凉血活血复方对体外培养HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

目的观察中药凉血活血复方水醇粗提液对人永生化表皮细胞(HaCaT)的增殖抑制效应和诱导细胞凋亡作用的影响,探讨该复方治疗银屑病的可能机制。方法将不同浓度的凉血活血复方水醇粗提液分别作用于体外培养的HaCaT细胞,采用MTT法检测凉血活血复方水醇粗提液对细胞的增殖抑制作用以及药物的有效浓度;采用倒置显微镜、透射电子显微镜观察细胞处理前后的形态学改变:流式细胞术检测细胞周期的变化及凋亡比率。结果凉血活血复方以时间和浓度依赖性方式抑制HaCaT细胞增殖,作用24、48、72h其IC50分别为155.83 mg/mL、71.57mg/mL,41.27 mg/mL。细胞形态学和流式细胞仪检测发现药物以浓度依赖性的方式干扰细胞周期、诱导细胞凋亡,细胞分裂周期阻皆滞于G2/M期。结论凉血活血复方可能通过抑制角质形成细胞的增殖、诱导其凋亡而治疗银屑病。     

中药消银汤药物血清对EGF诱导的HaCaT细胞生长增殖的影响

目的探讨中药消银汤药物血清对表皮生长因子诱导的HaCaT细胞生长增殖的影响。方法HaCaT细胞株为靶细胞.观察中药消银汤药物血清对10ng/mL EGF信号刺激下HaCaT细胞生长曲线的影响;用MTT法检测细胞增殖情况:用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率变化。结果中药消银汤药物血清影响EGF信号刺激下HaCaT细胞的生长状态并抑制其生长速度;不同浓度消银汤处理的HaCaT细胞,48h时表现出对细胞增殖的抑制作用,随着时间延长和药物剂量加大,抗增殖作用愈明显;高浓度组,48h和72h时的抑制率分别为59.47%和73.76%。与对照组相比,经消银汤作用48h后,细胞G_1期比例显著增加,S期与G_2期比例则显著下降,并可抑制G_1/G_2期转换。结论消银汤具有抑制表皮生长因子诱导的HaCaT细胞增殖及诱导其分化的作用     

复方青黛饮含药血清对体外HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

目的体外观察复方青黛饮大鼠含药血清对人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法根据中药血清药理学方法,用SD大鼠制备实验血清,采用MTT法、流式细胞术、免疫荧光Hoechst染色,观察含药血清对细胞生长抑制率、凋亡率、细胞周期分布及细胞形态学的影响。结果体外培养HaCaT细胞24h和48h后,复方青黛饮高、中、低三个剂量不同浓度的含药血清组,对HaCaT细胞的生长均有不同程度的抑制,与空白血清组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组抑制作用最明显。复方青黛饮含药血清组细胞凋亡率和G0/G1比例明显增加,与空白血清组相比,差异有统计学意义(P<0.05),在镜下呈现凋亡的特征性形态改变。结论复方青黛饮大鼠含药血清对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,并对细胞周期有一定的影响。     

亚砷酸对角质形成细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究亚砷酸对不同角质形成细胞增殖及凋亡的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株为对象，不同浓度的亚砷酸处理细胞后，用MTT比色分析法反映细胞增殖变化，用光镜和电镜观察细胞形态，流式细胞仪测定细胞周期分布及凋亡峰的出现，Annexin-V染色荧光照相证实凋亡的发生。结果：0.5-10μmol/L亚砷酸对良性角质形成细胞株HaCaT细胞有明显抑制作用，并呈时间和剂量依赖关系，而该浓度砷剂对A431细胞无明显影响。光镜及HE染色后观察均显示随浓度升高、时间延长，凋亡细胞增多。高于上述范围HaCaT细胞变性死亡增多，流式细胞仪检测细胞周期分布变化，G2M期细胞比例及亚G1期凋亡明显升高，Annexin-V法显示有绿色荧光的阳性细胞。而A431细胞无明显形态和细胞周期分布变化。结论：一定浓度的亚砷酸可抑制HaCaT细胞增殖，并具有诱导凋亡作用，对皮肤鳞状细胞癌A431细胞无明显影响，提示良性表皮角质形成细胞株HaCaT对亚砷酸的处理比鳞状细胞癌A431细胞株更敏感。     

喜树碱抑制HaCaT细胞增殖、诱导凋亡及对端粒酶活性的影响

目的探讨喜树碱对HaCaT细胞抑制增殖、诱导凋亡的作用及对端粒酶活性的影响。方法将不同浓度的喜树碱作用于HaCaT细胞24,48和72 h,用MTT法、光镜、电镜和流式细胞仪检测其对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;TRAP-ELISA法检测其对细胞端粒酶活性的影响。结果喜树碱能以时间和浓度依赖性的方式抑制HaCaT细胞增殖,作用24,48,72 h的最大抑制率分别为85.1%,94.3%,98.6%;且能以浓度依赖性的方式诱导HaCaT细胞凋亡,将细胞阻止于S期,并使细胞表现出典型的凋亡形态学特征,在诱导凋亡和低于诱导凋亡的浓度下均可抑制细胞端粒酶活性。结论喜树碱抗银屑病的机制与抑制角质形成细胞增殖、诱导凋亡有关,其作用可能是通过抑制端粒酶活性来实现的。     

