HPLC-DAD法测定鄂西北地区黄姜中薯蓣皂苷的含量

黄姜为我国特有的薯蓣品种薯蓣科薯蓣属盾叶薯蓣(Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright)的根状茎.其性味甘、苦凉,具有清肺止咳、利湿通淋、通络止痛、解毒消肿的功能.黄姜的主要成分为甾体皂苷,根茎内薯蓣皂苷的成分对心肌缺血、胸痹、高脂血症等具有明显治疗作用[1].我国人工栽培黄姜面积几万公顷,其中湖北鄂西北地区2万公顷,是国内栽植黄姜较早和比较集中的地区.目前多采用重量法、薄层扫描法、HPLC-ELSD法考察该类药材或制剂中总皂苷或皂苷元的含量,本文采用HPLC-DAD法对黄姜药材中的薯蓣皂苷含量进行了测定,结果表明该方法准确可靠,重复性好,为更好的控制黄姜药材的内在质量提供了可靠的分析方法.     

薯蓣皂甙片治疗冠心病临床观察

薯蓣皂甙片是从药用植物穿山龙中提出取的8种水溶性甾体皂甙制成，应用于冠心病心绞痛取得良好的疗效。我院于1999年7月-2000年8月采用陕西东盛医药有限责任公司制药一厂生产的薯蓣皂甙片(穿龙冠心宁片)治病冠心病心绞痛75例，同时设立对照组与复方丹参片作对照，现报道如下：     

盾叶薯蓣组织与细胞培养研究进展

盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis CH.W.right)俗称黄姜,系薯蓣科薯蓣属多年生草质藤本,其野生资源根茎内薯蓣皂苷元(俗称皂素)含量在同属植物中较高,一般为1%～2%,据报道单株含量最高有16.5%[1]。解放后,因生态环境不断遭到破坏,加上人们对盾叶薯蓣掠夺性采挖,造成盾叶薯蓣野     

人工种子在盾叶薯蓣快速繁殖技术中的初步应用

目的：提高盾叶薯蓣试管苗的移栽成活率。方法：在组织培养的基础上,对盾叶薯蓣人工种子中人工种皮、人工胚乳制作、人工种子一次性成苗及移栽成活率等问题进行了初步研究。结果：人工种子快速繁殖的最适条件为：从盾叶薯蓣愈伤组织表面切取2～3mm小块茎,包埋在2．5％海藻酸钠中,滴入2％CaCl2中反应8～10min,人工胚乳MS／2＋IAA0．4mg／L直接播种在MS／2培养基上,一次性成苗率可达100％左右,移栽成活率高达85％。结论：以组织培养为基础的盾叶薯蓣人工种子快速繁殖技术具有一定的优越性。     

盾叶薯蓣水溶性成分的研究

目的研究盾叶薯蓣的水溶性化学成分，寻找活性物质。方法用系统溶剂提取，色谱法分离，光谱法鉴定结构，如：^1H—NMR、^13C—NMR135DEPT、HMQC、HMBC、TOCSY。结果从盾叶薯蓣的水溶液中分离到-个薯蓣皂苷、一个苯苷类化合物、一个生物碱类化合物。薯蓣皂苷经测定分析，鉴定为26-O-（β-D-葡萄糖）-（25R）-furost-5-en-3β，26-diol-22-OMe-3-O-{α-L-鼠李糖-（1→4）-[β-D-葡萄糖-（1→3）-β-D-葡萄糖-（1→2）]-β-D-葡萄糖}。结论经文献检索为一新化合物，命名为盾叶薯蓣皂苷E（zingierenin E），另两个化合物在盾叶薯蓣中为首次报道。     

昆明山海棠在中药复方制剂中的定性与定量分析

目的 对中药复方制剂因宁片中的君药昆明山海棠药材进行定性及定量分析。方法 采用薄层色谱（TLC）法对因宁片中昆明山海棠药材进行定性分析并对其分析方法进行优化；采用高效液相色谱（HPLC）法对因宁片中的君药昆明山海棠药材主要成分雷公藤甲素进行定量分析并确定其含量的限量标准。结果 TLC法定性研究表明：因宁片供试品和阳性对照品均在相应色谱位置显色，且分离度好、斑点清晰，阴性无干扰，对不同厂家薄层板、温度、湿度的影响因素考察表明：耐用性良好；HPLC定量分析雷公藤甲素浓度1~100 μg/mL内，以峰面积对雷公藤甲素浓度进行线性拟合，得回归方程A=22.219C-19.165，r=0.9999，线性关系良好；测得3批因宁片试验品雷公藤甲素含量分别为0.34 μg/片、0.34 μg/片、0.28 μg/片，范围0.28~0.34 μg/片，最终确定因宁片中每片含雷公藤甲素含量不得高于0.6 μg。结论 TLC法和HPLC法对中药复方制剂因宁片中昆明山海棠药材进行定性与定量分析研究，该技术稳定、方法简便、准确、系统耐用性良好、专属性强，可为其药材在中药复方制剂中的定性与定量研究提供参考与借鉴。     

