,在APS刺激36 h后,流式细胞检测结果显示APS100、APS75、APS50组的CD80、CD86、CD11c、MHC-Ⅱ类分子表达水平均明显高于空白对照组(P值均< 0．05),与内毒素(LPS)组类似;空白对照组与APS25组的差异无显著性(P>0．05)。结论APS不能诱导小鼠髓源性DC前体分化为DC,但可能有促进DC成熟的作用。     

延胡索酸酯对体外培养的树突状细胞分化的影响

目的：研究延胡索酸酯（FAE）对树突状细胞（DC）的作用，以探讨FAE治疗银屑病的机制。方法：在体外将人外周血单细胞分化成树突状细胞；分别采用流式细胞术检测细胞表面CD1a,CD14,CD40,CD80,CD86和HLA-DR的表达，来评价FAE中各种成分对单细胞衍生的树突状细胞（MoDC)分化的作用，并用混合淋巴细胞反应分析FAE对MoDC刺激下细胞功能的影响。结果：0.01-100mg/L二甲基延胡索酸和甲基氢化延胡索酸钙盐抑制MoDC的分化，并降低MoDC刺激淋巴细胞增殖的能力。结论：FAE对树突状细胞分化的抑制作用可能是该药治疗银屑病有效的一个重要机制。     

间充质干细胞株对小鼠骨髓来源树突状细胞分化成熟的影响

目的探讨间充质干细胞株C3H10T1/2对小鼠骨髓来源树突状细胞（dendritic cells,DCs）体外分化、成熟的影响。方法采用密度梯度离心法分离小鼠骨髓细胞,在mGM-CSF和mIL-4刺激下获得大量未成熟DCs。将DCs和C3H10T1/2细胞共培养2d,同时加入LPS刺激,分别通过倒置显微镜、流式细胞仪,混合淋巴反应以及ELISA检测DCs的成熟。结果经C3H10T1/2细胞体外共培养的DCs,形态观察呈散在分布,细胞边缘圆滑,流式细胞仪检测显示其低表达CD11c、MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD40;共培养组的DCs刺激同种异型小鼠脾细胞增殖的能力在各个浓度均明显低于对照组（P〈0.05或0.01）;ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-10的浓度也明显低于对照组（P〈0.05或0.01）。结论间充质干细胞株C3H10T1/2可以明显抑制小鼠骨髓来源DCs的体外成熟。     

不同成熟状态小鼠树突状细胞的体外诱导

目的：体外诱导小鼠骨髓来源的不同成熟状态树突状细胞(dendritic cells，DCs)。方法：rmGM—CSF体外培养小鼠骨髓细胞，5～6d后，利用磁性细胞分离器(MACS)分离CD11C^ 细胞，部分细胞加入rmTNFα继续培养1～2d，通过流式细胞仪检测分别检测细胞表面标志，同种混合淋巴细胞反应检测细胞的体外刺激能力。结果：小鼠骨髓细胞经rmGM-CSF培养5～6d，再经过MACS分离可获得大量未成熟DCs，细胞表面出现少量短而粗的突起，低水平表达MHCI／分子和共刺激分子CD80、CD86及CI40，刺激同种CD4^ T细胞的混合淋巴细胞反应能力较弱：加入rmTNFα继续培养可获得成熟DCs，细胞表面出现大量细长突起，细胞表面高水平表达MHC Ⅱ分子和共刺激分子CD80、CD86及CI40，刺激同种CI4^ T细胞的混合淋巴细胞反应能力较强。结论：通过rmGM-CSF或rmGM-CSF rmTNFα体外培养体系可以获得大量未成熟DCs或成熟DCs，为进一步研究DCs的生物学功能提供实验基础。     

STAT信号通路在树突状细胞分化成熟中的作用研究进展

树突状细胞(DC)是已知体内功能最强,唯一能活化初始T细胞的专职抗原呈递细胞,是启动、调控和维持免疫应答的中心环节。活化的Janus激酶/信号转导与转录激活因子(JAK/STAT)在生长发育和稳态过程中是必不可少的,包括造血、免疫细胞发育、干细胞的维持、有机体的生长以及乳腺发育等。在DC细胞的发育成熟过程中,许多因子发挥了作用,但具体过程尚不清楚。     