龙胆泻肝汤激活Bax/Caspase-3通路并诱导人角质形成细胞凋亡

目的：明确龙胆泻肝汤对人角质形成细胞株HaCaT细胞凋亡的影响。方法：Tunel法检测龙胆泻肝汤对HaCaT细胞凋亡的影响; DAPI染色后荧光显微镜观察HaCaT细胞凋亡形态变化; Western blot检测分析HaCaT细胞凋亡相关蛋白表达。结果：龙胆泻肝汤处理组HaCaT细胞形态发生了明显变化，凋亡比例明显高于未处理细胞组。龙胆泻肝汤作用于HaCaT细胞后活化的caspase-3和Bax的表达明显上调， Bcl-2蛋白表达下降。caspase-3特异性抑制剂Z-DEVD-FMK预处理后可降低龙胆泻肝汤诱导的细胞凋亡。结论：龙胆泻肝汤能明显诱导人角质形成细胞的凋亡，其机制可能与下调Bcl-2的表达，增高Bax和caspase-3的表达有关。     

消银解毒饮及拆方对角质形成细胞COLO-16凋亡的调控作用

本研究以角质形成细胞株COLO-16为研究对象,用流式细胞仪分析了消银解毒饮及其拆方后的凉血、解毒和祛风除湿等三组主要成份含药血清对其凋亡的诱导作用.结果表明消银解毒饮能诱导COLO-16细胞的凋亡,诱导角质形成细胞的凋亡可能是其治疗银屑病的机制之一.     

贝伐珠单抗对HaCaT细胞凋亡及周期的影响

目的:评价贝伐珠单抗对HaCaT细胞凋亡的影响。方法:体外培养HaCaT细胞,不同浓度贝伐珠单抗分别作用:HaCaT细胞48 h后,Hoechst 33258荧光染色法观察贝伐珠单抗诱导HaCaT细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测贝伐珠单抗HaCaT细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:贝伐珠单抗处理HaCaT细胞48 h后,Hoechst 33258荧光染色显示细胞核染色质凝聚、边集、核裂解;流式细胞术检测结果显示细胞凋亡增加,G0/G1期细胞的比例增加。结论:贝伐珠单抗可诱导HaCaT细胞凋亡,同时可有效阻滞HaCaT细胞的周期进程,细胞周期被阻滞在G0/G1期。     

罗格列酮对HaCaT细胞增殖及β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达的影响北大核心CSCD

目的探讨罗格列酮对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的影响。方法用不同浓度的罗格列酮处理HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HaCaT细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法测定HaCaT细胞B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达水平。结果不同浓度的罗格列酮对HaCaT细胞体外增殖均具有抑制作用,药物作用48h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制率分别为18．9％、23．7％、35．1％、44．6％,与溶媒组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。罗格列酮处理HaCaT细胞后,p-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达明显下调。结论罗格列酮抑制HaCaT细胞的体外增殖的机制可能与B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1的表达下调有关。     

中波紫外线辐射剂量与HaCaT细胞凋亡时相的相关性研究

目的 探讨中波紫外线(UVB)辐射角质形成细胞后,UVB辐射剂量与角质形成细胞凋亡时相的相关性。方法 以20,40,60,80,100和120mJ/cm²的UVB辐射永生化人角质形成细胞株HaCaT细胞,检测辐射后2,12,24,48和72h的细胞活性和细胞周期的变化,以及代表不同时相的凋亡通路:即应用广谱Caspase抑制剂VAD-FMK与凋亡细胞中活化的Caspase不可逆的结合检测早期Caspase介导的凋亡;应用AnnexinV及PI双染方法检测后发的细胞膜介导的凋亡;以及应用DNA的梯度凝胶电泳检测晚期细胞核介导的凋亡。结果 UVB辐射可使HaCaT细胞的细胞周期受滞于G2/M期,G2/M期的百分比与辐射剂量成正比。细胞活性于24h后与辐射剂量成反比。各时相的凋亡率均与辐射剂量成正比,但凋亡通路有明显的时相性:即早期(48h内)由Caspase和细胞膜介导凋亡为主,晚期(48h后)则由细胞核介导凋亡为主。结论 UVB诱导的角质形成细胞凋亡具有显著的剂量与时相依赖性特征。宜对其进行多指标、多时相的检测。     

维胺酯对HaCaT细胞增殖和分化的影响

目的 探讨维胺酯对体外培养角质形成细胞(HaCaT细胞)增殖和分化的影响.方法 将浓度为2,5,10,15,20,25,30 μg/mL的维胺酯作用于培养的HaCaT细胞,采用MTT法检测维胺酯对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测分化标记物角蛋白10及内披蛋白mRNA的表达水平.结果 2 μg/mL维胺酯处理的HaCaT细胞,48 h时表现出对细胞增殖的抑制作用,随着时间延长和药物剂量加大,抗增殖作用愈明显;当药物质量浓度达到30 μg/mL时,48 h和72 h时的抑制率分别为57.67%和82.00%.与对照组相比,经维胺酯作用48 h后,细胞G₁期比例显著增加,S期与G₂期比例则显著下降,并可抑制G₁/G₂期转换,但对细胞凋亡无影响.细胞内披蛋白mRNA表达水平随维胺酯处理浓度增高而上升,药物浓度达30μg/mL时,表达水平由对照组的40.80%增高至156.12%;而角蛋白10 mRNA表达水平则下降,由96.46%降至14.60%.结论 维胺酯具有抑制角质形成细胞增殖及诱导其分化的作用.     

