A novel missense mutation of the ubiquitin protein ligase E3A gene in a patient with Angelman syndrome

Background  Angelman syndrome (AS) is a neurogenetic disorder caused by an expression defect of the maternally inherited copy of ubiquitin protein ligase E3A (UBE3A) gene from chromosome 15. Although the most common genetic defects include maternal deletions of chromosome 15q11-13, paternal uniparental disomy and imprinting defect, mutations in the UBE3A gene have been identified in approximately 10% of AS patients.

Methods  A Chinese girl of 28 months presented clinical manifestation of AS. Genetic diagnosis and molecular genetic defects were studied by methylation-specific PCR (MS-PCR) and linkage analysis by short tandem repeat (STR). We further performed sequence analysis of all the coding exons and flanking sequences of the UBE3A gene. The novel mutation screening was also performed in 100 unrelated healthy individuals to exclude the possibility of identifying a polymorphism variation.

Results  The MS-PCR analysis of the patient showed biparental inheritance of chromosome 15 with a normal methylation pattern in the 15q11-q13 region. And STR analysis revealed that the patient also inherited biparental alleles for six microsatellites. A novel mutation, cDNA1199 C>A (p.P400H), in exon 9 of the maternal UBE3A gene, was identified in the patient. Meanwhile, the mutation was observed in the patient’s mother who had a normal phenotype.

Conclusions  It is necessary to perform the UBE3A gene mutation analysis in non-deletion/non-UPD/non-ID patients with AS. The clinical picture of the patient is concordant with that observed in previously reported AS patients with UBE3A mutation.

     

肝细胞癌患者外周血单个核细胞中MnSOD及HSP27的表达

目的 探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和热休克蛋白27(HSP27)与乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞癌(HCC)发生的关系.方法 采用免疫印迹(Western blot)技术分析了38例HBV相关性HCC、35例乙型肝炎肝硬化(LC)、36例慢性乙型肝炎(CHB)及30例健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中MnSOD和HSP27两种蛋白的表达水平.结果 HBV相关性HCC与LC、CHB及健康对照比较,MnSOD表达量明显降低(P＜0.01),PBMC中HSP27表达明显增高(P＜0.01),两者成负相关.结论 MnSOD及HSP27可能成为HBV相关性HCC早期诊断、癌变机制、治疗及预后监测的外周血特异性分子标志物.     

类泛素蛋白FAT10共价结合底物蛋白质的活性分析

 目的 探讨类泛素蛋白FAT10的C末端双甘氨酸基团及双泛素结构域结合修饰底物蛋白质的活性。方法 分别将野生型全长FAT10,C末端双甘氨酸的缺失突变体FAT10ΔGG,分别包含N端、C端泛素结构域的截断突变体FAT10 N和FAT10 C构建到真核表达载体中,转染HEK293T细胞,并使用26S蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞。利用Western blot方法检测野生型FAT10及其突变体结合底物蛋白质的活性。结果 与野生型FAT10的蛋白质底物结合能力相比,FAT10ΔGG、FAT10 N、FAT10 C与底物蛋白质结合能力均显著下降。蛋白酶体抑制剂MG132能够促进FAT10及其突变体的底物结合活性。结论 FAT10的C末端双甘氨酸基团及双泛素结构域都是FAT10与底物共价结合所需的活性基团,被FAT10标记后的底物蛋白质通过26S蛋白酶体途径降解。     

听神经瘤组织中轴突神经丝及髓鞘碱性蛋白表达的检测及其意义

目的：检测听神经细胞瘤组织中轴突神经丝及髓鞘碱性蛋白的表达情况,探讨听神经瘤组织中组织细胞的生长特点。方法：选取本院听神经瘤患者的手术组织15例（听神经瘤组）及正常神经5例（正常对照组）,应用免疫荧光标记及免疫印迹方法,检测神经组织中的轴突神经丝200蛋白及髓鞘碱性蛋白的表达情况。结果：听神经瘤组织中,轴索的标志性抗体--神经丝200的表达为阴性,并且启动髓鞘化的前哨信号及髓鞘致密化的重要组成蛋白--髓鞘碱性蛋白在听神经瘤组织中也未检测到。而在正常对照组,二者的表达均为阳性。结论：在听神经瘤组织中缺失致密的髓鞘及轴索,提示听神经瘤细胞可能是处于前髓鞘化期的施万细胞,并且该类细胞失去了完成髓鞘化进程和重新形成致密髓鞘的能力。     

