弓形虫P30基因重组质粒的构建及其免疫效果

目的　通过构建含弓形虫P30不同表达形式 (膜型、分泌型及细胞内型 )的重组质粒 ,并将其用于免疫小鼠 ,测定抗体水平 ,以期初步筛选出一种对弓形虫感染具有良好保护作用的核酸疫苗。　方法　利用PCR技术和亚克隆技术分别构建弓形虫表膜型P30基因重组质粒 (含完整的P30编码序列 ,包括信号肽及疏水尾 )pcDNA3 P30Mb ,分泌型P30基因重组质粒 (含完整的P30编码序列 ,不包括疏水尾 )pcDNA3 P30Se以及细胞内型P30基因重组质粒 (含完整的P30编码序列 ,但不包括信号肽 )pcDNA3 P30In。将以上 3种重组质粒分别与脂质体混合后免疫小鼠 ,ELISA及免疫印迹测定小鼠血清中特异的IgG抗体。　结果　成功构建了弓形虫P30基因 3种表达形式的重组质粒 ,经双酶切鉴定及DNA序列测定 ,3种重组质粒中的插入片段确为P30的编码基因 ,且读码框架正确 ;抗体测定显示 :3个免疫组均能诱导小鼠产生特异的IgG抗体 ,但各组之间IgG出现的时间及强度有一定的差异。　结论　用编码弓形虫P30抗原的重组质粒进行核酸免疫 ,能诱导免疫小鼠产生特异性的IgG抗体 ;膜型及分泌型免疫小鼠的特异IgG抗体出现的时间早于细胞内型免疫鼠 ,但 4wk后 3组间差异无显著性。     

桥本病与甲亢患者抗钙调素自身抗体的检测和意义

钙调素(calmodulin,CaM)是一种真核细胞内的多功能调节蛋白,对免疫功能有调控作用。慢性淋巴细胞性甲状腺炎又称桥本病(HT),和甲亢均属自身免疫性甲状腺疾病(AITD),我们发现这类患者也存在较高水平的抗CaM自身抗体。现将研究结果报告如下。     

高浓度低密度脂蛋白促进内皮细胞NADPH氧化酶4的表达和细胞凋亡

目的分析高浓度低密度脂蛋白(LDL)刺激人脐静脉内皮细胞(hUVEC)时细胞内活性氧(ROS)、NADPH氧化酶4(NOX-4)mRNA水平和凋亡的变化。方法免疫组织化学法检测hUVECⅧ因子相关抗原的表达;RT-PCR检测hUVEC中NOX-4的表达;流式细胞仪检测细胞内ROS生成量和细胞凋亡率,Hoechst染色分析细胞凋亡。结果高浓度LDL刺激hUVEC时,NOX-4mRNA表达上调,细胞内ROS生成增加,细胞凋亡增加。结论高浓度LDL上调hUVCE内NOX-4mRNA的表达并促进细胞内ROS生....     

NLRP3介导炎症反应在心血管疾病中的研究进展

<正>1 NLRP3组成介绍1.1 NOD样受体(NLR)模式识别受体(PRR)是固有免疫中的免疫受体,其与病原微生物表面的病原体相关分子模式相互识别和作用是启动固有免疫应答的关键。目前已知的PRR有四种:NLRs、Toll样受体(TLR)、RIG样解旋酶(RLHs)和C型凝集素(CTL)。与TLR这个膜结合受体不同,NLR是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,诱导细胞内病原体的先天免疫。到目前为     

蛋白酶体在免疫反应及自身免疫病中的作用

蛋白酶体(proteasome)是一种存在于细胞质和细胞核内的蛋白水解酶复合物，负责降解细胞内大部分蛋白质。它在主要组织相容性复合体(MHC)I类分子的抗原递呈、免疫应答和许多自身免疫病的发生发展过程中扮演重要的角色，是近年来基础及临床免疫研究的热点之一。本文就蛋白酶体在这些领域的研究进展作一综述。     