脐血与成人外周血单核细胞来源树突状细胞分化和成熟标志物的比较

目的比较脐血单核细胞(CBMC)来源树突状细胞(DC)和成人外周血单核细胞(PBMC)来源DC在分化和成熟过程中表型的变化,以探讨新生儿免疫功能低下的原因。方法将重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组人白细胞介素-4(rhIL-4)和脂多糖(LPS)的不同组合对单核细胞来源DC进行刺激培养,利用流式细胞仪技术检测DC表面CD11c、CD1a、CD80、CD86、CD40、MHCⅠ类和MHCⅡ类分子的表达。结果CD11c阳性细胞和MHCⅠ类分子在CBMC来源DC和PBMC来源DC的表达率非常接近(P>0.05)。CBMC来源的DC上CD40的表达率低于PBMC来源DC[(34.80±7.77)%vs(54.37±9.57)%](P<0.01)。经LPS诱导后,CBMC来源DC上CD80、CD86的表达率都明显低于PBMC来源DC[(3.72±1.63)%vs(7.82±0.81)%、(28.53±4.67)%vs(45.62±5.16)%](均P<0.01)。CBMC来源DC上MHCⅡ类分子的相对荧光强度(RFI)均低于PBMC来源DC(P<0.01)。结论CBMC来源DC上MHCⅡ类分子及协同刺激分子的表达均明显低于PBMC来源DC,可能是造成新生儿免疫功能低下及脐带血移植时移植物抗宿主病发生率较低的原因之一。     

脐血与成人外周血单核细胞来源树突状细胞分化和成熟标志物的比较

目的 比较脐血单核细胞(CBMC)来源树突状细胞(DC)和成人外周血单核细胞(PBMC)来源DC在分化和成熟过程中表型的变化,以探讨新生儿免疫功能低下的原因.方法 将重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组人白细胞介素-4(rhIL-4)和脂多糖(LPS)的不同组合对单核细胞来源DC进行刺激培养,利用流式细胞仪技术检测DC表面CD11c、CD1a、CD80、CD86、CD40、MHC Ⅰ类和MHC Ⅱ类分子的表达.结果 CD11c阳性细胞和MHC Ⅰ类分子在CBMC来源DC和PBMC来源DC的表达率非常接近(P>0.05).CBMC来源的DC上CD40的表达率低于PBMC来源Dc[(34.80±7.77)%vs(54.37±9.57)%](P<0.01).经LPS诱导后,CBMC来源DC上CD80、CD86的表达率都明显低于PBMC来源DC[(3.72±1.63)%vs(7.82±0.81)%、(28.53±4.67)%vs(45.62±5.16)%](均P<0.01).CBMC来源DC上MHC Ⅱ类分子的相对荧光强度(RFI)均低于PBMC来源DC(P<0.01).结论 CBMC来源DC上MHC Ⅱ类分子及协同刺激分子的表达均明显低于PBMC来源DC,可能是造成新生儿免疫功能低下及脐带血移植时移植物抗宿主病发生率较低的原因之一.     

OPTIMIZATION OF ELECTROPORATION PARAMETERS FOR TRANSFECTION OF PLASMID DNA INTO MURINE BONE MARROW-DERIVED DENDRITIC CELL

Objective To explore the optimal electroporation parameters for transfection of plasmid DNA into murine bone marrow-derived dendritic cells. Methods Murine bone marrow-derived dendritic cells （DCs） were electroporated with plasmid DNA in varied conditions, such as electrical voltage, pulse time ,pre-electroporation cell condition and serum concentration in electrical buffer, lnverted fluorescence microscope and flow cytometer were used to determine the transfection efficiency. Some of the DCs genetically modified under different conditions were stained with trypan-blue and its viability was observed microscopically 48h after electroporation. Results Highest transfection efficiency （22.10%） could be reached when electrical voltage was 250V and pulse time was 20ms. Refreshing the culture medium pre-electroporation may help the cells recover more easily from gene transfer. Besides, electrical buffer containing serum may benefit the viability of DC after electroporation and temperature may has little influence on transfection efficiency. Conclusion Our observations demonstrated plasmid DNA could be efficiently transferred into murine bone marrow-derived DCs by electroporation. These data may helpful for cancer research related to murine DC transfection.     

