CD36功能肽段对小鼠实验性矽肺组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的观察CD36功能肽段YRVRYLAKENITQDPEDH(93-110)对小鼠实验性矽肺纤维化是否有阻抑作用。方法将小鼠按体重随机分为4组:生理盐水组、SiO2模型组、CD36功能肽段组[YRVRYLAKENITQDPEDH(93-110)]、CD36对照肽段组[TVDGVYKVFNGKDNISKV(208-225)]。采用暴露式气管内注入法染尘,分别于7、14、21 d处死动物,测定小鼠肺脏器系数和采用免疫组织化学染色法测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果在染尘后14 d、21 d时,小鼠肺脏器系数和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达明显低于SiO2模型组和CD36对照肽段组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD36功能肽段(93-110)对小鼠实验性矽肺纤维化具有明显的抑制作用。 更多还原     

RNA干扰CD36表达对潜在转化生长因子-β1活化和矽肺纤维化的抑制

目的 观察大鼠矽肺模型中RNA干扰CD36基因表达对潜在转化生长因子-β1(L-TGF-β1)的活化及矽肺纤维化的抑制作用.方法 将Wistar大鼠分为生理盐水组、SiO2模型组(10 mg SiO2)、CD36 shRNA表达的重组慢病毒(SiO2+Lv-shCD36)组和对照慢病毒(SiO2+Lv-shCD36-NC)组,每组24只.染尘后7、21、28 d处死动物,貂肺上皮细胞增殖抑制实验检测肺泡灌洗液(BALF)中转化生长因子-β1(TGF-β1)的活性;HE和VG染色观察肺组织病理变化;碱裂解法测定肺羟脯氨酸含量.结果 染尘7d时,SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺泡巨噬细胞CD36 mRNA的表达明显低于生理盐水组、SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).SiO2+Lv-shCD36组大鼠BALF中TGF-β1活化量和活化率均明显低于模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).染尘28 d时,SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺组织可见细胞性矽结节,而模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组大鼠肺组织可见纤维细胞性矽结节.染尘21d和28 d时,SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺羟脯氨酸含量明显低于SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠矽肺模型中通过RNA干扰CD36基因表达能够对L-TGF-β1的活化和矽肺纤维化具有一定的抑制作用.     

吡非尼酮对大鼠矽肺纤维化的抑制作用

目的 探讨吡非尼酮(PFD)对大鼠矽肺纤维化的抑制作用.方法 75只SD雄性大鼠,随机分成未处理对照组、生理盐水组、生理盐水+PFD组、SiO2组、SiO2+PFD组,每组15只,采用非暴露式气管内染尘法,SiO2组和SiO2+PFD组注入SiO2粉尘悬液(25 mg/ml),生理盐水组和生理盐水+PFD组注入等量生理盐水,染尘后第2天灌胃给予PFD(50 mg/kg),分别观察7、21、42 d后处死.HE、VG和Foot染色观察肺组织的病理形态学改变并进行病理分级,测定肺组织中羟脯氨酸(HYP)的含量.结果 大鼠肺组织病理观察显示,SiO2+PFD组肺组织纤维化程度比同期SiO2组明显减轻,胶原纤维形成缓慢,矽结节分级评分降低.第42天时,SiO2+PFD组大鼠肺组织HYP含量[(0.75±0.12)mg/g肺组织]比SiO2组[(1.19±0.17)mg/g肺组织]明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PFD能降低大鼠矽肺纤维化程度并减少肺组织中HYP的含量,对实验性大鼠矽肺纤维化具有抑制作用.     

