臭椿酮对非小细胞肺癌H460的作用和机制研究

目的 探究臭椿酮（ailanthone）抗非小细胞肺癌的作用及分子机制。 方法 CCK8检测ailanthone对H460非小细胞肺癌增殖的影响;Cultrex细胞迁移和侵袭法检测ailanthone对细胞迁移和侵袭的作用;细胞免疫荧光检测ailanthone对cyclin d1表达的影响;WB检测ailanthone对细胞蛋白激酶B（Akt）、蛋白酪氨酸激酶Src磷酸化和细胞周期蛋白D1（cyclin d1）蛋白表达的影响。结果 CCK8结果表明,于对照组相比,不同浓度（0.2、0.4、0.6、0.8和1.0μM）的ailanthone处理下H460细胞的增殖能力明显受抑制（P<0.05或P<0.001）;Cultrex 96孔细胞迁移法检测结果显示,于对照组（1.00±0.07）相比,ailanthone组（0.35±0.03,P＜0.01）明显抑制细胞迁移;Cultrex BME细胞侵袭法表明,ailanthone组（0.27 ± 0.04,P＜0.001）与对照组（1.00 ± 0.07）比明显抑制细胞侵袭;细胞免疫荧光实验显示,ailanthone处理细胞（14.67 ±1.20,P＜0.001）与对照组（50.00 ±1.73）比,明显抑制了Cyclin d1阳性细胞数;WB结果显示,H460细胞在ailanthone处理后Akt和Src的磷酸化明显降低,同时cyclin d1的表达明显下降。结论 ailanthone抑制非小细胞肺癌H460的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能是抑制Akt的磷酸化抑制细胞的迁移和侵袭,同时抑制Src的磷酸化抑制细胞周期相关蛋白cyclin d1的表达。     

热化疗对H446细胞增殖的影响

目的:研究热化疗对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其可能机制.方法:H446细胞分为单纯化疗组(单纯使用120 μg/L紫杉醇处理细胞)、热化联合组(采用43 ℃加热联合120 μg/L紫杉醇处理细胞)、抑制荊组(采用43 ℃加热联合120μg/L紫杉醇及1 μmol/L Akt特异抑制剂wortmannin处理细胞),以未处理的H446细胞作对照.应用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用Western Blot检测各组细胞磷酸化Akt水平.结果:对照组、单纯化疗组、热化联合组和抑制剂组细胞增殖率分别为(100.00 ± 0.00)%、(69.16 ± 2.95)%,(59.83 ±3.36)%和(40.65 ± 0.14)%,磷酸化AKt水平分别为(1.52 ± 0.01),(1.04 ± 0.42),(0.69 ± 0.03)和(0.00 ±0.00),4组细胞增殖率及磷酸化Akt水平相比,差异均有统计学意义(F=68.231和6.232,P均<0.05).与对照组和单纯化疗组相比,热化联合组细胞增殖率及磷酸化Akt水平均降低(P<0.05),wortmannin可进一步抑制H446细胞的磷酸化,且降低细胞的增殖串(P<0.05).结论:热化疗联合应用可抑制H446细胞增殖,其作用可能是通过抑制Akt信号转导通路实现的.     

HGF经HGF/Akt通路抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖

目的:观察肝细胞生长因子(HGF)对人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810增殖的影响,并探讨其分子机制?方法:HGF处理HCCC-9810细胞后,用MTT及EdU法检测癌细胞的增殖;siRNA干扰技术抑制HCCC-9810细胞内源性Akt的表达,Western blot检测癌细胞Cyclin D1蛋白表达和Akt磷酸化的变化?结果:50和100 ng/ml HGF显著抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖?Western blot结果显示,HGF处理后的肝癌细胞Akt磷酸化和Cyclin D1表达量明显下调?siRNA干扰Akt的表达,阻断了HGF诱导的Cyclin D1表达量的下调及细胞增殖抑制?结论:HGF通过下调Akt磷酸化和Cyclin D1表达量抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖?     

Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系

目的 探讨Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系.方法 实验设正常对照组(细胞未作其他处理)、人乙酰肝素酶重组蛋白处理组(5、10 μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特异性抑制剂pp2(5 μmol/L)或p38激酶特异性抑制剂SB 203580(1 μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重组蛋白(10 μg/ml)作用24 h组.利用划痕损伤实验和Transwell小室基质侵袭实验分别检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞、高表达乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901细胞和乙酰肝素酶表达被下调的SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,5和10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白均能明显增强人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);与未加抑制剂的人乙酰肝素酶重组蛋白比较,抑制剂pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重组蛋白增强的人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力(P<0.05).10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白促进人胃癌MGC-803细胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表达水平较SGC-7901细胞明显下调(P<0.01);抑制剂pp2和SB 203580对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白表达无明显影响;在人胃癌SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,Src激酶的抑制剂pp2抑制磷酸化p38蛋白的表达,而p38激酶的抑制剂SB 203580对磷酸化Src蛋白表达无明显影响.结论 乙酰肝素酶可能通过促进Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促进Src激酶磷酸化再促进p38激酶的磷酸化,从而促进人胃癌细胞迁移和侵袭能力.乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌细胞内存在的与细胞迁移和侵袭有关的信号转导通路.     

水飞蓟宾通过降低MEK/ERK途径依赖的MMP-9蛋白表达抑制人乳腺癌细胞生长和侵袭转移机制的实验研究

目的探讨水飞蓟宾对人乳腺癌细胞生长和侵袭转移的影响及机制。方法用不同浓度水飞蓟宾处理人乳腺癌细胞系MCF-7 24h,采用MTT(噻唑蓝)法和台盼蓝染色法检测水飞蓟宾对MCF-7细胞的抑制作用;采用transwell技术检测水飞蓟宾对MCF-7细胞侵袭转移的影响;Western blot检测水飞蓟宾对MCF-7细胞MEK及ERK(均为丝裂原激活的蛋白激酶)蛋白磷酸化水平及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的影响。结果水飞蓟宾可显著抑制MCF-7细胞的增殖并造成肿瘤细胞死亡,与对照组比较,水飞蓟宾增殖抑制率[20μM(8.9±3.8)%、50μM(19.7±4.2)%、100μM(29.8±5.7)%比0]、台盼蓝染色率[50μM(16.1±4.8)%、100μM(25.3±5.1)%比(3.4±1.4)%],均升高(P0.05,P0.01);水飞蓟宾通过抑制MEK(水飞蓟宾20μM:0.26±0.03、50μM:0.15±0.03、100μM:0.11±0.02比对照组:0.35±0.04)和ERK(水飞蓟宾20μM:0.23±0.03、50μM:0.12±0.02、100μM:0.07±0.01比对照组:0.32±0.05)的磷酸化降低MMP-9(水飞蓟宾50μM:0.18±0.03、100μM:0.14±0.02比对照组:0.29±0.04)的表达并抑制MCF-7[水飞蓟宾20μM:(14.3±2.1)%、50μM:(35.6±5.7)%、100μM(53.1±6.5)%比对照组:0]细胞侵袭转移的能力(P0.05,P0.01)。结论水飞蓟宾抑制人乳腺癌细胞的生长和侵袭转移。     

油酸激活Src基因诱导Hela细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨油酸是否能够通过激活Src基因,从而诱导宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭.方法 给予不同浓度的油酸(0、5、10μmol/L)处理人宫颈癌Hela细胞,使用CCK-8、平板克隆、EdU及Tran-swell等方法分别检测不同浓度油酸负荷下Hela细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化情况;Western blot检测油酸处理前后Src和p-Src蛋白表达水平变化;使用Src激酶特异性抑制剂SU6656处理细胞后,观察Hela细胞增殖率及穿膜细胞数等指标变化.结果 不同浓度油酸处理Hela细胞后,其体外增殖、迁移和侵袭能力均明显增加(P<0.05),且存在浓度依赖性.与NC组比较,油酸组p-Src蛋白表达水平升高(P<0.05).应用Src特异性抑制剂SU6656处理后,油酸引起的Hela细胞的增殖、迁移及侵袭力的增强均受到抑制.结论 油酸激活Src基因促进Hela细胞增殖、迁移和侵袭.     

