RNA干扰原理及其在肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是一种在动植物中广泛存在的、由双链RNA诱发的、同源mRNA特异性沉默的过程,包括小干扰RNA生成的起始阶段及靶mRNA降解的效应阶段。已成为分子生物学研究中最为活跃的热点之一;在肿瘤研究中,RNAi在抑制肿瘤抗凋亡基因、沉默癌基因、调控细胞周期、抗血管生成、增强放化疗敏感性及基因功能研究等有较广泛的应用。     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的应用价值

RNA干扰（RNAi）是一种在动植物中广泛存在的序列特异性转录后水平的基因沉默过程。它由双链DNA经核酸酶降解成21～23nt的小片段后，特定位点、特定序列的降解与之序列相应的mRNA。利用RNAi技术可作为一种基因敲除工具应用于多种疾病的治疗，尤其在肿瘤的基因治疗中有着广泛的应用前景和价值。     

RNA干扰及其抗病毒作用

RNA干扰 (RNAi)是一种新发现的通过 ds RNA介导的特异同源靶基因沉默途径。 RNAi主要包括两个步骤 :RNase 样核酸酶切割 ds RNA而生成 2 1- 2 3nt的 si RNA和 si RNA引导 RNA诱导的沉默复合体 (RISC)降解同源性靶基因 m RNA。在某些生物体中 RNAi具有放大效应。通过将 - 2 1nt si RNA导入哺乳动物细胞的 RNAi技术不仅可避免非特异干扰素反应 ,更重要的是还可介导序列特异的基因沉默。最近将 RNAi应用于许多病毒性疾病的治疗研究均取得了显著的基因沉默效果 ,预示 RNAi有望成为一种预防、治疗病毒性疾病的新手段。     

短发夹RNA及其在头颈肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是一种分子生物学上由双链RNA(dsRNA)诱发的特定基因沉默现象。随着该项技术的不断发展,以质粒、病毒为载体表达的短发夹RNA(shRNA)具有更强大的基因沉默作用,可使目的基因在细胞内稳定增殖并获得长效剔除效应。近年来,以shRNA为工具的RNAi技术开始在体内外各项实验中应用并取得突破,包括功能基因组学、药物靶点筛选、细胞信号转导通路分析及疾病治疗等,尤其在肿瘤领域显示出广阔的应用前景。     

RNA干扰技术的原理与应用

RNA干扰作用(RNA i)是通过双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默机制。RNA i主要是指dsRNA分子进入细胞内,特异性降解与之同源的mRNA,从而特异高效地抑制相应基因表达活性的现象。近年来,RNA i以其高特异性、高效性等显著优势已成为研究基因功能的新手段,在功能基因组学、基因表达调控机制研究等领域得到了广泛的应用。在此对RNA干扰技术的发展历程、作用机制、作用特点及应用前景予以综述。     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究现状

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是利用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),高效、特异性降解细胞内同源信使RNA(messenger RNA,mRNA),从而阻断特定基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型.1998年Fire等[1]首次应用RNAi技术将dsRNA正义链与反义链的混合物注入线虫体内,结果发现注入dsRNA比单独注入单链RNA引起的基因沉默要强得多,并可导致子一代同源基因的沉默.     

RNA干扰及其在药用植物代谢工程中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是把双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)导入某些生物和细胞而引起同源mRNA降解的现象,是一种转录后基因沉默机制。dsRNA在体内被Dicer二聚体切割成21～25bp的小干涉RNA(smallinterfering RNA,siRNA),然后在siRNA引导下,由RNA诱导沉默复合体(RN Ainduced silencing complex,RISC)降解靶mRNA。RNA干扰作为一种新型反义技术可以有效的抑制特异基因的表达,因此可用于对药用植物次生代谢产物的生物合成途径进行调控,达到调控天然产物生物合成的目的。现将RNAi机制研究的最新进展及RNAi在药用植物代谢工程方面的应用进行综述。     

RNA干扰在肿瘤治疗中的靶点研究

RNA干扰是一种转录后基因沉默机制.通过RNA干扰技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,进而为恶性肿瘤的治疗提供一种崭新的手段.本文就RNA干扰的机制、作用靶标及相关的临床应用做一综述.     

RNA interference and its current application in mammals

Objective The aim of this review was to assess RNA interference (RNAi) and its possibility as a potential and powerful tool to develop highly specific double-stranded RNA (dsRNA) or small interfering RNA (siRNA) based gene-silencing therapeutics. Data sources The data used in this review were obtained from the current RNAi-related research reports. Study selection dsRNA-mediated RNAi has recently emerged as a powerful reverse genetic tool to silence gene expression in multiple organisms. The discovery that synthetic duplexes of 21 nucleotides siRNAs trigger gene-specific silencing in mammalian cells has further expanded the utility of RNAi in to the mammalian system. Data extraction The currently published papers reporting the discovery and mechanism of RNAi phenomena and application of RNAi on gene function in mammalian cells were included. Data synthesis Since the recent development of RNAi technology in the mammalian system, investigators have used RNAi to elucidate gene function, and to develop gene-based therapeutics by delivery exogenous siRNA or siRNA expressing vector. The general and sequence-specific inhibitory effects of RNAi that will be selective, long-term, and systemic to modulate gene targets mentioned in similar reports have caused much concern about its effectiveness in mammals and its eventual use as a therapeutic mordality. Conclusions It is certain that the ability of RNAi in mammals to silence specific genes, either when transfected directly as siRNAs or when generated from DNA vectors, will undoubtedly accelerate the study of gene function and might also be used as a potentially useful method to develop highly genespecific therapeutic methods. It is also expected that RNAi might one day be used to treat human diseases.     