RNA干扰CD36表达对大鼠矽肺组织内Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达的影响

为观察RNA干扰CD36基因表达对大鼠实验性矽肺组织内Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达是否有抑制作用,选取健康Wistar大鼠96只,随机分为4组,即生理盐水组、SiO2模型组(10 mg SiO2/大鼠)、SiO2+Lv-shCD36(CD36 shRNA表达的重组慢病毒)组和SiO2+Lv-shCD36-NC(对照慢病毒)组。染尘后7、21、28 d处死动物,应用免疫组织化学方法测定大鼠肺组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,并采用图像分析系统进行定量分析。SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺组织中Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白阳性着色弱于SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,SiO2+Lv-shCD36组大鼠Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白的平均积分光密度值低于SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,且差异有统计学意义(P<0.05)。提示RNA干扰CD36基因表达对大鼠实验性矽肺组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达具有明显抑制作用。 更多还原     

γ-干扰素对染石英尘大鼠肺纤维化的影响

目的　观察γ -干扰素 (IFN -γ)对染石英尘大鼠肺脏器系数及羟脯氨酸含量的影响 ,探讨γ -干扰素对实验性早期矽肺的防治作用。方法　一次性经气管给予雌性Wistar大鼠石英粉尘 2 0mg/只 ,染尘后第 2d开始每天给予γ -干扰素 (1× 10 5 IU/只 ) ,分别在 1个月和 2个月时处死动物。观察大鼠肺脏器系数、肺羟脯氨酸含量变化。结果　给予γ -干扰素 1个月及 2个月时 ,治疗组大鼠肺脏器系数与同期染尘对照组比较有所降低 ,但无显著性差异 ;而治疗组大鼠的肺羟脯氨酸含量均显著低于同期染尘对照组 (P <0 0 5)。结论　γ -干扰素可降低染石英尘大鼠肺羟脯氨酸含量 ,提示对矽肺纤维化具有一定的防治作用     

安可临对二氧化硅粉尘所致大鼠肺损伤的保护作用

目的探讨安可临对二氧化硅(SiO2)粉尘所致大鼠肺氧化损伤的保护作用。方法将30只雄性大鼠(体质量约为200g)随机分为阴性对照组、矽肺模型组和安可临治疗组(简称"治疗组"),每组10只。采用非暴露式气管内注入法染尘,矽肺模型组和治疗组每只大鼠注入1ml 50mg/ml SiO2混悬液,治疗组于染尘第2天开始每天灌胃给予Oncolyn进行干预。饲养28d后测定大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率,肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中的总蛋白含量、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量、羟脯氨酸(HYP)含量;观察肺脏病理形态学改变。结果治疗组肺巨噬细胞凋亡率高于对照组但低于模型组;BALF和肺组织匀浆中,模型组和治疗组MDA含量和HYP含量均高于阴性对照组,而T-AOC含量低于对照组,且模型组HYP含量高于治疗组,T-AOC含量低于治疗组(P<0.05);BALF中模型组和治疗组MDA含量比较,差异无统计学意义(P>0.05);而在肺组织匀浆中MDA含量模型组高于治疗组(P<0.05);病理形态学显示,治疗组比模型组肺脏纤维化程度较轻。结论安可临对于SiO2粉尘所致肺氧化损伤有一定的保护作用。     

血小板反应素-1的Ⅰ型重复序列功能肽段对小鼠肺纤维化的抑制作用

目的 观察血小板反应素-1的Ⅰ型重复序列(type Ⅰ)功能肽段对小鼠肺纤维化的抑制作用.方法 将小鼠随机分为6组,麻醉后采用暴露式气管内注入法给药,分别为对照组(生理盐水),模型组(1 mg/kg博莱霉素),type Ⅰ功能肽段低、高剂量组(1 mg/kg博莱霉素+100/200μgCSVTCG功能肽段),对照肽段低、高剂量组(1 mg/kg博莱霉素+100/200μgGDVTEN对照肽段).分别于不同处理后第7、14、21大处死动物,HE、VG染色进行肺组织病婵形态学观察,测定肺组织中羟脯氨酸含量.结果 不同处理后第14天type Ⅰ功能肽段低,高剂量组羟脯氨酸含量分别为(295.43±47.02)和(282.67±33.48)μg/g,与对照肽段低、高剂量组比较,羟脯氨酸含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).第21天type Ⅰ功能肽段低、高剂量组羟脯氨酸含量分别为(365.83±60.14)和(363.29±27.15)μg/g,与模型组、对照肽段低剂量组和高剂量组比较,羟脯氨酸含量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 type Ⅰ功能肽段对小鼠肺纤维化具有明显的抑制作用.     

