过表达FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制研究

目的探讨FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞U2OS、MNNG/HOS中FOXO1的mRNA表达水平。利用pcDNA3.1-FOXO1重组质粒建立FOXO1过表达的细胞模型,空载质粒(pcDNA3.1-vector)作为对照,qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。确定成功过表达FOXO1基因后利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测骨肉瘤细胞的增殖能力(吸光度值),Transwell实验体外检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力,并采用qRT-PCR和western blot的方法检测基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达变化。结果人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、U2OS中FOXO1的mRNA的表达水平显著低于人成骨细胞hFOB 1.19(P0.05),且骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1的表达水平较低。重组质粒pcDNA3.1-FOXO1转染后,骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1表达水平显著升高。与对照组(pcDNA3.1-vector)比较,U2OS-FOXO1过表达组的细胞的增殖能力降低(P0.05),侵袭迁移和迁移能力降低,MMP9较对照组表达水平明显降低(P0.05)。结论骨肉瘤细胞中FOXO1表达水平明显低于正常成骨细胞。过表达FOXO1可能通过下调MMP9抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-100对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

[目的]观察miR-100对不同骨肉瘤细胞系的表达差异,研究miR-100对骨肉瘤细胞MG-63增殖、侵袭迁移能力的影响。[方法]采用qRT-PCR检测miR-100在骨肉瘤细胞系中的表达差异。通过脂质体2000转染说明对骨肉瘤细胞MG-63进行转染操作,分别构建miR-100过表达和miR-100阴性对照组。转染骨肉瘤成功后,通过CCK-8实验检测miR-100对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,同时Transwell实验检测骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力变化。[结果]miR-100在骨肉瘤细胞系中表达差异显著(P0.05),且差异具有统计学意义;相比miR-100NC组,过表达miR-100增殖、侵袭、迁移能力明显下降(P0.05),且差异具有统计学意义。[结论]miR-100在骨肉瘤中呈现低表达;过表达miR-100抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力。miR-100可能会成为未来骨肉瘤治疗的潜在靶点。     

PARP-1抑制剂对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨PARP-1抑制剂3-aminobenzamide(3-AB)对骨肉瘤U2OS细胞增殖及凋亡的影响.方法 常规培养骨肉瘤U2OS细胞,采用CCK-8法检测U2OS细胞的增殖和流式细胞术检测细胞凋亡,并用caspase-3活性测定试剂盒检测caspase-3活性和Western-blot技术检测Bcl-2、Ba...     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的：研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法 ：采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中（分别为过表达组和抑制剂组）,并设置miR阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果：与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达（P<0.05）,而HOXB4在骨肉瘤中高表达（P<0.05）。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞...     

趋化性细胞因子受体CXCR4基因表达对人骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的探讨趋化性细胞因子受体CXCR4基因表达对人骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响。方法Real-time PCR 检测人骨肉瘤细胞株 HOS-8603、U2OS 和 MG-63 中 CXCR4 mRNA 的表达情况;构建、鉴定pcDNA3/CXCR4 重组质粒并将其转染到 HOS-8603 细胞中（PCDNA3/CXCR4 组）,同时制备转染 pcDNA3 空质粒的阴性对照组（pcDNA3组）。MTT检测细胞增殖情况,穿膜小室重组细胞基底膜迁移实验检测细胞迁移情况。结果 HOS-8603细胞中CXCR4 mRNA相对表达含量低于U2OS、MG-63细胞（P 〈0.05）。转染后24、48h,pcDNA3/CXCR4 组 CXCR4 mRNA 表达量是 pcDNA3 组的 96 倍和 124 倍（P 〈0.05）。与 pcDNA3 组比较,转染后24、48、72 h,pcDNA3/CXCR4组细胞增殖率和发生迁移的细胞数明显增加（P 〈0.05）。结论 CXCR4的表达可能是促进骨肉瘤细胞增殖和迁移的重要因素。     

