精索静脉曲张的不育病人精子线粒体DNA片段缺失的调查

目的分析精索静脉曲张导致的不育病人的精子线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）中一个长为4 977 bp的片段缺失的情况。方法收集60例精索静脉曲张的不育病人和90名健康男性的精液标本,并抽提精子的总DNA,用Gap-PCR技术检测DNA 4 977 bp片段的缺失情况。结果在81.66%的患有精索静脉曲张的不育病人和4.44%的健康人对照中存在DNA 4 977 bp片段的缺失。患有精索静脉曲张的不育病人中DNA缺失频率更高（OR=139.80,95%CI=40.08~487.30,P < 0.01）。结论精索静脉曲张可能会导致一些男性精子DNA缺失,并导致不育。且精子线粒体DNA 4 977 bp片段缺失与精索静脉曲张所致不育症存在一定的相关性。     

Delta mtDNA4977 is more common in non-tumoral cells from gastric cancer sample

BACKGROUND: The aim of this study was to determine the frequency of delta mtDNA4977 in tumoral cells as compared with adjacent normal cells in gastric cancer. METHODS: In order to investigate whether a high incidence of mutation exists in mitochondrial DNA of gastric cancer tissues, we screened one of common region of the mitochondrial genome by PCR amplification and Southern blot followed by DNA sequence analysis. DNA isolated from these cells was used to amplify hypervariable regions ATPase8/6, COXIII, ND3, ND4 and ND5 of delta mtDNA4977. RESULTS: In 107 cancer patients, delta mtDNA4977 was detected in 6 cases (5.60%) of the tumoral tissues and 18 cases (16.82%) of the non-tumoral tissues that were adjacent to the tumors. Levels of delta mtDNA4977 deletions were found to be more in non-tumoral tissues than in adjacent tumoral tissues. There was no correlation of patients with certain clinical parameters like age, sex, tumor location and tumor size; however, there was an obvious relationship with intestinal-type of gastric cancer. CONCLUSIONS: Unknown genetic aspects, ambiguous environmental factors and reactive oxygen species (ROS) can cause the delta mtDNA4977 mutation rate to be increased in gastric cancer. The results suggest that percentage level of delta mtDNA4977 is less common and intolerable in tumoral tissue, probably because of high metabolism and ROS generation. We supposed that the cells initially had delta mtDNA4977 transform to tumoral cells and the existed deletion conferred metabolic disadvantage; thus, cells containing such a mtDNA deletion would be overgrown by other cancer cells without this mtDNA deletion. As a result, the presence of delta mtDNA4977 will be low in tumoral cells.     

人颗粒细胞线粒体DNA缺失的研究

目的 探讨颗粒细胞线粒体DNA突变在女性生殖老化中的可能机制，并为颗粒细胞线粒体移植提供理论基础。方法 分离70例临床行常规体外受精(IVF)和胞质内单精子注射(ICSI)患者的颗粒细胞，抽提DNA，PCR检测颗粒细胞线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)4977bp缺失情况。结果所有颗粒细胞均未检测到mtDNA4977bp缺失。结论 人颗粒细胞mtDNA并不发生4977bp缺失．这可能与其不是有丝分裂后细胞，仍具有增殖能力，受到的氧化损伤较少有关。颗粒细胞参与生殖老化的机制可能与其mtDNA突变无关。     

线粒体DNA4977bp缺失检测肿瘤细胞辐射敏感性的初步研究

目的:探讨mtDNA4977bp缺失用于肿瘤细胞辐射敏感性检测的可行性。方法:分别采用MTT法和巢式PCR法测定人肿瘤细胞株—肝癌细胞(HepG2)、食管癌细胞(EC-9706)和乳腺癌细胞(MCF-7)不同剂量γ射线照射后的存活分数(SF)和mtDNA4977bp缺失率。结果:MTT法:2Gy、4Gy和8Gy照射后,HepG2和EC-9706的SF显著低于MCF-7,表明HepG2和EC-9706细胞具有更高的辐射敏感性,HepG2细胞照射后的SF略低于EC-9706细胞,但统计学差异不显著。PCR法:1Gy和4Gy照射后3种肿瘤细胞mtDNA4977bp缺失率无显著性差异。8Gy照射后HepG2和EC-9706 mtDNA4977bp缺失进一步增加,而MCF-7的缺失率下降,显著低于HepG2与EC-9706细胞的缺失率,但HepG2和EC-9706细胞的缺失率无统计学差异,提示HepG2和EC-9706细胞的辐射敏感性高于MCF-7细胞,这与MTT法测定结果相符。结论:测定mtDNA4977bp缺失作为快速、简便的检测方法,有望用于肿瘤细胞辐射敏感性预测。     