两种矽肺造模方法比较

目的 比较两种矽肺造模方法的优劣,并探讨一次性气管滴注法造模的最佳时间。方法 口鼻暴露染尘小鼠20只,气管滴注染尘小鼠20只,分别于染尘后第7、14、21、28天处死;对照组小鼠5只,正常饲养28d处死。检测各时间节点小鼠肺湿重、脏器系数、肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,并观察肺组织病理改变。结果 口鼻暴露法染尘21、28d小鼠肺湿重及脏器系数,7、14、21、28d小鼠肺纤维化评分,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),染尘28d小鼠肺组织形成矽结节;气管滴注染尘后第14、21、28天小鼠肺湿重、脏器系数,第28天小鼠HYP含量,第7、14、21、28天小鼠肺纤维化评分,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),染尘后第21天形成多个矽结节,第28天矽结节融合成大片状。结论 暴露法染尘28d小鼠开始形成矽结节,滴注法染尘后第21天小鼠即可完成矽肺造模。     

大豆皂甙对矽肺纤维化大鼠肺组织细胞Fas/FasL系统表达的影响

[目的]探讨大豆的皂甙(soyasaponin,SS)对实验性大鼠矽肺纤维化模型中肺组织细胞Fas/FasL表达的影响. [方法]通过复制大鼠矽肺纤维化模型,观察各组大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、肺组织丙二醛(MDA)在染尘及SS干预后的含量变化.采用免疫组化法观察各组大鼠肺组织细胞Fas和FasL表达的改变. [结果]给予SS后,与对模型组相比血清SOD升高、MDA显著降低(P<0.05).SiO2组Fas蛋白表达为相应对照组的4.51和5.05倍.其阳性信号主要集中于支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞. [结论]Fas/FasL系统可能参与矽肺纤维化的发病过程,一定剂量的大豆皂甙可能通过降低氧化应激,从而缓解矽肺纤维化的进展.     

阿斯匹林预防性治疗实验性矽肺疗效研究

目的　探讨阿斯匹林预防性给药对实验性矽肺的疗效。方法　观察组大鼠染尘 [5 0mg/ (ml·只 ) ]后每次 2 0mg/ml的阿斯匹林溶液 1ml灌胃 ,每周 3次 ,给药 4周后测BALF中细胞总数、巨噬细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数、细胞内羟脯氨酸含量、血清铜蓝蛋白活性、全肺干重及胶原蛋白含量 ,取肺脏作组织切片 ,观察病理变化。结果　治疗组大鼠所有指标的测定值均显著低于染尘组。结论　阿斯匹林有抑制尘源性炎症和实验性矽肺的纤维化的作用。     

实验性矽肺模型大鼠外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞的变化及意义

[目的]研究实验性矽肺大鼠在染尘后病情发展不同阶段外周血CD4＋CD25＋T细胞和CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg细胞）的频率,初步探讨Treg细胞在矽肺发生发展中的可能作用。[方法]将40只健康雄性SD大鼠随机分为模型组和对照组,模型组24只,对照组16只。模型组以非暴露方式气管内一次性注入1mL石英粉尘悬液（40mg／mL）建立大鼠矽肺模型,对照组大鼠气管内一次性注入等容量的灭菌生理盐水。染尘后第7、14、21及28天分别处死6只模型组和4只对照组大鼠,用流式细胞术检测大鼠外周血CD4＋CD25＋细胞及Treg细胞的百分率。[结果]第7天,急性肺泡炎期间,模型组CD4＋CD25＋T细胞和Treg细胞较正常对照组频率明显降低（P〈0．05）;第14天,矽性肉芽肿形成期,模型组CD4＋CD25＋细胞和Treg细胞数量回升,接近正常水平;第21天,矽性肉芽肿增多期间,模型组CD4＋CD25＋T细胞和Treg细胞频率较正常对照组略高,但差异不具有统计学意义;第28天矽性肉芽肿增多并大量纤维化期间,模型组CD4＋CD25＋T细胞和Treg细胞频率明显增加,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）。[结论]Treg细胞可能在维持免疫耐受和矽肺的发生发展中发挥重要作用。     

