人成骨细胞株HOS TE85致瘤性转化的研究

目的建立人成骨细胞株HOS TE85致瘤性转化的模型, 作为骨肉瘤癌变过程细胞分子生物学研究的模型.方法通过克隆形成率实验确定N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)对HOS TE85细胞转化浓度后,以MNNG作启动剂,佛波酯(12-0-Te-tradecanoyl phorbol 13-acetate, TPA)作促进剂对其进行转化,66 d后通过细胞形态、软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞转化程度.结果经MNNG和TPA协同处理HOS TE85细胞66 d后,细胞中出现形态异常的转化灶,转化灶细胞失去接触抑制;转化细胞凝集性增强;软琼脂克隆形成率明显增加;转化细胞在裸鼠皮下成瘤,病理组织学证实为低分化骨肉瘤.结论模拟人体细胞发生恶性转化的过程,建立了HOS TE85的恶性转化模型.     

人永生化成骨细胞hFOB1.19恶性转化的研究

目的 建立人胚永生化成骨细胞系(hFOB1.19)的恶性转化模型, 作为骨肉瘤癌变过程细胞分子生物学研究的模型.方法 通过克隆形成率实验确定N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)对hFOB1.19细胞转化浓度后,以MNNG作启动剂,佛波酯(12-0-Te-tradecanoyl phorbol 13-acetate, TPA)作促进剂对hFOB1.19细胞进行转化,90 d后通过细胞形态、DNA含量分析、软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度.结果 经MNNG和TPA协同处理hFOB1.19细胞90 d后,细胞中出现形态异常的转化灶,转化灶细胞失去接触抑制; 高倍体细胞数,转化组(81.08%) 高于对照组(55.03%);软琼脂克隆形成率明显增加;转化细胞在裸鼠皮下成瘤,病理组织学证实为低分化骨肉瘤.结论 模拟人体细胞发生恶性转化的过程,建立了人胚永生化成骨细胞系的恶性转化模型.     

组蛋白乙酰化修饰对IEC-6恶性转化细胞细胞周期和p53、p21WAF1基因表达的调控

目的 分析和探讨IEC-6恶性转化细胞不同时期组蛋白乙酰化修饰对肿瘤发生相关基因表达的影响.方法 采用我们已建立的3个转化期(化学致癌剂MNNG和诱导剂PMA共同作用6、12、24次) 的IEC-6转化细胞进行培养,提取不同转化时期的IEC-6转化细胞的细胞核蛋白,采用免疫印迹检测H3乙酰化水平;并用ChIP及RT-PCR检测组蛋白H3乙酰化对p21WAF1表达的影响.结果 24次IEC-6恶性转化细胞组蛋白H3乙酰化水平高于6次IEC-6转化细胞,而组蛋白H3去乙酰化水平低于6次IEC-6转化细胞;同时发现p21WAF1的启动子区PCR产物减少.在6、12次IEC-6转化细胞中均有较弱的p53、p21WAF1表达;在24次IEC-6恶性转化细胞中仍可检测到较弱的p53表达,但p21WAF1表达缺如.结论 IEC-6恶性转化细胞过程中,组蛋白H3乙酰化水平增高,导致p21WAF1基因表达受抑,近而可能影响转化细胞的细胞周期.     

人转化生长因子β1对肿瘤细胞恶性表型的抑制作用

探讨人转化生长因子β１对肿瘤细胞的影响。方法通过构建人转化生长因子β１（ｈＴＧＦβ１）基因表达载体，利用基因转染技术，将基因导入ＨＬ－６０细胞中，经Ｇ４１８选择获得可稳定表达人转化生长因子β１的ＨＬ－６０细胞，对该细胞进行了一系列恶性表型变化的研究。结果表达人转化生长因子β１ｍＲＮＡ的ＨＬ－６０细胞其生长速度下降，在软琼脂中集落形成能力降低，在裸鼠体内的成瘤性下降，与对照组比较，转染组裸鼠没有发生肝转移。结论ｈＴＧＦβ１对肿瘤细胞ＨＬ－６０的恶性表型具有明显的抑制作用。     

从形态及功能研究MNNG诱导GES-1永生化细胞的恶性转化

目的 探讨甲基硝基亚硝基胍(methyl nitro nitrosoguanidine,MNNG)作用于GES-1永生化细胞所发生的恶性转化.方法 MNNG作用于GES-1永生化细胞24 h后,通过显微镜和软琼脂集落形成实验观察细胞形态学、染色体变化和集落形成情况.统计采用t检验.结果 经MNNG处理的GES-1细胞(命名为MC)核增大,畸形,核染色质变粗,核仁肥大,核分裂.染色体可见双倍及多倍体,染色体断裂.克隆形成实验可见细胞接触抑制消失克隆形成,t=5.139,P＜0.05.结论 经MNNG诱导的GES -1细胞的生长特性改变,呈现肿瘤细胞的形态学及生长特征.     

