高温致金黄地鼠神经管畸形中细胞凋亡的组织学观察

为研究细胞凋亡与高温致神经管畸形的关系，采用核固红－结晶紫染色方法和电镜技术，观察高温后胚胎发育变化。结果显示，高温后８ｈ胚胎发育迟滞，神经管延迟闭合或不闭合，胚胎各段尤期是头部的神经上皮和周围间充质的细胞凋亡比对照组增多，其超微结构改变为染色质浓缩，边聚，核膜皱缩，微绒毛消失并出现异常的包质突起；１６ｈ后细胞凋亡明显增多，胞质内出现了大量空泡，凋亡小体增多；     

aFGF在高温致神经管畸形中作用的免疫组织化学研究

在已建立的高温致神经管畸形的动物模型上，用免疫组织化学方法，对高温处理后的孕鼠之不同发育阶段的胚胎进行酸性成纤维细胞生长因子免疫组织化学染以，观察其在各期胚胎的神经上皮及春周围间充质，内界膜和脊索中的分布和变化。     

高温致神经管缺陷过程中凝集素受体变化的实验动物研究

妊娠金黄地鼠随机分为实验组和对照组,前者于受精后第８天置４２℃水浴中持续２０ｍｉｎ,后者置３７℃水浴中持续２０ｍｉｎ。分别于高温后８、１２、２４、４８ｈ剖腹取胎,石蜡包埋,连续切片。应用生物素标记的花生凝集素、刀豆凝集素、麦胚凝集和荆豆凝集素为分子探针作亲合细胞化学染色,对各期鼠胚神经上皮及其基膜、脊索和神经管周围间充质中相应受体糖基进行定性、定位和半定量观察。结果显示,正常胚胎神经上皮及其周围组     

高温致金黄地鼠神经管畸形的上调表达基因筛选及其鉴定

目的:筛选高温致金黄地鼠神经管畸形的上调表达基因,探讨其分子生物学机制。方法:通过抑制性消减杂交技术获得消减产物,转化大肠杆菌DH5α,构建高温致金黄地鼠胚胎神经管畸形的消减cDNA文库;联合蓝白斑和菌落PCR方法筛选含插入片段的阳性克隆,进行测序和同源性分析,并经Northern杂交技术检测基因的表达。结果:成功构建高温致金黄地鼠胚胎神经管畸形的消减cDNA文库,其中2个克隆插入片段的基因序列与小鼠磷酸甘油酸酯激酶(Pgk-1)同源。Northern杂交证实该基因在高温致畸胚胎神经管的表达较其在同龄正常胚胎神经管明显升高。结论:Pgk-1的上调表达可能与高温致神经管畸形密切相关。     

应用抑制性消减杂交技术筛选及鉴定高温致金黄地鼠神经管畸形下调表达基因

目的克隆高温致金黄地鼠神经管畸形下调表达基因，探讨其分子生物学机理。方法应用抑制性消减杂交技术构建高温致畸金黄地鼠胚胎神经管反向消减cDNA文库；联合蓝白斑和菌落PCR方法筛选阳性克隆进行测序和同源性分析；用Northern印迹方法证实这些基因的表达。结果成功构建高温致畸金黄地鼠胚胎神经管反向消减cDNA文库，从中筛选到15个基因，均与GenBank中已知基因有同源性。Northern印迹证实这些基因在高温致畸胚胎神经管中均呈下调表达。结论发现了高温致金黄地鼠神经管畸形过程中的一些重要相关基因并对其功能进行了初步探讨。     

神经管畸形动物模型的研究进展

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是一类常见的发病率高且后果严重的出生缺陷,为影响我国出生人口素质的重要问题.目前,其大部分研究内容依靠动物模型来完成.神经管畸形动物模型的建立对研究其发病机制及其防治起着重要作用.本文从物理和化学两方面因素对神经管畸形动物模型诱导方法及其机制作一综述.     