HPLC-FLD法测定丹参素在家兔组织中的分布

目的:建立高效液相色谱.荧光检测(HPLC.FLD)分析方法,测定丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑各组织中的含量.方法:家兔经丹参药材水提液灌胃后,其重要脏器的匀浆液以100 mL/L高氯酸沉淀,上清液乙酸乙酯萃取.以4-羟基苯甲酸为内标,测定丹参中丹参素在组织中的含量.结果:HPLC-FLD法的检测限为0.01 μg/mL,线性范围为0.05～200.00μG/mL;丹参中丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑组织中的含量顺序为c肾c肝c心肺c脑c脾.结论:建立的HPLC-FLD检测法具有特异性强,灵敏度高和定量准确等特点,可为其他样品中丹参素的测定提供参考.     

一种新的凋亡抑制蛋白Livin在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨一种新的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP) Livin两种异构体Livinα和Livinβ在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC组织类型、放化治疗的关系.方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测NSCLC组织中Livinα和LivinβmRNA的表达,并用western blot分析Livin蛋白的表达.结果 48例NSCLC组织中Livin表达阳性率为22.9%,其表达与NSCLC组织学类型相关,腺癌中Livin表达阳性率达45.5%,明显高于鳞癌和大细胞癌(P<0.01),而癌旁组织和良性疾病肺组织未检出阳性结果;Livin表达还与肿瘤治疗相关,放化治疗可明显诱导Livin表达(P<0.01).结论 Livin异构体在非小细胞肺癌组织中表达,作为肺腺癌的分子标志物,可能成为肺癌诱导凋亡治疗的新靶点.     

新型低相对分子质量聚乙烯亚胺耦联载体(PEI-Bu)对大鼠原代骨髓间充质干细胞的基因转染效率及毒性评价

目的 构建新型低相对分子质量聚乙烯亚胺(PEI)耦联载体,评估其对原代大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的细胞毒性及转染效率。方法 利用可降解的氨基甲酸酯化学键耦联相对分子质量为800的PEI 制备低相对分子质量的PEI （PEI 800）衍生物纳米非病毒载体,命名为PEI-Bu;进一步对PEI-Bu压缩DNA的能力、体外降解效率及对原代BMSCs的细胞毒性和基因转染效率进行生物学评价。结果 PEI-Bu能有效压缩质粒DNA并形成稳定的复合物,所形成的复合物粒径约50 nm。与实验室常用的已商品化的相对分子质量为25 000 的PEI （PEI 25 000）相比,PEI-Bu对大鼠原代BMSCs的细胞毒性较小,且基因转染效率更高。结论 作为一种新型的非病毒纳米载体,PEI-Bu能有效转染BMSCs,且安全性较高,具有进一步研发的价值。     

GSH引起的病态红细胞膜蛋白变化

为探讨GSH对红细胞的保护作用．实验研究了家免溶血模型中肌注GSH、维生素E后红细胞膜蛋白组份变化。发现其膜蛋白组份增加，用盐酸苯肼的溶血模型红细胞膜蛋白有3个组份；用GSH肌注后有4个组份；用CSH加维生素E肌注后有7个组份。红细胞形态观察：膜增厚水肿减轻．畸形红细胞减少（与只用苯肼组比较）；红细胞压积降低不多；血清胆红素增加不明显（与对照组比较）。实验结果表明：用外源性GSH肌注后，能减轻过氧化物对红细胞膜的损害作用。提示：CSH可能成为一种新药用于临床。     

Caveolin-3在心房纤颤组织中的表达

目的 探讨犬心房纤颤(atrial fibrillation,AF)模型中微囊蛋白-3(Caveolin-3)蛋白表达情况.方法 建立犬房颤(AF)模型,通过免疫荧光染色和Western blot技术检测心房快速起搏建立的犬AF模型及AF患者心房肌的Caveolin-3蛋白表达情况.结果 在犬和人房颤的心房组织,Western blot结果显示Csveolin-3蛋白表达明显降低,与非房颤组织相比P＜0.05.在犬假手术组和窦性心律的患者,免疫荧光结果显示位于心房组织细胞膜上Caveolin-3蛋白表达明显,并均匀分布在细胞膜表面;而在AF状态下,人和犬心房肌Caveolin-3蛋白表达显著降低.结论 Caveolin-3参与了AF这一临床复杂病症的发生和发展.     

