用多孔微载体Cytopore高密度培养CHO工程细胞和两株杂交瘤细胞

采用Ｃｙｔｏｐｏｒｅ多孔微载体和低血清添加剂，在１．５ＬＣｅｌｉｇｅｎ灌流培养系统中成功地培养了重组ＣＨＯ工程细胞ＣＬ－１１Ｇ和产尿激酶原单抗的杂交瘤细胞。细胞密度均超过１×ｌ０７／ｍｌ，尿激酶原和抗体的产量均随细胞的密度增加而增加。该载体适用于大规模培养工程细胞和杂交瘤细胞     

人关节滑膜A型和B型细胞的纯化分离和体外培养

人类关节滑膜细胞主要有两种细胞类型 ,即巨噬细胞样滑膜细胞 (ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｌｉｋｅｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ ,ＭＬＣ/Ａ型细胞 )和成纤维细胞样滑膜细胞 (ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｌｉｋｅｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ ,ＦＬＣ/Ｂ型细胞 )。目前已建立的分离培养ＦＬＣ模型[1、2 ] ,其分离纯度不高 ,建立模型所需时间较长 ,而国内尚未有ＭＬＣ体外培养模型的报道 ,限制了对ＭＬＣ、ＦＬＣ的病理生理作用的深入研究。故建立一种分离、培养高纯度人类关节滑膜Ａ、Ｂ型细胞模型具有重要意义。1　材料与方法1 1　人类滑膜细胞的分离、培…     

低温保存对人体皮肤表皮LC游走功能的影响

目的：探讨低温保存皮肤抗原性下降的原因。方法：冻存皮肤经体外培养和在体异种移植实验后,用ＡＴＰ酶染色方法测定皮肤表皮ＬＣ密度,以新鲜皮肤为对照。结果：经体外培养和在体移植实验后冻存皮肤表皮ＬＣ密度均高于正常对照组。结论：冻存皮肤表皮ＬＣ游走功能减弱是低温保存皮肤抗原性下降的原因之一。     

人尿激酶原工程细胞株CL—11G细胞外源因子的检测

目的：对工程细胞株的要求之一是不应被外源因子污染。因此有必要对表达人尿激酶原的工程细胞株ＣＬ－１１Ｇ进行外源因子的检测。方法：用普通肉汤,改良马丁和硫乙醇酸盐三种培养基对ＣＬ－１１Ｇ细胞进行培养,检查细菌和霉菌;用培养法;ＤＮＡ荧光染色法,单克隆抗体免疫荧光法及电镜检查支原体。用ＣＬ－１１Ｇ细胞悬液分别接种乳小鼠,成年小鼠,豚鼠,家兔,鸡胚及５种细胞,检查有无内外源性病毒污染。结果：ＣＬ－１１Ｇ细     

携带人FIt3—Iigand基因逆转录病毒载体的构建及其在小鼠骨？…

Ｆｌｔ3ｌｉｇａｎｄ(ＦＬ)是近年来新发现的一种细胞因子,属于Ｉ型穿膜糖蛋白,具有膜结合型和分泌型两种不同的表达形式。ＦＬ与ＩＬ3、ＩＬ6、ＳＣＦ及ＧＭＣＳＦ等细胞因子协同刺激造血干/祖细胞增殖,因而在造血干/祖细胞的体外培养中获得了广泛应用。ＦＬ及ＧＣＳＦ协同作用能够动员造血干/祖细胞进入外周血,另外,ＦＬ还具有抗肿瘤的作用。人和小鼠ＦＬ基因在基因组中的结构十分相似,它们在核酸水平上有76%的相似性,在氨基酸水平上有72%的相似性。人ＦＬ可作用于小鼠细胞,产生与小鼠ＦＬ相同的生物学效应。为了研究ＦＬ在造血过程中的作…     

稀土对小鼠表皮Langerhans细胞的影响

用ＡＴＰ酶染色等方法观察了稀土对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠表皮Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）的影响。结果显示：接触组表皮ＬＣ密度及Ｉａ抗原阳性ＬＣ密度明显下降，细胞分布不均匀，ＬＣ树支状胞突减少、变短或消失。组织学表现为接触组皮肤增厚和弹力纤维、网状纤维增生。认为稀土可以损伤表皮ＬＣ。     