小鼠脾脏树突细胞的免疫刺激作用

目的探讨小鼠脾脏树突细胞（ＤＣ）的免疫刺激作用。②方法以ＤＣ作为刺激细胞,Ｔ淋巴细胞作为反应细胞,检测同种混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）。③结果ＤＣ的免疫刺激作用比巨噬细胞显著增高,差异有显著意义（ｔ′＝２９．５～４８．７,Ｐ＜０．００１）;ＤＣ刺激Ｔ细胞对氧化物丝裂原ＮａＩＯ４的增殖反应比巨噬细胞有显著增强（ｔ′＝４６．３,Ｐ＜０．００１）。④结论ＤＣ具有较强的免疫刺激作用     

树突状细胞的体外培养及鉴定

目的:建立树突状细胞(dendritic cells,DCs)体外培养的方法.方法:从正常人外周血分离获得单核细胞,加入rhGM-CSF1000U/ml、rhIL-4500U/ml体外培养.取培养7天的细胞,采用免疫细胞化学方法和流式细胞仪测定细胞表型,并对其进行鉴定.结果:免疫细胞化学方法显示,90%以上培养7天的细胞表达DCs特异性标志CD1a,而单核细胞特异性标志CD14表达小于5%;FACS分析显示,培养7天的细胞高表达HLA-A、B、C,HLA-DR和协同刺激分子CD40、B7-1.表明加入细胞因子体外培养后,由单核细胞生成了DCs.结论:通过该方法对人外周血单核细胞进行体外扩增,能够得到成熟的DC.     

OXIDIZED HIGH-DENSITY LIPOPROTEIN PROMOTES MATURATION AND MIGRATION OF BONE MARROW DERIVED DENDRITIC CELLS FROM C57BL/6J MICE

Objective To explore the influence of oxidized high-density lipoprotein （oxHDL） on the maturation and migration of bone marrow-derived dendritic cells （BMDCs） from C57BL/6J mice.
Methods The C57BL/6J mice bone marrow cell suspension was prepared and purified. Recombinant granulocyte-macrophage colony-stimulating factor （rmGM-CSF） and recombinant interleukin-4 （rmlL-4） were used to promote monocytes to differentiate and suppress lymphocytes. Then 50μg/mL oxHDL was added to stimulate BMDCs, using 50μg/mL high-density lipoprotein （HDL） as homologous protein control, PBS as negative control, and 1 μg/mL lipopolysaccharide （LPS） as positive control. The CD86 and MHCII expression rates were detected with fluorescence-activated cell sorting （FACS）. Liquid scintillation counting （LSC） was used in mixed lymphocyte reactions （MLRs） to reflect the ability of BMDCs in stimulating the proliferation of homologous T cells, Levels of cytokines IL-12 and IL-10 were detected by ELISA. The cell migration was evaluated with the transwell system.
Results Compared with PBS group, the expressions of CD86 and MHCII, counts per minute of MLRs, secretion of IL-12 and IL-10, and number of migrated cells in oxHDL group and LPS group significantly increased （all P 〈 0.05）, while the increment was less in oxHDL group than LPS group. The number of migrated cells in oxHDL group was about twice of that in HDL group.
Conclusion OxHDL may promote the maturation and migration of BMDCs in vitro.     

树突状细胞激活效应细胞的最佳效靶比及其体外杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和小鼠脾淋巴细胞(小鼠脾LC)的最佳效靶比并观察被有效激活的TIL和小鼠脾LC等对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤作用.方法:从荷瘤小鼠四肢长骨提取DC,联合应用GM-CSF、IL-4和小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原致敏DC,然后依据不同的激活效靶比用致敏DC体外激活TIL、小鼠脾LC,分别检测、比较被不同程度激活的TIL、小鼠脾LC以及未激活的小鼠脾LC、未激活的TIL对小鼠H22肝癌细胞的杀伤活性.结果:①当DC:靶细胞(E/T)为1:400和1:200时,所激活的TIL或小鼠脾LC的杀伤活性较弱;当E/T为1:100时,杀伤活性有较明显的提高,与前两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);当E/T=1:50时,杀伤活性增加,与前三者比较差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);而当E/T=1:25、1:12.5和1:6.25时,杀伤活性与E/T=1:50时比较无明显变化(P＞0.05);②当E/T=1:50时,未经DC激活的小鼠脾LC(A组)杀伤率为(9.73±1.40)%,未经DC激活的TIL(B组)和DC激活的小鼠脾LC(C组)杀伤率分别为(50.91±2.36)%和(49.70±2.70)%,DC激活的TIL(D组)的杀伤率为(73.49±2.46)%.A组与其他组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);B组和C组比较差异无统计学意义(P＞0.05);D组与其他各组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:①当E/T=1:50时,DC能很好的发挥抗原提呈作用,使小鼠脾LC和TIL得以充分激活;②充分激活的小鼠脾LC或TIL对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤活性较未激活的小鼠脾LC或未激活的TIL均具有明显的提高,尤以激活的TIL的杀伤活性最强.     