2 型糖尿病患者线粒体常见基因突变PCR检测的局限性

目的:研究北京地区汉族人群中线粒体DNA(m itochondrial DNA,m tDNA)多位点突变频率与2型糖尿病之间的相关性。方法:采用直接PCR、PCR-限制性片段长度多态性(restriction fragm ent length polymorph ism,RFLP)、PCR-时相温度梯度凝胶电泳(temporal temperature grad ient gel electrophoresis,TTGE)法筛查m tDNA 4977片段缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变和m tDNA T14577C突变。结果:在250例2型糖尿病患者及142例健康对照外周血基因组总DNA中,未发现m tDNA 4977缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变及m tDNA T14577C突变。结论:m tDNA 4977缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变及m tDNA T14577C突变在外周血中没有检出,采用常规PCR法检测2型糖尿病患者外周血线粒体DNA突变具有较大的局限性。     

线粒体DNA缺失与心肌病

研究线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）缺失与心肌病发生的关系。方法用大片段ＤＮＡ体外扩增技术，扩增心肌病患者心肌、骨骼肌血液标本的ｍｔＤＮＡ，并与冠心病患者、正常人的标本对照。结果在１例肥厚型心肌病（ＨＣＭ）患者心肌中发现ｍｔＤＮＡ缺失，缺失片段长度为４００个碱基对（４００ｂｐ），心肌中缺失ｍｔＤＮＡ的相对含量超过５０％。结论ｍｔＤＮＡ缺失可能是心肌病发病的一个重要病因。     

Cochlear mitochondrial DNA3867bp deletion in aged mice

目的　探讨老龄小鼠耳蜗mtDNA缺失情况 ,明确老龄小鼠耳蜗mtDNA缺失的位置。方法　应用套式PCR和DNA测序技术对不同月龄 12 9/CD1杂交小鼠耳蜗 31个 (2月龄 7个 ,7- 10月龄 16个 ,17- 19月龄 8个 )进行定性及定量检测。结果　 1 小鼠耳蜗mtDNA386 7bp大片缺失 ,缺失发生在nt910 3-nt12 970之间 ,其两侧nt90 89-nt910 3和nt12 95 6-nt12 970为核苷酸完全相同的 15bp重复序列。 2 随着小鼠月龄的增加 ,耳蜗mtDNA386 7bp缺失发生率有明显增加的趋势 ,2月龄小鼠未发现缺失 (0 /7) ;17- 19月龄小鼠 (7/8)明显高于 7- 10月龄小鼠 (4/16 ) (P <0 0 1)。 3 缺失mtDNA/总mtDNA比值 ,17- 19月龄小鼠明显高于 7- 10月龄小鼠 (P <0 0 1)。结论　老龄小鼠耳蜗出现mtDNA386 7bp大片缺失可能与老年性聋发生相关     

人类单纯性先天性心脏病患者Nkx2—5基因突变及表达的研究

目的：研究Nkx2-5基因在人类单纯性先天性心脏病患者中的突变及表达情况。方法：应用PCR－SSCP方法和NDA测序技术在58个单纯性先天性心脏病核心家系183名成员中检测Nkx2-5基因的突变情况;以β－actin作为内对照对11个室间隔缺损患者心肌标本和2个非先天性心脏病患者（正常对照）心肌标本进行RT－PCR扩增和定量分析,观察mRNA表达水平。结果：发现Nkx2-5基因同源结构域中（CCA）三碱基缺失;与非先天性心脏病患者（正常对照）相比,室间隔缺损患者的Nkx2-5基因基因mRNA表达呈下降趋势。结论：Nkx2-5基因与人类单纯性先天性心脏病密切相关,其同源结构域内的基因突变可能是人类单纯性先天性心脏病发病的重要遗传基础。Nkx2-5基因转录水平的异常可能是先天性心脏病形成的另一种潜在机制。     