油酸激活Src基因诱导Hela细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨油酸是否能够通过激活Src基因,从而诱导宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭.方法 给予不同浓度的油酸(0、5、10μmol/L)处理人宫颈癌Hela细胞,使用CCK-8、平板克隆、EdU及Tran-swell等方法分别检测不同浓度油酸负荷下Hela细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化情况;Western blot检测油酸处理前后Src和p-Src蛋白表达水平变化;使用Src激酶特异性抑制剂SU6656处理细胞后,观察Hela细胞增殖率及穿膜细胞数等指标变化.结果 不同浓度油酸处理Hela细胞后,其体外增殖、迁移和侵袭能力均明显增加(P<0.05),且存在浓度依赖性.与NC组比较,油酸组p-Src蛋白表达水平升高(P<0.05).应用Src特异性抑制剂SU6656处理后,油酸引起的Hela细胞的增殖、迁移及侵袭力的增强均受到抑制.结论 油酸激活Src基因促进Hela细胞增殖、迁移和侵袭.     

通过下调FOXM1的新型小分子抑制剂1-3-51抗胃癌细胞的作用

目的 研究新型小分子抑制剂1-3-51在胃癌中调控FOXM1 (Forkhead box protein M1)表达及其抗癌的作用.方法 CCK-8实验检测1-3-51处理后的BGC823和MKN45细胞IC50;Western blot检测胃癌细胞FOXM1表达;qRT-PCR检测胃癌细胞FOXM1及其下游分子Cyclin D1和MMP9 mRNA表达;流式细胞术测定细胞周期情况;Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力;裸鼠皮下移植瘤模型检测1-3-51抗胃癌增殖效果;在胃癌细胞BGC823中转染FOXM1过表达质粒及其空载质粒,CCK-8实验、Transwell实验分别检测1-3-51对胃癌细胞活性、迁移及侵袭等的影响.结果 新型小分子抑制剂1-3-51在BGC823和MKN45细胞作用48 h后的IC50分别为(5.429±0.225) μmol/L、(5.169±0.239) μmol/L,并可以显著抑制FOXM1的表达及其下游分子Cyclin D1和MMP9 mRNA表达.1-3-51显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭及迁移.过表达FOXM1后,可部分逆转其抑制细胞增殖、侵袭及迁移能力.结论 小分子抑制剂1-3-51在胃癌细胞中可通过抑制FOXM1及其下游分子Cyclin D1和MMP9等的表达,进而降低胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力.     

Tmub1沉默提高Akt蛋白活性促进肝细胞增殖

目的 探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响.方法 应用RNAi技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、Cyclin D1、c-myc等基因的mRNA和蛋白表达水平;采用平板集落形成实验和CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期.结果 与对照组相比,Tmub1基因沉默后,Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(P＜0.05),p-Akt磷酸化水平以及Cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(P＜0.05);BRL-3A细胞的增殖及生长能力增强(P＜0.05);且处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(P＜0.05).通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的mRNA及蛋白的表达水平,细胞的增殖及生长能力明显降低(P＜0.05),且处于S+ G2/M期的细胞比例下降(P＜0.05).结论 Tmub1沉默通过增加Akt蛋白的磷酸化及Cyclin D1、c-myc的表达水平从而促进BRL-3A细胞的增殖和生长.     