维生素E对大鼠矽肺支气管肺灌洗液中几种磷脂含量的影响

本文报告了维生素E对大鼠矽肺支气管肺泡灌洗液中几种磷脂含量的影响。实验分为正常对照,石英及维生素E治疗组,疗程270天。结果表明,维生素E组肺灌洗液中总磷脂、二棕榈酰卵磷脂(DPPC)、磷脂酰甘油三酯(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)含量早期高于同期对照组,但又都低于同期石英组。维生素E组全肺胶原蛋白含量高于对照组,但均低于同期石英组。提示维生素E在抗脂质过氧化、保护生物膜及抑制胶原合成上起着一定的作用。     

实验性矽肺大鼠外周血NK及NKT细胞动态变化及意义

[目的]研究实验性矽肺模型大鼠在染尘后的不同时间点外周血中自然杀伤细胞（NK）及自然杀伤T细胞（NKT）数量的变化,并探讨NK及NKT细胞与矽肺的相关性及临床意义。[方法]将48只健康雄性SD大鼠随机分成模型组和对照组,每组24只。模型组采用非暴露方式气管内一次性染尘（注入40mg／mL二氧化硅悬液1mL）建立大鼠矽肺模型,对照组采用相同方式气管内注入等量灭菌生理盐水。分别于染尘后第1、8、15、23、30、37天时处死模型组和对照组大鼠各4只,采集外周血,用流式细胞术检测大鼠外周血中NK（CD3-／CD161＋）及NKT（CD3＋／CD161＋）细胞的百分率。[结果]模型组外周血NK细胞的水平在试验早期（第1天）开始上升,高于对照组（P〈0．05）,第23天达到高峰（P〈0．01）;之后有所下降,但依然高于对照组（P〈0．05）。NKT细胞百分率在早期明显下降,后期慢慢回升,但仍低干对照组（P〈0．05）。[结论]石英诱发了机体的固有性免疫应答．NK及NKT细胞参与了矽肺变化发展过程。     

矽结节银染色的形态学特点及其在矽肺组织病理学检查中的意义

目的观察矽结节在沃森-斯塔理银染色（Warthin—Starry，WS）下的形态学特点，对其在矽肺组织病理学检查中的意义进行初步探讨。方法收集矽肺尸检病例6例，结节病病例21例（其中尸检病例3例、活检病例18例）。对石蜡包埋组织标本的连续切片进行HE染色、WS银染色、鼠抗人CD68单克隆抗体免疫组织化学链酶卵白素过氧化物酶法染色、透射电镜（TEM）标本制作及观察、X线质谱分析（X—RSA）[对矽结节／肉芽肿细胞（指类上皮细胞、尘细胞、多核巨细胞）胞质内的尘粒进行观察和分析]。结果HE染色下，肉芽肿内尘粒的沉积程度如下：在细胞性矽结节为（＋＋或＋＋＋），在纤维性矽结节为（＋），在结节病结节为（-）；WS染色下，在2种形态的矽结节均为（＋＋＋），呈特征性的黑色结节状，在结节病结节为（＋／＋＋），经秩和检验，矽结节内尘粒的沉积程度明显高于结节病结节，差异有统计学意义（P〈0．01）。免疫组织化学显示，2种疾病的肉芽肿细胞CD68抗体标记均阳性，其阳性程度与细胞内尘粒的含量呈反比。TEM下结节病的尘粒较小，矽结节内的尘粒较大，电子密度较高；X—RSA显示，2种疾病尘粒的主要元素成分相同，均为硅。结论WS银染色法可以显示出矽结节内有大量尘粒，其染色效果明显优于HE染色方法，WS银染色法与TEM观察及X—RSA并用，可以观察到病理样本中的微小矽肺病变，对矽肺病变的可能性具有提示作用。     

