肿瘤坏死因子诱导细胞凋亡的信号传导机制

1肿瘤坏死因子的分子生物学特性 TNF的研究可追溯到一百多年前.早在19世纪末,人们发现有些恶性肿瘤患者在伴细菌感染时,可导致肿瘤的自发消退,提示细菌感染和肿瘤消退之间存在一定关系.1893年美国学者Coley et al尝试在肿瘤患者体内诱发细菌感染以及注射死亡细菌的混合物来治疗肿瘤.这就是有关TNF的最早记录[1].本世纪80年代以来,随着分子生物学的飞速发展,对TNF研究不断深入,人们发现其具有多种生物学活性,除对免疫细胞有活化、促增殖和分化等作用外,对某些非肿瘤细胞和大多数肿瘤细胞具有诱导凋亡(Apoptosis)的作用[2].当机体处于炎症如病毒、细菌、寄生虫感染,或创伤等病理状态时,这些作用对清除受损细胞、维持机体内环境平衡,起着重要的作用.     

缺血性神经元DNA损伤导致凋亡的信号传导机制

DNA损伤缺是决定神经元能否存活的重要因素之一。文章主要介绍了缺血性DNA损伤引发凋亡的机制。DNA损伤可绅发P53蛋白表达，经过Bcl-2家族成员的调节，使细胞色素c(Cyt c）从线粒体转移到胞浆，Cyt c与Apaf-1和前caspase-9形成复合物，激活caspase-9，引发caspase家族级联反应caspase作用于各自的底物，包括激活核酸内切酶（DNase),DNase使DNA双链断裂，产生180－200bp或其整数倍的DNA片断，最终神经元凋亡。深入了解通路的具体过程，参与的有关物质，将会加深我们对脑缺血损伤机制的理解。     

CaN-NFAT信号传导通路参与EPCs凋亡作用的研究

目的:研究钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子(CaN-NFAT)信号传导通路参与内皮祖细胞(EPCs)的凋亡过程。方法:采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,贴壁培养获得EPCs。实验分为4组:空白对照组、苯肾上腺素(PE)组、环孢素A(CsA)组、CsA+PE组。采用TUNEL染色测定EPCs凋亡状况。逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测Bax、Bcl-2、Caspase-3及NFAT4的mRNA的转录水平。免疫荧光染色检测NFAT4亚细胞水平定位。结果:(1)EPCs凋亡检测:与空白对照组及PE组比较,CsA组和CsA+PE组EPCs凋亡数明显增加[(3.41±0.89)比(4.39±1.92)比(23.68±1.14)比(25.92±2.62),P<0.05];(2)与空白对照组和PE组比较,CsA组和CsA+PE组的Bcl-2mRNA水平、Bcl-2/Bax mRNA比值明显下降(P均<0.05),Caspase-3mRNA水平明显升高(P<0.05)。NFAT4mRNA水平:与空白对照组比较,PE组的明显升高(P<0.05),CsA组的明显下降(P<0.05);与PE组比较,CsA组和CsA+PE组的NFAT4mRNA水平均明显下降(P<0.05)。四组之间Bax mRNA水平均无显著差异;(3)与空白对照组比较,PE组NFAT4核转移率明显增加[(25.33±2.08)%比(95±2)%,P<0.05];与空白对照组及PE组比较,CsA组和CsA+PE组NFAT4核转移率[(8.00±2.65)%、(7.00±1.73)%]明显下降(P均<0.05)。结论:CaN-NFAT信号传导通路参与EPCs凋亡的调节作用。     

凋亡信号传导在急性胰腺炎发病中的作用研究

目前研究发现,急性胰腺炎的发生发展与细胞凋亡传导途径相关,其中与(Caspase家族、Fas/FasL系统和Bcl-2家族的关系尤为密切,阐明凋亡信号传导途径有助于了解急性胰腺炎的发病机制。     

病毒性心肌炎心肌细胞凋亡机制研究

在病毒性心肌炎的发病机制及病理生理过程中，关于心肌细胞是否发生凋亡，以及凋亡的诱导原因和重要程度，一直众说纷纭，没有确切定论。本文参考近年来一些文章的实验结果，介绍了病毒性心肌炎发生凋亡的情况，以及诱导凋亡出现的机制，主要概括为：在病毒的刺激下，炎症细胞分泌细胞因子，进而通过胞外受体，信号转导进入心肌细胞激活凋亡通路；此外，病毒直接侵入心肌细胞，诱导细胞凋亡发生。     

