HIF-1α反义寡核苷酸治疗人胃癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用.方法 用人胃癌细胞株SCG-7901建立胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为反义寡核苷酸(ASOND)组、正义寡核苷酸(SOND)组和对照组,瘤体内分别注射阳离子脂质体包裹的HIF-1α ASOND、HIF-1α SOND和空白阳离子脂质体.观察各组动物的肿瘤生长曲线,测瘤重计算抑瘤率,光学显微镜下观察肿瘤细胞形态学变化,免疫组化方法 检测各组肿瘤组织HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的表达.结果 ASOND组裸鼠的肿瘤生长受到明显抑制,ASOND组瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);ASOND组、SOND组抑瘤率分别为47.94%、16.88%,差异有统计学意义(P＜0.01);ASOND组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF和MVD的表达低于SOND组和对照组(P＜0.01).结论 肿瘤原位注射HIF-1α反义寡核苷酸治疗胃癌裸鼠皮下移植瘤能降低HIF-1α的表达,继而减少VEGF的生成和新生血管的形成,抑制肿瘤的生长.     

内皮抑素基因腺病毒联合化疗治疗小鼠Lewis肺癌

目的:研究腺病毒介导的小鼠内皮抑素基因联合化疗对肺癌的综合治疗作用.方法:利用病毒重组技术将内皮抑素基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中,构建携带内皮抑素基因的重组腺病毒Ad-mES,复制小鼠Lewis肺癌的动物模型,随机分成4组,每组10只:化疗组,皮下隔日注射环磷酰胺150 mg/kg,共3次;基因治疗组,一次性瘤内多点注射6×1010 pfu/ml的Ad-mES病毒纯化液100 μl;基因联合化疗组,Ad-mES病毒纯化液联合环磷酰胺,剂量同上;对照组,以0.9%生理盐水100 μl替代环磷酰胺.定期测量各组肿瘤体积,采用Western印迹分析检测基因转导后肿瘤组织中内皮抑素的表达,应用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD),观察内皮抑素基因对肿瘤血管生长的抑制作用.结果:构建了表达内皮抑素的重组腺病毒载体Ad-mES;各治疗组荷瘤C57BL/6小鼠肿瘤生长抑制明显,以基因联合化疗组尤为显著(P＜0.01);基因治疗组和基因联合化疗组MVD与对照组和化疗组相比差异显著(P＜0.05).基因治疗过程中未见明显不良反应,且荷瘤鼠生存期明显延长,以联合治疗组为著(P＜0.05).结论:所构建的Ad-mES重组腺病毒载体可有效表达具有生物学活性的内皮抑素;并能减少肿瘤内微血管生成、减慢肿瘤增殖、延长生存期.     

内皮抑素在人子宫内膜异位症裸鼠模型中的治疗作用术

目的 建立人子宫内膜异位症(内异症)裸鼠模型,探讨内皮抑素治疗内异症的作用.方法 采用皮下种植方法,建立内异症裸鼠模型,光镜下观察异位病灶的形态学特点,采用免疫组化法检测内皮抑素的不同给药方法裸鼠异位内膜中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平.结果 实验裸鼠共25只,加只成模,以内皮抑素按2 mg/(kg·d)分别自尾静脉注射(静脉注射组8只)及局部注射(局部注射组7只),对照组注射5只(局部注射)同体积PBS,比较3组异位病灶VEGF的表达.注射内皮抑素的两组异位病灶的VEGF表达均明显降低,差异均有显著性(P＜0.05),而两组之间比较,局部注射组VEGF的表达较静脉注射组低,差异有显著性(P＜0.05).结论 成功建立人子宫内膜异位症裸鼠皮下种植模型,通过不同给药途径内皮抑素对内异症裸鼠异位内膜VEGF分泌的抑制、局部给药效果好于全身用药,给今后内皮抑素应用于临床治疗子宫内膜异位症提供了实验依据.     

三羧氨基喹啉对人舌鳞状细胞癌Tca8113裸鼠移植瘤效应及其机制研究

目的:观察三羧氨基喹啉(Linomide)对人口腔癌裸鼠移植瘤的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:建立人舌癌裸鼠移植瘤模型,观察Linomide对肿瘤生长的抑制作用,采用免疫组化染色检测Linomide治疗组和对照组荷瘤裸鼠的肿瘤微血管密度(MVD)的变化,用半定量RT-PCR方法研究治疗组和对照组肿瘤组织中VEGF和VEGF受体FltlmRNA表达的改变,并测定各组小鼠血清VEGF水平的变化,同时,用原位末端标记(TUNEL)法观察治疗组和对照组裸鼠瘤体内肿瘤细胞凋亡的发生情况。结果:Linomide治疗组的裸鼠皮下肿瘤生长明显受到抑制,平均瘤重低于对照组(P<0.01)。结论:Linomide可有效抑制人舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的生长,降低肿瘤微血管密度,通过抑制血管形成而发挥抗肿瘤作用,Linomide可抑制瘤组织VEGF受体FltlmRNA的表达;Linomide治疗荷瘤裸鼠后可诱导肿瘤细胞发生凋亡。     