乙型脑炎病毒prME、E蛋白基因表达与DNA免疫效率对比研究

目的研究乙型脑炎病毒prME、E蛋白表达特点,比较不同接种途径所致DNA免疫效率。方法脂质体法将质粒(pJME、pJE)转染于HepG2、COS-1及KN73细胞;免疫印迹法分析质粒表达及与转染剂量关系,鉴定DNA免疫鼠血清抗体性质;肌内(100μg/次)与基因枪(3μg/次)注射法将质粒免疫BALB/c鼠,腹腔注射乙型脑炎病毒(105PFU/100μl)进行病毒攻击。80%空斑减少中和试验法检测中和抗体滴度。结果pJME转染的细胞内可检测到相对分子质量约为72×103与11×103两种蛋白,pJE转染的细胞内检测到相对分子质量约为54×103蛋白。蛋白表达程度由高至低顺序为10μg/孔>5μg/孔>3μg/孔。pJME与JE灭活疫苗免疫的BALB/c鼠在病毒攻击后21 d全部存活,pJE免疫鼠部分存活。pJME所致中和抗体滴度高于pJE。肌内注射组所致的最终中和抗体滴度等同于基因枪注射组。pJME免疫鼠产生血清抗体仅与JEV E蛋白发生反应。结论pJME与pJE在不同转染细胞内表达效率不同;转染剂量和蛋白表达呈一定剂量依赖性;pJME免疫效果优于pJE,基因枪注射所致免疫效率高于肌内注射;DNA免疫所致的中和抗体效价水平与保护性免疫效果呈一致性;DNA免疫鼠血清中和抗体含针对JEV E蛋白的抗JEV-E抗体。     

CEIA-LIF法在重型再生障碍性贫血患者干扰素-γ水平检测中的应用

目的检测再生障碍性贫血(再障)患者单个CD8+T细胞内干扰素-γ(IFN-γ)的绝对含量。方法用毛细管电泳免疫分析激光诱导荧光法对再障患者外周血单个CD8+T细胞内IFN-γ的水平进行定量检测。结果2例重型再障(SAA)患者免疫治疗前外周血单个CD8+T细胞内IFN-γ的水平分别为(151.53±28.92)z mol和(223.72±45.23)z mol,免疫治疗后相应的降为(45.57±13.90)z mol和(36.44±9.66)z mol,正常对照为(47.47±17.97)z mol。经统计分析,SAA患者治疗前、后及与正常对照比较差异均有统计学意义。结论毛细管电泳免疫分析激光诱导荧光法可以检测到外周血单个CD8+T细胞内IFN-γ的z mol水平,有望成为一种新的检测方法应用于临床。     

再生障碍性贫血红细胞免疫粘附活性和红细胞超氧化物歧化酶活性变化的观察

近年来,人们对红细胞免疫功能进行了较多的研究,但对再生障碍性贫血(AA)红细胞免疫功能的变化了解不多。超氧化物歧化酶(SOD)广泛存在于能利用氧的细胞内,它能催化超氧阴离子的歧化反应,从而有抗致癌和抗细胞损伤等作用。有关肿瘤患者的     

乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白结合蛋白基因的筛选及其与人胰腺CDK5RAP3的相互作用

我们通过细胞内的免疫共沉淀(CO-IP)技术验证乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(LHBs)LHBs与人胰腺CDK5RAP3之间的相互作用,为进一步研究HBV影响代谢的分子生物学机制提供一定的思路和研究方向.     