氧化砷诱导胃癌细胞凋亡的信号传导途径研究

目的 检测氧化砷(As2O3)诱导胃癌细胞株(SGC-7901和MKN-45)凋亡过程中cAMP、蛋白激酶C(PKC)和酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性变化，以探讨其诱导胃癌细胞凋亡过程中可能存在的信号传导途径。方法 应用钙离子拮抗剂、PKC和PTK抑制剂研究其对AS2O3诱导胃癌细胞凋亡过程的影响，以TUNEL法检测细胞凋亡率。以放射免疫法测定As2O3作用前后细胞内cAMP水平的变化。抽提PKC和PTK蛋白，以Lowry法测定As2O3作用前后各自蛋白表达水平的变化。结果 钙离子拮抗剂对As2O3诱导胃癌细胞凋亡过程没有影响，PKC和PTK抑制剂不仅本身能诱导胃癌细胞凋亡，且对As2O3诱导胃癌细胞凋亡具有协同作用。在As2O3诱导胃癌细胞凋亡过程中存在cAMP浓度增高和PKC、PTK活性显著降低，提示cAMP、PKC和PTK可能参与As2O3诱导胃癌细胞凋亡的作用。结论 PKC和PTK抑制剂可以通过影响信号传导系统诱导胃癌细胞凋亡，并能促进As2O3诱导胃癌细胞凋亡。     

凋亡信号传导在急性胰腺炎发病中的作用研究

目前研究发现,急性胰腺炎的发生发展与细胞凋亡传导途径相关,其中与Caspase家族、Fas/FasL系统和Bcl－2家族的关系尤为密切,阐明凋亡信号传导途径有助于了解急性胰腺炎的发病机制。     

Rho激酶信号通路与大鼠心肌细胞凋亡的关系

目的探讨Rho激酶信号通路在心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡组织中的表达变化及对心肌细胞凋亡的影响作用。方法选取健康雄性Wistar大鼠,通过结扎左前降支建立大鼠心肌梗死模型,将24 h后仍然存活的大鼠选取30只,随机分为模型组和治疗组(法舒地尔5 mg/kg,2次/d)各15只,并另外选取健康雄性大鼠15只作为假手术组,假手术组和模型组给予等量生理盐水处理,比较4 w后3组心肌梗死面积及Rho激酶mRNA、蛋白等指标的表达差异。结果 3组左心室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)差异均有统计学意义(P0.05),模型组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于治疗组和假手术组(P0.05),LVEDP显著高于治疗组和假手术组(P0.05),治疗组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于假手术组(P0.05),LVEDP显著高于假手术组(P0.05)。治疗组心肌缺血面积低于模型组但差异不显著(P0.05);治疗组心梗面积显著低于模型组(P0.05)。3组Rho激酶mRNA、Bax蛋白、Bcl-2蛋白表达差异有统计学意义(P0.05);组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论心肌梗死大鼠心肌组织中的Rho激酶mRNA、Bax蛋白达显著增加,同时Bcl-2蛋白表达降低,法舒地尔能够降低Rho激酶mRNA表达,减少心肌细胞凋亡,减轻心肌梗死面积。     

他汀类药物抗心肌细胞凋亡机制

近来实验证实他汀类药物具有除降血脂以外的心肌保护效应。现主要从他汀类药物激活磷脂酰肌醇-3激酶丝氨酸- 苏氨酸激酶／一氧化氮舍酶(PI3K／Akt／eNOS)信号通路、抑制氧化应激和抑制糖原合成激酶3β(GSK3β)三个方面阐述他汀类药物抑制心肌细胞凋亡的主要机制。     

FABP3基因对心肌细胞凋亡的影响

目的脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将H9C2心肌细胞分为空白对照组、阴性对照组、FABP3沉默组、FABP3沉默+空质粒组及FABP3沉默+过表达人FABP3组,转染72 h后Western印迹检测各组细胞中FABP3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western印迹检测Cleaved caspase3、Bcl-2蛋白表达。结果空白对照组与阴性对照组及FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组之间FABP3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组FABP3的蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组,FABP3沉默+过表达人FABP3组FABP3的蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01);FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于空白对照组与阴性对照组,Bcl-2蛋白表达显著低于空白对照组与阴性对照组FABP3(P<0.01);沉默+过表达人FABP3组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著低于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组,Bcl-2蛋白表达显著高于FABP3沉默组和FABP3沉默+空质粒组(P<0.01)。结论沉默FABP3的表达可促进H9C2心肌细胞凋亡,过表达则抑制细胞凋亡,其机制与调节Cleaved caspase3及Bcl-2蛋白表达有关。     