新的肾上腺脑白质营养不良基因突变1例的鉴定

目的：对1例肾上腺脑白质营养不良(ALD)患及其家系成员的ALD基因的突变类型进行鉴定。方法：以外周血RNA为模板，采用长链RT-PCR技术，分4个片段扩增ALD基因mRNA的编码序列，对4个PCR产物进行直接测序，筛查整个基因编码区,通过限制性内切酶酶切分析患及其家系成员基因组ALD基因片段，以进一步确证所发现的基因突变。结果：位于患ALD基因第6外显子的第508位密码子存在一个新的错义突变CCC→CTC(P508L)，患母亲为突变携带，患父亲和妹妹不存在此突变。结论：发现中国ALD患一个新的ALD基因突变，即P508L突变。     

硝酸酯类NO供体型齐墩果酸衍生物的合成及抗肿瘤活性

以齐墩果酸为先导物,将其3位OH通过各种类型的连接基团与硝酸酯类NO供体偶联,合成了10个目标化合物（ 2,4,8a～8c,10,12,15a～15c ）。结构均经IR,MS及¹H NMR确证,并采用MTT法测定了偶联物的细胞毒性。结果显示,化合物 8c 对人肺癌细胞A549、人结肠癌细胞HT-29及人肝癌细胞SMMC-7721均具有较强的抗肿瘤活性,值得进一步研究。     

Repair of Rabbit Femoral Defects with a Novel BMP2-derived Oligopeptide P24

In this study, the bioactivity of a novel BMP2-derived oligopeptide P24 was investigated by using the model of rabbit femoral defect after loaded in the biodegradable poly （lactic acid / glycolic acid / asparagic acid-co-polyethylene glycol） （PLGA-[ASP-PEG]）. A 1.5-cm unilateral segmental bone defect was created in the left femoral diaphysis in each of the 30 new zealand white rabbits. The defects of 18 legs filled with BMP2-derived peptide P24 combined with PLGA-[ASP-PEG] scaffold serves as the experimental group, and the defects in the rest 12 rabbits filled with （PLGA-[ASP-PEG]） without P24 as control group. The bone-repairing capability in the target region of the two group was grossly, radiologically, histopathologically and biomechanically evaluated 4, 8 and 12 weeks after the operation. Our results showed that in each group, primary healing of incision was achieved in the two groups. Radiographically, in experimental group, defects were filled with induced callus within 8 weeks, and a cortical bone-like structure was observed in some animals at the 12th week. According to the standardized stage of bone defect repair, 9 （64.28%） achieved grade-4 healing. In contrast, little bone formation was seen in the defects even 12 weeks after the operation, and 5 （62.50%） had grade 0 healing in this group. Histologically, tissue engineering material was mostly absorbed and cartilage was found around implants in the experimental group at the 4th week; 8 weeks after operation, the engineering material was completely absorbed, and formation of woven bone was observed and typical trabecular bone structure could be seen. In control group, 8 weeks after operation, the defect was filled with fibrous tissues, and no bone-like structure was observed. Statistical analysis showed very significant difference in biomechanical indicators between the two groups （P〈0.05）. It is concluded that new oligopeptide P24 can induce excellent bone regeneration and promote bone repair.     

泛素C末端水解酶L1活性对皮层神经元中tau蛋白磷酸化的影响

目的:在细胞水平探讨泛素C末端水解酶L1(UCH-L1)活性抑制对微管相关蛋白tau的磷酸化影响。方法:使用UCH-L1特异性抑制剂LDN-57444处理原代培养皮层神经元后检测UCH-L1酶活性,tau蛋白磷酸化水平采用免疫印记法检测。结果:LDN-57444对UCH-L1酶活性的抑制呈浓度依赖性和时间依赖性关系(P<0.01);伴随UCH-L1酶活性的显著抑制,tau蛋白Ser199、Ser202和Ser396位点磷酸化水平均明显升高(P<0.01),而总tau水平无明显改变(P>0.05)。结论:UCH-L1抑制可诱发神经元过度磷酸化tau蛋白的聚积,UCH-L1活性失调可能参与了阿尔茨海默病的病理过程。     

急性毒鼠强中毒死亡兔组织器官病理观察

目的:观察不同浓度急性毒鼠强中毒大白兔组织器官的显微病理变化。方法:采用灌胃方法使大白兔急性毒鼠强染毒,制作大白兔急性中毒模型,并以健康大白兔灌服生理盐水为对照,提取大白兔的脑、心、肺、肝、脾、肾、胃等实质性组织器官,取材制片HE染色,进行显微病理观察。结果:不同浓度的毒鼠强急性中毒死亡大白兔的脑、心、肺、肾、脾组织器官显微病理改变与一般急死的区别不明显。肝、胃组织器官病理改变具有一定价值,肝细胞呈片状或桥接样变性坏死,无炎症细胞浸润,且与中毒量和时间具有相关性。胃黏膜中层浆液细胞增多,浅层和底层黏液细胞减少,与中毒量和时间具有相关性。结论:肝、胃组织器官显微病理改变对急性毒鼠强中毒死亡尸体的死因鉴定具有指导意义。     

