用聚合酶链反应检测急性非淋巴细胞白血病微量残留细胞

目的：探讨用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测急性非淋巴细胞白血病微小残留病的意义。方法：利用ＰＣＲ扩增降钙素（ＣＴ）基因５′端第４个甲基化位点附近的ＤＮＡ序列，所有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的限制性内切酶消化，检测２５例初治或复发的急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ），１０例完全缓解期患者。细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，正常对照组１０例。结果：２５例ＡＮＬＬ中，１７例阳性（６４％），１０例缓解期骨髓标本，４例可检测到残留的白血病克隆，有１例在复发前２个月出现持续的残留白血病克隆。结论：用ＰＣＲ方法检测ＣＴ基因甲基化是非常有潜力的检测ＡＮＬＬＭＲＤ的方法，对预测复发有重要临床意义。     

聚合酶链反应微量残留病检测在造血干细胞移植中的作用

微量残留病(MRD)检测在造血干细胞移植中具有重要的作用。本文对几种常见的白血病移植治疗采用PCR检测MRD的临床研究近况作一综述。     

急性淋巴细胞性白血病残留细胞的检测及其意义

用聚合酶链式反应检测了１２例急性淋巴细胞性白血病患者完全缓解期骨髓标本；５例有基因重排，临床随访均在２～３月内复发；７例未发现基因重排，其中２例分别在缓解后３月、８月复发，可能为白血病基因重排发生了变异，其余５例未复发。提示检测白血病残留细胞有助于提前预测白血病的复发，指导治疗。     

用聚合酶链反应技术检测急性髓细胞白血病

应用一对引物通过逆转录酶／聚合酶链反应扩增１７例急性髓细胞白血病患的ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合转录本，１２例初治患中一致性扩增到预期的２００ｂｐ大小的片段，其中７例证实有典型ｔ（８；２１）易其变异型。扩增片段大小及其限制性内切酶谱提示ｔ（８；２１）易位的ＡＭＬ１和ＥＴＯ基因断裂点局限于一个内含子。５例Ｍ２已完全缓解２－３８个月仍检测到相同的ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合ｍＲＮＡ，提示体内仍残存少量ｔ（８；２１     

小儿急性淋巴细胞白血病微量残留病T细胞受体δ基因重排的PCR检测

白血病是造血系统的恶性肿瘤,其中急性淋巴细胞白血病(ＡＬＬ)是儿童最常见的白血病。患儿经初治后,体内仍有少量的残留白血病细胞(108-1010)称微量残留病(ｍｉｎｉｍａｌｒｅｓｉｄｕａｌｄｉｓｅａｓｅ,ＭＲＤ)。这是白血病复发的主要根源,大多数出现于复发期的肿瘤细胞,且与初诊时的肿瘤细胞来源同一克隆。目前普遍认为提高白血病治愈率的关键之一是要彻底地根除ＭＲＤ,但ＭＲＤ用一般形态学检测很难发现。应用聚合酶链反应(ＰＣＲ)技术检测急性淋巴细胞性白血病Ｔ细胞受体(ＴＣＲ)克隆性基因重排的研究已有不少报道[1,2]。ＴＣＲ由四条…     

PCR检测17例急性早幼粒细胞白血病缓解后微量残留白血病

采用逆转录聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病缓解患者的残留早幼粒白血病－α维甲酸受体融合基因（ＰＭＬ－ＲＡＲα）。缓解期在３年之内的１０例中９例阳性，１例阴性，缓解期在３年以上者７例，４例阴性，３例阳性，两组阳性率相差显著，Ｐ＜０．０５。在ＰＭＬ－ＲＡＲα表达阳性的患者中已有３例复发，１例复发趋势，５例ＰＭＬ－ＲＡＲα阴性患者已随访１１±４月均无复发迹象。对阴性患者放松治疗，对阳性患者继续治疗，４例原已停止治疗的患者结果阳性，继续治疗后目前随访１２个月（中数），尚无复发证据。     