细胞外反应激酶信号传导通路及其在心肌肥厚中的作用

细胞外反应激酶是细胞内广泛存在的有丝分裂原激活的蛋白激酶超家族成员 ,通过受体酪氨酸激酶通路和异三聚体 G蛋白耦连的受体通路两条途径激活 ,直接参与心肌肥厚的启动、诱发心肌细胞肥大的形态学改变 ,调控基因表达 ,在心肌肥厚的发生、发展过程中具有促进作用。     

心肌重塑中AT1受体β1受体与PKC和MAPKs信号转导通路间关系的探讨

目的　探讨心肌重塑中AT1受体、β1受体与PKC和MAPKs信号转导通路间的关系 ,以进一步探讨心肌重塑的分子机制。方法　Wistar大鼠 2 4只 ,随机分为 4组 ,分别为假手术组、单纯心肌梗死组、氯沙坦组和倍他乐克组 ,结扎左冠状动脉前降支建立大鼠心肌梗死后心肌重塑模型 ,均观察 2 1d ,其中假手术组不结扎冠状动脉。心肌I型、III型胶原、纤维连接蛋白、c fos、细胞外信号调节激酶 (ERK)和蛋白激酶C(PKC)表达的变化均用免疫组织化学染色法和计算机图像分析进行检测分析。用RT PCR方法检测c fos受体mRNA表达的变化。结果　单纯梗死组心肌I型、III型胶原、纤维连接蛋白 (FN)、c fos、ERK1和PKC蛋白表达增强 ,与假手术组比较均有显著性差异 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,且c fosmRNA表达增强 ;氯沙坦组心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原、FN、c fos、ERK1和PKC蛋白表达均比单纯梗死组显著减少 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,c fosmRNA表达减弱 ,而倍他乐克组对PKC和ERK1表达无明显影响。结论　PKC和MAPK信号转导通路与心肌梗死后心肌重塑相关 ,其中心脏AT1受体与PKC和MAPK信号转导通路有关 ,而 β1受体与PKC和MAPK信号转导通路可能无关 ,其参与心肌重塑的信号转导通路有待进一步研究     

风湿性心脏病患者心肌、骨骼肌细胞mtDNA突变的相关性研究

目的探讨风湿性心脏病(风心病)患者心肌细胞与骨骼肌细胞线粒体DNA(mtDNA)突变的相关性.方法随机选取56例风湿性二尖瓣狭窄为主患者(下称实验组,冠心病除外),另选10例意外死亡的成人做为正常对照组.术中切取后乳头肌作为心室肌标本,胸大肌作为骨骼肌标本.定量每例患者心肌及骨骼肌mtDNA4977缺失率,分析其相关性及与心功能的关系.结果实验组心肌mtDNA4977缺失率为1.18%～13.75‰,对照组为0～0.06‰,两者有显著性差异(P＜0.01).随着心功能恶化,实验组心肌mtDNA4977缺失率增加.按NYHA心功能分级,Ⅱ级(B组)、Ⅲ级(C组)、Ⅳ级(D组)心肌mtDNA4977缺失率分别为3.79‰、6.32‰和9.28‰,两两比较,P＜0.05.实验组心肌、骨骼肌mtDNA4977缺失率呈正相关(γ=0.75,P＜0.01).结论风心病患者的心肌mtDNA4977缺失率与其心功能损害程度密切相关;其骨骼肌mtDNA4977缺失率与心肌mtDNA4977缺失率呈正相关.     

