大鼠肝细胞癌变过程中survivin与livin的动态表达及相关性研究

目的探讨大鼠肝细胞癌变过程中survivin与livin的动态表达及其二者的相互关系。方法随机将100只SD大鼠分为模型组与对照组各50只,模型组大鼠给予0.01%DEN自由饮用18周诱导大鼠肝癌模型,对照组大鼠常规自由饮水,于4、8、12、16、18周分别处死模型组10只,对照组10只。采用免疫组化、RT-PCR、Western bolt法检测survivin和livin的表达。结果免疫组化结果显示:模型组大鼠survivin、livin表达总阳性率分别为82%(41/50)、86%(43/50),survivin与livin都表达于肝癌组织及癌旁肝组织中,且二者的表达重叠,Spearman相关分析表明,二者的表达有相关性(r=0.9027,P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,肝癌组织中均有survivin mRNA和livin mRNA表达,随着肝癌程度的加重而增加,与对照组肝组织比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,survivin、livin的表达随着肝癌程度的加重而增加,对照组肝组织比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论survivin、livin在肝癌组织中高表达,且二者的表达密切相关,为肝细胞癌的临床治疗以及预后提供理论依据。     

大鼠肝细胞癌模型的建立及MR成像研究

目的 探讨诱发性大鼠肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC)模型的MRI特点，为肝癌的MR成像研究提供一种理想的动物模型。方法 Wistar大鼠60只，随机分为实验组（40只）和对照组（20只），实验组以低剂量二乙基亚硝胺（DEN）间断灌喂法诱导HCC。于诱癌第16、18、20，21，22，23，25周分别作MR扫描，观察肝癌的MRI特征，并与病理对照分析。结果 36例（90%）诱癌成功，共发现51个大于4mm的HCC，平均直径8.6mm，T2WI均呈高信号，T1WI呈高（10/51），等（9/51），低（32/51）三种信号，高信号组病理上均为Ⅰ-Ⅱ级，等信号组以Ⅱ-Ⅲ级多见（6/9），低信号组中29个属Ⅲ-Ⅳ级（29/32）。结论 低剂量DEN间断灌喂法诱导的大鼠肝癌模型能较好地模仿人肝癌的MRI表现，是动态研究肝癌MR成像的一种理想手段。MR检查电动机以诱癌第18-25周为宜。     

二阶段化学诱发小鼠肝癌模型C-MYC基因动态变化的研究

目的探讨癌基因C-MYC在化学诱导小鼠肝癌过程中的动态变化。方法取C57BL/6J雄性健康小鼠60只(实验组),二甲基亚硝胺(DEN)/四氯化碳(CCl4)/乙醇联合诱导20周;取60只同种小鼠为对照组。每2周随机抽取小鼠处死,取肝组织进行病理学观察,并采用实时荧光定量PCR检测诱癌组和相应时期对照组中C-MYC基因表达变化情况。结果 DEN/CCl4/乙醇诱导20周后,成功诱发小鼠肝癌。实时荧光定量PCR结果显示,C-MYC mRNA在第4周和第6周实验组和对照组差异无统计学意义(P>0.05),从第8周开始C-MYC mRNA的表达量逐渐升高,以诱癌第18～20周其表达升高尤为显著,实验组明显高于对照组(P<0.05)。结论在肝癌的诱癌过程中,C-MYC基因表达量随着诱癌的时间延长而逐渐增加,在肝癌阶段异常高表达,C-MYC基因可能促进肝癌的发生、发展。     