过表达FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制研究

［摘要］ 目的 探讨FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT?PCR）的方法检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞U2OS、MNNG/HOS中FOXO1的mRNA表达水平。利用pcDNA3.1?FOXO1重组质粒建立FOXO1过表达的细胞模型,空载质粒（pcDNA3.1?vector）作为对照,qRT?PCR和蛋白质印迹法（Western blot）验证转染效率。确定成功过表达FOXO1基因后利用Cell Counting Kit?8（CCK?8）实验检测骨肉瘤细胞的增殖能力（吸光度值）,Transwell实验体外检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力,并采用qRT?PCR和western blot的方法检测基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达变化。结果 人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、U2OS中FOXO1的mRNA的表达水平显著低于人成骨细胞hFOB 1.19（P<0.05）,且骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1的表达水平较低。重组质粒pcDNA3.1?FOXO1转染后,骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1表达水平显著升高。与对照组（pcDNA3.1?vector）比较,U2OS?FOXO1过表达组的细胞的增殖能力降低（P<0.05）,侵袭迁移和迁移能力降低,MMP9较对照组表达水平明显降低（P<0.05）。结论 骨肉瘤细胞中FOXO1表达水平明显低于正常成骨细胞。过表达FOXO1可能通过下调MMP9抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力。     

人骨髓核分化抗原对人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡和增殖的影响

[目的]探讨人骨髓核分化抗原(MNDA)对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及凋亡的影响.[方法]逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法定量测定Saos-2细胞中MNDA的mRNA表达差异.将MNDA基因转染Saos-2细胞,应用MTT法测定转染后的肿瘤细胞增殖,流式细胞仪定量检测细胞凋亡程度,没有转染质粒的和转染空质粒的做为对照组.[结果] MNDA的mRNA在骨肉瘤Saos-2细胞中表达明显降低.转染MNDA后人骨肉瘤Saos-2细胞的凋亡程度高于对照组,增殖率低于对照组.[结论]转染MNDA可诱导人骨肉瘤Saos-2细胞发生凋亡,抑制骨肉瘤细胞的增殖率.     

p14ARF增强顺铂诱导的骨肉瘤U20S细胞凋亡的研究

目的探讨p14ARF对顺铂诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的影响及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供依据。方法在不表达p14ARF的U2OS细胞中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株;采用RT-PCR和Western blot法鉴定其表达;台盼蓝拒染法测定生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测凋亡;Western blot法检测Caspase-3,9和PARP的表达和活化。结果 mRNA和蛋白水平,U2OS和U2OS-vec细胞未见p14ARF表达,U2OS-ARF细胞可见p14ARF的高表达;p14ARF单独对U2OS细胞的生长无影响,但顺铂（5μM）处理72小时后,U2OS-ARF细胞的生长抑制率明显高于U2OS和U2OS-vec细胞,相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞不仅表现更为明显的凋亡形态学变化,还明显出现了Caspase-3,9和PARP的活化裂解。结论 p14ARF能够增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,通过激活Caspase-PARP级联活化,提高骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性。     

p14ARF增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡的研究

目的探讨p14ARF对顺铂诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的影响及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供依据。方法在不表达p14ARF的U2OS细胞中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株;采用RT-PCR和Western blot法鉴定其表达;台盼蓝拒染法测定生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测凋亡;Western blot法检测Caspase-3,9和PARP的表达和活化。结果 mRNA和蛋白水平,U2OS和U2OS-vec细胞未见p14ARF表达,U2OS-ARF细胞可见p14ARF的高表达;p14ARF单独对U2OS细胞的生长无影响,但顺铂(5μM)处理72小时后,U2OS-ARF细胞的生长抑制率明显高于U2OS和U2OS-vec细胞,相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞不仅表现更为明显的凋亡形态学变化,还明显出现了Caspase-3,9和PARP的活化裂解。结论 p14ARF能够增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,通过激活Caspase-PARP级联活化,提高骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性。     

YAP 基因干扰对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨干扰YAP基因的表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。 方法：通过逆转录病毒介导的方法,分别用YAP shRNA（实验组）或阴性对照shRNA（对照组）转染MCF-7乳腺癌细胞,用qRT-PCR和Western blot方法检测干扰效率;溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）结合实验和MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术和DAPI染色检测细胞凋亡情况。 结果：干扰效率检测显示,转染72 h后,实验组MCF-7细胞YAP mRNA表达量明显降低（P<0.05）,同时YAP蛋白表达也明显下调;细胞增殖检测显示,与对照组比较,实验组MCF-7细胞BrdU结合与OD值明显降低（P<0.05）,转染后24、48、72 h增殖抑制率分别为19.1%、38.5%、53.5%;凋亡检测显示,实验组细胞凋亡率与凋亡细胞数较对照组明显增加（均P<0.05）。 结论：干扰YAP基因的表达能有效抑制乳腺癌细胞的增殖并促进凋亡,YAP可能是乳腺癌潜在治疗靶点。     