维生素D3抑制胰腺癌细胞迁移的作用机制

目的:探讨维生素D3抗胰腺癌的相关作用机制。方法:应用不同浓度的维生素D3(0,25,50,75,100μmol/L)干预胰腺癌PANC-1细胞,以未加维生素D3干预的细胞作为阴性对照组。Western Blot检测Hedgehog信号通路Smo蛋白的表达,Transwell小室测定其迁移能力。结果:维生素D3干预PANC-1细胞48h后,阴性对照组及25,50,75,100μmol/L组细胞Smo/β-actin灰度值分别为0.579±0.120,0.409±0.090,0.289±0.075,0.182±0.034,0.068±0.019,随浓度的增加而下调,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,高浓度组(75,100μmol/L)明显抑制了胰腺癌PANC-1细胞的迁移,维生素D3呈浓度依赖性抑制PANC-1细胞的迁移,以最大浓度组(100μmol/L)的抑制作用最强,25,50,75,100μmol/L维生素D3干预PANC-1细胞24h后,其迁移抑制率分别为(15.45±1.35)%、(37.26±2.11)%、(69.96±2.71)%、(84.55±2.83)%,且各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:维生素D3可以有效抑制胰腺癌PANC-1细胞的迁移,其机制可能与阻滞Hedgehog信号通路的Smo蛋白有关。     

穿心莲内酯对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨穿心莲内酯(Andro)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖及细胞周期的影响,为其应用于乳腺癌的治疗提供理论基础.方法 将实验分为对照组及Andro组,Andro组加入终浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L的Andro[Andro粉末先用DMSO溶解,再用培养基稀释至细胞处理浓度,控制DMSO的含量为0.1%(v/v)],对照组仅用0.1%DMSO溶剂.采用CCK8检测Andro不同浓度及不同处理时间(24、48、72 h)对MCF-7细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测两组细胞周期分布情况;应用预胶化淀粉细胞块制作方法 ,将两组细胞制作成石蜡切片,应用免疫组织化学方法 检测切片中MCF-7细胞增殖相关的核抗原Ki67及细胞周期相关抗原周期素D1(Cyclin D1)及周期素依赖性激酶4(CDK4)的表达.结果 CCK8检测结果 显示Andro浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L显著抑制MCF-7细胞的增殖,IC50值为25μmol/L,并且在IC50浓度下24、48、72 h Andro均显著抑制MCF-7细胞的增殖,并随着作用时间的延长,抑制作用越明显.细胞周期检测结果 Andro处理后G0/G1期细胞数量达(75.51±1.56)%,与对照组(49.16±1.35)%比较,显著升高(P<0.05),而S期的细胞数量仅为(12.69±0.87)%,与对照组(44.07±0.98)%比较,显著降低(P<0.05).细胞块免疫组织化学结果 显示对照组与Andro组Ki67的表达分别为(91.77±2.75)%、(78.05±2.61)%,显著降低(P<0.05),Cyclin D1的IOD值分别为(2.14±0.17)×107、(1.27±0.22)×107,显著降低(P<0.05),CDK4的IOD值分别为(1.14±0.014)×107、(1.16±0.024)×107,无明显差异.结论 Andro可通过抑制MCF-7细胞的增殖及抑制Cyclin D1的表达从而阻断MCF-7细胞的细胞周期进程从而发挥抗肿瘤作用,Andro不能通过影响CDK4的表达发挥阻断MCF-7细胞周期.     

PYK2介导H460肺肿瘤细胞失巢凋亡抗性的机制

【目的】研究蛋白激酶PYK2对悬浮状态下的肺癌细胞H460失巢凋亡抗性的作用和PYK2的下游通路蛋白。【方法】RNA干扰实验采用逆转录病毒载体介导的稳定表达系统降低PYK2蛋白的表达;细胞悬浮培养实验用polyHEMA培养方法;用PARP 断裂带和DAPI荧光染色检测细胞凋亡情况;细胞侵袭能力用侵袭小室实验;磷酸化蛋白激酶水平用免疫印记实验检测。【结果】用RNA干扰沉默能够降低H460细胞中PYK2蛋白的表达。抑制PYK2的表达能够降低悬浮培养H460细胞增殖能力和促进细胞凋亡增加。此外,沉默PYK2的表达能使肿瘤细胞侵袭能力下降, 并降低磷酸化Paxillin和Src的水平,但不能降低磷酸化JNK、AKT和ERK的水平。【结论】 PYK2信号通路在H460肺癌细胞失巢凋亡抗性中起重要作用,Paxillin和Src可能是PYK2的下游通路蛋白。     

