痘苗病毒致炎兔皮提取物促进小胶质细胞M1向M2极化、抑制炎性因子分泌的体外研究

目的 探讨痘苗病毒致炎兔皮提取物(AGC)对缺血性脑卒中细胞模型脑内炎症反应的影响及作用机制。方法 采用连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₂)无糖培养基在体外模拟缺血性脑卒中模型。将BV2细胞分为6组：对照组、对照加0.5 U/ml AGC组、氧糖剥夺再恢复(OGD/R)组,OGD/R加AGC (0.25 U/ml、0.5 U/ml、1.0 U/ml)组。OGD/R加AGC组氧糖剥夺1.5 h后换为正常培养基,同时给予不同浓度AGC,共同孵育3 h后进行细胞处理。取细胞上清液分别测定白介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)的含量。免疫荧光染色观察CD₁₆⁺+CD₃₂⁺(M1型小胶质细胞)和CD₂₀₆⁺(M2型小胶质细胞)细胞数。将BV2细胞分为7组：对照组、对照加0.5 U/ml AGC组、IL-4组、IL-4+脂多糖(LPS)+干扰素-γ(IFN-γ)组、IL-4+LPS+IFN-γ加AGC (0.25 U/m、0.5 U/m、1.0 U/ml)组。IL-4+LPS+IFN-γ加AGC 组IL-4处理24 h后,向细胞中加入LPS+IFN-γ处理18 h,加入相应浓度AGC 24 h后,流式细胞仪观察CD₁₆+CD₃₂和CD₂₀₆的表达。结果 与对照组相比,OGD/R组细胞上清液中IL-6、TNF-α含量明显增加(P < 0.01),CD ₁₆⁺+CD₃₂⁺细胞数增多,CD₂₀₆⁺细胞数减少;与OGD/R组相比,AGC各剂量组IL-6、TNF-α含量均明显降低(P < 0.01),CD ₁₆⁺+CD₃₂⁺细胞数减少,CD₂₀₆⁺细胞数增多。与对照组比较,IL-4组CD₂₀₆有增多趋势,CD₁₆+CD₃₂有减少趋势;与IL-4组比较,IL-4+LPS+IFN-γ组CD₁₆+CD₃₂有增多趋势,CD₂₀₆有减少趋势;与IL-4+LPS+IFN-γ组比较,AGC各剂量组CD₁₆+CD₃₂有减少趋势,0.25 U/ml、0.5 U/ml AGC剂量组CD₂₀₆有增多趋势,1.0 U/ml AGC 剂量组CD₂₀₆表达增多(P < 0.05)。 结论 AGC可通过促进小胶质细胞从M1表型向M2表型极化,抑制炎症因子的分泌。     

雌激素对去势大鼠脑缺血再灌注致脑损伤的保护作用

目的：通过观察雌激素替代疗法对去势大鼠脑缺血再灌注所致脑损伤的影响，研究雌激素对中枢神经组织的保护作用及保护机制。方法：取SD大鼠40只随机分为4组：①假手术对照组：不切除卵巢，不夹闭颈总动脉；②脑缺血再灌注组：作局灶性脑缺血再灌注手术，不切除卵巢；③去卵巢对照组：切除卵巢，作局灶性脑缺血再灌注手术，不补充雌激素；④补充雌激素组：切除卵巢，作局灶性脑缺血再灌注手术，补充雌激素（切除双侧卵巢30d开始补充雌激素，连续2周）。脑缺血再灌注12h，处死动物取材，10%脑组织匀浆，检测一氧化氮含量，冰冻切片，NOSmRNA原位杂交，TUNEL法原位检测凋亡细胞，细胞间黏附分子CD54的表达，电镜观察脑细胞膜结构系统的非特异性损伤。结果：去卵巢组脑组织NO的含量明显降低，NOSmRNA的表达减弱，脑细胞膜系统的非特异性损伤加重，脑细胞的凋亡增加；补充雌激素组脑组织NO的含量增高，NOSmRNA的表达增强，脑细胞膜系统的非特异性损伤减轻，脑细胞的凋亡减少，各组数据比较差异有显著性意义。结论：在缺乏雌激素的大鼠体内适当补充雌激素能减少脑细胞的凋亡，增强脑组织对缺血缺氧的耐受性。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡研究