YH-16对宫颈癌细胞及其裸鼠移植瘤抑制作用研究

目的探讨YH-16（重组内皮抑素）对宫颈癌Hela细胞及其荷瘤鼠生长抑制作用。方法用MTT法检测细胞生长;用透射电镜观察细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;将Hela细胞移植至裸鼠皮下,观察不同浓度YH-16（0、0.4、0.75和1.5mg/kg）对荷瘤鼠皮下移植瘤生长的影响;TUNEL法观察肿瘤细胞的凋亡;免疫组化方法检测裸鼠移植瘤组织中肿瘤微血管密度（MVD）。结果YH-16抑制Hela细胞增殖（P〈0.01）;能诱导Hela细胞凋亡。YH-16能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长（P〈0.05）;YH-1615mg/kg组的肿瘤MVD计数较对照组和其他治疗组明显降低（P〈0.05）。结论YH-16具有抑制宫颈癌Hela细胞及其皮下移植瘤生长的作用。     

内皮抑素对卵黄囊瘤裸鼠模型血管生长的影响

目的通过动物实验验证血管生长在卵黄囊瘤裸鼠模型中的作用,以及内皮抑素对模型血管生长的影响。方法建立卵黄囊瘤裸鼠模型,分别采用1.5mg/(kg.d)及0.75mg/(kg.d)两个浓度重组人血管内皮抑制素局部注射干预,并皮下及瘤内注射生理盐水25ml/(kg.d)注射对照,共14天,每组10只。药物干预结束后,明胶-氧化铅悬浊液灌注法行肿瘤血管造影,观察肿瘤血管差异。免疫组化方法检测移植瘤AFP、VEGF、CD34。结果 (1)小儿恶性畸胎瘤裸鼠模型复制成功,AFP在移植瘤细胞胞质中有表达,肿瘤性质稳定。(2)肿瘤体积自第6天测量治疗组肿瘤生长速度明显低于对照组(P<0.05);第12天测量结果提示高剂量组与低剂量组肿瘤体积出现显著差异(P<0.01)。(3)免疫组化:VEGF表达范围及强度,治疗组均小于对照组(P<0.05),高剂量组小于低剂量组(P<0.05),两对照组之间无明显差异(P>0.05);MVD:治疗组均小于对照组(P<0.01),高剂量组小于低剂量组(P<0.01),两对照组之间无明显差异(P>0.05)。(4)肿瘤血管造影:血管分布密度内皮抑素高剂量治疗组<低剂量组<实验对照组。结论内皮抑制素通过抑制VEGF的作用,减少血管发生,从而对卵黄囊瘤裸鼠模型移植瘤的生长有抑制作用。     

内皮抑素在人子宫内膜异位症裸鼠模型中的治疗作用

目的建立人子宫内膜异位症(内异症)裸鼠模型,探讨内皮抑素治疗内异症的作用。方法采用皮下种植方法,建立内异症裸鼠模型,光镜下观察异位病灶的形态学特点,采用免疫组化法检测内皮抑素的不同给药方法裸鼠异位内膜中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果实验裸鼠共25只,20只成模,以内皮抑素按2mg/(kg.d)分别自尾静脉注射(静脉注射组8只)及局部注射(局部注射组7只),对照组注射5只(局部注射)同体积PBS,比较3组异位病灶VEGF的表达。注射内皮抑素的两组异位病灶的VEGF表达均明显降低,差异均有显著性(P<0.05),而两组之间比较,局部注射组VEGF的表达较静脉注射组低,差异有显著性(P<0.05)。结论成功建立人子宫内膜异位症裸鼠皮下种植模型,通过不同给药途径内皮抑素对内异症裸鼠异位内膜VEGF分泌的抑制、局部给药效果好于全身用药,给今后内皮抑素应用于临床治疗子宫内膜异位症提供了实验依据。     

