牛血浆纤维粘连蛋白对人牙髓成纤维细胞增殖,DNA合成,细胞…

采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）、３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验、细胞大小测定的图象分析等方法，观察不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）和人工合成肽段（ＲＧＤＳ，４０ｕｇ／ｍｌ）对外培养的人牙髓细胞的影响。ＦＮ（２０、４０ｕｇ／ｍｌ）可促进牙髓成纤维细胞增殖、刺激细胞ＤＮＡ合成，ＦＮ（１０、８０ｕｇ／ｍｌ）、ＲＧＤＳ（４０ｕｇ／ｍｌ）和空白组成对牙髓细胞无上述效应。４种浓度ＦＮ和ＲＧＤＳ（４０ｕｇ／ｍｌ）均使牙髓细     

牛血浆纤维粘连蛋白对人牙髓成纤维细胞增殖、DNA合成、细胞形态的影响

采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）、３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验、细胞大小测定的图象分析等方法，观察不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＭ）和人工合成肽段（ＲＧＤＳ，４０μｇ／ｍｌ）对体外培养的人牙髓细胞的影响。ＦＮ（２０、４０μｇ／ｍｌ）可促进牙髓成纤维细胞增殖、刺激细胞ＤＮＡ合成，ＦＮ（１０、８０μｇ／ｍｌ）、ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）和空白组对牙髓细胞无上述效应。４种浓度ＦＮ和ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）均使牙髓细胞处于伸展状态，支持细胞的粘附。说明ＦＮ可促进牙髓细胞增殖，并可通过整合素受体调节细胞与基质之间的联系。     

牛血浆FN对人牙髓成纤维细胞骨形成蛋白和碱性磷酸酶分泌和表达的影响

目的：观察纤维粘连蛋白（ＦＮ）与牙髓细胞分化的关系．方法：将传代的人牙髓细胞接种于９６孔板,分别用不同浓度牛血浆ＦＮ（１０,２０,４０,８０μｇ／ｍｌ）作用３天,进行骨形成蛋白（ＢＭＰ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的免疫组化染色,图象分析仪半定量测定,并测定培养上清液中ＡＬＰ活性．结果表明：四种浓度的ＦＮ组的牙髓细胞ＢＭＰ和ＡＬＰ表达无明显差异,ＦＮ（２０,４０μｇ／ｍｌ）组培养上清液中ＡＬＰ活性较强．结论：ＦＮ在牙髓细胞分化过程中的作用是有限的．     

牛肌腱胶原凝胶体在人牙髓成纤维细胞等原代培养中的应用

在铺有牛肌腱胶原玻璃培养瓶中进行人牙髓和牙周组织原代培养，牙髓和牙周组织的成功率分别为９／２１和５／１５，与不铺胶原的对照组（１／２１和０／１５）相比有显著差异（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）。这可能是细胞特异的高亲和力受体与胶原结合，使两者成为一个整体，增加了组织块贴壁率和细胞培养的成功率。本研究提示牛肌腱胶原铺制技术可以大大提高人牙髓和牙周组织培养的成功率。     

机械拉伸对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原及蛋白合成的影响

目的：研究拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞I型胶原及蛋白合成的影响。方法：应用酶联免疫吸附实验及考马斯亮蓝微板法对拉伸应变下的细胞合成代谢变化进行观察,应变范围为1－8％,结果：在0．5－8％拉伸应变范围内,人牙周膜成纤维细胞I型胶原合成无明显变化,但1－8％拉伸应变作用下细胞蛋白合成减少,其中2％拉伸应变影响最明显。结论：拉伸应变可改变人牙周膜成纤维细胞细胞外基质成分。     