目的：探讨在大鼠全脑缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的作用与意义。方法：采用四血管闭塞法复制大鼠全脑缺血再灌注模型,在光镜,电镜水平观察损伤病灶形态学改变,利用原位末端标记（TUNEL）法定量检测细胞凋亡指数。结果;大鼠全脑缺血30min后再灌注,细胞凋亡的发生随着缺血再灌注损伤时间变化,呈动态性改变,凋亡指数在再灌注24h达高峰,形态学观察预见细胞凋亡与坏死并存,结论：急性全脑缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡与坏死同时存在,表明细胞凋亡参与急生全脑缺血再灌注的损伤过程。     

银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨银杏叶提取物 (GBE)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :制造大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。 40只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组 (A组 )、缺血组 (B组 )、小剂量GBE组 (C组 )、大剂量GBE组 (D组 )。C、D 2组于术前 3 0min及术后 1h分别给予银杏叶提取物 2 0mg/kg、40mg/kg腹腔内注射。应用TTC染色及HE染色观察梗死体积及缺血坏死程度 ,应用TUNEL法检测凋亡细胞数。结果 :①C、D 2组梗死体积明显小于B组 (P <0 .0 1) ,D组小于C组 (P <0 .0 5)。②C、D 2组凋亡细胞数明显少于B组 (P <0 .0 1) ,D组少于C组 (P <0 .0 5)。结论 :银杏叶提取物可减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和梗死体积 ,疗效与剂量有关     

夜交藤提取物对大鼠完全性脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的研究夜交藤提取物对大鼠完全性脑缺血再灌注损伤的保护作用,并初步探讨其保护机制。方法取wistar大鼠,采用四血管阻断法制备完全性脑缺血再灌注损伤模型,将成模大鼠随机分为夜交藤组(灌胃给予夜交藤提取物)和模型组(灌胃生理盐水),另设假手术组(灌胃生理盐水),每组10只。再灌注72 h后,断头取血,比色法测血清一氧化氮合成酶(NOS)、超氧化物岐化酶(SOD)的活性及一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)的含量;取脑缺血组织,测定脑组织兴奋性氨基酸(EAA)含量。结果与模型组相比,夜交藤组大鼠血清SOD的活性升高,NOS的活性及NO、MDA含量均降低,能显著减轻缺血、缺氧造成的EAA含量增加,抑制EAA所导致的兴奋性神经毒性。结论夜交藤提取物对脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其保护机制与夜交藤提取物抑制NO释放及增强氧自由基的清除有关。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及其相应基因的调控

目的 观察胰岛素（insulin,RI)对缺血再灌注损伤后细胞凋亡及其相应基因的调控作用。评估RI对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将健康wistar大鼠56只，随机分为对照组、缺血再灌注盐水组(NS)、缺血再灌注胰岛素组(RI)。采用pulsinelli4血管阻塞模型，观察RI、NS在4．24，48h海马CA1区存活神经元数目，TUNEL阳性细胞数目，Bcl-2蛋白的表达，以观察比较缺血再灌注阶段细胞凋亡的变化。结果 再灌注NS组CA1区神经元数目(36&;#177;6)个／mm^2较再灌注RI组(88&;#177;9)个／mm^2少(t=3．34，P&;lt;0．01)。再灌注后CA1区细胞凋亡数：4h时再灌注NS组(12&;#177;3)个／mm^2高于再灌注RI(8&;#177;1)个／mm^2和假手术组(2&;#177;1)个／mm^2：组间比较，F=127．66，P&;lt;0．001。Bcl-2对海马CA1细胞凋亡评估4h时。再灌注NS组43．0&;#177;9．8,高于再灌注RI组24．0&;#177;5．4和假手术组2．7&;#177;0．8。结论 全脑缺血再灌注时急用RI可减轻脑缺血再灌注神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤引起的神经元延迟性坏死有保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注后自由基损伤的保护作用