HMGB1在高温致金黄地鼠神经管畸形神经上皮细胞中的表达变化

为了探讨高温致神经管畸形(NTDs)作用的分子机制,为预防人类NTDs的发生提供理论依据,本研究在高温致金黄地鼠NTDs模型的基础上,研究HMGB1在高温致金黄地鼠NTDs神经上皮细胞中的表达变化。将孕鼠随机分为实验组和对照组,分别于水浴处理后8、16、24、40、64 h(相当于胚龄第8、8.5、9、9.5、10.5 d)处死孕鼠,剖腹取鼠胚,制备石蜡切片,应用免疫荧光染色技术检测NTDs发生过程中HMGB1在神经上皮细胞中的表达变化。结果显示:对照组和模型组孕鼠在水浴处理后8、16、24h,HMGB1免疫阳性产物分布于鼠胚神经上皮细胞和周围间充质细胞的胞浆中;水浴后40、64 h,HMGB1表达部位出现了由胞浆向胞核的转移;高温处理后,HMGB1在实验组各期胚胎神经上皮细胞内的表达均比对照组减弱。上述结果提示,HMGB1的表达变化与神经管发育密切相关,其表达降低是高温致神经管畸形发生的重要途径之一。     

高温致畸金黄地鼠神经管cDNA文库的构建与鉴定

目的:构建高温致畸金黄地鼠神经管cDNA文库。方法:在高温致神经管畸形动物模型上,提取高温致畸金黄地鼠胚胎神经管总RNA,用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒反转录合成cDNA第1链,经LD-PCR合成全长双链cDNA,去除小于500 bp的片断后与λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成未扩增cDNA文库,再进行文库扩增。测定未扩增和扩增文库的滴度及重组率;随机挑取噬菌斑,经PCR扩增,电泳检测所构建cDNA文库的质量。结果:未扩增文库滴度为2.03×106pfu/ml,重组率为98.4%,文库扩增后滴度达2.503×109pfu/ml,重组率为97.6%。插入片段长度分布于500~3 000 bp之间。结论:成功地构建了高质量的高温致畸金黄地鼠神经管cDNA文库。     

酒精致金黄地鼠神经管和眼畸形的实验研究

目的 观察酒精致金黄地鼠胚胎神经管和眼畸形发生过程的形态学改变,并定量观察致畸过程中的细胞凋亡。方法 实验组孕金黄地鼠分别用腹腔注射酒精致畸处理后4、8、16、24、48和72h剖腹取胚或胎,在光镜、体视显微镜和扫描电镜下观察胚胎神经管和眼的畸形发生中的形态变化;借助TUNEL法和透射电镜,定量研究神经管和眼畸形发生过程中的细胞凋亡。结果 1．酒精可使金黄地鼠神经管和视杯的发生明显延迟。2．酒精处理后8h,神经上皮细胞凋亡显著增加,尤以前脑和神经嵴处明显;16h和24h,凋亡仍大量存在,主要位于神经嵴和延迟发生的视沟部位;48h后神经上皮细胞凋亡逐渐减少。结论 酒精可使金黄地鼠神经管和视杯的发生明显延迟,神经上皮和视泡、视杯上皮细胞过度凋亡,这可能是酒精致神经管和眼畸形的机理之一。     

环磷酰胺对SD大鼠的致畸作用及其致神经管畸形形态发生的观察

本实验选用雌性SD大鼠,妊娠第13天腹腔注射环磷酰胺(15mg/kg体重),分別于给药后4、8、12、24、48小时及妊娠第20天剖腹取胎,进行大体形态、光镜和透射电镜观察。结果显示环磷酰胺有明显的胚胎毒作用和致畸作用(致畸率为97.46％),神经管畸形较常见。在光镜下可见给药后8小时,神经上皮细胞开始变性、死亡,最早受影响的部位是端脑和后脑神经上皮的套层;给药后24小时损伤最重,范围广泛。电镜观察见线粒体、内质网等细胞器肿胀、溶解;单位膜模糊;细胞核固缩,电子密度增高。受损区域可见许多髓样小体、空泡、残余体等,神经管周围的间充质细胞排列紊乱,细胞死亡伴间质水肿。给药后48小时,吞噬细胞清除坏死组织并留下较大间隙。上述结果提示,环磷酰胺主要作用于DNA合成活跃的神经上皮细胞,并使其变性、死亡,还可引起线粒体等细胞超微结构的破坏;并能损伤神经管周围的间充质,干扰骨的发生过程。     

金仓鼠神经管cDNA文库的建立

目的　构建金仓鼠神经管cDNA文库,以筛选与神经管发育及神经管畸形发生相关的基因。　方法 　用TRIZOLReagent提取金仓鼠神经管总RNA;用LD PCR法反转录合成双链cDNA;经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、 CHROMASPIN 400柱分离去除小于500bp的片段;将cDNA与载体λTriplEX2按一定比例连接;经体外包装,建立 cDNA的噬菌体表达文库。　结果　cDNA文库容量为1.5×106pfu ml,重组率为99%,平均插入片段大于1kb。　 结论　我们初步构建的金仓鼠神经管cDNA文库为高效的cDNA文库。     