大鼠蛛网膜下隙出血后骨髓源性神经干细胞移植对脑组织的修复作用

目的探讨大鼠蛛网膜下隙出血（SAH）后骨髓源性神经干细胞（BMSCs-D-NSCs）移植对脑组织的修复作用。方法成功建立Wistar大鼠SAH模型后,随机分为对照组、DMEM组和BMSCs-D-NSCs组,SAH模型两次采用枕大池注入0.3mL自体血的方法建立,后两组在模型制作后24h于枕大池分别注入30μL的DMEM和BMSCs-D-NSCs。BMSCs-D-NSCs用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记。用神经功能等级评分对移植后大鼠的神经功能进行评估;用免疫组化染色观察BrdU阳性细胞。结果BMSCs-D-NSCs组10～40d神经功能等级评分与其他两组相比,差异有显著统计学意义（F=3.508～4.444,q=3.01～3.67,P〈0.05）。在BMSCs-D-NSCs移植后约40d,取脑组织行免疫组织化学染色检查,大脑皮质内可见BrdU阳性细胞存在。结论SAH后移植BMSCs-D-NSCs可以有效地促进大鼠神经功能的恢复;BMSCs-D-NSCs能够分化为神经元从而发挥对SAH后的大脑的修复作用。     

表皮Thy—1^＋和Ia^＋树枝状细胞与接触过敏

纯系鼠在用2,4,6-Trinitrochlorobenzene(TNCB)致敏及激发后用耳肿胀实验检查其接触过敏程度,同时应用间接免疫荧光技术鉴定并计算身体不同部位表皮Thy-1~ 及表皮Ia~ 树枝状细胞(DEC)密度及动力学改变。结果表明:在TNCB激发后6小时～第10天内,耳肿胀指数较对照组显著增加.Thy-1~ DEC和Ia~ DEC在激发后18～48小时密度显著下降,从第5～21日密度显著上升,以后恢复到正常水平。上述结果表明;同Ia~ DEC一样,Thy-1~ DEC在接触过敏中扮演了一定的角色。     

细菌脂多糖对人外周血单核细胞来源的树突状细胞发育和功能的影响

目的 :探讨细菌脂多糖 (LPS)对正常成人外周血单核细胞来源的树突状细胞 (Dendritic cell,DC)表面分子表达及免疫功能的影响。方法 :分离正常人 (n=5 )外周血单个核细胞 (PBMC)以 GM-CSF、IL-4联合诱生 DC,实验组在培养的第 2天加入LPS,正常对照组不加。于第 4、8天 FACS检测 DC表面分子 CD1a、CD14、CD83、CD80、HL A-DR的表达。同期检测 DC的增殖和刺激同种异体 T淋巴细胞的增殖情况。结果 :经 LPS刺激后 ,正常人 DC早期、晚期表面分子 CD1a、CD83、CD80表达增高 ,CD14表达降低 (P<0 .0 5 )。DC数量的增加及刺激同种异体 T细胞能力明显增强。结论 :GM-SF、IL-4和 L PS联合刺激能促进正常人 DC的成熟和免疫功能的提高     

大鼠淋巴树状突细胞与巨噬细胞的形态学观察

对大鼠淋巴树状突细胞(LDCs)和巨噬细胞(Mφs)的观察结果如下:相差镜下 LDCs 突起持续伸缩而 Mφs 呈静止球形;扫描电镜下 LDCs 表面光滑而 Mφs 表面多皱褶和微绒毛;透射电镜下 LDcs 细胞器很少而 Mφs 细胞器发达;免疫荧光梁 Ia 抗原,LDCs 呈强阳性反应而 Mφs 弱阳性或阴性;S-100蛋白免疫染色,LDCs 呈强阳性反应而Mφs 阴性;ACP 反应 Mφs 强阳性而 LDCs 弱阳性或阴性。因此 LDCs 和 Mφs 可用 S-100蛋白和 ACP 两种染色来判断区分。在悬液细胞,相差镜和扫描电镜检查也有鉴别意义。     

大鼠脾悬液和原位树状突细胞的免疫组化观察

采用 ABC 免疫酶标技术,观察了大鼠脾悬液和原位树状突细胞的 S-100蛋白免疫反应性。结果表明,脾悬液标本中的淋巴树状突细胞(LDC)和脾石蜡切片标本中的交错突细胞(IDC)、滤泡树状突细胞(FDC)均为显示棕黄色反应的 S-100蛋白阳性细胞。结合扫描电镜和透射电镜观察的结果,支持了 LDC 在体内的等同细胞是 IDC 的观点。