Epstein-Barr病毒在肝细胞癌组织中的检出

目的：探讨Epstein-Barr病毒(EBV)与肝细胞癌(HCC)的关系。方法：采用PCR及免疫组化方法检测石蜡包埋HCC标本中EBV。结果：PCR测EBV DNA[BamHIW和(或)LMP1]阳性率为28．2％(22／78)。免疫组化测EBV LMP1多定位于肿瘤细胞中。结论：EBV在HCC组织中有较高的检出率，可能在HCC的发生中起一定作用。     

Detection of Human Parvovirus B19 Nonstrutural Protein DNA by Nested-Polymerase Chain Reaction in Gravida Serum and Pregnant Tissues

A new nested-polymerase chain reaction （nested-PCR） assay was developed to detect human parvovirus B19 DNA corresponding to the nonstructural protein in clinical specimens in a routine diagnostic laboratory. The sensitivity of this highly specific assay was up to 0. 005 fg of B19 DNA. Parvovirus B19 was identified in sera of 20 pregnant women with abnormal pregnant outcome. Among these 20 cases, intrauterine parvovirus infection did exist in 7 pregnant women because parvovirus B19 DNA was detected in the pregnant tissues of them such as placenta tissues, chorionic villi, amniotic fluid, fetal spleen, liver and abdominal fluids.     

宫颈癌组织中端粒酶活性测定

目的 探讨端粒酶活性在子宫颈癌组织发生发展中的作用及临床应用价值。方法 采用PCR－TRAP微孔杂交法检测45例子宫颈癌组织标本和8例正常的子宫颈组织的端粒酶活性。结果 45例宫颈癌组织中端粒酶阳性表达率为86．6％,其中宫颈癌Ⅰ期27例,阳性率77．7％,宫颈癌Ⅲ期6例,阳性率100％。8例正常宫颈组织中未检测出端粒酶阳性。结论 端粒酶活性表达在子宫颈癌的发生发展中起重要的作用,端粒酶活性检测对指导宫颈癌的诊断和治疗具有重要意义。     

深静脉血栓形成患者血浆部分抗凝物质的检测及其临床意义

【目的】研究深静脉血栓形成 (DVT)患者血浆蛋白C(PC)、蛋白S(PS)活性水平、活化蛋白C抵抗 (APCR)和狼疮样抗凝物 (LA)阳性率 ,进一步探讨它们与静脉血栓形成间的关系。【方法】用凝固法在SysmexCA 15 0 0、CA 6 0 0 0全自动血凝仪上检测 38例DVT患者和 40名正常对照的血浆PC、PS活性、活化蛋白C反应性和LA。【结果】治疗前DVT组PC、PS活性分别为 (70± 2 3) %、(76± 2 5 ) %,与对照组相比差异均有极显著性意义 (P <0 0 1) ,治疗后DVT组PC、PS活性分别为(96± 15 ) %、(98± 2 0 ) %,与对照组相比差异均无显著性意义 (P >0 0 5 )。DVT组APCR阳性率为 2 1%,明显高于对照组2 5 %(P <0 0 5 ) ,DVT组LA阳性率为 2 6 %,与对照组相比差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。【结论】DVT患者血浆PC、PS活性呈消耗性降低 ,经治疗可逐渐恢复正常。LA与DVT患者血栓形成无关 ,APCR是DVT患者血栓形成的高危因素。     

火器伤合并海水浸泡兔肢体骨骼肌组织脂质过氧化反应

目的：观察兔肢体火器伤合并海水浸泡后,伤道周围骨骼肌过氧化脂质与抗氧化酶活力的 早期救治提供实验依据。方法 用滑膛枪发射２５０ｍｇ钢珠,致伤兔后肢,伤后将致伤兔随机分为两组：一组为海水浸泡组（ＳＩＧ）,将兔浸泡于粗制盐配制的人造海水中３０ｍｉｎ。另一组为单纯致伤组（ＳＷＧ）,伤后不浸泡海水。伤后３、６、１２、２４ｈ手术取距伤道边缘０．５ｃｍ（Ａ区）,１．５ｃｍ（Ｂ区）和２．５ｃｍ（Ｃ区）处肌组织,