晶体蛋白基因的转录调控与其超螺旋构形的关系

本文在一个克隆化的基因组系统中,研究了DNA超螺旋结构在α-晶体蛋白基因表达中的调控作用;测定了调节基因区及其对转录过程的影响.结果显示α-晶体蛋白基因可被RF-36蛋白因子特异性激活.足迹法分析表明其调控结合区为核苷酸“-AGGGCTGGAA-”,能与特定的DNA配位体结合,例如抗Z-DNA单克隆抗体和Chiral金属复合物,此种结合表明α-晶体蛋白基因富含“GC”盒,并具有类似“Z”型的DNA构型.所获结果还提示,DNA高度有序的结构在α-晶体蛋白基因的表达调控过程中起重要作用.     

人甲胎蛋白基因转录调控元件的改造

目的 为构建高效利用甲胎蛋白（ＡＦＰ）基因转录调控元件（ＴＲＥｓ）,驱动治疗基因在肝癌细胞中特异性表达的基因治疗载体,对天然人ＡＦＰＴＲＥｓ进行改建和鉴定。方法 采用亚克隆技术,删除了天然人ＡＦＰＴＲＥｓ中含有沉默子活性的－０．８７－－３．０６ｋｂ区域,将具有增强子活性的－３．０６－－５．１ｋｂ片段和调控ＡＦＰ基因表达的启动子“核心”区域＋２９－８７０ｂｐ片段连接,获得经人工改造后的基因转录调控元     

端粒、端粒酶及其基因转录调控与肿瘤

近年来，随着人们对肿瘤特别是恶性肿瘤研究的不断深人，端粒、端粒酶及其基因转录调控与肿瘤的关系逐渐成为大家探索的热点，“端粒—端粒酶”假说已被越来越多的实验证实。现就目前的研究进展作一综述。     

环氧化酶2与心血管疾病的关系及其转录调控

环氧化酶(COX)是花生四烯酸代谢过程中的重要限速酶,其中COX-2是诱导型酶。COX-2及其代谢产物对动脉粥样硬化、高血压和心力衰竭等多种心血管疾病的发生、发展起着重要作用。COX-2的表达受多种转录因子调控,包括核因子κB、C/EBP、激活蛋白1和丝裂原活化蛋白激酶等。本文综述了COX-2与心血管疾病之间的关系、COX-2表达的转录调控及其影响因素。     

SP1调控PIWIL1基因启动子转录活性研究

目的 克隆转录因子SP1编码序列,构建真核表达质粒PCDNA3.1-SP1,并研究其对PIWIL1基因转录活性的影响。方法 RT-PCR法从正常人外周血总RNA中钓取SP1基因的编码序列,插入至真核表达载体PCNDA3.1（+）,酶切及测序鉴定重组质粒。Western blot法分别验证重组表达载体的在COS-7细胞中的表达效应。分别将活性最高的PIWIL1基因启动子报告基因截短体（即核心启动子区域）、活性最低的PIWIL1基因启动子报告基因截短体,与SP1重组质粒共转染COS-7细胞,利用Dual-Luciferase reporter assay system测定不同启动子活性区的PIWIL1基因转录活性的改变,同时应用光辉霉素A下调SP1的表达来进一步验证SP1对PIWIL1活性的影响。结果 酶切及测序鉴定结果显示SP1表达质粒构建成功,Western blot法结果表明重组SP1表达载体能有效表达于COS-7细胞,过表达SP1可明显提高PIWIL1不同活性区的启动子的活性（P<0.05）。结论 外源性SP1真核表达载体转染能有效表达于COS-7细胞,并对PIWIL1的转录活性起着上调的作用,提示SP1可能是PIWIL1转录活性的正调控元件之一。     