中药清热利湿饮对HaCaT细胞周期的影响

目的 探讨中药清热利湿饮水提液对经肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导活化的人永生化角质形成细胞（HaCaT）细胞周期的影响.方法 采用MTT法检测TNF-α对HaCaT细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测清热利湿饮提取液对HaCaT细胞周期的影响.结果 经2.5×10^5 u/L的TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖率比对照组增加了（14.11±2.97）％,12.5g/L和15 g/L清热利湿饮可使HaCaT细胞阻滞于S期,与TNF-α对照组相比,S期比率分别增加了10.63％和21.55％.结论 TNF-α可使HaCaT细胞活化及过度增殖,一定浓度的清热利湿饮以浓度依赖的方式干扰正常的HaCaT细胞周期,通过阻滞细胞的周期时相而抑制HaCaT细胞的分裂和过度增殖.     

他克莫司对UVA照射后HaCaT细胞增殖的影响

目的探讨不同浓度他克莫司(TM)对不同强度长波紫外线(UVA)照射HaCaT细胞24h和48h后细胞增殖活性的影响。方法将培养的HaCaT细胞分别行2,4和8J/cm2的UVA照射,且照射前1h分别加入50,500和5000pg/mL的TM,对照组分别加入50,500和5000pg/mL的TM,但不行UVA照射。各剂量组分别照射24h和48h后在倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化,MTT法检测细胞的增殖活性。结果HaCaT细胞经UVA照射24h后,细胞连接松散,细胞折光性较未照射组差,部分细胞死亡、脱壁;与未经UVA照射组相比,细胞增殖受到抑制(P<0.05),加入TM组无明显变化(P>0.05);照射48h后细胞虽有大量增殖,但体积较小;与未经UVA照射组相比,细胞增殖明显(P<0.05),加入TM组细胞增殖受到抑制(P<0.05)。结论TM可抑制UVA照射HaCaT细胞引起的过度增殖,对UVA照射后的HaCaT细胞有保护作用。     

苦参碱对HaCaT细胞Bcl-2/Bax和Fas/FasL的调控

目的:明确苦参碱对HaCaT细胞Bcl-2/Bax和Fas/FasL表达的影响。方法:体外培养HaCaT细胞,选择第二代细胞对数生长期HaCaT细胞作为研究对象,将细胞随机分为4组:苦参碱2mg/mL、10 mg/mL和50 mg/mL 3组及对照组(加入相同体积的0.9%盐水),孵育48 h后,MTT法测定各浓度下细胞增殖,RT-PCR检测Bcl-2/Bax和Fas/FasL的表达。结果:与对照组相比,当苦参碱浓度为2 mg/mL时,HaCaT细胞增殖活性无明显变化;Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达也无明显变化(P0.05)。当苦参碱浓度为10 mg/mL时HaCaT细胞增殖活性较对照组明显下降(P0.001);Bcl-2表达明显下降,Bax表达上升(P0.001);Fas、FasL表达上升(P0.05)。当苦参碱浓度为50 mg/mL时,MTT法检测HaCaT细胞增殖明显抑制(P0.001);同时Bcl-2、Bax、Fas和FasL的变化与10 mg/mL时相似(P0.05)。结论:苦参碱能够调控上皮细胞致炎因子的表达,抑制细胞的增殖。     

重组人甲状旁腺素(1-34)对肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察重组人甲状旁腺素(1-34)[ rhPTH(1-34)]对肿瘤坏死因子-α(TN F-α)诱导的永生化人角质形成细胞( HaCaT)增殖的影响.方法 不同浓度rhPTH( 1-34)作用于由TNF-α诱导的HaCaT细胞,观察细胞形态变化;噻唑蓝法检测不同浓度rhPTH(1-34)作用后细胞增殖情况;流式细胞检测药物作用后细胞周期变化.结果 相差显微镜下可见,HaCaT细胞经rhPTH(1-34)作用后,细胞生长状态和生长速度受抑制;噻唑蓝法显示rhPTH( 1-34)(0.05、0.2、0.8、3.2、12.8 μmol/L)分别作用HaCaT细胞36 h、48 h后,细胞增殖受到明显抑制(P＜ 0.05或0.01);流式细胞检测显示,rhPTH( 1-34) (0.2、0.8、3.2、12.8 μmol/L)作用细胞48 h后,G1期细胞比例明显增加(P值均＜0.01),S期比例下降(P值均＜0.01).结论 在体外rhPTH(1-34)对TNF-α诱导的HaCaT增殖有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.