培养基和溶氧对重组霍乱毒素B亚单位产量的影响

研究了培养基和溶氧对ＭＭ２工程菌产霍乱毒素Ｂ亚单位的影响。用正交试验获得了高产且廉价的ＹＣＰ培养基，０．０２５－０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐是霍乱素Ｂ亚单位高产所必需的。提高溶氧以提高产率和缩短培养时间，在５Ｌ发酵罐中培养平均产量达９３．３ｍｇ／Ｌ。分析并讨论了ＭＭ２工程菌的培养动力学过程。     

CD3单抗对自体LAK细胞增殖作用的观察

有效的ＩＬ - 2 /ＬＡＫ细胞治疗必需具备两个主要条件 ,一是增强ＬＡＫ高效杀伤活性 ,二是大量扩增足够数量的ＬＡＫ细胞 ,一般认为每次的细胞输注数不得少于 10 11。因此如何制备质量高数量多的ＬＡＫ细胞是提高临床疗效的关键所在。Ａｎｄｅｒｓｏｎ(1998) [1] 等报道用ＣＤ3 单抗和ＩＬ - 2联合培养ＬＡＫ细胞 ,可以明显增加ＬＡＫ细胞的数量 ,为了进一步明确ＣＤ3单抗在人全血ＬＡＫ细胞制备中的合理应用 ,我们对不同浓度的ＣＤ3 单抗在不同时间对ＬＡＫ细胞的增殖作用进行了初步研究。现将结果报告如下。1　材料与方法1.1　试剂 :ＩＬ…     

308nm波长准分子激光致癌性的探讨

本实验旨在探讨波长３０８ｎｍ准分子激光的潜在致癌危险性。体外培养的成纤维细胞ＮＩＨ／３５３及肿瘤细胞ＬＡ７９５，ＦＣ和ＤＣＳ分别采用准分子激光辐照，剂量达４３２．７８ｍＪ／ｃｍ＾２。经对激光处理后细胞在琼脂中集落形成数的统计，与对照组相比未见显著差异。     

呋喃苯胺酸对白细胞介素-1β促骨髓基质细胞增殖的抑制作用

目的：观察Ｃｌ－ 通道阻断剂呋喃苯胺酸对重组人白细胞介素－１β（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－ １β,ＩＬ－ １β）诱导的小鼠骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ） 增殖作用的影响。方法：ＭＴＴ法测定原代培养的小鼠ＢＭＳＣ增殖活性。结果：ＩＬ－１β（２００～１ ０００ｋＵ·Ｌ－１） 对ＢＭＳＣ具显著的促增殖作用。呋喃苯胺酸（２０ ～５００μｍｏｌ·Ｌ－１）特异性地抑制ＩＬ－ １β的促增殖作用,效应呈浓度依赖性。结论：Ｃｌ－ 通道与ＩＬ－ １β促ＢＭＳＣ增殖作用有关,Ｃｌ－ 通道的活化参与了细胞因子ＩＬ－１β促ＢＭＳＣ增殖信号的转导     

HBs／CD3双特异性抗体介导LAK对HBVDNA转染细胞的细胞毒作用

应用化学偶联方法合成ＨＢｓ／ＣＤ３双特异性抗体，并观察其对ＬＡＫ细胞的细胞毒性作用的影响。用化学偶联剂ＳＰＤＰ将鼠源的ＣＤ３与ＨＢｓ单克隆抗体连接得到ＨＢｓ／ＣＤ３双特异性抗体；设ＨｅｐＧ－２和Ｋ５６２细胞对照组。实验显示，ＨＢｓ／ＣＤ３双特异性单克隆抗体能显著提高ＬＡＫ细胞与２．２．１５细胞结合率；应用１２５ＩＵｄＲ释放试验检测细胞毒性，发现双特异性抗体能增强ＬＡＫ细胞对２．２．１５细胞的细胞毒性，并与抗体浓度相关，ＢｓＡｂ浓度递增，细胞毒性作用随之增加。对细胞毒性作用的特异性研究表明：加入ＨＢｓ／ＣＤ３ＢｓＡｂ后，ＬＡＫ细胞对２．２．１５细胞毒性显著高于ＨｅｐＧ－２和Ｋ５６２细胞组。结果表明，ＨＢｓ／ＣＤ３双特异性抗体具有双向识别ＬＡＫ细胞和２．２．１５细胞的特性，特异地促进ＬＡＫ细胞与靶细胞结合，发挥选择性细胞毒性作用。     