靶向CXCR4的siRNA对人食管鳞癌EC9706细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨CXCR4 siRNA对人食管鳞癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 建立人食管鳞癌细胞株EC9706裸鼠移植瘤动物模型,瘤旁注射化学合成CXCR4 siRNA,同时以瘤旁注射阴性对照siRNA和PBS为对照.监测肿瘤生长变化,测量瘤质量.HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、免疫组化方法检测CXCR4 mRNA和蛋白变化.结果 裸鼠体内实验结果显示,与对照组比较,CXCR4 siRNA组肿瘤生长受到明显抑制,瘤质量下降;HE染色显示对照组肿瘤体积大、异形明显;RT-PCR、免疫组化结果表明CXCR4 siRNA处理组CXCR4 mRNA和蛋白表达下调.结论 CXCR4 siRNA能抑制人食管鳞癌EC9706细胞株裸鼠皮下移植瘤的形成,且能在体内有效下调CXCR4 mRNA和蛋白的表达.     

携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体内研究

目的:探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)进行子宫内膜癌基因治疗的可行性.方法:BALB/c裸鼠随机分3组,每组8只, 以空载体Ad-CMV转染或未转染作为对照组,观察Ad-PTEN体外转染后体内接种对子宫内膜癌细胞致瘤能力的影响.应用LacZ 作为报告基因,X-gal染色检测Ad-PTEN 体内转染效率.皮下荷人子宫内膜癌BALB/c裸鼠15只,随机分为对照组、Ad-CMV组及Ad-PTEN治疗组,每组5只,每只裸鼠皮下有2个移植瘤.待皮下移植瘤长至4～5 mm时,治疗组Ad-PTEN肿瘤内注射,每个移植瘤5×108 pfu/100 μl,隔日1次,共3次,观察裸鼠肿瘤体积的变化及有无不良反应,最后1次治疗后15 d处死裸鼠,取肿瘤组织及治疗组裸鼠肝脏病理检查.结果:Ad-PTEN体外转染子宫内膜癌RL 95-2细胞,子宫内膜癌细胞致瘤能力完全抑制,裸鼠成瘤率为0;而空载体转染组和PBS对照组裸鼠成瘤率均为100%.重组腺病毒在裸鼠体内具有较高的转染效率,Ad-CMV-LacZ肿瘤内注射后96 h,转染效率可达到80%. Ad-PTEN肿瘤内注射可使裸鼠皮下移植瘤生长速度显著减慢,肿瘤体积较对照组明显缩小(P<0.05),Ad-PTEN基因治疗未发现明显不良反应. 结论:PTEN基因治疗有可能成为子宫内膜癌非手术治疗的一个新方法,具有潜在的应用价值.     

腹腔注射内皮抑素腺病毒治疗原位胰腺癌的实验研究

目的探讨腹腔注射内皮抑素腺病毒治疗裸鼠原位胰腺癌的机制,观测其疗效。方法通过细胞内同源重组方法构建携带内皮抑素重组腺病毒Ad-mEndo,体外转染胰腺癌细胞株AsPC-1、BxPC-3,并测定感染的胰腺癌细胞上清液（鼠源性内皮抑素）mEndostatin蛋白的表达。荷瘤裸鼠腹腔注射腺病毒液Ad-mEndo,观察原位胰腺癌肿瘤的大小及测定肿瘤微血管密度。结果重组腺病毒Ad-mEndo体外能转染胰腺癌细胞株,并表达mEndostatin mRNA及蛋白。重组腺病毒Ad-mEndo治疗组肿瘤体积和微血管密度均显著小于生理盐水组,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论重组腺病毒Ad-mEndo腹腔注射能有效抑制裸鼠原位胰腺癌的生长,为胰腺癌的治疗探索了一种新的治疗途径。     

RNAi沉默STAT3基因对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的：研究pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,阐明RNA干涉技术在卵巢癌生物治疗领域中的作用。方法：应用人卵巢癌细胞系SKOV3对15例裸鼠建立人卵巢癌皮下移植瘤模型,随机分为3组：对照组（生理盐水）、空质粒对照组及重组质粒组（pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3）。应用电子穿孔仪将质粒转入裸鼠移植瘤内,观察重组质粒注射后第7、14、21和28天各组裸鼠皮下移植瘤体积变化。利用Western blotting检测重组质粒对STAT3蛋白表达的影响,采用HE及TUNEL染色方法观察肿瘤组织形态变化及细胞凋亡情况。结果：重组质粒瘤内注射对SKOV3裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的抑制作用,与2个对照组比较,重组质粒组裸鼠移植瘤生长速度明显减慢（P<0.01）。重组质粒组瘤体内STAT3及CyclinD1、VEGF、survivin、c-myc蛋白表达明显低于2个对照组（P<0.01）。HE染色显示,重组质粒组肿瘤细胞出现大片细胞坏死,2个对照组肿瘤细胞以正常形态居多。TUNEL染色显示,重组质粒组癌组织有大量细胞凋亡,2个对照组几乎均为TUNEL阴性反应细胞。结论：pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒能明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3裸鼠皮下移植瘤的生长。     