瓣膜疾病患者和先心病患者心肌线粒体DNA缺失的初步观察

目的 初步观察心脏瓣膜疾病与先心病患者心肌线粒体DNA缺失及其意义。方法 随机选择心脏瓣膜病患者17例和14例先心病患者术中取心肌，提取线粒体DNA，应用PCR测序技术检测心肌线粒体DNA序列并分析其突变情况。结果 17例心肌瓣膜置换术患者中，总核苷酸碱基变异或丢失为70个，人均变异率为4．1176个，碱基平均变异率为1．1372％；14例先心病患者中，核苷酸碱基总变异为63个，人均变异率为4．5个，碱基平均变异率为1．3118％；瓣膜置换术组C-T变异率为51．39％，T-C变异率为33．33％，先心病组C-T变异率为46．03％，T-C变异率为34．92％。结论 心脏瓣膜病与先心病患者的心肌线粒体DNA均存在不同程度的碱基突变与丢失。     

内耳缺血及线粒体DNA缺失与老年性耳聋发病的关系

目的 探讨内耳缺血及ｍｔＤＮＡ４９７７缺失与老年性聋的关系,确定老年性耳聋颞骨中ｍｔＤＮＡ缺失的病理基础。方法 对４１例不同分组的６７侧颞骨应用巢式ＰＣＲ和三重巢式ＰＣＲ检测ｍｔＤＮＡ４９７７缺失,应用图像分析技术测量血管管腔与血管的截面积比值。结果 在老年性聋组检出ｍｔＤＮＡ４９７７缺失的总发生率为５０．０％（１７／３４,缺失阳性耳数／总耳数）。在老年对照组检出ｍｔＤＮＡ４９７７缺失总发生率为２１．１％（４／１９）,与病变组比较差异无显著意义（Ｐ〈０．０５）。非老年对照组１０例１４耳均未检出ｍｔＤＮＡ４９７７缺失,缺失率为０。ｍｔＤＮＡ４９７７缺失阳性的老年性耳聋颞骨的神经滋养血管管壁增厚,管腔狭窄程度较缺失阴性组严重。并且ｍｔＤＮＡ缺失与内耳血管管腔狭窄程度的关系较ｍｔＤＮＡ４９７７缺失与年龄的关系更为密切     

133例心脏移植供心保护回顾分析

目的总结133例心脏移植的供心获取及其保护经验并做回顾分析。方法武汉协和医院心脏外科2008年9月至2014年5月共完成133例原位心脏移植,其中非停搏供心103例,停搏供心30例。非停搏供心经主动脉根部灌注4℃改良St.Thomas液,供心快速停搏,取下供心后再灌注8℃康斯特保护液(HTK液)并置于HTK液中低温浸泡保存。停搏供心经主动脉根部灌注8℃HTK液,取下供心后再灌注HTK液并置于HTK液中保存。在供心修剪时均经主动脉根部再次灌注HTK液。结果非停搏供心组,92例供心自动复跳,11例电除颤复跳;热缺血时间(3.25±2.25)min,冷缺血时间(253.22±136.73)min,术后主动脉内球囊反搏(IABP)使用率9.5%,术后三周左室射血分数(LVEF)值(65.52±6.72)%,术后一年生存率92.55%。停搏供心组,23例供心自动复跳,7例电除颤复跳。热缺血时间(5.78±2.82)min,冷缺血时间(179.12±52.43)min,术后IABP使用率10.1%,术后三周LVEF值(65.78±7.22)%,术后一年生存率91.07%。结论本中心对两类供心采用不同获取及保护方法均确切有效,扩大了边缘供心的使用范围,提高了手术疗效。     

Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗易于出现mtDNA缺失突变-ROS对组织损伤的特异性研究