外用枸杞对小鼠皮肤及表皮郎格罕细胞影响的研究

为了探讨枸杞对皮肤及表皮郎格罕细胞（Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓｃｅｌ，ＬＣ）的影响，将单味中药枸杞提取液溶于硅霜中，外涂小鼠皮肤。结果：枸杞提取液促进小鼠表皮ＬＣ数量增多、表达Ｉａ抗原功能增强；图像分析表明枸杞对真皮组织内胶原纤维、弹性纤维及ＤＮＡ含量均有促进作用。提示外用枸杞提取液有增加小鼠表皮ＬＣ数量、增强皮肤免疫功能的作用     

重组腺病毒介导mlL—12基因转染的EL—4细胞生物学特性的研究

目的：观察ｍＩＬ－１２基因转染的大鼠ＥＬ－４细胞（Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｔ淋巴瘤细胞株）体外生物学特性的改变。方法：阳离子脂质体协同ＩＬ－１２重组腺病毒感染ＥＬ－４细胞。结果及结论：基因转染的ＥＬ－４细胞有ｍＩＬ－１２的ｍＲＮＡ表达,培养上清中可以检测到ｍＩＬ－１２的生物学活性。与野生型ＥＬ－４细胞相比,ｍＩＬ－１２重组腺病毒感染的ＥＬ－４细胞形态及体外增殖能力无明显改变,转染细胞的成瘤性降低,此外,     

特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T^＋4＋8双标记细胞的分布

用减数法观察了３０例原发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患儿外周血Ｔ双标记细胞（ＤＬＣ）的分布及ＤＬＣ分别与血小板计数（ＰＣ）、血小板表面相关抗体ＩｇＧ（ＰＡＩｇＧ）、ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞及ＨＬＡ─ＤＱ＋Ｔ细胞的关系。发现：ＩＴＰ患儿的ＤＬＣ较正常对照组显著升高（Ｐ＜０．０１）。ＤＬＣ与ＰＡＩｇＧ、ＨＬＡ─ＤＲ＋Ｔ及ＨＬＡ─ＤＱ＋Ｔ均呈显著正相关（Ｐ分别＜０．０５、０．０５及０．０１），与ＰＣ呈负相关（Ｐ＜０．０５）。提示ＤＬＣ在外周血中的大量出现与ＩＴＰ发病密切相关。     

外围型非小细胞肺癌CT表现与DNA含量的关系

目的：通过外围型非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的ＣＴ表现与ＤＮＡ含量之间的关系的分析，提高ＣＴ对肺癌生物学行为认识水平。方法：通过ＣＴ和ＦＣＭ对照的方法，回顾分析４６例ＮＳＣＬＣ的ＣＴ表现与ＤＮＡ含量之间的内在联系。结果：ＮＳＣＬＣ的ＤＩ值明显高于正常肺组织（Ｐ＜０．０５），异倍体率８３％，二倍体率１７％，而正常肺组织皆为二倍体。ＮＳＣＬＣ瘤体直径大于３ｃｍ的ＤＩ值高于小于３ｃｍ的，并且异倍体也高。瘤体轮廓呈毛刺边缘的ＤＩ值高于分叶和光滑状边缘。但它们之间的ＤＮＡ倍体类型没有出现差异，也没有发现ＤＮＡ指数（ＤＩ）与胸膜改变有关，但是ＮＳＣＬＣ出现淋巴结转移者ＤＩ值较高。结论：ＦＣＭ检测ＤＮＡ含量可作为评价肿瘤生物学行为有益的补充方法。作者认为，由于ＤＮＡ含量与预后相关，因此可以从外围型ＮＳＣＬＣ的ＣＴ表现来推测其预后。     