HGF/Akt信号通路调控肝癌细胞HCCC-9810的增殖

目的：观察肝细胞生长因子（HGF）对人肝癌细胞HCCC-9810增殖的影响,并探讨其分子机制。方法：用MTT法检测HGF处理后肝癌细胞增殖的变化,RIPA蛋白裂解液裂解肝癌细胞后提取总蛋白,BCA比色法测定蛋白浓度,将蛋白煮沸5 min使其变性,取等量蛋白进行Western blot分析。结果：50 ng/ml和100 ng/ml HGF显著抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖。Western blot结果显示,HGF处理后的肝癌细胞Akt磷酸化和Cyclin D1表达量明显下调。siRNA干扰Akt的表达,可显著抑制HGF诱导的Cyclin D1表达量的下调及细胞增殖抑制。结论：本研究初步说明,HGF通过下调Akt磷酸化和Cyclin D1表达量抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖。     

丹参二萜醌类活性成分通过PKCδ/PKD1μ信号通路抗胰腺癌作用研究

目的观察丹参二萜醌类活性成分对胰腺癌的抑制效应,探讨其诱导胰腺癌凋亡的作用机制。方法胰腺癌细胞AsPC-1、BxPC-3用含10%gibco胎牛血清的RPMI1640培养液培养,按隐丹参酮组(30μM)、丹参新酮组(15μM)、去氢丹参新酮组(15μM)分别加药处理。Cell-countingkit-8(CCK8)法检测细胞存活率;AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测相关PKC同工酶磷酸化水平;对AsPC-1和BxPC-3细胞进行siRNA转染,Western blot检测相关PKC同工酶磷酸化水平。结果隐丹参酮组AsPC-1、BxPC-3细胞存活率分别为(40.1±5.0)%、(36.2±5.4)%;丹参新酮组AsPC-1、BxPC-3细胞存活率分别为(52.1±5.1)%、(47.2±5.7)%;去氢丹参新组AsPC-1、BxPC-3细胞存活率分别为(46.1±5.0)%、(42.2±5.4)%(P<0.01)。流式细胞术结果显示,AsPC-1组内空白对照组、隐丹参酮组、丹参新酮组、去氢丹参新酮组细胞的凋亡率分别为4.71%、30.10%、52.26%、42.30%;BxPC-3组内空白对照组、隐丹参酮组、丹参新酮组、去氢丹参新酮组细胞的凋亡率分别为5.10%、30.66%、33.76%、51.76%,组间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测显示,隐丹参酮组、丹参新酮组、去氢丹参新酮组较空白对照组,胰腺癌AsPC-1、BxPC-3细胞p-PKD/PKCμser916、p-PKCδthr505、p-PKD/PKCμser744/748的水平降低。Western blot检测显示,siRNA沉默胰腺癌AsPC-1、BxPC-3细胞PKCδ,胰腺癌AsPC-1、BxPC-3细胞PKD/PKCμser744/748磷酸化水平下调。结论隐丹参酮、丹参新酮、去氢丹参新酮可能通过抑制PKCδthr505磷酸化水平,下调PKD1μser744/748磷酸化水平,促进胰腺癌AsPC-1和BxPC-3细胞凋亡发生。     

