FLT3基因突变与急性髓细胞性白血病的关系及临床意义

目的研究FLT3基因内部串联重复(internal tandemduplication,ITD)突变与急性髓细胞性白血病(AML)的关系及临床意义。方法采用基因组PCR及RT-PCR方法检测126例AML患者的FLT3/ITD突变。结果106例初治AML患者检出FLT3/ITD突变者18名,突变率17.0%,在20例完全缓解期患者及对照组中均未检测到FLT3/ITD突变,基因组PCR及RT-PCR两种方法检测FLT3/ITD突变的结果一致,对其中3例特征性突变测序结果显示,ITD主要位于外显子14,亦可累及内含子14和外显子15,长度为21～42bp,均为框内突变。FLT3/ITD阳性患者外周血白细胞计数高(P<0.01),骨髓白血病细胞比例高(P=0.039),早期病死率高(P=0.036)。在M3患者中,FLT3/ITD阳性者完全缓解率低(P=0.015)。在非M3患者中,FLT3/ITD阳性者的完全缓解率与阴性者比较,差异无统计学意义(P>0.05),FLT3/ITD阳性患者完全缓解后检测FLT3/ITD转阴性。结论FLT3/ITD阳性AML患者早期死亡率高,FLT3/ITD阳性M3患者预后差,FLT3/ITD突变检测对于AML患者疗效评价、预后估计具有重要意义。     

急性髓系白血病FLT3基因突变研究进展

急性髓系白血病（acute myelocytic leukemia ,AML）是由髓系造血干／祖细胞起源的一组在临床及遗传学上均有高度异质性的克隆性疾病,是成人急性白血病的主要类型,分类复杂,发病机制至今尚未完全明确。目前认为其发病机制主要包括染色体易位或缺失、原癌基因及抑癌基因突变等,但其独特的细胞遗传学和分子遗传学改变是分类的基础,对疾病诊断、预后分层、微小残留病灶监测,以及靶向治疗的开发等具有极为重要的意义。近年来人们在AML中发现了越来越多的分子异常,例如NPM1、FLT3的内部串联重复序列（FLT3‐ITD）、C‐KIT等基因突变,在 AML 的分层治疗中具有重要意义［1］,而FLT3／ITD 是 AML 中最常见基因突变之一,该突变在AML发病机制中起驱动作用［2］,是提示预后不良的标志［3］,动态检测AML患者治疗前后Fms样酪氨酸激酶‐3（FLT3）表达水平,可作为判断 AML 预后和监测微小残留病灶的一项指标。目前,在 FLT3‐ITD阳性 AML患者治疗方面,化疗和自体干细胞移植的疗效均不理想,异基因造血干细胞移植的疗效尚存在争议,靶向治疗越来越受到人们的关注,也取得了一定疗效,然而随着耐药的出现,克服耐药的靶向药物治疗是人们面临的一大挑战,是治疗FLT3‐ITD阳性的AML患者的新方向。现简要综述AML中FLT3基因突变的临床意义、检测方法及治疗的最新研究进展。     

稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞株的构建及鉴定

构建稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的急性髓细胞白血病细胞(AML)株,为研究FLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的作用和以FLIT3为靶点的治疗提供一种新的体外模型。筛选临床上FLT3-ITD突变的AML患者,选取mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变作为克隆对象,PCR扩增FLT3基因全长。然后通过同源重组的方法构建FLT3-ITD/FIV慢病毒载体并包病毒,收集病毒液上清液进行K562白血病细胞株感染,通过流式细胞分选术筛选阳性转染细胞。收集阳性转染细胞做Western blot验证阳性质粒的表达情况。207名AML患者中有42例FLT3-ITD突变,成功扩增出了mutant/wt比值最高的FLT3-ITD突变患者的FLT3基因全长。双酶切FIV载体和模板DNA,连接以及感受态细胞转化筛选出阳性重组子,双酶切鉴定和测序结果验证。慢病毒成功感染K562白血病细胞株,用流式细胞分选术筛选出了稳定感染的细胞,且该细胞可以传代、扩增。同时,稳定感染细胞的Western blot鉴定也证实了阳性质粒的表达情况。通过筛选FLT3-ITD突变的AML患者,成功构建了稳定表达FLT3-ITD/FIV载体的白血病细胞株,为研究FLT3-ITD在AML发病中的作用以及针对FLT3-ITD为靶点的药物筛选治疗等提供了一个稳定的体外细胞模型。     

急性淋巴细胞白血病FLT3基因突变的发现及临床意义

目的 研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因突变情况.方法 采用PCR方法检测61例ALL患者的FLT3基因内部串联重复突变(FLF3-ITD)与ASP835突变(FLT3-TKD),并以7名健康志愿者为对照,对检测结果进行分析并探讨其临床意义.结果 61例ALL患者中,2例出现FLT3-ITD,1例出现FLT3-TKD.结论 少数ALL患者体内存在FLT3突变.     