E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究

目的：探讨腺病毒E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究。 方法：取对数生长期的CNE-2Z细胞5×105 /0.2 mL,接种于4周龄左右裸鼠右前肢腋部皮下致瘤,第7天裸鼠皮下肿瘤长至直径0.6～0.8 cm时,随机分为6组(n=10): PBS组, Ad-β-gal组,放射组,Ad-β-gal+放射组,Ad-E1A组,Ad-E1A+放射组。Ad-β-gal组/Ad-E1A组在第2周开始给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109 PFU/ 50μL 的Ad-E1A/ Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,放射组在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。Ad-β-gal+放射组/Ad-E1A＋放射组在第2周开始,给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109 PFU/ 50μL 的Ad-E1A/ Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。第1次治疗后,每隔4天用卡尺测量1次肿瘤的体积,记录其直径,裸鼠的生存时间。当肿瘤的直径超过2 cm时,处死裸鼠,分离肿瘤组织,采用免疫组织化学方法分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和CD34表达,TUNEL分析细胞凋亡。 结果：Ad-E1A+放射组较其他组能明显延缓移植瘤生长时间, Ad-E1A+放射组裸鼠的肿瘤平均体积比单独放射组小4.7倍,比单独用Ad-E1A组的小5.3倍。Ad-E1A+放射组的裸鼠生存率显著高于其他治疗组。Ad-E1A+放射组的VEGF蛋白表达和微血管密度较其他各组明显下降（P＜0.01)。TUNEL分析结果显示Ad-E1A组和Ad-E1A+放射组及放射组的肿瘤组织内均可明显观察到凋亡细胞。并且Ad-E1A+放射组肿瘤细胞凋亡数目明显高于Ad-E1A组或者放射组。结论：E1A基因通过抑制肿瘤血管的形成和诱导肿瘤细胞的凋亡来提高人鼻咽癌细胞对放射的敏感性。     

重组腺相关病毒介导TRAIL对卵巢癌裸鼠肝转移的抑制作用的实验研究

目的探讨重组腺相关病毒介导TRAIL对卵巢癌裸鼠肝转移的抑制作用。方法构建卵巢癌裸鼠肝转移模型。选择重组腺相关病毒rAAV—PEG—sTRAIL治疗，将裸鼠分为TRAIL治疗组和对照组，治疗6w后，观察肝转移率和肝转移结节数；Tunnel法分析TRAIL对肿瘤细胞的凋亡诱导情况。结果全身系统性给予重组腺相关病毒介导TRAIL后，治疗组和对照组相比转移率低，肝转移结节数目少，差异有统计学意义（p〈0．05）；Tunnel法分析TRAIL可诱导肿瘤细胞凋亡。结论重组腺相关病毒介导TRAIL可抑制卵巢癌裸鼠肝的转移生长，TRAIL用于卵巢癌肝转移的基因治疗中具有较好的应用前景。     

溶血磷脂酸诱导人卵巢上皮癌裸鼠腹腔移植瘤生长研究

目的 观察溶血磷脂酸(LPA)对卵巢上皮性癌裸鼠腹腔移植瘤生长及转移的作用.方法 建立人卵巢上皮性癌腹腔移植瘤模型,16只裸鼠随机分为2组即对照组和LPA处理组,将6×106个未经处理的卵巢上皮癌细胞株SKOV3和用LPA刺激后的SKOV3细胞分别注入2组裸鼠腹腔,待裸鼠自然死亡后,观察移植瘤大小、重量、腹腔转移灶的数目及腹腔脏器转移情况.结果 两组成瘤率均为100%,但LPA组移植瘤生长速度、重量和腹腔转移灶数目均高于对照组(P＜0.01).结论 LPA具有促进卵巢癌细胞在腹腔内增生和浸润转移的作用.     