Survivin与p21waf-1在大鼠肝细胞癌变过程中的动态表达及其相关性的研究

目的:动态观察黄曲霉毒素B1(AFB1)在诱发大鼠肝细胞癌(HCC)过程中survivin 及p21waf-1表达的变化及它们在HCC发生发展中的关系.方法:用免疫组化及RT-PCR检测24只用AFB1诱发出的大鼠肝癌及癌旁肝组织、6只未诱发出肝癌的大鼠及11只对照大鼠不同时期肝活检组织中的survivin与p21waf-1基因和蛋白表达.结果:①HCC组织中survivin阳性率41.67%、癌旁肝组织54.17%;未发生肝癌及对照组大鼠活检肝组织,均未检出survivin蛋白(P<0.01);②HCC及癌旁肝组织中survivin mRNA的表达水平显著上调(P<0.01);③HCC及癌旁肝组织p21waf-1蛋白阳性率明显低于58周未出癌及对照组大鼠肝组织(P<0.01);④出癌大鼠p21waf-1 mRNA表达水平在HCC形成过程逐渐下调(P<0.01);⑤在HCC形成中,survivin与p21waf-1表达呈负相关.结论:在HCC形成的早期p21waf-1mRNA表达的下调逐渐失去抑制细胞增殖、促进细胞分化功能,使细胞增殖,而survivin mRNA表达上调,抑制细胞凋亡,两者在HCC形成过程中可能发挥协同作用.     

间断给药DEN诱导大鼠肝癌模型建立及病理研究

目的:建立间断给药二乙基亚硝胺(Diethylmitrosamine,DEN)诱导SD大鼠肝癌模型,探讨与人类肝细胞癌相似的动物肝癌模型病理形态变化.方法:取体重为170～210g雄性SD大鼠63只,随机分为实验组(48只)和对照组(15只),实验组采用0.01%DEN溶液间断喂养SD大鼠诱发肝癌,对照组自由喂养,常规病理HE染色并动态观察肝癌发生的不同时相.结果:设立间断DEN给药诱导SD大鼠肝癌,病理证实大鼠肝癌为肝细胞癌.诱癌率88.9%(32/36),其末期成功率高,在整个诱癌过程中经历了肝细胞损伤再生→增生-硬化→癌变3个阶段.结论:该造模方法容易、诱癌成功率高、大鼠存活率高.同时,该肝癌模型可以作为研究人类肝癌发生、发展变化病理形态的一种理想动物模型.     

肝癌及其癌旁组织中细胞凋亡抑制蛋白survivin的表达

目的：分析细胞凋亡抑制蛋白survivin在原发性肝癌（HCC）及其癌旁组织中的表达,探讨其在肿瘤血管形成和抵抗肿瘤血管内皮细胞凋亡中的作用。方法：采集HCC癌组织、癌旁组织和正常肝组织标本,通过免疫组织化学方法分析survivin蛋白表达阳性率与HCC病理参数的关系,采用流式细胞术分析survivin蛋白在不同组织中的表达水平,用荧光定量PCR方法分析不同组织中survivin基因的表达水平。结果：survivin蛋白在肝癌组织中表达水平与门静脉癌栓的形成有关联（P<0.05）,与肿瘤大小、包膜、甲胎蛋白（AFP）水平及HCC病理分期均无关联（P＞0.05）;流式细胞术结果,肝癌组织中survivin蛋白表达水平高于癌旁组织和正常肝组织（P<0.05）,癌旁组织中survivin蛋白表达水平高于正常肝组织,但差异无统计学意义（P＞0.05）;荧光定量PCR检测,survivin基因只在肝癌组织中表达,在癌旁组织和正常肝组织中无表达,其表达水平组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：细胞凋亡抑制蛋白survivin在肝癌组织中表达水平较高,但在癌旁组织中检测不到其基因的表达,survivin蛋白可能是通过旁分泌作用从肝癌病变处进入癌旁组织细胞中发挥抑制细胞凋亡的功能。     

RUNX3在人类原发性肝细胞癌中的表达

目的探讨RUNX3基因在人类肝细胞性肝癌中的表达差异。方法采用免疫组化法和蛋白免疫印迹（WesternBlot）及逆转录-多聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对临床肝细胞性肝癌50例石蜡标本和43例新鲜标本及其癌旁组织中RUNX3基因的表达进行检测。结果免疫组化结果表明RUNX3在肝细胞性肝癌组织中的表达率显著低于癌旁组织,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;WesternBlot结果显示RUNX3蛋白在肝癌组织标本中的光密度值明显低于在癌旁组织中的光密度值,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;RT-PCR结果显示RUNX3mRNA在肝癌组织表达率低于癌旁组织表达率,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。RUNX3蛋白及mRNA的表达与肿瘤分化程度有关（P〈0.05）,而与患者性别、年龄、HBsAg、AFP均无明显关系（P〉0.05）。结论 RUNX3的表达下调与HCC的发生密切相关,可能作为抑癌基因在肝癌的发生发展中起作用。     