Visfatin转录调控的生物信息学分析

目的:分析Visfatin基因可能的转录启动子区段及转录因子结合位点.方法:检索网上数据库资料,获得Visfatin的转录本信息;运用CpG/CpGReport/Isochore和FirstEF对Visfatin基因进行CpG岛分析和第一外显子预测;利用PromoterScan等程序对Visfatin的启动子进行预测.再用Matlspector、TFSEARCH和Match预测潜在的调控元件及转录因子结合位点.结果:目前已知的Visfatin转录本中,5'UTR区最长的序列为NM_005746;Visfatin基因属于典型的CpG岛相关基因,在NM_005746的5'上游229bp到798bp内很可能存在启动子,在该区域内发现了一些重要的顺式作用元件.结论:NM_005746的5'上游229bp到798bp内存在一些重要的顺式作用元件,通过实验确认这些转录因子结合位点有重要意义.     

肝组织选择性细胞通讯类基因转录调控网络的构建

目的 探讨肝脏组织选择性基因表达的转录调控机制.方法 按照基因功能的差异对组织选择性Affymetrix探针集(共3919条探针)进行聚类,挑选肝组织选择性细胞通讯类(LSCC)基因进行研究.收集各基因上游的500个碱基序列,用3种软件分别预测这些基因的转录因子(TFs)以及转录因子结合位点(TFBS),并进行文献挖掘,最后构建基因转录调控网络.结果 获得含23个基因的肝组织选择性细胞通讯类探针集,两种软件预测分别得到50和72个TFs,两者交集有18个相同TFS,得分最高前10条TFBS序列基本上与预测的TFs相对应,文献挖掘结果提示LSCC基因和TFs除具有肝组织的选择性、转录因子的一般性词汇外,还与白蛋白、糖尿病、葡萄糖、脂类、代谢、JNK等显著相关.调控网络显示LSCC基因和TFs具有参与糖、脂代谢调节,结合、转运功能,凝血信号转导,炎症应答等功能,未进入网络的PPP2RIB基因与网络中DUSP10基因部分功能相似.结论 LSCC基因和预测的TFs参与肝脏多种重要功能的调控,这些功能整合在复杂的转录调控网络中,转录因子JUN可能是发挥调控作用的重要靶点,推测PPP2R1B也可能参与几肿的调控.     

SIRS期NF－κB的基因转录调控

炎症反应综合征 (ＳＩＲＳ)是多器官功能失常综合征 (ＭＯＤＳ)重要的发病基础 ,是在多种因素的作用下机体产生细胞因子、炎症介质的应激状态 ,使致炎与抗炎体系失衡的临床症候群。最近的研究发现 ,许多细胞因子和炎症介质由转录因子ＮＦ -κＢ(ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ -κＢ)调控[1] 。ＮＦ -κＢ最初是由Ｓｅｎ等[2 ] 从Ｂ淋巴细胞核中提取的一种与免疫球蛋白κ轻链基因的增强子κＢ序列特异结合的蛋白因子 ,后被证明广泛存在于淋巴细胞和非淋巴细胞中。细胞在静息状态下 ,ＮＦ -κＢ以无活性状态潜伏于细胞质中 ,在细胞受到炎症介质…     

小鼠PGC-1α基因启动子的转录调控功能分析

目的 克隆小鼠PGC-1α基因的启动子并分析其转录调控模式.方法 设计引物,以小鼠肝脏组织DNA 为模板,PCR扩增PGC-1α基因启动子区并克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic 中,构建具有PGC-1α启动子转录活性的报告质粒pGL3-PGC-1α-Luc.通过特异性引物,引入替换碱基突变相关转录因子调控模序,构建点突变融合载体,并将其转染1c1c7 及c2c12 细胞系,检测荧光素酶的表达情况.结果 构建的pGL3-PGC-1α-Luc 系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA 测序分析都显示正确;PGC-1α基因启动子区域（-2533~＋78）具有较强的转录活性;突变失活PGC-1α基因启动子区域中的CRE及IRE反应原件导致转录活性明显降低.结论 成功构建小鼠PGC-1α基因启动子报告质粒,PGC-1α基因上游区域（-2533~＋78）具有较强的启动子活性;启动子区域中的CRE和IRE反应原件为主要转录调控位点.     