目的 :研究银杏叶提取物 (GBE)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后SOD、MDA及NO含量的影响 ,探讨GBE的脑保护作用的机制。方法 :4 0只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组 (A)、缺血组 (B)、小剂量GBE组 (C)、大剂量GBE组 (D)。制造大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。C、D组于术前 30min及术后 1h分别给予银杏叶提取物2 0mg/Kg、4 0mg/Kg腹腔内注射。应用TTC染色观察梗死体积、检测脑缺血组织SOD活性、MDA和NO含量。结果 :①SOD活性C、D组明显高于B组 (P <0 .0 1) ,D组高于C组 (P <0 .0 5 )。②MDA和NO含量C、D组明显低于B组(P <0 .0 1) ,D组低于C组 (P <0 .0 5 )。③梗死体积C、D组明显小于B组 (P <0 .0 1) ,D组小于C组 (P <0 .0 5 )。结论 :银杏叶提取物可减少脑缺血再灌注后自由基生成及梗死体积 ,疗效与剂量有关。     

无患子皂苷对脑缺血再灌注损伤模型大鼠炎症因子的影响

目的:探讨无患子皂苷对脑缺血再灌注损伤模型大鼠炎症反应及其作用机制。方法:选取80只雄性SD大鼠,随机均分为假手术组、模型组、阳性药物组、无患子大、小剂量组。采用线栓法复制大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血2h,随即实施再灌注,再灌注时间为22h。取血后用ELLISA法检测各组动物血清白细胞介素-1β、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α,取脑一部分采用TTC染色观察梗死面积,其他匀浆后测黏附分子-1的含量。结果:与模型组比较,药物组IL-1β、TNF-α、ICAM-1含量显著降低,IL-6含量上升,脑梗死率明显降低。结论:无患子皂苷可抑制脑缺血再灌注损伤过程中的炎症反应;其机制可能与抑制炎症因子的级联反应以及其在血液和脑组织内的含量有关。     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase-3活性的影响

目的：探讨亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase—3活性的影响。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，大脑中动脉阻塞2h，再灌注损伤12h，用TUNEL法和荧光四肽底物(AC—DEVD-AMC)法分别检测假手术组、对照组和亚低温组的凋亡细胞百分率和Caspase—3活性水平。结果：与对照组比较，亚低温组和假手术组的凋亡细胞百分率和Caspase活性水平显著降低。结论：Caspase—3活性明显降低可能是亚低温处理大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡细胞百分率显著下降的分子机制之一。     

脑缺血再灌注对大鼠不同组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响

目的 探讨脑缺血再灌注（CI／RP）对大鼠不同组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响。方法 应用TUNEL法和免疫组化法，分别测定CI／RP损伤后各组大鼠脑皮质、丘脑和胸腺组织细胞凋亡及凋亡调控基因bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果 CI／RP损伤后大鼠脑皮质、丘脑和胸腺组织细胞凋亡率明显升高，凋亡调控基因bcl-2和Bax蛋白表达率也呈不同程度的升高，与对照组比较，差异非常显（P＜0．01）。电镜观察结果与之相似。结论 CI／RP损伤后上述3种组织细胞凋亡率增高，凋亡调控基因bcl-2和Bax表达异常。该结果为临床早期防治CI／RP损伤提供了实验依据。     

穴位埋线对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠运动功能的影响

目的 研究穴位埋线对局灶性脑缺血再灌注大鼠运动功能的影响,并探讨其可能作用机制。 方法 取3月龄健康雄性SPF级Sprague-Dawley大鼠48只,随机分为3组,每组16只。假手术组仅离断右侧颈外动脉,模型组和穴位埋线组制作局灶性脑缺血90 min再灌注大鼠模型,穴位埋线组缺血再灌注90 min后于百会穴、右侧顶颞前斜线进行穴位埋线。再灌注1 d、3 d、7 d、14 d后,进行神经功能评分和网屏实验;再灌注14 d后,TTC染色比较各组脑梗死体积;HE染色观察神经细胞损伤;免疫组织化学、Western blotting和逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测缺血半暗带脑组织内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、突触素I的表达。 结果 与假手术组相比,模型组神经功能评分显著降低(t > 11.851, P < 0.001),网屏实验时间显著缩短( t > 6.190, P < 0.001),GFAP阳性表达增加( P < 0.05),突触素I阳性表达下降( P < 0.05);与模型组比较,穴位埋线组神经功能评分显著增加( t > 3.464, P < 0.001),网屏实验时间显著增加( t > 3.642, P < 0.001),脑梗死体积显著减小( F = 93.426, P < 0.001),GFAP阳性表达降低( P < 0.05),突触素I阳性表达增加( P < 0.05)。 结论 穴位埋线可促进局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠运动功能恢复,可能与抑制星形胶质细胞反应性增生,增加缺血半暗带内轴突的再生,加强突触间连接与传导有关。     