间隙连接基因Cx32在肝细胞癌中的表达意义

目的：探讨肝细胞癌（HCC）、癌旁组织及正常肝组织中细胞间隙连接Cx32mRNA与Cx32蛋白的表达及其在HCC发生中的意义和机制。方法：应用Western blot和RT-PCR分别检测Cx32蛋白和Cx32mRNA在26例HCC组织、22例癌旁组织和9例正常肝组织中的表达。结果：Cx32蛋白在HCC中的表达明显低于正常肝组织和癌旁肝组织（P〈0.01）;Cx32mRNA在HCC、癌旁肝组织和正常肝组织均有一定水平,但三者之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：Cx32蛋白在肝癌中的表达下调可能是肝癌发生的重要环节,Cx32蛋白的减少与该基因在翻译或蛋白质的加工修饰过程中调控异常有关。     

肝复健冲剂抑制二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌形成的机制

目的：探讨肝复健冲剂抑制大鼠肝癌发生发展的可能作用机制。方法：应用肝复健冲剂干预二乙基亚硝胺（DEN）诱导大鼠肝癌过程，动态观察肝复健冲剂对肝癌诱发过程中肝细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK4）、细胞周期素D1(cyclin D1)、c-myc、IGF-ⅡmRNA表达的影响。结果：肝复健冲剂可延缓DEN诱导大鼠肝癌的发生、发展，降低实验大鼠肝癌发生率，延长其生存期；中药预防组大鼠肝细胞CDK4、cyclin D1阳性表达，c-myc、IGF-ⅡmRNA阳性信号均明显低于单纯诱癌组。结论：肝复健冲剂可能通过抑制c-myc、IGF-Ⅱ的表达，影响细胞周期进程，阻断肝细胞失控增殖及癌变，减少和延缓肝癌变的发生。     

981208冲剂抑制二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝癌细胞增殖活性

目的：探讨中药981208冲剂对二乙基亚硝胺（DEN）诱癌过程中肝细胞增殖活性的影响。方法：建立DEN诱肝癌大鼠模型，采用免疫组化染色方法及计算机图像分析技术检测了981208冲剂对诱癌过程中肝细胞阳性表达细胞增殖核抗原（PCNA）、H－ras蛋白及诱癌后期溴化脱氧尿嘧啶（Brd-U)细胞标记指数的影响。结果：DEN诱肝癌过程中，PCNA、H-ras阳性表达呈逐渐增加趋势，两表达显正相关。981208冲剂可明显抑制诱癌过程中两蛋白的阳性表达，显降低诱癌后期Brd-U细胞标记指数。结论：中药981208冲剂可抑制大鼠肝癌形成过程中肝细胞增殖活性，从而延缓肝细胞癌变的过程。     

黄曲霉毒素B1诱导性大鼠肝癌超微结构、c—myc和HER-2表达变化

目的探讨黄曲霉毒素B1（AFB1）诱导性大鼠肝癌模型超微病理特征,以及c—myc、HER-2mRNA表达变化规律。方法用AFB-（400μg／kg）间断腹腔注射雄性Wistar大鼠制作肝癌模型,电镜观察大鼠肝组织超微结构,用RT—PCR技术检测不同病变肝组织中C—myc、HER-2mRNA的表达。结果本组大鼠肝癌模型中,肝细胞呈变性损伤、异型性到癌变,典型肝细胞吞噬细胞现象;线粒体由增生肿胀到枯竭、空泡变;糖原颗粒逐渐减少等特征性变化。C—mycmRNA在损伤病变、早期癌变和癌变组织中表达水平均显著高于对照组大鼠肝组织（F=4．81,P=0．035;F=12．43,P=0．000;F=12．57,P=0．000）。HER-2mRNA在早期癌变组织、癌变组织中表达水平均显著高于对照组大鼠肝组织和损伤病变肝组织（F=10．89,P=0．001;后者F=11．48,P=0．000）;结论AFB1诱导性大鼠肝细胞出现变性、异型性及癌细胞渐变的超微结构特征,C—myc、HER-2异常表达参与AFB1诱导性大鼠早期肝癌的发生。     