细胞外信号调节激酶通路对二氧化硅活化的肺成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路对经SiO2活化的矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)条件上清刺激的人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖的影响.方法 将矽肺患者支气管肺泡灌洗液中的AM体外再次染尘,取其上清与HELF共同孵育,用特异性阻断剂PD98059进行干预,实验分为空白对照组、AM对照组、SiO2处理组、PD98059干预组,通过噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术法及免疫印迹(Western blot)法观察成纤维细胞细胞增殖活性及p-ERK1/2蛋白表达情况.结果　SiO2处理组及AM对照组细胞增殖的吸光度(A值)增高,分别是空白对照组的2.6和2.0倍,差异有统计学意义(P＜0.05).25和50 μmol/L PD98059组HELF细胞增殖的A值分别是SiO2处理组的72.1%和48.5%,差异有统计学意义(P＜0.05).经SiO2粉尘刺激的AM培养上清作用于HELF后,p-ERK1/2表达明显上调,15min时已有表达,30min时活化明显,表达最强(A值为0.4653±0.0265),60min后仍处于较高的状态而表达有所减弱.除15 min外,SiO2处理组各时间点ERK1/2的蛋白表达分别是同期AM对照组的1.25、1.23、1.25倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 加尘AM培养上清可能通过ERK1/2信号途径促进HELF的增殖及ERK1/2的活化,而参与矽肺的发生发展.     

矽肺肺泡巨噬细胞对人胚肺成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的体外研究

目的探讨矽肺患者的肺泡巨噬细胞(AM)是否通过影响肺成纤维细胞(FB)胶原的表达,参与矽肺纤维化的发生发展。方法收集矽肺患者AM,经SiO_2体外刺激18 h收集培养上清,与人胚肺FB共同孵育6、12、18、24、36、48、72 h,用~3H-脯氨酸掺入检测48 h胶原的合成与分泌,免疫细胞化学方法、Western blot方法检测各时间点Ⅰ型胶原表达。结果经SiO_2刺激矽肺患者AM培养上清,可使FB中Ⅰ型胶原的表达增高,实验组48 h细胞内、外3H-脯氨酸掺入值分别为1259.500±73.879、790.500±70.315,免疫细胞化学染色的积分光密度值为0.341±0.011,Western blot条带扫描灰度值为14.218±0.342,均明显高于空白对照组及AM对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论SiO_2可通过AM介导影响FB中Ⅰ型胶原表达,参与肺纤维化的形成。     

CD36 and proteoglycan-mediated pathways for (n-3) fatty acid enriched triglyceride-rich particle blood clearance in mouse models in vivo and in peritoneal macrophages in vitro