目的　探讨ROS对各种组织mtDNA的损伤情况 ,耳蜗mtDNA是否为ROS损伤的标靶。方法　应用套式PCR及分子克隆测序技术对 10只Sod1基因敲除小鼠及 5只同系野生型小鼠耳蜗、脑、肝脏、肾脏、脾脏、心脏及皮肤组织进行研究。结果　 1 各组织mtDNA可检测到 3种缺失 ,常见的缺失为mtDNA386 7bp和mtDNA372 6bp缺失 ,mtDNA4 2 36bp缺失不常见。 2 mtDNA缺失在不同组织的含量有明显的不同 ,肝脏和肾脏组织含量最高 ,耳蜗、心脏和大脑组织其次 ,脾脏及皮肤组织含量最低。与野生型小鼠比较 ,Sod1基因敲除小鼠mtDNA在不同组织的缺失量是野生型小鼠的 3- 2 0倍 ,其中耳蜗组织mtDNA缺失量约是WT小鼠的 15倍。结论　缺乏Sod1的保护 ,ROS可以攻击各种组织mtDNA ,但具有明显的组织特异性 ,耳蜗mtDNA是其损害的敏感标靶。     

人外周血细胞线粒体DNA中存在特大片段缺失突变

了解线粒体ＤＮＡ大片段缺失突变及其意义。方法采用６种方法提取人外周血细胞ＤＮＡ,,其中１种方法先分离线粒体,再抽提线粒体ＤＮＡ。以得到的人外周血细胞ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增,其产生经琼脂糖凝胶回收后与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接、转化、测序。结果６种方法抽提ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增后,产物电泳行为相同,发现人血细胞线粒体ＤＮＡ存在１３１６２ｂｐ特大片段缺失突变。结论此缺失首首发现的,经测序证明为人线粒体ＤＮ     

曲美他嗪联合远端缺血预处理对行PCI治疗的老年缺血性心脏病患者心肌损伤及预后的影响

目的 探讨曲美他嗪联合远端缺血预处理对行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的老年缺血性心脏病患者心肌损伤及预后的影响。 方法 选取2016年1月—2016年9月于温州市中医院及温州医科大学附属第二医院行PCI的老年缺血性心脏病患者96例,随机对照表法分为观察组和对照组,各48例。2组患者均行抗血小板等常规药物治疗,对照组在此基础上加用曲美他嗪进行治疗,观察组在此基础上,联合应用曲美他嗪和远端缺血预处理。观察2组患者治疗前及治疗24 h后心肌损伤指标肌钙蛋白I (cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)变化及随访6个月不良心血管事件的发生情况。 结果 与治疗前相比,2组患者治疗24 h后心肌损伤指标cTnI、CK-MB均明显升高(P<0.05),但对照组cTnI、CK-MB升高更显著(P<0.05);随访6个月,观察组再发心绞痛者2例,再发心绞痛发生率为4.17%,心肌梗死0例,死亡0例,对照组再发心绞痛者10例,再发心绞痛发生率为20.83%,心肌梗死者5例,心肌梗死发生率为10.42%,死亡0例。观察组再发心绞痛发生率、心肌梗死发生率均明显低于对照组(P<0.05)。 结论 曲美他嗪联合远端缺血预处理应用于行PCI治疗的老年缺血性心脏病患者中,可明显降低cTnI、CK-MB水平,减少心肌损伤及不良心血管事件的发生。      

心脏回缩的临床观察

本文选择扩张型心肌病、风心病、冠心病、肺心病、先心病和渗出性心包炎病人共100例,观察治疗后扩大的心脏回缩情况,比较各种心脏病心脏回缩韵范围和差异,探讨心脏外形与心腔变化的关系。作者发现,扩张型心肌病治疗后94.6％的病人心脏明显缩小,心胸比值平均缩小6.4％,与其它心脏病相比,具有显著差异(P<0.05)。此点可作为鉴别诊断的参考。扩张型心肌病心胸比值缩小与超声心动图左室、右室内径缩小呈正相关,尤与左室内径缩小相关性最好(r=0.414)。渗出性心包炎虽有心胸比值缩小显著、但与其心腔内径变化不相关。     

广西壮族人群线粒体DNA单个碱基突变的分析

目的：探讨广西壮族人群的线粒体DNA（mtDNA）单个碱基的突变，了解突变的频率，为进一步研究壮族人群的遗传基础和相关的线粒体遗传病提供基础资料，方法：从83例广西壮族人血液标本中提取DNA，通过PCR扩增，分离和回收，用377全自动序列分析仪进行序列测定，分析了mtDNA第一高变区单个碱基的突变。结果：来自南宁第四个地区的76个样本共有66个单倍型，71个多态位点，共发生了298次转换，39次，颠换和1个缺失，88％的碱基替换为转换，12％为颠换，南宁、百色、柳州和河池地区的转换，颠换和缺失的频率分别为6．31％，6．40％，6．79％和5．90％，对上述频率进行多样本率比较的卡方检验，均无显著性差异（P＞0．05）。结论：壮族人九mtDNA的单个碱基突变比较丰富，各位点发生突变的频率不同。     