动态监测FLT3-ITD基因突变在急性髓系白血病中的意义

目的:分析急性髓系白血病(AML)化疗前后FLT3-ITD基因突变与临床缓解的相关性,探讨FLT3-ITD基因动态改变对评估AML患者临床疗效的意义.方法:分析2016年6月—2019年6月中山市人民医院收治的初诊AML患者178例(除M3型),通过PCR扩增联合一代测序的方法检测骨髓单个核细胞FLT3-ITD突变情况...     

急性髓系白血病患者 FLT3-ITD 基因突变检测的意义

目的：探讨对急性髓系白血病（ AML ）患者行FLT3-ITD基因突变检测的临床意义。方法选取首次确诊的AML患者50例,对患者进行常规FAB分型及R显带核型分析,并抽取患者骨髓进行FLT3-ITD突变检测,根据其突变发生与否将患者分为阳性组和阴性组。患者接受诱导治疗。比较两组患者的年龄分布、性别比例、染色体核型、白细胞计数（ WBC ）、骨髓原始细胞比例、外周血血红蛋白浓度、血小板计数等一般临床参数和诱导治疗临床结局、患者生存情况。结果50例患者中共检出FLT3-ITD突变阳性（阳性组）10例,阴性患者（阴性组）40例。两组患者间一般临床参数中除了WBC、骨髓原始细胞2项指标差异有统计学意义（P＜0.05）外,其余指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。阴性组患者完全缓解（CR）率高于阳性组,复发率低于阳性组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。阳性组患者的无病生存率和总体生存率均低于阴性组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 FLT3-ITD突变阳性AML患者CR率低,复发率高,预后差,早期检测FLT3-ITD突变发生情况具有重要临床意义。     

急性髓细胞白血病细胞遗传学的研究进展

急性髓细胞白血病(AML)的发病率占整个急性白血病的77%,染色体异常涉及到FAB的各型。染色体异常不仅有数量的改变,而且有结构的变化,二者可同时发生,也可单独存在,在白血病获得完全缓解(CR)后可消失,复发时再出现,甚至出现新的染色体改变。1　数目异常8号染色体三体性( 8)　是AML中最常见的染色体异常[1]。可单独或同时伴有另外的染色体异常。大约17%的M3患者初诊时有 8,同时伴有t(15;17)。 8并非只见于某一特定的FAB的亚型,但在M1、M2和M5中多见,应用荧光点杂交技术能提高检出率[2]。除 8外,在AML中4、11、13、21和22号染色体的三…     

FLT3突变,FLT3表达水平在急性髓系白血病中的意义

目的研究FLT3基因长度突变(FLT3-LM)及FLT3受体在初诊AML患者中骨髓单个核细胞(MNC)的表达水平在急性髓系白血病(AML)的临床意义。方法采用基因组DNA聚合酶链反应(PCR)技术检测95例初诊AML患者FLT3-LM,采用流式细胞仪(FCM)检测分析其中68例FLT3的表达水平。结果初诊AML患者中FLT3-LM阳性率为15.8%;FLT3-LM 存在于AML-M1(3/18),M2(4/24),M3(2/17),M5(5/25),M6(1/4)亚型中(P>0.05);22例ALL和10例正常对照中均未检测到FLT3-LM阳性;FLT3-LM在正常染色体核型组和伴t(15;17)核型异常患者中突变率分别为23.0%(10/52例)和16.7%(2/12例),较其他核型组突变率4.3%(1/23例)高,但无统计学差异;FLT3-LM组与非突变组在年龄,性别,诱导缓解率方面无统计学差异(P>0.05);FLT3-LM阳性患者外周血白细胞高,骨髓原始细胞高(P<0.05)。AML患者FLT3表达水平为(11.48%±14.87%),高于10例正常对照组水平(1.10%±0.31%)(P<0.05);FLT3表达水平在12例FLT3-LM 组为(5.86%±6.85%),低于56例非突变组(14.14%±16.25%)(P<0.05);临床资料显示,诱导治疗后缓解组的FLT3表达水平为(5.52%±2.67%),低于非缓解组FLT3表达水平(25.53%±22.60%)(P<0.05)。结论FLT3长度突变是AML中发生频率较高的一类突变;突变患者临床特征表现为外周血高白细胞,骨髓高原始细胞;FLT3受体在AML患者单个核细胞中呈高水平表达;FLT3受体高表达与低诱导缓解率有关。FLT3突变与FLT3受水平检测可能有助于白血病诊断,预后判断和靶向治疗。     