细胞因子及其信号通路在放射性肝损伤发病中的作用研究进展

放射性肝损伤（radiation-induced liver injury,RILI）是原发性肝癌及其他腹腔肿瘤放射治疗中最主要的并发症之一,它制约了肿瘤区的放疗剂量,严重影响了患者的治疗疗效。研究发现RILI的发生与多种细胞因子相关。细胞因子通过启动多种下游信号通路参与RILI各阶段的发病。     

哇巴因诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的：研究哇巴因对白血病细胞株Jurkat是否具有凋亡诱导作用，探索其可能的信号传导通路，阐明哇巴因诱导细胞凋亡的作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对白血病细胞生长的抑制程度；应用电镜及流式细胞术观测细胞凋亡；应用Western-blot检测细胞外信号调节蛋白激酶(extracelluar sig-nal-regulated kinase1/2简称 ERK1/2)的表达。结果：哇巴因能诱导白血病细胞凋亡，细胞凋亡的数量与哇巴因的浓度呈正相关，Western-blot检测结果显示哇巴因作用后，磷酸化：ERK1/2的表达减低。结论：细胞外信号调节蛋白激酶ERK通路可能参与了哇巴因引起的白血病细胞的凋亡过程。     

整合素在心肌肥大细胞信号转导中的作用

整合素及其信号转导通路在心脏的发育和心肌肥大的发生与发展中起着重要作用,作为介导心肌肥大的细胞表面受体的异二聚体家族,为细胞黏附提供附着点,通过其双向信号转导通路和机械传导受体作用,调节下游信号转导蛋白的磷酸化水平与活性,调整心肌细胞骨架的重构.其中报道较多的是β1整合素及其相关的信导分子以及少量的关于 β3整合素及其...     

生存素与肿瘤信号转导通路之间的关系

生存素是凋亡抑制蛋白家族新成员,是细胞增殖和凋亡调控界面间的"结点"分子.生存素基因表达的肿瘤特异性使其成为目前恶性肿瘤诊断和治疗的新靶点.肿瘤细胞发生与正常细胞的信号通路异常有关,信号转导通路的活化参与细胞癌变、增殖、凋亡等多种生物学效应.本文就肿瘤中信号转导对生存素基因的表达调控机制的研究进展作一综述.     

钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号传导通路对内皮祖细胞增殖作用的研究

目的研究钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子（CaN—NFAT）信号传导通路对内皮祖细胞（EPCs）增殖的作用。方法采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,贴壁培养获得EPCs。比色法测定EPCs增殖能力;免疫印迹法检测EPCs内钙调神经磷酸酶Ap（cnAp）蛋白质水平的表达;逆转录聚合酶链反应法检测EPCs内cnAB和NFAT4的表达。观察不同干预因素24h和48h后对EPCs增殖能力的作用,干预因素48h后对EPCs内CnAβ蛋白质水平表达的影响及对EPCs内CnAB和NFAT4表达的影响。结果苯肾上腺素（PE）使EPCs增殖能力增高;环孢素A（CsA）不仅直接使EPCs增殖能力下降,而且可抑制PE引起的EPCs增殖能力增高。结论EPCs内存在CaN—NFAT信号传导通路,该通路受促进因素及抑制因素的调节;CaN—NFAT信号传导通路对EPCs的增殖有明显作用。     

内分泌腺来源的血管内皮生长因子抑制胰腺癌细胞凋亡的信号转导机制研究

目的 探讨内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)在胰腺癌MiaPaCa细胞中抗凋亡作用及其相关分子机制.方法 以50、100、200 ng/ml EG-VEGF处理细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞p42/44MAPK、STAT3蛋白表达及其磷酸化,检测抗凋亡蛋白Mcl-1的表达.应用G蛋白耦联非特异受体阻断剂PTX、Rsa/ERK信号通路阻断剂PD98059和JAK/STAT3信号通路阻断剂AG490预处理细胞1 h,观察Mcl-1蛋白表达的变化.结果 100 ng/ml EG-VEGF可使MiaPaCa细胞的凋亡率从(28.4±4.6)%显著下降到(13.2±2.5)%(P<0.05).50 ng/ml的EG-VEGF处理后,MiaPaCaⅡ细胞p42/44MAPK的磷酸化增加(1.735 ±0.019)倍;STAT3的磷酸化增加(21.810±0.052)倍,均较对照组显著增加(P值均<0.05),但100、200 ng/ml EG-VEGF没有进一步增加蛋白的磷酸化.50 ng/ml的EG-VEGF处理后,Mcl-1蛋白的表达较对照组增加(3.460±0.002)倍,但100、200ng/ml EG-VEGF没有进一步增加蛋白的表达;应用PTX预处理后,Mcl-1蛋白表达的增加被完全抑制,用PD98059、AG490预处理后Mcl-1表达增加抑制率分别为52%和68%.结论 EG-VEGF可抑制MiaPaCa细胞的凋亡,其机制可能与激活Ras-MAPK和JAK-STAT3信号转导通路及增加Mcl-1蛋白的表达有关.