逆转录酶／聚合酶链反应检测早幼粒细胞白血病PML－RARα融合基因对预后和微量残留白血病细胞检测的意义

应用逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）技术检测９７例中国人急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ），其中包括３５例初发期患者，４４例缓解期患者，以及１８例进行动态观察的患者，发现二种ＰＭＬ－ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ异构体（Ｌ型或Ｓ型）存在于５２例初发期ＡＰＬ中，其早期死亡率和复发率Ｓ型高于Ｌ型，两者预后差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０２５）。６２例缓解期患者中有１１例ＰＣＲ阳性，其中５例于检测后１～６个月内复发，６例经强化治疗后仍处缓解期，其中１例化疗２疗程后ＰＣＲ转阴，提示ＲＴ／ＰＣＲ确实为检测微量残留白血病细胞的一项极灵敏方法，可作为预报ＡＰＬ复发的一项指标。     

急性淋巴细胞白血病基因重排及其用于微量残留白血病检测的…

应用多种分子生物学技术，对急性淋巴细胞白血病患儿６５例进行抗原受体基因重和肿瘤融合基因转录本的研究，发现９６％的患者存在至少一种上述基因标记，对其中２３例具有连续３次以上送检骨髓标本的患者进行微量残留病检测。     

急性淋巴细胞白血病基因重排及其用于微量残留白血病检测的研究

应用多种分子生物学技术，对急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患儿６５例进行抗原受体（ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＩｇＨ）基因重排和肿瘤融合基因（ＳＩＬ－ＴＡＬ－１、ｂｃｒ／ａｂｌ、ＨＲＸ）转录本的研究，发现９６％的患者存在至少一种上述基因标记，对其中２３例具有连续３次以上送检骨髓标本的患者进行微量残留病（ＭＲＤ）检测。杂交试验显示，ＭＲＤ可检出的敏感度在以肿瘤融合基因为标记的患者为１０－４～１０－６，在以抗原受体Ｖ－（Ｄ）－Ｊ结合部顺序为探针的患者为１０－２～１０－５。文中就选用多种基因标记，对ＡＬＬ患儿进行有步骤、多方位筛查特异标记基因，并对同一患儿采用不同基因标记作ＭＲＤ跟踪检测的方法学评价和临床意义予以讨论。     

聚合酶链反应微量残留病检测在造血干细胞移植中的作用

微量残留病(MRD)检测在造血干细胞移植中具有重要的作用。本文对几种常见的白血病移植治疗采用PCR检测MRD的临床研究近况作一综述。     

以LacZ基因标记的大鼠微量残留白血病细胞的分布研究

目的 了解微量残留白血病（ＭＲＬ）在体内的分布状态。方法 利用携带外源性标志基因ＬａｃＺ的白血病细胞株ＬＴ１２ｎｌ建立了ＢＮ大鼠ＭＲＬ模型。应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及巢式ＰＣＲ方法,结合Ｘ－ｇａｌ染色法,细胞形态学及病理形态学方法检测ＢＮ大鼠ＭＲＬ阶段白血病细胞中的特异性标志基因ＬａｃＺ。     

四色流式细胞术检测B细胞急性淋巴细胞白血病微量残留病的临床意义

目的探讨利用四色流式细胞术（FCM）检测B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）微量残留病（MRD）的临床意义.方法采用以抗CD34/CD10/CD45/CD19为主的两种四色荧光标记抗体组合,对98例B-ALL患者的671份骨髓标本和1份脑脊液标本进行FCM多参数MRD检测,98例随访患者中26例无发病初期的免疫分型资料.结果FCM检测显示白血病细胞＜0.0001（MRD阴性）的标本为579份;白血病细胞＞0.0001的样本数为93份,其中64份骨髓标本白血病细胞比例＜0.05,29份标本白血病细胞比例＞0.05,我们将其归为复发病例（包括治疗后未达CR的病例）.共20例患者复发,其中19例血液学复发,1例中枢神经系统复发.15例血液学复发者在复发前7～17周发现MRD阳性,包括发病时免疫分型资料不明者6例,MRD水平均＞0.0001;2例分别在复发前3个月和9个月检测MRD为阴性,此后中断检测.在诱导治疗结束和治疗3个月时,如果MRD水平＞0.0001,复发率为50%（12例中有6例复发）,而MRD阴性组复发率为7.5%（40例中有3例复发）（P=0.000）.结论利用FCM进行MRD跟踪监测可预测复发,治疗初期患者MRD＞0.0001,复发的危险性较高.而在掌握了正常B祖细胞抗原表达规律的基础上,可不完全依赖于发病时的免疫表型资料.     