β-glycerophosphate促进血管平滑肌细胞体外钙化

本研究旨在观察β－ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ对主动脉中膜体外钙化的促进作用，建立体外动脉钙化模型，并对血管异常钙化的机制进行初步探讨。１方法１．１平滑肌细胞的分离和培养分离家兔主动脉中膜，剪碎并接种于培养瓶中。贴壁后，加入含有２０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌ青霉素、１００μｇ／ｍｌ链霉素、２ｍｍｏｌ／Ｌ谷胺酰胺的ＤＭＥＭ，３７℃５％ＣＯ２培养。５～６代细胞按１．８×１０５／孔的密度接种于６孔培养板，７２ｈ后更换为添加有１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－ｇｌｙｃｅｒｏ－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、５０μｇ／ｍｌ维生素…     

重组腺病毒介导mIL-12 基因转染的 EL-4细胞生物学特性的研究

目的：观察 ｍ Ｉ Ｌ１２ 基因转染的小鼠 Ｅ Ｌ４ 细胞（ Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ 小鼠 Ｔ 淋巴瘤细胞株）体外生物学特性的改变。方法：阳离子脂质体协同 Ｉ Ｌ１２ 重组腺病毒感染 Ｅ Ｌ４ 细胞。结果及结论：基因转染的 Ｅ Ｌ４ 细胞有 ｍ Ｉ Ｌ１２ 的 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达,培养上清中可以检测到 ｍ Ｉ Ｌ１２ 的生物学活性。与野生型 Ｅ Ｌ４ 细胞相比,ｍ Ｉ Ｌ１２ 重组腺病毒感染的 Ｅ Ｌ４ 细胞形态及体外增殖能力无明显改变, 转染细胞的成瘤性降低。此外,研究结果还表明,阳离子脂质体能显著提高腺病毒的感染效率。     

60Coγ射线对大鼠血管平滑肌细胞L-Arg/NO生成系统的影响

经皮腔内冠状动脉成形术 (Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌｃｏｒｏ ｎａｒｙａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ ,ＰＴＣＡ)是目前治疗冠心病的有效措施之一 ,但其易损伤与剥脱血管内皮 ,导致术后血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)增生和新生内膜增厚 ,约 30 %～ 50 %的病人半年内发生术后再狭窄 (ＲＳ) [1 ] 。一氧化氮 (ＮＯ)是调节血管张力和影响血管结构变化的重要因子。ＰＴＣＡ术后血管ＮＯ生成紊乱是再狭窄发生的决定因素之一[4] 。本工作拟在培养的大鼠ＶＳＭＣ上观察60 Ｃｏγ射线辐射对ＮＯ生成系统即Ｌ 精氨酸(Ｌ Ａｒｇ)、ＮＯ…     

用国产SH－2型微载体和低血清培基灌流培养CHO工程细胞

采用国产ＳＨ—２型聚苯乙烯微载体和新研制的低血清培基添加剂ＢＩＧＢＥＦ—２，在改进了的灌流控制系统的控制下灌流培养产尿激酶原ＣＨＯ工程细胞ＣＬ—１１Ｇ，所得细胞密度超过１×１０￣７细胞／ｍｌ，尿激酶原平均活性为４００７ＩＵ／ｍｌ，最高达６６１４ＩＵ／ｍｌ，均高于以前采用５％血清的培基和Ｂｉｏｓｉｌｏｎ微载体培养时的水平，从而更有利于中试和未来的大规模工业化生产。     

局部晚期非小细胞肺癌治疗的现状及减少其肺放射性毒副反应的策略

局部晚期非小细胞肺癌 (ＮＳＣＬＣ)占全部肺癌病人的40 %左右。放射治疗是这部分病人的主要治疗方法 ,如何减少放射治疗毒副反应 ,特别是肺放射性毒副反应则是病人治疗策略制订时所必须考虑的。一、局部晚期ＮＳＣＬＣ治疗的现状与发展趋势局部晚期ＮＳＣＬＣ指ⅢＡ和ⅢＢ的病人。手术、化疗、放疗或其他治疗方式的综合治疗是这部分病人的主导治疗策略。手术治疗主要针对小部分具备手术条件的ⅢＡ病人 ,如Ｔ3Ｎ1Ｍ0期病人 ,而大部分病人则是接受放化疗为主的综合治疗。以铂类为主的化疗方案的化疗可以提高局部肿瘤控制率和病人远期生存率 ,…