盾叶薯蓣四倍体的鉴定和薯蓣皂苷元的定量分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质。方法 采用高效液相色谱法,对组织培养条件下诱导获得的盾叶薯蓣四倍体株系试管苗薯蓣皂苷元的量和部分株系一年生田间苗薯蓣皂苷元的量进行了分析,并对部分株系一年生田间苗农艺性状进行了鉴定。结果 经诱导获得的四倍体株系试管苗与对照相比薯蓣皂苷元的量有较大差异;而且四倍体株系试管苗与一年生苗薯蓣皂苷元的量有较强的相关性,大部分四倍体株系表现出典型的多倍体性状。结论 在组织培养的基础上,利用多倍体育种来改善盾叶薯蓣的品质是可行的。     

近红外漫反射光谱(NIRS)结合TQ软件建立盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元定量模型

 目的  利用近红外漫反射光谱(near infraed spectroscopy,NIRS)结合TQ软件快速测定盾叶薯蓣药材中薯蓣皂苷元含量。方法  采集盾叶薯蓣样品的近红外光谱图,采用高效液相色谱法(HPLC)测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的含量,利用TQ软件建立薯蓣皂苷元的定量分析模型,利用模型对未知样品进行预测。结果  建立的薯蓣皂苷元校正模型的相关系数(R2)、校正均方差(RMSEC),内部交叉验证均方差(RMSECV)分别为0.96459,0.0999,0.30041;经外部验证,模型的预测相关系数(R2)和预测均方差(RMSEP)分别为0.9634,0.128。结论  所建模型预测能力较好,可以用于盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量的快速检测。     

盾叶薯蓣四倍体及辐射株系薯蓣皂苷元含量分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质。方法 通过组织培养,分别用秋水仙素和Co60射线处理盾叶薯蓣愈伤组织和丛生芽,获得盾叶薯蓣四倍体和辐射株系,并分别对其试管苗和部分株系一年生田间苗根茎中的薯蓣皂苷元含量进行分析。结果 经诱导获得的大部分四倍体和辐射株系试管苗根茎中薯蓣皂苷元含量都超过了二倍体株系;四倍体株系试管苗与一年生苗根茎中薯蓣皂苷元含量有较强的相关性,而辐照株系试管苗与一年生苗根茎中薯蓣皂苷元含量相关性不明显。但整体看,根茎中薯蓣皂苷元含量高的试管苗在田间生长1年后,薯蓣皂苷元含量一般也较高。结论 在组织培养的基础上,利用多倍体和辐射诱变育种来改善盾叶薯蓣的品质是可行的。     

青梅感冒冲剂中的岗梅和甘草的薄层色谱鉴别

目的：研究青梅感冒冲剂中岗梅、甘草的薄层色谱鉴剐方法。方法：分别取甘草药材、岗梅药材、青梅感冒冲剂及阴性制剂的乙酸乙酯提取液，在硅胶板上前者以ψ(苯：乙酸乙酯：水)：5：2：0．1展开，后者以ψ(甲苯：乙酸乙酯：水)=5：2：0．1展开，在紫外灯(365 nm下)检视。结果：在两者供试品色谱中与各自对照药材色谱相应位置上，均有相同的特征斑点，阴性制剂色谱图中无此斑点。结论：该法专属性强，为该制剂增加质量控制指标提供了实验依据。     

盾叶薯蓣三倍体自然变异类型的发现及其主要经济性状评价

目的对盾叶薯蓣三倍体自然变异类型主要经济性状进行评价,为盾叶薯蓣三倍体新品系选育奠定基础。方法对云南各地区收集盾叶薯蓣进行倍性鉴定。对鉴定获得的三倍体株系的单株产量、增殖率、薯蓣皂苷元的量等经济性状进行评价。结果在收集的盾叶薯蓣资源中发现5个三倍体;盾叶薯蓣三倍体株系间性状均表现较大差异,单株产量1090.00～628.57g,增殖率(倍)72.43～29.43,干物质质量分数36.95%～24.06%,薯蓣皂苷元质量分数4.40%～1.50%,株系1和株系3产量超过1000g,株系2薯蓣皂苷元质量分数达到4.40%,株系3在单株产量、增殖率、薯蓣皂苷元的量等性状均表现优异,综合指标数值最高。结论通过盾叶薯蓣三倍体自然变异类型发现和株系性状评价,获得表现优良的三倍体株系,通过后代进一步评价有望选育出盾叶薯蓣三倍体新品系。     