Because the mechanisms of (n-3) fatty acid-enriched triglyceride-rich particle [(n-3)-TGRP] uptake are not well characterized, we questioned whether (n-3)-TGRP are removed via "nonclassical" pathways, e.g., pathways other than an LDL receptor and/or involving apolipoprotein E (apoE). Chylomicron-sized model (n-3)-TGRP labeled with [3H]cholesteryl ether were injected into wild-type (WT) and CD36 knockout (CD36-/-) mice at low, nonsaturating and high, saturating doses. Blood clearance of (n-3)-TGRP was determined by calculating fractional catabolic rates. At saturating doses, blood clearance of (n-3)-TGRP was slower in CD36-/- mice relative to WT mice, suggesting that in part CD36 contributes to (n-3)-TGRP uptake. To further examine the potential nonclassical clearance pathways, peritoneal-elicited macrophages from WT and CD36-/- mice were incubated with (n-3)-TGRP in the presence of apoE, lactoferrin, and/or sodium chlorate. Cellular (n-3)-TGRP uptake was measured to test the roles of apoE-mediated pathways and/or proteoglycans. ApoE-mediated pathways compensated in part for defective (n-3)-TGRP uptake in CD36-/- cells. Lactoferrin decreased (n-3)-TGRP uptake in the presence of apoE. Inhibition of cell proteoglycan synthesis by chlorate reduced (n-3)-TGRP uptake in both groups of macrophages, and chlorate effects were independent of apoE. We conclude that although CD36 is involved, it is not the primary contributor to the blood clearance of (n-3)-TGRP. The removal of (n-3)-TGRP likely relies more on nonclassical pathways, such as proteoglycan-mediated pathways.     

Murine immunological and histological changes in response to chronic silica exposure

The relationship between immunological and histological changes was studied in mice exposed to silica dust over a period of 39 weeks. The response of these mice to Escherichia coli antigens given as an aerosol was suppressed in the spleen at all times tested, while in the mediastinal lymph nodes (MLN) an initial enhancement at 9 weeks was followed by suppression of responses at all subsequent times.The development of silica-induced lesions also was studied using histological methods. With polarized light, silica-laden aggregations of macrophages were observed in the lungs after 24, 33, 36, and 39 weeks. Using scanning electron microscopy, numerous macrophages were frequently present in respiratory airways of silica-exposed animals. Typical silicotic lesions were observed in lungs and adjacent lymph nodes after 39 weeks of exposure.     

Distribution patterns of leucocyte subpopulations expressing different cell markers in the cumulus-oocyte complexes of pregnant and pseudopregnant mice

The nature of leucocyte subpopulations expressing different cell markers around the cumulus-oocyte complex (COC) of pregnant and pseudopregnant mice was investigated in the present study. Immunolabelling for CD4, CD8, CD14, CD45 and CD163 and transmission electron microscopy were used to determine whether leucocytes differ between pregnant and pseudopregnant mice. Sexually mature female BALB/c mice (n = 36; 18 pregnant, 18 pseudopregnant) were stimulated to superovulate with pregnant mare's serum gonadotropin and human chorionic gonadotrophin, then mated with either fertile or vasectomised males. Postovulatory oocytes were collected after mating. The cumulus cell masses of the pregnant group contained spermatozoa between cells and were more variable than COCs of the pseudopregnant group. Streptavidin-biotin-peroxidase immunohistochemical labelling of the cell markers CD4, CD8, CD14, CD45 and CD163 showed that there were fewer leucocytes in the COCs of the pseudopregnant group compared with the pregnant group. Transmission electron microscopy revealed that often there were macrophage-like cells containing spermiophagic bodies between the cumulus cells. These observations suggest that, together with other cumulus cells and oviducal cells, these macrophage-like cells may be involved in removing unsuitable or excess spermatozoa and, therefore, in maintaining a suitable microenvironment for normal fertilisation.     

维生素E对实验性大鼠矽肺组织中几种磷脂含量的影响

本文报告了维生素E对大鼠矽肺组织中几种磷脂含量的影响。实验分为正常对照组、矽肺组及维生素E治疗组,疗程270天。结果表明治疗组肺组织总磷脂、二棕榈酰卵磷脂(简称DPPC)磷脂酰甘油三脂(简称PG)、磷脂酰乙醇胺(简称PE)含量均高于同期对照组,且早期增高明显,但又都低于同期矽肺组,治疗组脂质过氧化物也都高于对照组,但均低于同期矽肺组。本文还对实验结果做了讨论。