GAS5对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:观察生长停滞特异性转录因子5(GAS5)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响,探讨其机制。方法:在人骨肉瘤U2OS细胞和人正常成骨hFOB 1.19细胞中,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测GAS5和微小RNA (miR)-221的表达,Western blot检测基质金属蛋白酶抑制物-2 (TIMP2)蛋白的表达。转染pcDNA-GAS5重组质粒后,采用噻唑蓝(MTT)法和Trasnwell小室法检测GAS5对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响,qRT-PCR检测GAS5对miR-221表达的影响。利用Starbase软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证GAS5与miR-221以及miR-221与TIMP2的靶向关系。转染miR-221模拟物和miR-221抑制剂后,观察miR-221过表达对GAS5调控的U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及miR-221对TIMP2蛋白表达的影响。结果:与正常hFOB 1.19细胞相比,U2OS细胞中GAS5和TIMP2蛋白的表达水平明显降低,而miR-221表达水平显著升高(GAS5:P=0.0001;TIMP2:P=0.0003;miR-221:P=0.0004)。GAS5过表达可抑制U2OS细胞增殖、迁移和侵袭(增殖48h:P=0.0005;增殖72h:P=0.0002;迁移:P=0.002;侵袭:P=0.001),而miR-221过表达可明显逆转GAS5对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(增殖48h:P=0.0002;增殖72h:P=0.0003;迁移:P=0.0001;侵袭:P=0.0001)。Starbase软件预测到miR-221存在能够与GAS5互补结合的位点,还存在能够与TIMP2 3′UTR互补结合的位点;双荧光素酶结果显示miR-221过表达后野生型GAS5(GAS5-WT)和野生型TIMP2 (TIMP2-WT)细胞的荧光素酶活性明显降低(P均为0.0003);同时,GAS5过表达后,U2OS细胞中miR-221表达水平明显降低(P=0.0001),反之miR-221明显升高(P=0.0001);miR-221过表达后,U2OS细胞中TIMP2蛋白的表达水平明显降低(P=0.0003),反之TIMP2蛋白的表达水平明显升高(P=0.0009)。结论:GAS5可通过靶向抑制miR-221促进TIMP2表达,进而抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭。     

沉默LncRNA TUG1对骨肉瘤细胞放射敏感性影响

[目的]探讨沉默LncRNA TUG1对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响。[方法]采用qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞HOS、放射抵抗的骨肉瘤细胞HOS-R中TUG1与miR-328-3p的表达量;采用不同方式检测沉默TUG1与miR-328-3p过表达对HOS-R细胞放射敏感性的影响;TUG1的靶基因miR-328-3p;沉默TUG1对HOS-R细胞中miR-328-3p表达量的影响;HOS-R细胞凋亡率;抑制miR-328-3p联合沉默TUG1对HOS-R细胞放射敏感性及细胞凋亡率的影响。[结果]与hFOB 1.19细胞相比,TUG1在HOS与HOS-R细胞中表达量较高(P0.05),miR-328-3p的表达量显著较低(P0.05),且在HOS-R细胞中显著低于HOS细胞(P0.05);沉默TUG1或过表达miR-328-3p显著降低HOS-R细胞存活分数(P0.05);并增加细胞放射敏感性;TUG1可吸附miR-328-3p并调节其表达水平;抑制miR-328-3p联合沉默TUG1可逆转沉默TUG1对HOS-R细胞放射敏感性的增强作用。[结论]本研究表明LncRNA TUG1可通过靶向调控miR-328-3p的表达促进骨肉瘤细胞凋亡,并抑制其存活,从而增加骨肉瘤细胞的放射敏感性。     

熊果酸对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及凋亡的影响研究

目的探讨熊果酸对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖以及凋亡的影响,分析其作用机制。方法取人骨肉瘤细胞株U2-OS分为4组,分别采用浓度为0、10、20、40μmol/L的熊果酸进行培养。培养0、24、48、72 h,应用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖能力变化;培养48 h,使用流式细胞术测定熊果酸对骨肉瘤细胞周期和凋亡的影响,应用实时荧光定量PCR和Western blot检测周期蛋白cyclin D1的表达和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达和活化情况。结果 CCK-8检测示,培养0、24 h时各组吸光度(A)值比较,差异无统计学意义(P0.05);48、72 h时随浓度增加A值逐渐减小,各组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测示,随熊果酸浓度增加,U2-OS细胞的G_1期增加、S期及G_2/M期减少,细胞凋亡率逐渐增加,各组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。与0μmol/L组相比,10、20、40μmol/L组cyclin D1 m RNA及蛋白相对表达量下调(P0.05);各组间Caspase-3 m RNA相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);但随熊果酸浓度增加,Caspase-3前体蛋白下降,活化的Caspase-3增加,各组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论熊果酸能有效抑制U2-OS细胞增殖,诱导cyclin D1表达下调导致细胞在G_0/G_1期阻滞,同时使Caspase-3活化增加进而促进细胞凋亡。     