PTEN survivin基因在肝癌组织中的蛋白表达及相关研究

目的：应用免疫组化的方法研究肝细胞肝癌组织中抑癌基因PTEN,癌基因survivin蛋白的表达情况以及与临床病理学特征的关系,探讨其间相互关系,为相关的基因治疗的研究提供依据。方法：43例HCC标本及癌旁肝组织标本,临床资料和病理资料完整,经石蜡包埋保存。基因的染色方法均为免疫组织化学s—P法,进行光镜观察和统计学分析。结果：43例HCC组织中PTEN,SUF-vivin蛋白表达阳性率分别为48．8％、69．77％,癌旁组织为100％,11．8％。PTEN的表达分别与血中AFP浓度和组织病理分化程度（Edmondson分级）有关;survivin的表达与血中AFP及HCCEdmondson病理分化程度相关,survivin与肿瘤的侵袭危险度相关。spearman相关分析发现HCC组织中PTEN与survivin的表达具有相关（r：一0．471,P=0．031;）。结论：PTEN和survivin的蛋白表达呈负相关,二者均参与HCC的发病过程,共同调控肝脏组织恶变的病理过程。     

内毒素急性肺损伤大鼠肺组织survivin表达研究

目的探讨内毒素急性肺损伤大鼠肺组织中survivin表达情况及其与肺损伤发生发展关系。方法建立内毒素急性肺损伤大鼠模型,应用苏木精．伊红染色、免疫组化及RT-PCR方法,观察内毒素急性肺损伤大鼠肺组织中是否存在survivin阳性表达,且在注射内毒素后不同时间：量上表达水平的变化,分析该变化与肺损伤程度的关系。结果与对照组比较,内毒素急性肺损伤大鼠肺组织中存在survivin阳性表达（P〈0．05）。注射内毒素2h时,survivn在肺组织中出现表达,6h表达水平达顶峰,之后逐渐下降趋势,各时间组之间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论内毒素急性肺损伤时,survivin在肺组织中存在阳性表达,且表达水平与肺损伤程度密切相关,提示survivin可能参与了内毒素急性肺损伤早期的病理生理过程。     

UBE2D2基因在肝癌细胞中的作用及不同中医治法对其调控作用的影响

目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌UBE2D2表达的调控差异,以及UBE2D2在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,Affy-metrix rat 230A GeneChip arrays检测肝癌组织UBE2D2表达的差异;设计2个人UBE2D2基因siRNA靶点,将重组质粒经脂质体转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果:芯片结果显示,UBE2D2基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的下调作用,其中健脾理气法下调作用较明显;采用MTT法筛选到1个UBE2D2基因RNA干扰有效靶序列,转染6 d后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比,P<0.01);实时荧光定量PCR检测表明,转染6 d后该基因的表达明显降低。结论:UBE2D2基因的高表达与肝癌细胞恶性增殖有关,而中药健脾理气治法对其具有下调作用。     

非小细胞肺癌中survivin和HIF-1α的表达及其相关性研究

目的:探讨survivin和HIF-1α在非小细胞肺癌(non-small cell Lung cancer,NSCLC)组织中的相关性表达,以及两者与NSCLC组织分化程度、淋巴结转移和临床分期的关系。方法:采用免疫组织化学S-P法检测120例NSCLC患者手术标本和40例良性肺疾病组织标本中survivin和HIF-1α的表达,分析两者之间的相关性。结果:120例NSCLC患者标本中survivin的阳性表达率为81.6%,良性肺疾病组织无表达;HIF-1α在NSCLC和阳性表达率分别为58.33%,而在良性肺疾病组织中为10.00%;survivin和HIF-1α在NSCLC中的表达均与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期有一定关系(P<0.05~P<0.001);survivin和HIF-1α在NSCLC中的表达呈正相关关系(P=0.005)。结论:survivin和HIF-1α在NSCLC组织中均有高表达,且与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期密切相关。NSCLC组织中survivin与HIF-1α的表达呈正相关。     