Nestin在高温致畸神经管的表达及多种维生素和微量元素对神经管畸形的保护作用

本研究旨在探讨高温致神经管畸形(NTD)中巢蛋白(nestin)的表达规律及多种维生素和微量元素对NTD的保护作用。孕鼠随机分为实验组和对照组。实验组又进一步分为3组,A组:孕前第8d开始灌服多种维生素和微量元素;B组:孕后第1d开始灌服;C组:不灌服。孕鼠分别于孕第8d高温处理,对照组不灌服多种维生素和微量元素,也不进行高温处理。对以上各组胎鼠进行形态学观察,计算神经管畸形发生率;利用免疫荧光染色观察nestin在胚胎不同发育时期的神经上皮细胞中的表达规律。结果显示,在实验组中,C组神经管畸形发生率最高,为77.5%;各组鼠胚神经上皮细胞胞质中nestin呈阳性染色,实验C组的染色明显弱于其它组;不同发育阶段各组染色强度不同。结果提示,nestin低表达是神经管畸形发生的重要因素,多种维生素和微量元素对高温致神经管畸形有保护作用。     

卡氏肺孢子虫肺炎大、小鼠低死亡率动物模型的建立

为建立低死亡率卡氏肺孢子虫肺炎 (PCP)SD大鼠和ICR小鼠动物模型 ,本试验将雌性SD大鼠和ICR小鼠分别随机分为实验组和对照组 ,实验组采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法 ,免疫抑制诱导建立PCP动物模型 ,对照组注射与地塞米松等体积的生理盐水。分别制作肺印片 ,经瑞 姬氏复合染色后 ,检查卡氏肺孢子虫包囊。制作肺组织病理切片 ,经HE染色后观察肺组织病理变化。用地塞米松诱导后 ,实验组SD大鼠和ICR小鼠死亡率均为 0 ,肺印片阳性率均为 76 7% (2 3 30和 2 3 30 )。肺组织出现典型的病理变化 ,并可观察到Pc包囊。实验组SD大鼠体重下降明显 ,与对照组体重比较具有极显著性差异 (P <0 0 1)。ICR小鼠经诱导后 ,体重变化不显著。采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法可建立低死亡率PCP动物模型     

MAPKs信号转导蛋白在高温致神经管畸形中的表达

目的:探讨高温致畸中MAPKs激酶中的ERK1/2通路与JNK1/2通路蛋白表达及其作用,进一步揭示高温致畸机制。方法:在高温致金黄地鼠畸形的动物模型上,应用Western blotting技术检测对照组和高温组胚胎的丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2及JNK1/2的表达及其磷酸化水平。结果:p-ERK1/2在对照组稳定表达;高温作用后p-ERK1/2表达与对照组相比活性降低,差异明显(P0.05);p-JNK1/2在对照组不表达,在高温组各时段均出现表达,并于高温作用后16h活性达最大值,与对照组差异明显(P0.05)。结论:高温可导致胚胎MAPKs信号转导通路中p-ERK1/2活性表达降低、p-JNK1/2活性升高,引起胚胎发育过程中细胞增殖和凋亡的失衡,从而导致胚胎先天缺陷的发生,这可能是高温致畸的一条重要途径。     

新型微波热疗机研制及其临床应用

重点对新型电脑微波热疗机的构成、测温控温方案进行了研究。采用自适应广义预测控制算法对热疗温度进行控制，解决了因更换不同辐射器导致对象特性变化使控制性能降低的问题，从而得到了满意的疗效。文中介绍了该仪器关键的硬件、软件设计，基本的特点和临床应用     

制作冲击创伤性关节内骨折动物模型的实验研究

目的：制作关节内骨折动物模型。方法：以重锤自由下落做功条件和凿开法制作兔膝关节内骨折模型。采用16DJL－10型高速摄影拍摄撞击作用过程,计算撞击作用时间和冲击作用刀,共实验11只家兔。另21只家兔以WE-10A万能材料试验机,测得近膝关节部位股骨冲击状态下破坏载荷、强度、弹性模量及其它生物属性。所有数据由IBM-586计算机进行统计学处理。结果：11只家兔（22个膝关节）造模制得关节内骨折模型18个（81．8％）。另发生1个股骨下端粉碎性骨折,3个骨折线自股骨外髁偏出。造模撞击作用时间为8．5毫秒。冲击作用为303．64牛顿,大于兔股骨的横向破坏载荷（131．2牛顿）。结论：按标准化程序,经guo窝后入路切凿股骨,可造成兔膝关节内骨折动物模型。