7-O-丁二酰大环内酯菌素A对人肺癌细胞H460的抑制作用及其机制

探讨7-O-丁二酰大环内酯菌素A对人肺癌细胞侵袭转移的抑制作用及其机制。7-O-丁二酰大环内酯菌素A处理人肺癌细胞H460后,采用MTS、细胞黏附、Transwell和划痕实验观察7-O-丁二酰大环内酯菌素A对细胞生长、体外黏附能力及侵袭转移的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化,RT-PCR和Western blot检测7-O-丁二酰大环内酯菌素A对β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、vimentin、N-cadherin、CD44、integrin β1、bcl-2、Survivin和MMP-2/9的mRNA和蛋白表达的影响以及AKT和mTOR的磷酸化的变化。结果表明:7-O-丁二酰大环内酯菌素A显著抑制H460细胞的体外增殖和体外黏附,诱导细胞发生凋亡,且抑制细胞体外迁移和侵袭能力。Western blot和Real-time PCR结果显示,7-O-丁二酰大环内酯菌素A下调细胞中Bcl-2、Survivin、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、vimentin、N-cadherin、CD44、integrin β1和MMP-2/9的表达,以及AKT和mTOR的磷酸化。7-O-丁二酰大环内酯菌素A可抑制人肺癌细胞H460的体外生长,并抑制其体外黏附和侵袭转移能力。     

光老化成纤维细胞分泌的细胞外基质对HaCAT细胞增殖影响及FAK/PI3-K/Akt信号途径的作用机制研究

目的 探寻UVB诱导的衰老(UVB-SIPS)成纤维细胞分泌的细胞外基质(ECM)对HaCAT细胞增殖的影响以及FAK和PI3-K/Akt信号途径在其中所起的作用.方法 连续亚细胞毒剂量UVB辐照诱导皮肤成纤维细胞衰老,制备由衰老成纤维细胞分泌的ECM,接种HaCAT细胞至ECM包被的平皿,观察空白ECM、未衰老的ECM和光老化的ECM对HaCAT增殖、凋亡等功能的影响.免疫印迹法检测细胞内FAK和Akt磷酸化水平的时相性变化.在干预研究中,采用细胞松弛素D和渥曼青霉素阻断FAK和PI3-K/Akt信号通路,对比观察对细胞功能和信号的影响.结果 ①3组均可见Akt轻度但无显著差异的磷酸化的增加;但U-VB-SIPS组的FAK信号发生最快最明显的增加.②2μM细胞松弛素D可明显抑制FAK和Akt磷酸化;同时,细胞的凋亡率也显著增加.③以400 nM渥曼青霉素预处理细胞,明显抑制Akt磷酸化,同时3组的凋亡水平分别达15.8%、23.4%和21.8%.④细胞松弛素D和渥曼青霉素均明显抑制了光老化的ECM促细胞增殖效应.结论 在本系统中FAK/PI3-K/Akt信号途径发挥抑制细胞凋亡的作用.阻断该信号通路可完全破坏UVB-SIPS成纤维细胞分泌的细胞外基质对HaCAT的促增殖作用.     

Torin2对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的影响

目的 观察Torin2对人非小细胞肺癌A549细胞生长和迁移的影响,初步探讨其作用机制.方法 实验分为空白对照组、阴性对照组和Torin2加药组,CCK-8检测Torin2对各组A549细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞的凋亡及周期;Transwell检测细胞的迁移;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 Torin2对A549细胞的增殖具有显著抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,IC50为214.96 nmol/L;流式细胞仪检测对照组、加药组200 nmol/L和400 nmol/L细胞凋亡率分别为(4.51±1.32)％、(9.56±2.34)％、(16.40 ±3.57)％;各加药组凋亡率明显高于对照组(P＜0.05),且加药组与对照组比较:G1期细胞比例显著增多(P＜0.05),S期显著减少(P＜0.05).Transwell实验结果显示加药组(200 nmol/L和400 nmol/L)的A549细胞迁移能力较对照组显著下降.Western blot结果显示A549细胞经Torin2加药处理后,p-Akt473、p-4EBP1、Cyclin D1蛋白表达明显降低,Caspase 9蛋白酶切片段表达显著增加.结论 Torin2可以抑制A549细胞增殖,引起细胞周期G1/S期阻滞,抑制细胞迁移,促进细胞凋亡,其机制可能与Torin2抑制了PI3K/Akt/mTOR信号通路以及周期相关蛋白Cyclin D1的表达有关.     