丙型肝炎病毒体外感染成年树鼩肝细胞的初步研究

探索原代培养树肝细胞对ＨＣＶ的易感性 ,旨在建立较为稳定实用的细胞感染模型。感染血清与细胞共同孵育后 ,并在不同时相点收集标本 ,用逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)、免疫组织化学、原位杂交分别检测细胞内或上清液中正负链ＲＮＡ ,细胞内ＨＣＶＮＳ3、ＮＳ5、ＣＰ10 3种抗原的表达情况 ,以及原位检测ＨＣＶ负链ＲＮＡ。结果表明 :( 1)接种感染血清后第 3～ 5ｄ ,即可在细胞内或培养上清液中间断检出ＨＣＶＲＮＡ ;( 2 )ＨＣＶＮＳ3、ＮＳ5、ＣＰ10可在感染细胞内表达 ,阳性物质位于胞浆中 ;( 3)原位杂交法证实细胞内存在负链ＲＮ…     

中毒性肝损伤的生化和细胞机制

药物或中毒性肝损伤的发病机制涉及免疫反应或细胞内应激导致的细胞死亡.免疫攻击主要通过Fas或穿孔素介导肝细胞凋亡;细胞内应激的转归依线粒体参与程度、激活或抑制Bcl-2蛋白家族和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(简称Caspases)的多因素之间平衡而不同,可致凋亡或坏死.     

核因子-κB对血管紧张素Ⅱ诱导THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达的影响及在胆固醇流出中的作用。方法:THP-1源性泡沫细胞分别给予10-5mol/LAngⅡ(AngⅡ组)、10μmol/LNF-κB特异性抑制剂TPCK预孵(TPCK组)。采用夹心酶联免疫分析法检测泡沫细胞内NF-κB的活化程度。通过透射电镜和荧光分光光度计、酶化学法,检测泡沫细胞内胆固醇含量的变化。利用闪烁计数法测量泡沫细胞内胆固醇流出率。用逆转录-聚合酶链反应法和免疫印迹法半定量分析泡沫细胞ABCA1的表达。结果:TPCK组NF-κB活化核易位则无明显高峰,维持在较低的水平。TPCK组泡沫细胞内胆固醇含量较AngⅡ组降低24.1%(P<0.05),胆固醇流出率较AngⅡ组显著升高41.1%(P<0.05),ABCA1mR-NA和蛋白表达较AngⅡ组升高30%和19%(P<0.05)。结论:AngⅡ可经NF-κB介导下调THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达,致泡沫细胞内胆固醇流出减少,增加泡沫细胞内胆固醇含量,加速动脉粥样硬化。     

寄生虫的核酸疫苗研究

所谓核酸疫苗，就是把外源基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒ＤＮＡ直接注射到动物体内，使外源基因在活体内表达，产生的抗原激活机体的免疫系统，引发免疫反应。核酸疫苗具有突出的优点：（１）能诱导全方位的免疫应答，优于亚单位疫苗和灭活疫苗，既可产生细胞免疫又可诱导体液免疫; (2) 安全性, 没有减毒疫苗和灭活疫苗可能引起的致病作用; (3) 能表达经修饰的天然抗原, 由于抗原在真核细胞内表达, 能形成正确的折叠和进行翻译后修饰; (4) 长效性, 质粒DNA 可在细胞内存在两个月, 且单次免疫即可获得免疫保护作用达两年; (5) 能构建成多价疫苗并进行多级免疫; (6) 生产简便、成本低廉、稳定性好且贮运方便。所以, 核酸疫苗已在细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病和肿瘤的预防和治疗中显示出巨大的潜力[1 ] , 部分感染性疾病的核酸疫苗已进入临床实验阶段[2 ]。核酸疫苗作为继灭活疫苗、减毒疫苗和基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗, 正在成为一个新的研究热点。本文将重点介绍核酸疫苗的作用机理、研究的基本策略及其在寄生虫病防治中的应用。     

钙通道阻滞剂对内分泌系统的影响

钙在内分泌系统中甚为重要,激素的合成、释放以及对靶组织的作用依赖于细胞内钙浓度的改变。许多体外实验已证实,当腺细胞内钙浓度下降时,激素的分泌将减少或增加。静息状态时细胞内游离钙的浓度为10~(-8)～10~(-7)M,兴奋时可增加10～100倍。细胞内游离钙浓度的增加部分来自细胞外,即通过一种“钙通道”将钙从细胞外转运入     