急性髓系白血病FLT3基因突变的研究进展

近年来对急性髓细胞性白血病（AML）中FLT3突变及FLT3抑制剂的研究十分广泛和深入。研究表明,野生型FLT3基因在AML中普遍高表达70％～100％,FLT3突变存在于部分AML中（成人约20％～30％）,FLT3基因突变已经被公认是AML中发生率最高的一种基因改变。目前认为FLT3突变在白血病的发生、预后判断、微小残留病变检测等方面具有重要意义。近来FLT3抑制剂治疗AML的研究很多,     

FLT3基因突变与白血病的关系

FLT3属于Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员之一,研究表明,其在正常造血及免疫系统的发育中起重要调节作用。FLT3基因突变常见有两种,即内串联复制和点突变。FLT3在急性髓细胞白血病中有过度表达,FLT3基因的内部串联重复(FLT3-ITD)是急性髓细胞白血病最常见的基因异常。FLT3还可作为白血病基因诊断及微小残留病灶的检测标志。本文就FLT3及其突变与白血病的发生、发展及预后的关系予以综述。     

PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变及意义

目的 研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA水平FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变情况。方法 采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测63例不同免疫分型ALL患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果 63例ALL患者经PCR扩增发现41例(65.1%)FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为93.3%(14/15),77.8%(14/18),41.7%(5/12)和28.6%(4/14);前前B细胞ALL和前B细胞患者ALLFLT3基因检测阳性率84.8%,显著高于成熟B细胞ALL(41.7%,P<0.005);B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为73.3%,显著高于T细胞系ALL患者(28.6%,P<0.001)。63例ALL患者中仅有2例(3.2%)出现FLT3/ITD基因突变,均为伴有两种髓系抗原表达、免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例,预后较差。结论 B细胞系ALL和T细胞系ALL患者DNA水平均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低。ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断。     

FLT3基因表达在急性髓系白血病中的临床意义

目的 研究急性髓系白血病（AML）患者骨髓中FMS样酪氨酸激酶3基因（FLT3）表达水平与FLT3基因内部串联重突变（FLT3-ITD突变）、临床表现和疾病预后的相关性及意义。方法 采用荧光定量PCR法检测128例AML患者初诊时骨髓标本中FLT3基因表达水平,以FLT3基因表达量＜35%作为低表达组,≥35%作为高表达组,并探讨不同FLT3基因表达水平的FLT3-ITD突变、临床症状、实验室检查结果及疾病预后,采用多因素logistic回归分析FLT3基因高表达的影响因素,采用单因素Cox回归和生存曲线进行生存分析。 结果 剔除1例不合格的M2患者RNA样本,最终纳入127例进行分析。AML患者初诊时FLT3表达量为0.01～180.68（均值14.65）。FLT3基因表达水平在WHO的AML分型中M1最高,M6最低,但各亚型间差异不具有统计学意义。FLT3基因高表达组AML患者外周血白细胞计数（WBC）较低表达组高（P<0.01）,且高表达组患者更容易发生贫血及发热临床症状（P<0.05）,多因素logistic回归发现,FLT3基因高表达的可能相关因素为WBC〔回归系数（B）=1.508,比值比（OR）=4.518,95%可信区间（95%CI）：1.465~13.390,P=0.009〕及贫血（B=2.142,OR=8.513,95%CI：3.201~22.644,P<0.001）。 FLT3基因低表达组AML患者完全缓解率（CR）为81.82%（36/44）,高于FLT3基因高表达组38.55%（32/83）,（P<0.05）。生存曲线显示,FLT3基因高表达组患者生存时间较低表达组短（P<0.05）。Cox回归显示, FLT3基因表达高水平患者死亡风险是FLT3基因表达低水平者的3.810倍（B=1.338,相对危险度3.810,95%CI：1.820~7.947,P<0.001）。高表达组总生存率为56.63%,低表达组为70.45%,两组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 FLT3基因高表达可能与AML患者WBC及贫血症状有关。FLT3基因高表达是AML患者预后不良的指标。     