中药三七抑制二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌血管生成的研究

目的：研究中药三七抑制二乙基亚硝胺（ DEN ）诱发大鼠肝癌血管生成的作用。方法82只Wistar雄性大鼠,根据随机数字表法分为中药组、西药组、联合组、模型组,每组18只;空白组10只,以100 ppm DEN饮水法诱发大鼠肝癌模型。中药组用三七水煎剂灌胃,西药组静脉注射贝伐单抗,联合组给予三七灌胃、贝伐单抗静脉注射,模型组和空白组均给予等量的生理盐水灌胃。分别于12周末和18周末分批处死大鼠,分析中药组、西药组、联合组、模型组和空白组大鼠肝标本,检测大鼠肝细胞癌血管内皮生长因子（ VEGF ）、血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）、血管生成素-2受体（Tie-2）、缺氧诱导因子-1α（Hif-1α）表达水平及肝癌组织微血管密度（ MVD）。结果12周末及18周末时Ang-1 mRNA在中药组、西药组、联合组较模型组肝癌组织中表达均上调,而Ang-2、Tie-2、HIF-1α及VEGF mRNA表达均下调（ P＜0．05）。联合组、西药组、中药组的MVD也均较模型组明显减少（ P＜0．05）。结论三七在HCC肿瘤血管生成和进展中可能通过抑制Ang-2、Tie-2 HIF-1α及VEGF而发挥预防作用。     

腺病毒介导人白介素-10转基因对大鼠同种异体移植血管IL-2、TNF-α的影响

目的:观察腺病毒介导人白介素-10(hIL-10)转基因对大鼠同种异体移植血管IL-2、TNF-α的影响及其可能的作用机制。方法:以Wistar大鼠为供体,SD为受体,采用颈动脉显微外科原位吻合技术,将经直接浸泡法转染腺病毒介导hIL-10的离体供血管植入受体血管。随机分为3组:I组(空白对照组,n=9),II组(空载体组,n=10),III组(基因转染组,n=10)。移植后5d,观察移植物病理组织学变化及免疫排斥级别;RT-PCR、ELISA、免疫组化染色检测移植血管hIL-10基因产物;免疫组化染色检测IL-2、TNF-α。结果:基因转染组移植血管有效地表达特异性hIL-10基因产物。与对照组比较,急性排斥级别降低(P<0.01);IL-2、TNF-α的表达量明显下降(P<0.01)。结论:腺病毒介导人白介素-10转基因能有效地下调IL-2、TNF-α表达,诱导移植血管局部免疫抑制状态,抑制同种异体移植血管的急性排斥反应。     

脑缺血肺损伤大鼠肺组织TNF-α的表达变化

目的 探讨脑缺血后损伤肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达变化。方法 成年SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血肺损伤组(n=13),其中每组5只用于免疫组化检测TNF-α在肺的定位分布,余8只分别用于RT-PCR和Western blot检测TNF-α mRNA和蛋白水平变化。术后24 h取肺组织行RT-PCR、术后48 h取肺组织行Western blot检测肺组织TNF-α mRNA和蛋白表达水平;术后3 d取肺组织行免疫组织化学染色检测肺组织内TNF-α的定位分布。结果 肺组织TNF-α mRNA和蛋白表达在脑缺血肺组织明显增加,与假手术组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。TNF-α主要分布在气道上皮细胞和巨噬样细胞。结论 脑缺血后损伤肺组织TNF-α表达上调,提示其可能与脑缺血肺损伤炎症反应有关。     

survivin在食管癌的表达及其与Bcl-2相关性研究

目的:探讨食管癌中survivin和Bcl-2的表达及它们的相关性。方法:收集经病理证实的40例食管癌、12例癌旁食管组织及9例食管炎标本,免疫组织化学S-P法检测survivin和Bcl-2蛋白的表达。结果:82.5%食管癌组织survivin蛋白表达阳性,survivin蛋白在食管癌中的表达与在食管炎及癌旁食管组织中的表达差异有统计学意义(P<0.005),在不典型增生的食管炎中可检测到survivin蛋白的表达;survivin蛋白的表达与食管癌分化程度和年龄无明显关系(P>0.05);食管癌中survivin蛋白的表达与Bcl-2蛋白的表达有一定关系(P=0.030)。结论:食管癌组织中survivin表达上调,与肿瘤分化及病理分型无关,survivin蛋白的表达与Bcl-2蛋白的表达有一定关系;不典型增生食管炎中可检测到survivin蛋白的表达,提示survivin蛋白的表达可能参与食管癌的发病,并在癌前病变向食管癌的转化中发挥作用。