罗哌卡因调控PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞功能的作用研究

目的 探究罗哌卡因对人肝癌细胞黏附、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及对磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的调控作用。方法 体外培养人肝癌MHCC97H细胞，分为对照组(不做干预),实验组(200、400、600和800 μmol/L罗哌卡因)和抑制剂组(200 μmol/L罗哌卡因+30 μmol/L PI3K/Akt通路抑制剂LY294002),干预24 h。用细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定细胞活力，采用细胞黏附实验测定黏附细胞数，用Transwell小室测定细胞的迁移和侵袭能力，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹(WB)法对细胞EMT和PI3K/Akt通路相关因子表达水平进行分析。结果 与对照组比较，800μmol/L罗哌卡因的细胞活力降低(P<0.05);200、400和600μmol/L罗哌卡因的细胞黏附数、迁移数、侵袭数以及p-PI3K、p-Akt、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和纤连蛋白(FN)表达量减少(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05);与200μmol/L罗哌卡因组相比，抑制剂组上述指标变化更为显著(P<0.05)。结论 罗哌卡因可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路来抑制人肝癌MHCC97H细胞的黏附、迁移、侵袭和EMT进程。     

土贝母皂苷甲增强人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的探讨土贝母皂苷甲(tubeimoside 1,TBMS1)促进人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂(cisplatin,DDP)的增敏作用。方法采用MTT法分别检测顺铂和TBMS1对A2780/DDP细胞作用的半抑制浓度值(IC50),将实验分为对照组:只加等量生理盐水;顺铂组:给予6μmol/L顺铂处理;联合用药Ⅰ组:6μmol/L顺铂+3μmol/L TBMS1;联合用药Ⅱ组:6μmol/L顺铂+6μmol/L TBMS1。按上述方法处理细胞后,MTT法检测细胞活力;电泳法检测细胞内DNA损伤;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期;Western blot分析周期蛋白A(Cyclin A)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果 TBMS1(3、6μmol/L)与顺铂(6μmol/L)联用使人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性增强;细胞的DNA损伤随TBMS1浓度的增加而明显增多;细胞周期被阻滞在S期,联合用药Ⅰ和Ⅱ组S期所占比例分别为(51.23±3.53)%、(77.34±2.80)%;细胞凋亡率为(5.19±0.78)%、(7.11±1.06)%;Cyclin A的表达为1.89±0.28及2.91±0.43,CyclinD1为0.66±0.09及0.28±0.05(P<0.05,P<0.01)。结论 TBMS1显著增加顺铂对A2780/DDP细胞增殖抑制作用,Cyclin A、Cyclin D1可能参与其调节。     

乙酰基转移酶抑制剂对食管癌细胞KAT5、Survivin乙酰化水平及细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨乙酰基转移酶抑制剂NU9056对食管癌EC109细胞乙酰基转移酶KAT5、Survivin乙酰化水平及细胞增殖和迁移的影响。方法 NU9056处理食管癌EC109细胞为实验组(NU9056组),有机溶剂DMSO处理食管癌EC109细胞为对照组(DMSO组)。采用MTT法筛选并确定NU905最佳给药浓度,RT-qPCR检测KAT5 mRNA表达,Western blot检测KAT5、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、癌基因-Myc(c-Myc)、B淋巴细胞瘤-2(BCL2)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,免疫共沉淀检测Survivin乙酰化水平,MTT法检测细胞增殖情况,划痕修复实验检测迁移能力,Transwell小室实验检测侵袭能力。结果 NU9056可浓度依赖性抑制食管癌EC109细胞增殖,其IC₅₀=0.946μmol/L,确定NU905最佳给药浓度为0.9μmol/L。NU9056组中KAT5 mRNA和蛋白表达较DMSO组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。NU9056组Survivin乙酰化水平较DMSO组明显下降,...