RNA干扰降低唾液酸酶3表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的探讨下调唾液酸酶3(neuraminidase 3,NEU3)表达对人成骨肉瘤MG-63细胞体外增殖及凋亡的调控作用。方法取MG-63细胞行免疫荧光染色,观察MG-63细胞中NEU3的表达情况。然后根据处理方法不同将细胞分为5组:正常对照组(A组),不作任何处理;30、50、100 nmol/L NEU3 RNA干扰组(分别为B、C、D组),分别以浓度为30、50、100 nmol/L的NEU3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染细胞;阴性对照组(E组),使用不同种属阴性对照siRNA(小鼠actin siRNA,50 nmol/L)转染细胞。转染后采用实时荧光定量PCR检测NEU3 mRNA水平,细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Ras蛋白和Bcl-2蛋白表达情况。结果荧光显微镜观察示NEU3表达集中在MG-63细胞的细胞质中。实时荧光定量PCR检测示,培养24 h后B、C、D组NEU3 mRNA相对表达量明显低于A、E组(P0.05);随着siRNA浓度升高,B、C、D组NEU3 mRNA相对表达量呈下降趋势(P0.05)。CCK-8法检测示,培养48 h后随NEU3 si RNA浓度升高,B、C、D组MG-63细胞抑制率显著升高,成活率显著降低,组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测示,培养24 h后B、C、D组MG-63活细胞逐渐减少、坏死细胞逐渐增加(P0.05)。B、C、D组细胞凋亡率与A组比较,差异均有统计学意义(P0.05);与E组比较,C、D组细胞凋亡率显著降低(P0.05),B、E组间差异无统计学意义(P0.05)。Western blot检测示,培养24 h后,与A、E组比较,B、C、D组Ras和Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P0.05),而D组以上蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论 NEU3表达下降能够抑制骨肉瘤MG-63细胞的成活,促进细胞凋亡,提示NEU3可能是治疗骨肉瘤的潜在药物靶点。     

微小RNA-135a调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和凋亡

目的探讨微小RNA-135a(miR-135a)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能的机制。方法构建miR-135a过表达和空载病毒的Saos-2细胞分别为miR-135a UP组(实验组), Control组(对照组)。采用实时定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测c-Myc信使核糖核酸(mRNA)的改变, 采用蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测c-Myc蛋白及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)(PAM)通路蛋白的改变。细胞集落形成和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力, 划痕和Transwell实验分别检测迁移和侵袭能力, 细胞流式技术检测抗凋亡能力, 两组比较采用t检验。结果 miR-135a表达量实验组高于对照组(59.006±5.034比1.008±0.151, t=23.031, P<0.01), c-Myc与PAM通路蛋白表达量实验组低于对照组, 细胞增殖能力实验组低于对照组(CCK-8法:1.311±0.048比2.029±0.046, t=24.301, P<0.01...     

Survivin基因干扰RNA对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

[目的]观察Survivin基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。[方法]体外构建Survivin shRNA表达载体pSilence2．1-neo-Survivin，转染骨肉瘤细胞系MG-63，筛选稳定表达的克隆，倒置显微镜观察各组细胞形态学变化，RT-PCR、Weston-blot方法检测转染后Survivin mRNA及蛋白的表达，噻唑蓝（MTT）法、克隆形成实验检测细胞的增殖情况，吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡情况。[结果]转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降，其抑制率分别为85．08％和81．14％；细胞增殖受到显著抑制，培养48h后与空白组比较，抑制率达63．4l％；吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变，转染组凋亡率为24．54％。[结论]靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。     