microRNAs 转录与表观遗传调控的研究进展

小分子RNA（microRNAs,miRNAs）是由17-25个核苷酸组成的非编码RNA,参与调节多种生物功能,包括发育、细胞增殖、细胞分化、信号传导、凋亡、代谢和寿命等。但关于miRNA调控的相关分子机制很大程度上仍未知。新近研究表明,转录调节或表观遗传改变可能是miRNA表达的重要调节机制。本文综述了miRNA转录和表观遗传调控的最新进展,对了解miRNA的调控具有重要意义。     

热休克蛋白90β基因上游片段的转录调控活性研究

以人工合成的一对寡核苷酸为引物和人外周血淋巴细胞γＧＥＭ－１１基因文库为模板，通过ＰＣＲ护增并克隆了人ＨＳＰ９０β基因上游－１１０２／＋６８ｂｐ片段。将该片段删虍后克隆在报告基因－－荧火虫荧光素酶基因５｀上游，转染Ｊｕｒｄａｔ细胞后测定不同刺激条件下细胞裂解液中的荧光酶活性并同时测定荧光酶ｍＲＮＡ水平。结果表明，ＨＳＰ９０β基因上游片段在正常生理状态下通过启动子介导较高水平的基础转录；热休克时该片     

人NaDC1基因启动子序列转录调控元件的初步分析

目的 对hNaDC1基因启动子序列转录调控元件进行初步分析.方法 构建hNaDC1基因5'侧翼序列系列缺失质粒,以双荧光素酶报告基因检测系统检测hNaDC1基因5'侧翼区(-2 232/ 136)的转录调控元件与转录调控蛋白之间的相互作用.结果 pGL3-hNaDC1A质粒的转录活性最高,为(2.98±0.45);pGL3-hNaDC1D的转录活性最低,为(0.45±0.14).以pGL3-hNaDC1A质粒的转录活性为基准(100%),其他4种质粒相应的转录活性分别为:pGL3-hNaDC1B 86.7%,pGL3-hNaDC1C 89.4%,pGL3-hNaDC1D 15.8%,pGL3-hNaDC1E 61.2%.MatInspector 5.0软件预测结果显示hNaDC1基因5'侧翼启动子序列共含有22个14种转录因子结合位点.结论 hNaDC1基因5'侧翼区-1 084/-254和-12/ 136区域可能存在有正性作用转录因子的结合位点.     

继发性甲状旁腺功能亢进症的甲状旁腺激素基因转录后调控机制研究进展

继发性甲状旁腺功能亢进症（secondary hyperparathyroidism,SHPT）是以甲状旁腺激素（parathyroid hormone,PTH）分泌增加为特征的慢性肾脏病患者最常见的严重并发症之一。多项研究证实,PTH mRNA相关结合蛋白和miRNAs参与靶基因PTH转录后调控机制,调节PTH mRNA的稳定性和水平,对SHPT中高PTH表达起重要作用。转录后调控机制可能作为指导SHPT诊治的潜在临床应用价值亟待进一步探索。本文将就SHPT的PTH基因转录后调控机制研究进展展开综述。     

转录调控因子在中药次生代谢调控中的研究进展

许多中药的有效成分为植物次生代谢产物,具有重要的药用价值。但次生代谢的产物的量往往很低。转录调控因子可调控多个参与代谢途径基因的表达。采用基因工程的方法调控转录因子,往往可导致植物中该转录因子所控制性状的较大改变,从而提高中药中有效成分的量,具有广阔的应用前景。     