抗血管内皮生长因子抗体对人浆液性卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究抗血管内皮生长因子抗体(抗VEGF抗体)对浆液性卵巢癌生长的抑制作用。方法首次采用人浆液性卵巢癌组织直接接种而建立的裸鼠皮下移植瘤动物模型,观察有中和活性的抗人VEGF121单克隆抗体对肿瘤生长的影响。实验用BALB裸鼠分为两组,每组各6只,治疗组给予抗VEGF 121抗体,100μg/次;对照组给予等体积的磷酸盐缓冲液,均为腹腔内注射,自肿瘤接种后24 h起,每周2次,共9次;肿瘤接种一周起每次给药前测量肿瘤的长径及短径,并计算各时点体积;治疗结束后24 h处死动物,测量肿瘤的重量及计数肿瘤组织中的微血管密度(MVD)。结果①抗体治疗组与对照组裸鼠的体积逐渐出现差异,这种差异随时间的推移逐渐增大,接种第22天差异有显著性(P<0.05),并持续至实验结束。②用药结束后24 h处死裸鼠,治疗组平均瘤重为(0.70±0.11)g,对照组平均瘤重为(1.19±0.18)g,两组相比较有显著性差异(P<0.01)。③对照组肿瘤组织中微血管较密集,MVD值为7.60±1.14,治疗组肿瘤组织中的微血管明显减少,MVD值为4.80±0.83,两组相比较差异有显著性(P<0.05)。结论抗VEGF121单克隆抗体能够有效抑制裸鼠体内浆液性卵巢癌皮下移植肿瘤的血管形成,从而达到抑制肿瘤生长的目的。     

新城疫病毒疫苗和IL-15治疗3AO裸鼠移植瘤实验研究

目的探讨新城疫病毒疫苗（ATV一NDV）和白细胞介素-15（IL一15）对3AO裸鼠皮下移植瘤的治疗作用及其机制。方法建立3AO裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组10只。Ⅰ组注射ATV一NDV0．2ml;Ⅱ组注射IL一151001xg／kg;Ⅲ组注射IL-151001zg／kg加ATV—NDV0．2ml;Ⅳ组为对照组,腹腔注射生理盐水（ATV—NDV右侧下肢皮下注射,IL-15腹腔注射,按每只裸鼠0．2ml配制）;观察各组裸鼠成瘤率、生存期和生存延长率及肿瘤生长曲线。流式细胞术（FCM）观察裸鼠移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,双标记NK细胞群计数;测定裸鼠脾脏重量;移植瘤瘤体及各组裸鼠肝、脾、肾行常规病理学检查。结果实验组与对照组之间,联合治疗组与单独治疗组之间相比：荷瘤裸鼠生存延长率,移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数。裸鼠脾脏重量具有明显差异。病理学检查各治疗组中均可见肿瘤坏死,凋亡细胞,肿瘤细胞周围及肿瘤内有明显的淋巴细胞浸润。ATV—NDV治疗组脾脏有增生,肥大。IL—15治疗组脾脏有充血增生,肝脏有肝细胞水肿,嗜酸性变性,周围有浊肿。对照组裸鼠肝、脾、肾未见明显病理改变。结论ATV—NDV、IL-15对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有明显抑制作用,IL-15对ATV一NDV有协同作用。其机制与ATV—NDV直接、特异地对肿瘤细胞产生细胞毒作用,提高了肿瘤抗原的免疫原性;IL一15增强NK细胞的细胞毒活性,诱导NK细胞及细胞因子产生有关。     

赖氨酰氧化酶对荷胃癌裸鼠肿瘤形成和转移的影响

目的观察用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)对荷胃癌裸鼠肿瘤形成和转移的影响。方法 6周龄的裸鼠,随机分为BAPN预处理组和对照组,预处理组10只,对照组15只。BAPN预处理组每天用BAPN 100mg.kg-1腹腔注射,对照组每天用相同体积的无菌PBS腹腔注射。2周后,以人胃癌细胞SGC-7901 1×107.mL-1建立荷胃癌裸鼠模型。肿瘤细胞接种4周后,比较成瘤率、瘤重和转移率。结果 BAPN预处理组平均瘤重高于对照组,P<0.05;BAPN预处理组的成瘤率和转移率与对照组的差异无统计学意义。结论用BAPN预先抑制LOX活性后,肿瘤的重量明显增加,但对原发肿瘤形成和转移未见明显作用。     

反义hTR基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤治疗作用的初步观察

目的 观察反义人端粒酶RNA（hTR)基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤的治疗作用。方法 人胃癌细胞株SGC－7901裸鼠背部皮下接种,成瘤后于瘤内多点注射FuGENETM6/反义hTR表达质粒复合物,设FuGENETM6稀释液为对照,观察肿瘤生长情况和肿瘤组织学结构变化。 结果 治疗组肿瘤生长速度明显减慢,治疗1个月瘤体较对照组小23％,瘤组织中的瘤细胞排列较稀疏并形成较多的腺样结构,显示有分化倾向。结论 反义hTR基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤有一定的治疗作用,值得进一步研究。