牛血浆纤维粘连蛋白对培养的人牙髓细胞增殖,表型的影响

目的：将传代的人牙髓细胞培养于加入１０％ＦＣＳ的ＤＭＥＭ液中，其中含５０μｇ／ｍｇＬ－ＶｉｔＣ、１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－磷酸甘油钠，观察牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ，２０μｇ／ｍｌ）对细胞的增殖、表型的影响。方法：细胞培养，免疫组化染色，扫描电镜。结果：ＦＮ（２０μｇ／ｍｌ）在细胞增殖期可促进细胞增殖，但在静止期则无明显的促增殖作用，也不能改变细胞的形态、生长方式；两组细胞的ＣｏｎＡ、ＷＧＡ凝集素受体的表达也无差异。扫描电镜证实：两组细胞表面光滑。结论：ＦＮ（２０μｇ／ｍｌ）可促进含１０％ＦＣＳ的ＤＭＥＭ液中的人牙髓细胞的增殖，但不影响其表型。     

牛血浆纤维粘连蛋白对培养的人牙髓细胞ConA、WGA、SBA凝集素受体表达的影响

本文观察了不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）和人工合成肽（ＲＧＤＳ．４０μｇ／ｍｌ）对人牙髓成纤维细胞ＣｏｎＡ、ＷＧＡ、ＳＢＡ凝集素受体的影响，培养液中ＦＮ的浓度分别为１０、２０、４０、８０μｇ／ｍｌ，ＲＧＤＳ的浓度为４０μｇ／ｍｌ．凝集素受体的表达情况通过图象分析仪进行半定量分析，培养的人牙髓细胞不表达ＳＢＡ受体，ＦＮ（４０、８０μｇ／ｍｌ）可显著地使人牙髓细胞ＣｏｎＡ受体表达增强，而ＷＧＡ的受体表达减弱，ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）组的细胞ＷＧＡ的受体表达弱于ＦＮ（１０、２０μｇ／ｍｌ）组。     

体外培养人牙囊细胞Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白的表达

目的：通过体外培养人牙囊细胞，研究Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白在细胞中的表达，探讨其在牙齿萌出过程中转化为牙周膜细胞的机制。方法：取12岁患者因正畸需要拔除埋藏阻生牙齿的牙囊，组织块法进行人牙囊细胞的培养，通过免疫组织化学染色技术观察Ⅰ型胶原及纤维粘连蛋白在牙囊细胞中的表达及定位。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形、卵圆形及多角形，形似成纤维细胞。在牙囊细胞中Ⅰ型胶原和纤维粘连蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性。结论：体外培养人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性，具有合成与分泌Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白的能力。     

Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的比较研究

目的比较人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞在胶原基质合成方面的差别,并探讨其意义。方法采用组织块法体外培养人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞,利用免疫细胞化学技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原在两种细胞中的表达,通过图像分析探讨其表达的差异。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙周韧带细胞中表达阳性,在牙龈成纤维细胞中染色较弱。统计学分析显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞的免疫细胞化学染色结果具有显著性差异(P<0.01)。结论牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞胶原基质的合成或分泌存在差异,这种差异可作为鉴别两种细胞的标志之一。     

静压力大小对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达影响的研究

目的研究不同大小静压力对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的影响。方法采用第4代人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs）,对照组不加力,实验组用静压力加载装置分别施加15 kPa、30 kPa、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后立即收集样本,用免疫细胞化学染色技术检测细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达情况,用彩色病理图像分析仪分析各组细胞的阳性表达。结果与对照组比较,15 kPa压力下,实验组Ⅰ型胶原蛋白表达显著增多（t=5.806,P〈0.05）;30 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达有所下降但仍高于对照组（t=4.933,P〈0.05）;45 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达较对照组明显减少（t=5.654,P〈0.05）。结论适当大小的静压力能促进人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达,但静压力过强则会抑制其表达。     