电离辐射致线粒体DNA 4977bp缺失与肿瘤细胞放射敏感性关系的初步研究

目的探讨肿瘤细胞经X线照射后线粒体DNA 4 977bp缺失率与存活分数的潜在关系。方法选用人宫颈癌细胞系(Hela细胞)、人肝癌细胞系(HepG2细胞)、人食管癌细胞系(EC-9706细胞)和人前列腺癌细胞系(PC-3细胞)4种肿瘤细胞系,经0Gy到8Gy X线照射后,采用克隆形成法测得存活分数,巢式PCR法检测线粒体DNA 4 977bp缺失率。结果肿瘤细胞放射敏感性由高到低依次是Hela细胞、HepG2细胞、EC-9706细胞和PC-3细胞。Hela细胞经1Gy X线照射后,HepG2细胞、EC-9706细胞和PC-3细胞经2Gy X线照射后均检测到线粒体DNA 4 977bp缺失。1Gy X线照射后,4种细胞线粒体DNA 4977bp缺失率比较,差异无统计学意义(P>0.05);2Gy X线照射后,Hela细胞线粒体DNA 4 977bp缺失率高于其余3种细胞(P<0.01);4Gy和8Gy X线照射后,Hela细胞线粒体DNA 4 977bp缺失率高于其余3种细胞(P<0.05),HepG2细胞和EC-9706细胞线粒体DNA 4 977bp缺失率高于PC-3细胞(P<0.01)。Hela细胞、HepG2细胞和EC-9706细胞的存活分数和缺失率之间呈负相关(r=―0.951,P<0.05;r=―0.976,P<0.01;r=―0.986,P<0.01)。结论线粒体DNA 4 977bp缺失可能是一个反映肿瘤细胞放射敏感性的生物标记。     

慢性肾功能衰竭心脏损害的临床分析

目的:探讨慢性肾功能衰竭(慢性肾衰)的心脏损害情况.方法:对120例慢性肾功能衰竭患者进行回顾性分析,并以同期住院肾功能正常的肾脏病为对照组.结果:慢性肾衰与对照组比较,左心房内径(LAD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)增大(P<0.01),室间隔厚度(IVS)、左室后壁厚度(LVPW)增加(P<0.01),左室舒张末期容量(EDV)及收缩末期容量(ESV)增加(P<0.01),射血分数(EF)降低(P<0.05).41.6%有左室壁运动降低,19.1%有心包积液,31.5%出现心力衰竭.肾功能损害程度、高血压及贫血与心脏损害有密切关系.结论:慢性肾衰存在不同程度的心脏损害,特别是心脏结构和功能异常,在尚未进入终末期肾衰前即已发生,心脏超声检查是发现心脏结构和功能损害及心包积液的敏感方法,应作为慢性肾衰的常规检查.     

白细胞介素-18高敏C反应蛋白与缺血性心脏病心衰关系的研究

目的观察细胞因子白细胞介素18（IL-18）、高敏C反应蛋白（hsCRP）与缺血性心脏病心衰的相关性,探讨IL-18、hsCRP与缺血性心脏病冠状动脉病变程度、心功能状况之间的临床意义。方法本研究选择我院缺血性心脏病心力衰竭患者50例,观察其IL-18和hsCRP的变化。结果缺血性心脏病组IL-18和hsCRP较对照组明显升高,随着心功能状态的恶化,IL-18和hsCRP逐渐升高,有显著性差异。不同冠脉病变支数的IL-18和hsCRP的比较,随着冠脉病变加重,IL-18和hsCRP明显升高,对比有统计学差异。结论心衰患者的IL-18和hsCRP值明显升高,提示心衰轻重与炎性反应轻重相关。对于缺血性心脏病患者心力衰竭越重,IL-18和hsCRP水平越高;冠状动脉病变程度越重,血清IL-18和hsCRP越高。本研究提示血清IL-18和hsCRP测定可以作为临床上判断冠状动脉病变范围程度的一个参考指标,对评估冠心病患者的预后和,临床疗效有价值。