siRNA沉默高迁移率蛋白A2基因对人膀胱移行细胞癌细胞T24增殖凋亡的影响

目的 观察siRNA靶向沉默HMGA2基因在人膀胱移行细胞癌T24细胞中表达的变化,探讨抑制HMGA2基因对T24细胞增殖、周期和凋亡的影响.方法 针对人HMGA2基因构建siRNA干扰片段,瞬时转染T24细胞后,采用Western-blot方法检测转染siRNA干扰片段48h后T24细胞蛋白表达量的变化,CCK-8法检测T24细胞增殖和流式细胞仪（FCM）检测T24细胞周期和凋亡情况.结果 转染后48h的T24细胞HMGA2蛋白表达水平较空白对照组（CON）和阴性对照组（NC）显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,转染HMGA2-siRNA的实验组抑制T24细胞增殖,T24细胞S期细胞比例（35.47±0.23）％高于CON组和NC组（P＜0.05）,实验组T24细胞凋亡率为（17.25±0.24）％,明显高于CON组和NC组（P＜0.05）.结论 HMGA2基因的特异性siRNA可以抑制T24细胞增殖,细胞周期阻滞在S期,并促进其凋亡.     

小分子抑制剂Spautin-1增强骨肉瘤细胞化疗敏感性

目的 观察小分子抑制剂Spautin-1对骨肉瘤细胞株(U2OS)化疗敏感性的影响.方法 培养U2OS细胞,使用有效自噬抑制浓度的Spautin-1(10 μmol/L)和顺铂(5μmol/L)处理U2OS,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测Spautin-1对于顺铂(Cisplatin)介导的U2OS的增殖抑制作用的影响,流式细胞术和Western blot检测Spautin-1对顺铂介导的U2OS的凋亡诱导作用的影响.结果 有效自噬抑制浓度的Spautin-1(10 μmol/L)对U2OS无明显的生长抑制及凋亡诱导作用(P＞0.05),而此浓度的Spautin-1可明显增强顺铂对U2OS的增殖抑制(P＜0.05),与顺铂处理组(16.5％)比较,Spautin-1与顺铂共处理后U2OS细胞凋亡比例明显增加(35.0％),切割后的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)明显升高.结论 小分子抑制剂Spautin-1可增强U2OS对顺铂的敏感性.     

微小RNA-146a在骨肉瘤中的表达及意义

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-146a在骨肉瘤中表达的意义和miRNA-146a对骨肉瘤的作用机制.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测骨肉瘤标本和癌旁组织中miRNA-146a表达量,并采用Cox回归模型分析其与患者生存期的相关性.质粒转染miRNA-146a进入骨肉瘤细胞TE85中,检测转染后细胞活性、细胞凋亡和细胞中YY1、Fas蛋白的表达.结果 癌旁组织和骨肉瘤组织中miRNA-146a的表达量分别为1.213±0.525和0.734±0.263,差异有统计学意义(P＜0.05).miRNA-146a的表达量与患者的生存时间呈正相关(P＜0.05).转染miRNA-146a24 h后,50、100 nmol/L组人骨肉瘤细胞活性明显降低至(65.161±5.528)％和(40.385±8.442)％(P＜0.05),细胞凋亡率分别明显升高至(38.671±12.415)％和(59.513±9.058)％ (P＜0.05),细胞中YY1蛋白表达量明显降低(分别为0.472±0.014和0.272±0.005,P＜0.05),而Fas蛋白表达量明显升高(0.292±0.010、0.584±0.006,P＜0.05).转染miRNA-146a 48 h后,与对照组比较,50、100 nmol/L组人骨肉瘤细胞活性、凋亡率、YY1表达量和Fas蛋白表达量变化与转染24 h的变化相似.结论 miRNA-146a对骨肉瘤的作用是通过下调YY1的表达,而上调Fas蛋白的表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖同时促进骨肉瘤细胞的凋亡.     

整合素αvβ3抑制剂RGDfv对人骨肉瘤F_5M_2细胞系增殖及凋亡的影响

目的研究整合素αvβ3抑制剂RGDfv对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法通过MTT法检测不同浓度RGDfv序列肽对F5M2细胞生长增殖的抑制作用;通过Western blot方法观察经RGDfv诱导48 h的F5M2细胞中凋亡蛋白cleaved Caspase-3的表达。结果 MTT法检测结果显示经不同浓度RGDfv序列肽处理的F5M2细胞增殖受到抑制,OD值明显减少,并且呈浓度及时间依赖性(P0.05 or 0.01);RGDfv处理后的F5M2细胞中,随着RGDfv浓度的升高,cleaved Caspase-3的表达量也较对照组明显增加(P0.05)。结论 RGDfv序列肽能抑制F5M2细胞的增殖,并通过依赖于Caspase-3的通路诱导骨肉瘤F5M2细胞凋亡。