纤维粘连蛋白影响成骨细胞增殖和Ⅰ型胶原表达的研究

目的探讨纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)对成骨细胞增殖和表达Ⅰ型胶原的影响,明确FN促进成骨细胞成骨功能的作用。方法体外原代培养大鼠成骨细胞,加入一定浓度的FN作用细胞,采用MTT法检测成骨细胞的增殖率,并利用免疫组化方法观察成骨细胞表达Ⅰ型胶原的变化,SPSS10.0统计软件进行数据分析。结果FN作用成骨细胞后,能够明显提高细胞的增殖率,细胞增殖率的差异变化有统计学意义(P<0.05),并且其作用具有剂量依赖性。以50μg/ml浓度的FN作用细胞48h,细胞表达Ⅰ型胶原的能力比空白对照组相比有显著提高。结论FN能够促进成骨细胞的增殖,并能诱导成骨细胞Ⅰ型胶原的表达。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞增殖和迁移的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）对体外培养人牙髓细胞增殖、迁移活性的影响。方法以常规组织块培养法体外获得人牙髓细胞,实验组分别加入终浓度为1.0、5.0、10.0和50.0ng/ml的bFGF,对照组仅加入等量的空白培养基,采用CCK-8法分别测定450nm下各组光吸收度A值,研究bFGF对牙髓细胞增殖活性的影响;应用Transwell小室培养法,研究bFGF对牙髓细胞迁移活性的影响。结果与对照组相比,bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下可促进牙髓细胞的增殖（P〈0.05）,bFGF最低显效浓度为1.0ng/ml,最佳显效浓度为10.0ng/ml。bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下诱导细胞迁移（P〈0.05）。结论 bFGF可诱导体外培养人牙髓细胞的增殖和迁移,在牙髓牙本质复合体修复中可能发挥重要作用。     

血小板衍化牛长因子对人牙髓成纤维细胞DNA和胶原蛋白合成的影响

目的：观察血小板衍化生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF）对人牙髓成纤维细胞（human dental pulp fibroblast,HDPF）DNA合成和胶原蛋白合成的影响。方法：应用^3H-TdR和^3H-脯氨酸掺入方法，观察PDGF对体外培养的HDPF DNA合成和胶原蛋白合成的情况。结果：20-60ng/mL PDGF可明显促进HDPF DNA的合成，40ng/mL浓度使细胞DNA合成在36h达最大值；对细胞的胶原蛋白合成无明显促进作用。结论：PDGF明显促进HDPF DNA的合成，可能在治疗牙髓病中起重要作用。     

葡萄糖浓度对人牙龈成纤维细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及纤维粘连蛋白影响研究

目的    探讨不同浓度葡萄糖对人牙龈成纤维细胞分泌Ⅰ（COL1）、Ⅲ型胶原蛋白（COL3）及纤维粘连蛋白（FN）的影响。方法    分别于5.5、7.0、8.8、10.0、15.0、20.0 mmol/L的葡萄糖溶液中培养人牙龈成纤维细胞3 ~ 7 d,酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定其分泌COL1、COL3及FN的量。结果    人牙龈成纤维细胞培养3 d后,葡萄糖浓度高于10.0 mmol/L时,COL1的分泌量减少;高于15.0 mmol/L时,COL3的分泌量减少;FN与COL3情况相似。培养7 d后,葡萄糖浓度高于10.0 mmol/L时,COL1、COL3及FN的分泌量均减少。结论    随着葡萄糖浓度的增高,人牙龈成纤维细胞分泌COL1、COL3及FN的量均有减少趋势,且高糖条件下更为明显。     

内毒素对人牙髓、牙周膜成纤维细胞DNA含量的影响

具核梭杆菌和牙髓类杆菌内毒素脂多糖(LPS)在50μg/ml浓度下可使人牙髓,牙周膜成纤维细胞核面积值和DNA含量升高,而100μg/ml浓度则可使细胞DNA含量降低,内毒素在不同浓度对细胞DNA含成的影响有显著差异。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响

目的：观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响。方法：改良组织块法培养人牙周膜细胞，免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的能力。结果：50、100、200mg/L的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞合成I、Ⅲ型胶原，其中，以100mg/L釉基质蛋白的促I型胶原合成作用最明显，50mg/L釉基质蛋白的促Ⅲ型胶原合成作用最明显。但是，这种促进作用有一定的时间性。结论：一定浓度的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原。