急性髓性白血病多药耐药基因的表达及其临床意义

目的 探讨急性髓性白血病（AML）多药耐药基因mdrl表达与临床耐药和化疗疗效的关系。方法 应用反转录－聚合酶链反应（RT－PCR）,检测30例AML患者骨髓和10名正常人外周血单个核细胞中mdrl基因的表达。结果 正常对照组均为阴性表达。AML初治组mdrl阳性率为26.32%,而复发难治组mdrl阳性率为81.82%,两组之间存在明显差异（P＜0.01)。初治组中mdrl阳性患者的首次完全缓解率（20.00%)明显低于mdrl阴性患者的首次完全缓解率（85.71%)（P＜0.01)。结论 AML的mdrl基因过度表达与临床耐药密切相关,是判断疗效及预后的一个重要指标。     

FLT3基因突变与急性早幼粒细胞白血病髓外复发

目的 探讨 [QX(Y9]FLT3[QX)]基因突变在急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocyticleukemia,APL）髓外复发中的意义。 方法 回顾性检测2例典型APL髓外复发患者骨髓及血液标本可能存在的基因突变,分析FLT3突变与APL髓外复发的相关性。结果 1例APL中枢神经系统复发的患者发生较罕见的FLT3-酪氨酸激酶结构域（TKD）点突变Asn841Gly（A841G）及一种新的WT1基因突变 (c.1209_1210insT/p.K404X);1例APL睾丸复发的患者发生较罕见的FLT3-TKD点突变Asp839Gly (D839G)和一种新的WT1基因突变Arg458Pro (c.1373G>C)。 结论 本研究病例中发现的罕见FLT3突变与新的WT1基因突变可能与APL髓外复发相关,为后续相关研究提供了基础。临床中需重视APL患者基因突变检测,以便更好分层治疗,改善预后。     

CD184表达与急性髓细胞白血病预后相关因素分析

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)患者CD184表达与预后关系。方法:应用流式细胞术(FCM)检测了54例初治急性髓细胞白血病患者CD184表达情况,并分析CD184表达与CR1率,髓外浸润,复发率相关性。结果:CD184阳性组AML患者CR1率低,髓外浸润,复发率均较CD184阴性组增高,有统计学差异(P<0.05);CR1组患者CD184水平较非CR1组患者低,有统计学差异(P<0.05)。结论:CD184高表达与CR1率低,髓外浸润,复发等不良预后有关;CD184是急性髓细胞白血病预后预测因子。     

HLX基因的表达与急性髓系白血病相关性

目的 研究HLX表达水平与AML的临床变量及AML不同危险度分层的相关性。方法 应用实时荧光定量PCR方法检测32例初治AML患者骨髓单个核细胞中HLX表达量,分析其与患者FAB分型、血象、骨髓原始细胞、分化程度及AML不同危险度分层关系。结果 初治AML患者HLX表达量在AML-M₃中明显降低（P<0.01）,AML-M₅中明显升高（P<0.05）;HLX表达水明与骨髓原始细胞数呈负相关（P<0.01）,与外周血血小板水平呈正相关（P<0.05）,且AML-M₃ HLX表达量与外周血白细胞水平呈正相关（P<0.05）,AML-M₅ HLX表达量与外周血白细胞水平呈负相关（P<0.05）;AML-M₅组中分化不良组HLX表达水平明显高于分化良好组,（P<0.05）,病例组及非M₃组初治AML患者中,低危组与中危组HLX表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 HLX表达水平在部分亚型（如AML-M₅）中表达升高,且在不同的FAB分型中有差异。该基因与白血病细胞的增殖、分化和成熟相关。本研究暂无证据表明HLX在不同AML危险度分层中有差异,仍需进一步实验研究。