大鼠脑缺血再灌注后自噬的变化及灯盏生脉胶囊干预的影响

目的观察大鼠脑缺血再灌注后自噬的变化及灯盏生脉胶囊干预的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠50只分为假手术组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、3-MA对照组、灯盏生脉胶囊(DZSM)组和DZSM对照组,每组10只。除假手术组外,其他大鼠线栓法制作大脑中动脉阻塞1 h再灌注模型。3-MA组和3-MA对照组造模前1 h立体定位侧脑室内注射3-MA或生理盐水,DZSM组和DZSM对照组从造模后4 h起每天予DZSM 20 mg/kg或生理盐水灌胃,共3 d。再灌注3 d后,各组采用Longa评分检测,免疫荧光染色和Western blotting检测脑组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin1表达,化学荧光法检测DZSM组和DZSM对照组活性氧水平。结果与假手术组相比,脑缺血再灌注后LC3、Beclin1表达显著增加(P0.001),尤其在梗死灶周边的皮层和纹状体区。3-MA组LC3、Beclin1阳性细胞计数均显著少于3-MA对照组(均P0.001),Longa评分显著低于3-MA对照组(P0.001)。DZSM组LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达显著低于DZSM对照组(均P0.001),活性氧水平、Longa评分也显著低于DZSM对照组(P0.001)。结论抑制局灶性脑缺血再灌注后自噬反应可保护神经功能。DZSM胶囊的作用机制包括抑制自噬反应。     

谷红注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠运动功能障碍的影响

目的观察谷红注射液对脑缺血再灌注损伤模型大鼠运动功能障碍的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠90只分为假手术组、模型组、乙酰谷酰胺组、红花注射液组和谷红注射液组,采用大脑中动脉闭塞(MCAO)建立脑缺血2 h再灌注损伤模型。术后24 h给药治疗,连续给药14 d。采用Bederson神经缺损症状评分平衡杆测试观察各组运动功能。酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色观察各组大鼠黑质神经元细胞存活率。结果模型组大鼠的过杆总时间比假手术组明显增加(P0.01),红花注射液与谷红注射液组过杆总时间较模型组降低(P0.05)。模型组大鼠缺血侧黑质TH神经元细胞存活率较健侧显著减少(P0.001),红花注射液和谷红注射液组TH神经元的细胞存活率较模型组明显升高(P0.01)。结论谷红注射液能显著改善脑缺血再灌注大鼠的运动功能障碍,其保护作用可能与抑制黑质神经元的继发性损伤有关。     

运动预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠自噬相关蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响

目的 研究运动预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌自噬相关蛋白Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)表达及细胞凋亡的影响,探讨其心肌保护相关作用机制。方法 36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n= 12)、模型组(n= 12)和运动预处理组(n = 12)。运动预处理组造模前给予4周运动预处理训练。结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注。再灌注1 h后,Western blotting检测心肌缺血区Beclin 1、LC3蛋白表达;TUNEL染色观察心肌缺血区细胞凋亡情况,计算心肌细胞凋亡指数。结果 与模型组相比,运动预处理组心肌缺血区LC3-Ⅰ蛋白表达上升,Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白表达下降,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ下降(P< 0.05),心肌缺血区凋亡细胞指数减少(P< 0.05)。结论 运动预处理能上调心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌缺血区LC3-Ⅰ表达,下调Beclin 1、LC3-Ⅱ表达,抑制心肌细胞凋亡。     

莫诺苷对脑缺血再灌注大鼠皮层梗死周边区基质金属蛋白酶表达的影响

目的研究莫诺苷对大鼠脑缺血再灌注3 d皮层梗死周边区基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响。方法健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠15只随机分为假手术组(n=3),模型组(n=3),莫诺苷小剂量组(n=3)、中剂量组(n=3)及大剂量组(n=3)。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)30 min再灌注模型。术后3 h,莫诺苷各组予莫诺苷30 mg/kg、90 mg/kg、270mg/kg每天1次灌胃。术后3 d,免疫组化染色观察脑缺血皮层梗死周边区MMP-2、MMP-9表达。结果与假手术组比较,模型组皮层梗死周边区MMP-2、MMP-9表达明显著升高(P0.01)。与模型组比较,莫诺苷各组MMP-2、MMP-9表达明显降低(P0.01)。结论莫诺苷能降低大鼠脑缺血再灌注3 d皮层梗死周边区MMP-2、MMP-9的表达,从而保护血脑屏障功能。     