急性淋巴细胞白血病微小残留病的检测及其临床意义

急性淋巴细胞白血病(ALL)完全缓解率已明显提高,缓解期体内残留病灶(MRD)是导致复发而成为影响患者长期生存的主要因素。动态、定量监测ALL缓解期MDR水平具有独立的预后价值,有利于个体化治疗。本文复习了有关ALLMRD检测技术的进展,其中PCR检测白血病特异的DNA/RNA序列,如融合基因和IgH、TCR基因重排,敏感性10~(-4)～10~(-6);流式细胞术分析白血病细胞免疫表型敏感性10~(-4)～10~(-5)。MRD与预后的相关性得到一致肯定,但究竟何时何水平MRD临床价值最大尚需进一步研究确定。     

用聚合酶链反应技术检测急性髓细胞白血病AML_1－ETO融合转录产物

应用一对引物（ＥＴＯＵ＿１／ＥＴＯＤ＿１）通过逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）扩增１７例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者的ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合转录本，１２例初治患者（Ｍ＿１１１例、Ｍ＿４１例）中一致性扩增到预期的２００ｂｐ大小的片段，其中７例证实有典型ｔ（８；２１）或其变异型。扩增片段大小及其限制性内切醇谱提示ｔ（８；２１）易位的ＡＭＬ＿１和ＥＴＯ基因断裂点局限于一个内含子。５例Ｍ＿２已完全经解２～３８个月仍检测到相同的ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合ｍＲＮＡ，提示体内仍残存少量ｔ（８；２１）异常克隆。ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合转录本的检测是诊断和监测ｔ（８；２１）ＡＭＬ的有力手段。     

定量分析儿童急性淋巴细胞白血病脑脊液微小残留病

目的：总结急性淋巴细胞白血病(急淋)患儿脑脊液中微小残留病(minimal residual dis-ease，MRD)的变化及其临床意义。方法：确诊为急淋患儿18例，采用一步煮沸法提取脑脊液白细胞DNA，采用常规酚-氯仿抽提法提取骨髓DNA。追踪并采用改良的极限稀释法定量检测MRD值。分析初治病例在骨髓诱导达到缓解时脑脊液MRD值与预后的关系。结果：诱导缓解的18例中，9例脑脊液MRD阳性，9例阴性。经随访MRD阳性者，有5例发生中枢神经系统白血病(central nervous system leukemia，CNSL)；而阴性者无l例发生CNSL。结论：急淋完全缓解时，脑脊液MRD高水平者发生CNSL的危险性较高，故追踪检测脑脊液MRD对临床CNSL的预防、治疗有一定的指导意义。     

荧光聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML／RARα的临床价值

实时定量逆转录聚合酶链反应是目前最精确地检测急性白血病微小残留病的方法，对急性早幼粒细胞PML／RARα融合基因表达量的测定及动态变化监测，取得PML／RARα融合基因的表达拷贝数，对临床治疗、预防复发、延长患者生存期，最终治愈白血病具有重要的指导意义。     

PCR检测急性淋巴细胞白血病脑脊液中白血病细胞

白血病细胞可侵脑脑组织和脑膜，继发中枢神经系统白血病。涂片染色法检测脑脊液中白血病细胞缺乏敏感性。近年来聚合链反应技术已成功地用于检测急性淋巴细胞白血病残留白血病细胞。