聚氧乙烯-马来酸酐聚合物改性纤维素酶催化酸水解盾叶薯蓣薯蓣皂苷元的研究

目的提高纤维素酶在催化过程中的稳定性，并考察聚氧乙烯-马来酸酐聚合物改性纤维素酶在盾叶薯蓣薯蓣皂苷转化为薯蓣皂苷元过程中的可行性。方法采用聚氧乙烯-马来酸酐共聚物对纤维素酶进行化学改性，并以相对酶活考察改性酶的稳定性。以薯蓣皂苷元的提取率和熔点为指标，比较了纤维素酶和改性酶的辅助催化作用。对改性酶催化所得薯蓣皂苷元产品进行元素分析和HPLC分析。结果改性酶在高温下的活力衰减速率减小，在50℃pH4．8的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中放置100min，保持了初始酶活的69．4％。改性酶辅助催化盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的转化时，较未改性酶的效果好，所得薯蓣皂苷元产品提取率为97．6％以上，为白色或乳白色，熔点为200-203℃，元素分析结果为H：77．96％，O：10．11％，HPLC法测定的质量分数高达96．03％。结论聚氧乙烯-马来酸酐聚合物改性纤维素酶在较高温度下能够保持较高的催化活性，可以更有效地促进盾叶薯蓣薯蓣皂苷向薯蓣皂苷元的转化．     

冠心宁片通过PI3K/AKT信号通路抑制慢性心力衰竭小鼠心肌细胞凋亡

目的观察冠心宁片对慢性心力衰竭(CHF)小鼠的治疗作用,并从心肌细胞凋亡和相关细胞信号通路探讨其作用途径,为冠心宁片的临床应用提供实验依据。方法利用主动脉弓缩窄术建立小鼠CHF模型,筛选造模成功的小鼠分为模型对照组、冠心宁片低剂量组(600 mg/kg)、冠心宁片高剂量组(1200 mg/kg)和卡托普利阳性对照组(12.5 mg/kg),并设假手术组作为对照。实验期间观察动物存活率,给药3、6、9周时进行超声成像,检测小鼠射血分数(EF),给药结束后,处死小鼠取心脏组织,TUNEL法观察心肌组织细胞凋亡情况,RT-PCR法检测BAX和BCL2基因mRNA的表达,全自动蛋白分析仪检测PI3K、p-AKT和BAX/BCL2的蛋白表达水平。结果模型对照组小鼠生存率为50%,冠心宁片低剂量组存活率为60%,冠心宁片高剂量组存活率70%。与假手术组比较,模型对照组小鼠EF值在给药3、6、9周时均显著下降,给与冠心宁片后,具有不同程度的提高;病理观察可见,模型对照组小鼠心肌细胞凋亡较多,冠心宁片能有效降低心肌细胞凋亡水平。模型对照组小鼠心肌组织中BAX基因mRNA相对表达量显著升高,BCL2下降,与蛋白表达相一致,PI3K和p-AKT水平也显著上升;与模型对照组相比,冠心宁高剂量组心肌组织中PI3K、p-AKT的蛋白表达和BAX的mRNA表达水平下降。结论冠心宁片能提高CHF小鼠的存活率,增强CHF小鼠的心脏功能,其作用机制可能是通过抑制PI3K/AKT/BAX信号通路的活化来减少心肌细胞的凋亡,从而改善CHF小鼠的心力衰竭症状。     

不同外植体和激素组合对盾叶薯蓣组织培养的影响

目的探讨盾叶薯蓣组织培养的最佳外植体和激素组合。方法采用盾叶薯蓣茎段、叶为外植体 ,接种于不同激素组合的培养基上 ,观察比较培养情况。结果最佳外植体为腋芽萌发而来的无菌枝条切段 ,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS +BA 1 .5mg·L-1+NAA 0 .5mg·L-1,不定芽分化的培养基为LS +BA1 .5mg·L-1,诱导生根的培养基为 1 2MS+NAA 1 .0mg·L-1。结论外植体的选择是盾叶薯蓣组织培养成功与否的关键所在     

盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量测定方法的研究

目的 建立盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的含量测定方法,为制订药材标准提供参考.方法 采用Dikma4.6×250mmC18 柱,甲醇-水(95∶5)为流动相,流速为1.0ml·min-1,PDA-100检测器,检测波长203nm,以外标法测定.结果 薯蓣皂苷元分离度好,在浓度为0.101～2.011mg·ml-1 范围内呈良好的线性关系,样品溶液在12小时内稳定,平均回收率为97.9%,RSD=2.0%.结论 本法操作方便、准确,重复性好,可作为其质量控制指标.     