ZHX2调控HBV转录活性的研究

【目的】 乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染是原发性肝细胞癌(HCC)发生的重要因素,HBV的复制与表达受宿主肝细胞内多种转录因子调控,寻找宿主细胞内抑制HBV启动子活性的转录因子,将为实现控制HBV复制、阻断HCC发生提供重要理论依据。研究证实,新型转录抑制因子ZHX2能抑制肝癌重要标志物AFP和GPC3的表达,并通过抑制cyclinA/E启动子,在HCC发生中发挥抑癌作用。本室前期研究发现HCC组织中ZHX2表达与HBcAb相关,然而ZHX2是否抑制HBV转录迄今尚未报道。本研究旨在探索ZHX2对HBV基因启动子活性的调控作用及其分子机制。 【方法】 设计引物,以pcDNA3-HBV1.1质粒为模板PCR扩增获得HBV不同启动子片段,克隆入pGL3-Basic,构建HBV启动子报告基因表达载体。ZHX2过表达载体分别与HBV不同启动子报告基因表达载体共转染肝癌细胞系HepG2.2.15、BEL7402、HepG2细胞,双荧光素酶报告基因检测启动子活性变化;干扰NF-YA后检测启动子活性变化。在HepG2.2.15细胞过表达ZHX2,ELISA、RT-PCR、蛋白质印迹法检测HBV基因转录表达。 【结果】 成功构建HBV核心启动子(core promoter, CP)、前S1区启动子(SPI)、前S2及S区启动子(SPII)和X基因启动子(XP) 的报告基因表达载体pGL3-CP、pGL3-SPI、pGL3-SPII、pGL3-XP。4种载体在不同细胞中均表现出良好启动子活性(P<0.05)。共转染及双荧光素酶报告基因检测结果显示,HepG2.2.15细胞内ZHX2过表达可明显抑制CP、SPII、XP活性(P<0.01);干扰NF-YA可抑制SPII 活性(P<0.05),并消除了过表达ZHX2对SPII启动子的作用,提示ZHX2通过抑制NF-YA下调SPII活性。蛋白质印迹结果证实了ZHX2的过表达效果;与对照组相比,ZHX2过表达组actin水平基本一致,提示ZHX2并非通过影响细胞增殖而调节HBV转录。ELISA结果显示,ZHX2转染6 h 后细胞上清中的HBsAg、HBeAg显著降低 (P<0.05);RT-PCR结果发现,ZHX2转染48 h后明显降低HBV pgRNA表达,进一步证明ZHX2能抑制HBV基因的转录活性。 【结论】 ZHX2能抑制HBV CP、SPII、XP启动子活性,并抑制HBV pgRNA的合成,降低HBV抗原表达,提示ZHX2在HBV相关疾病防治中的潜在价值。     

Ub--一种高效的转录调控子

在酵母和哺育动物细胞中[1],Ub(全称Ubiquitin,又称泛肽途径)可以介导多种细胞功能,如异常蛋白清除、DNA修复、细胞周期调控、信号转导、孢子形成、胁迫响应、肿瘤蛋白降解等.在植物中,Ub途径功能的研究也取得了一定进展,如它参与光敏素A周转,细胞程序性死亡,异常蛋白清除等过程的调节.最近,Ub作为启动子在真核基因转录调控方而的作用也逐渐受到重视.     

人类PPARγ基因5′-非翻译区转录调控序列生物信息学分析

目的:对人类PPARγ基因5′-非翻译区进行生物信息学的分析。方法:通过搜索网络数据库,得到PPARγ基因翻译起始点上游约2 kb的序列。运用PROMOTER SCAN分析该序列可能的启动子区域,利用在线分析软件EMBOSS、MethPrimer和CpG Island Searcher分析该序列潜在的CpC岛,运用TFSEARCH软件分析该序列潜在的转录因子结合位点。结果:人类PPARγ基因5′-非翻译区转录起始位点上游反向链2 425到2 175区具有启动子活性,在启动子上具有TATA盒。PPARγ基因5′-非翻译区转录起始位点上游2 kb序列存在包括MyoD、HSF和Nkx-2等19个转录因子的潜在结合位点,不存在CpG岛。结论:该实验为后续的PPARγ基因的转录调控研究奠定基础。