右美托咪定改善大鼠脑缺血再灌注后认知功能障碍

目的:观察右美托咪定(Dex)对大鼠脑缺血再灌注后认知功能障碍的影响。方法:64只SD大鼠随机分为MCAO组、假手术组、Dex组、对照组,每组16只。建立脑缺血模型,MCAO组大脑中动脉阻塞60 min后再灌注,假手术组仅分离血管,Dex组术前腹腔注射Dex 100μg/kg,其他组经腹腔注射相同体积生理盐水,对照组仅接受全麻20 min,不予手术处理。24 h后ELISA法测定各组大鼠额叶皮质IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。术后第7天开始Barnes迷宫测试观察大鼠空间学习记忆功能。结果:MCAO组IL-1β、IL-6、TNF-α的表达比假手术组、对照组和Dex组均增高(均P0.05),Dex组的炎性因子表达与对照组相比差异无统计学意义(P0.05);MCAO组大鼠在Barnes迷宫进入目标洞时间比假手术组、对照组和Dex组均延长(均P0.05),Dex组与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:Dex能降低大鼠脑缺血术后中枢神经炎性因子的表达,改善其术后认知功能障碍。     

运动对老龄脑缺血再灌注大鼠空间学习记忆能力的影响及其机制

目的探讨运动对老龄脑缺血再灌注大鼠空间觉学习记忆的影响及其相关机制。方法20 月龄SD脑缺血再灌注大鼠随机分为试验组和对照组各10 只。试验组接受规律的运动训练,对照组在跑台上自由活动。两组在试验1 周后分别进行Morris 水迷宫测试,检测大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA表达。结果与对照组比较,试验组大鼠在第2 天的潜伏期缩短(P<0.05),平台周围活动轨迹延长(P<0.05);试验组大鼠海马缺血侧BDNF mRNA表达明显增加(P<0.01)。结论一定强度的规律性运动可提高老龄脑缺血再灌注大鼠空间学习和记忆能力,可能与海马内BDNF mRNA表达增加有关。     

丰富环境对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能和缺血半暗带区葡萄糖代谢的影响

探讨丰富环境对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能及缺血半暗带区葡萄糖代谢的影响。     

线粒体介导远端缺血后处理抗脑缺血再灌注损伤的机制研究进展

线粒体作为缺血后神经细胞凋亡的关键靶点,与脑缺血再灌注损伤关系密切。远端缺血后处理能缓解脑缺血再灌注损伤,可能与缓解线粒体损伤,改善其功能紊乱有关系,机制涉及细胞色素C/caspase、线粒体自噬、线粒体ATP敏感性钾通道和线粒体膜通透性转运孔等四个方面。     

早期运动联合戊四氮对脑缺血再灌注大鼠神经功能的效果及其机制

目的 探讨早期跑步运动和γ-氨基丁酸(GABA)受体拮抗剂对缺血再灌注(I/R)大鼠神经功能和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。 方法 雄性Sprague-Dawley大鼠50只平均分为假手术组、模型组、运动组、戊四氮组和综合组,每组10只。除假手术组外,其余大鼠行大脑中动脉阻塞(MCAO) 1 h再灌注。再灌注2 d后,戊四氮组和综合组每天腹腔注射戊四氮0.25 mg/kg,共5 d;运动组和综合组每天跑步机上跑步30 min。再灌注7 d后,各组大鼠行神经行为学评价,TTC染色评估各组大鼠梗死体积,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法检测各组缺血半影区BDNF表达水平。 结果 与模型组相比,运动组、戊四氮组和综合组神经功能评分改善,脑梗死体积减少(P < 0.05),而且综合组优于其他两组(P < 0.05)。综合组缺血半影区BNDF表达高于其他组(P < 0.05)。 结论 早期跑步运动联合戊四氮可促进I/R大鼠神经功能恢复,可能与BDNF上调有关。