薄层色谱法鉴别冠脉宁颗粒的研究

目的：建立冠脉宁颗粒的薄层鉴别方法。方法：采用薄层色谱法（TLC）对本制剂中的四味药材丹参、当归、葛根、红花进行鉴别研究,对照实验均以四味药材各自的药材中相应有效成分及阴性对照品进行试验。结果：经过多次鉴别实验后,四种药材实验测得的斑点均清晰可见,具有良好的重现性,且阴性无干扰。结论：用薄层色谱法鉴别冠脉宁颗粒的实验具有操作简单、稳定、重现性及专属性都很强的特点,可作为此类中药制剂质量控制的定性依据,为今后标准的进一步修订提供了依据。     

分光光度法测定盾叶薯蓣总皂苷的含量

目的用分光光度法测定盾叶薯蓣总皂苷的含量，为其质量控制提供依据。方法用分光光度法测定，以高氯酸为显色剂，显色温度70℃，时间15min，在407nm处有最大吸收。结果薯蓣皂苷在5．22—41．76μg／ml范围内呈良好的线性关系。精密度与回收率的RSD分别为1．9％和1，4％。方法学考察各项指标均符合要求。结论此法操作简便、准确、稳定性、重现性好。     

不同倍性盾叶薯蓣的生理指标和薯蓣皂苷元量的比较研究

目的通过比较盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis人工四倍体植株和普通二倍体植株在抗性相关指标及薯蓣皂苷元量方面的差异,探索药用盾叶薯蓣倍性育种的应用前景。方法以秋水仙素诱导加倍的、经鉴定确认的3个不同株系四倍体盾叶薯蓣为材料,以二倍体原种为对照,采用分光光度法测定叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(PPO)活性以及可溶性糖的量;高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶(CAT)活性;采用HPLC法测定根状茎薯蓣皂苷元的量。结果四倍体植株SOD、PPO、CAT的活性以及可溶性糖的量明显高于二倍体;四倍体植株薯蓣皂苷元的量显著高于二倍体,增加幅度最大为二倍体原种的27%。结论人工四倍体植株薯蓣皂苷元量高,其生理指标也显示较强的抗性基础,可望直接利用或作为进一步培育高产、高薯蓣皂苷元量薯蓣新品种的良好育种材料。     

冠心宁片对麻醉犬血流动力学的影响

目的:观察冠心宁片对麻醉犬血流动力学的影响.方法:将本重(12±2)kg的健康Beagle犬,随机分为空白对照组、冠心宁片高、中、低剂量组、阳性对照(冠心宁注射液)组,采用开胸分离麻醉犬冠状动脉,用电磁流量计测量冠脉血流量,用多道生理记录仪测定左心室内压,观察麻醉犬血流动力学的变化.结果:冠心宁片降低心率、平均动脉压,但差异不显著(P＞0.05),明显增加冠脉流量、心肌血流量和左心室内压(P＜0.05),降低冠脉阻力和左室舒张末期压(P＜0.05).结论:冠心宁片可明显增加冠脉流量,降低冠脉阻力及左室舒张末期压,对心脏血流动力学有明显的改善作用.     

不同光强对弱光型盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元和生物量的影响

目的 在生长光强为1.5、10、30、55、100、270 μmol/(m²?s)下对弱光生态型盾叶薯蓣的薯蓣皂苷元和生物量分别进行测定,以探讨不同光强与盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元和生物量的关系,并找出弱光生态型盾叶薯蓣的最适生长光强。方法 采用TLC法和RP-HPLC法测定其根状茎中薯蓣皂苷元的量。结果 不同光强对盾叶薯蓣的薯蓣皂苷元的量有显著影响。在100、55 μmol/(m²?s)的光强下,根状茎中薯蓣皂苷元的量最高,分别占其干质量的0.45%和0.55%。光照强度对盾叶薯蓣的生长有显著的影响,在30、55、100 μmol/(m²?s)下长势良好,其中在100 μmol/(m²?s)下生长最好。光照强度影响叶片的形状,随着光照强度的增加,叶片长与宽的比率也随之增加。在270 μmol/(m²?s)的强光照射下,叶片长与宽的比率最大。光照强度能显著地影响植株的总叶面积,在100 μmol/(m²?s)光强下植株总的叶面积最大,总的生物量最高,根状茎的生物量与整个植株生物量的比值最大。结论 弱光型盾叶薯蓣是一种薯蓣皂苷元量较高的薯蓣变种,这将为该药源植物的选择育种以及栽培提供理论指导。