系统性红斑狼疮患者外周血中CD64与CD16的表达

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种由免疫复合物(IC)介导和由IC沉积所引起的多器官损害的一种自身免疫性疾病。在Ic的形成中以IgG型抗体为主，IgG的FC受体(FcγR)在IC的吞噬中起着关键作用。FcγR与IC结合后发生信号传导，使酪氨酸磷酸化、细胞内钙离子流动，释放一系列可溶性介质，包括炎症介质白三烯、前列腺素，以及细胞因子干扰素(IFN)-1、白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α等从而引起一系列炎症反应．导致SLE的发生。     

低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞来源的巨噬细胞脂质代谢的影响

目的:研究动脉粥样硬化过程中低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)对单核细胞来源的巨噬细胞内脂质含量的影响。方法:以佛波酯刺激分化的THP-1细胞作为单核细胞来源巨噬细胞模型。固定后的细胞以苏丹Ⅳ染色,观察细胞内脂质含量变化。通过胆固醇酶联法测定细胞内胆固醇含量。结果:与LDL-IC孵育能使单核细胞来源巨噬细胞内胆固醇堆积,呈现泡沫细胞的外观。细胞内胆固醇水平随着LDL-IC的浓度增加与作用时间的延长而升高。在4组平行对照实验中,LDL-IC组细胞内胆固醇水平明显高于阴性对照组、LDL组和IgG-IC组(P<0.01)。结论:LDL-IC能通过增加细胞内脂质而在动脉粥样硬化过程中发挥作用。     

早期肺癌患者细胞活性氧变化水平与免疫功能的相关性

目的探讨早期肺癌细胞内活性氧(ROS)变化水平对机体免疫功能的影响。方法利用激光扫描共聚焦显微镜法检测肺癌原代细胞中ROS的水平,根据ROS水平将其分为A、B、C 3组,同期采集上述3组肺癌患者术前外周血,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群、自然杀伤(NK)细胞百分比;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平,同法检测正常肺泡细胞中ROS水平、健康体检者免疫功能相关指标作为对照,并进行统计学分析。结果肺癌组ROS水平与对照组相比明显升高(P0.05);B组与A和C组相比免疫功能明显提高,且差异有统计学意义(P0.05)。结论肺癌细胞中ROS水平明显升高,机体免疫功能与肺癌细胞中ROS水平具有明显浓度依赖性。     

RNA干扰作为一种病毒性肝炎治疗手段的可能性（上）

事实上RNA干扰(RNAi)是存在于所有真核细胞中的一种进化一守衡机制。该程序是通过双链RNA(dsRNA)的存在被启动的，这种dsRNA在许多病毒基因组复制时短暂地形成，通常在非感染的细胞中缺无。因此，RNAi代表一种为了对抗细胞内病原体的免疫状态以原始形式的核苷酸产生序列特异性的基因表达沉默。     

甲状旁腺腺瘤在钙浓度不同时分泌的甲旁素及其它片段

对流经牛甲状旁腺的静脉血分析表明,完整的PTH及其C一端肽段的分泌随甲状旁腺的功能而变化,因此反映了细胞内PTH的降解及PTH分泌的调节机理。为此,作者观察钙浓度不同时对免疫反应性PTH(iPTH)释放的影响以及对功能亢进的     

幽门螺杆菌提取液诱导AGS细胞内活性氧类物质水平的变化

目的 探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与AGS细胞内活性氧类物质(ROS)的关系.方法 将Hp11638(CagA~+,VacA~+)菌株及其突变株Hp11638M(CagA~+,VacA~-)提取液与AGS细胞共同孵育,收集细胞及培养上清液.流式细胞术检测细胞内ROS水平,分光光度计550 nm处检测培养上清液中细胞色素C含量.结果 AGS细胞内ROS水平与2株Hp提取液呈浓度及时间依赖关系,经Hp11638提取液刺激的AGS细胞内ROS水平高于Hp11638M提取液.细胞色素C减少证实了这一结果 .结论 AGS细胞内ROS升高是Hp多种蛋白共同作用的结果 ,VacA蛋白参与了这一过程.