RNA干扰抑制c-myc基因表达对D341细胞增殖的影响

目的探讨应用小干扰RNA（siRNA）技术抑制髓母细胞瘤D341细胞株的c-myc基因对D341细胞的生长、细胞周期及凋亡的变化。方法制备特异性针对c-myc基因的siRNA,转染D341细胞,实时定量RT-PCR、Western blot检测c-myc基因表达情况,流式细胞仪进行细胞周期及凋亡检测。结果siRNA转染D341细胞后,c-myc基因表达在转染后24h抑制效率最高,c-myc蛋白在48h抑制效率最高,并随siRNA浓度的增大,沉默c-myc基因效率增高。RNA干扰抑制D341细胞c-myc基因后,细胞生长停滞于G1期。结论针对c-myc基因的siRNA对D341细胞c-mycmRNA及蛋白有明显抑制作用,细胞生长受到抑制,有望成为髓母细胞瘤的新的治疗途径。     

RNA干扰技术及其在神经病学中的研究进展

RNA干扰(RNAi)是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象,其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。微RNA(miRNA)在哺乳动物的大脑的不同区域具有不同的作用,并且RNAi在大脑的发育过程中具有重要的作用,miRNA具有调控多种目的基因表达的功能。由于神经元一旦受到损害就很难恢复正常的特性,目前RNAi被认为是治疗和改善神经变性疾病最有潜力的的技术。目前治疗性RNAi已运用于多种神经退行性疾病的体内和体外研究当中(如遗传肌张力障碍、阿尔茨海默病等),但其运用于临床治疗仍需进一步的研究。     

RNA干扰与呼吸系统疾病的治疗

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。RNAi作为一种强大的基因沉默技术,具有高效性和高特异性等特点,被广泛应用于生物医学等各个研究领域,其在呼吸系统疾病的治疗研究方面也取得了很多突破性的进展,广泛用于病毒感染、肺癌、哮喘等疾病的分子生物学机制的研究与治疗。本文对RNAi技术的发现、作用机制及在呼吸系统疾病治疗上的应用进行了综述。     

RNA干扰技术及其应用

RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默。在此过程中,与双链RNA有同源序列的信使RNA被降解,从而抑制了该基因的表达。从发现RNAi现象以来,对RNAi的了解已取得重大进展。包括从最初的,对其干扰模式的预测,到如今,能够精确了解RNAi在多个物种中调节基因表达的作用机制及多面性。RNAi技术也已经在很多领域成为研究基因功能的重要工具。     

RNA干扰沉默S100A2和E-cadherin基因后对胃癌细胞增殖和侵袭力的影响

 目的研究RNA干扰沉默S100A2和E-cadherin基因后对胃癌细胞增殖和侵袭力的影响。方法采用RNA干扰技术,在E-cadherin和S100A2表达阳性的MNK45细胞同时沉默E-cadherin和S100A2基因表达,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测干涉效果,MTT 和Transwell检测细胞生长和侵袭力的变化。结果小干扰RNA明显抑制MKN45 细胞E-cadherin和S100A2 的表达;干涉第11天,E-cadherin和S100A2蛋白表达下降,细胞生长速度和细胞侵袭力明显增加。结论E-cadherin和S100A2蛋白具有抑制细胞增殖和侵袭的功能,可作为抑癌因子参与胃癌的发生与转移。     

RNA干扰中小干扰RNA的设计原则

RNA干扰(RNAi)是由内源性或外源性双链RNA介导的一种高度保守的序列特异性基因表达调控机制,主要通过小干扰RNA(siRNA)和微小RNA发挥作用。由于其具有高效、高特异性、作用稳定等特点,已被广泛地应用于基础实验和疾病治疗的研究中。在进行siRNA介导的RNAi实验时,如何设计高效、特异性抑制靶mRNA的siRNA是实验成败的关键。     

DPC4 RNAi慢病毒载体的构建及其基因沉默效应

目的：构建DPC4基因tLNA干扰慢病毒载体及其基因沉默效应。方法：针对DPC4基因序列,利用网站设计程序按照RNA干扰序列设计原则,设计多个RNA干扰靶点序列,根据设计经验和设计软件进行评估测定,选择最佳的动力学参数靶点进入后续实验流程;生工生物合成含干扰序列的双链DNA oligo,其两端含酶切位点粘端．直接连入酶切后的IKNA干扰载体上。将连接好的产物转入制备好的细菌感受态细胞,对长出的克隆进行酶切鉴定,挑选出阳性克隆测序,进行测序比对后,鉴定阳性克隆即为构建成功的目的基因1KNA干扰慢病毒载体。结果：经过Western blot方法检测和测序证实,成功构建了DPC4shRNA慢病毒栽体LVshSmad4,并成功制备了DPC4 shRNA慢病毒,3株病毒感染细胞后均具有有效的基因沉默,其中SHI序列最为显著。结论：DPC4基因RNA干扰靶点的成功设计和RNA干扰靶点慢病毒载体制备,而且具有显著的基因沉默效果。