c－Ha－ras反义DNA及其衍生物对转化细胞恶性表型的逆转

应用突变ｃ－Ｈａ－ｒａｓ质粒ＤＮＡ转化小鼠Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２纤维细胞，发现细胞获得恶性表型。本文合成了反义ＤＮＡ（ｏｌｉｇｏ），它与ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因前４个密码子及其上游正链序列互补；并发现ｏｌｉｇｏ可有效地抑制恶性转化细胞内ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因表达、细胞在软琼脂中集落形成以及细胞在裸鼠体内的致瘤作用。补骨脂素修饰ｏｌｉｇｏ后，其生物学活性增强。     

γ-氨基丁酸对肝癌细胞株HepG-2恶性表型的影响

目的：研究γ-氨基丁酸（GABA）对肝癌细胞株HepG-2增殖能力及恶性表型的影响。方法：用不同浓度的GABA与人肝癌细胞HepG-2作用后,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长速度,并测定其倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期的改变,软琼脂细胞集落形式实验和裸鼠成瘤实验检测细胞的恶性表型。结果：MTT实验结果表明实验组细胞的生长速度明显快于对照组细胞的生长速度,且呈剂量依赖性,其细胞周期分布也发生改变,G1期细胞减少,S期细胞增多;对照组细胞和各浓度组细胞的平均倍增时间分别为39.0,30.6,30.0,27.3,26.6和38.2 h,软琼脂细胞集落形成率依次为3.2%,4.2%,5.4%,6.6%,6.5%,3.5%,Balb/c裸鼠成瘤实验显示,对照组和实验组的肿瘤平均质量依次为0.285和1.382 g,其差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：GABA能促进细胞增殖,并引起细胞恶化改变。     

冬凌草甲素诱导结直肠癌细胞SW-1116凋亡与衰老的体内外实验研究

目的探讨冬凌草甲素（Ori）在体内外抑制结直肠癌细胞的作用及机制。方法应用不同浓度Ori（0、6.25、12.5、25、50和100μmol/L）处理结直肠癌细胞SW-1116及其建立的裸鼠移植瘤模型,CCK-8法检测Ori对SW-1116细胞的抗增殖效应;流式细胞仪检测Ori处理SW-1116后细胞周期的改变及细胞的凋亡;β-半乳糖苷酶染色检测Ori诱导SW-1116细胞衰老;软琼脂细胞克隆形成实验检测Ori对SW-1116细胞克隆形成的影响;观察Ori对SW-1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。结果 Ori可诱导结直肠癌细胞SW-1116生长抑制、细胞周期阻滞、凋亡、衰老和克隆形成能力。Ori还显著抑制SW-1116裸鼠移植瘤的生长,随着Ori剂量的增加裸鼠移植瘤中的细胞凋亡与衰老增加。结论体内外实验研究表明,Ori具有抗结直肠癌的活性,可能成为治疗结直肠癌的一个新的候选化合物。     

EB病毒基因诱导细胞恶性转化和移植性裸鼠瘤的建立课题负责人陈剑经

ＥＢ病毒基因诱导细胞恶性转化和移植性裸鼠瘤的建立课题负责人陈剑经本研究建立和应用病毒基因片段转染、细胞恶性转化、裸鼠成瘤试验和基因片段分子杂交等体内－体外相结全的实验系统。建立了ＲＮＡ分子探针（ｒｉｂｏｐｒｏｂｅ）技术系统。首次报道ＥＢＶ－Ｗ（ＹＨ）...     

hTERT基因永生化人毛乳头细胞系的转化特征

目的 探讨hTERT基因永生化人毛乳头细胞系是否具有转化特征.方法 采用脂质体转染法,将hTERT基因导入体外培养的正常人毛乳头细胞,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养.应用RT-PCR 法检测 hTERT mRNA 的表达.采用细胞形态学观察、染色体核型分析、软琼脂克隆形成实验和裸鼠致瘤实验分析转染细胞是否具有转化特征.结果 转染后获得1个阳性细胞克隆,扩大培养后细胞生长良好,现已连续传至50代.检测证实转染细胞稳定表达hTERT mRNA,细胞形态与未转染细胞基本相同,染色体核型正常,在软琼脂内不能生长,无裸鼠致瘤性.结论 hTERT基因永生化人毛乳头细胞系基本上是正常细胞而无明显转化特征.     

Malignant transformation and abnormal expression of eukaryotic initiation factor in bronchial epithelial cells induced by cadmium chloride

Objective To analyze the relationship between malignant transformation and abnormal expression of eukaryotic initiation factor 3 （eIF3 p36） in human bronchial epithelial （16HBE） cells induced by cadmium chloride （CdCl2）. Methods 16HBE cells were treated several times with different concentrations of CdCl2. Tumorigenic potential of transformed cells was identified by assays for anchorage-independent growth in soft agar and for tumorigenicity in nude mice after the 35th passage. Total RNA was isolated from 16HBE cells induced by CdC12, including non-transformed, Cd-transformed, and Cd-tumorigenic cell lines. Special primers for eIF3 p36 were designed and the expression of eIF3 mRNA in different cell lines was detected with fluorescent quantitative-polymerase chain reaction technique （FQ-PCR）. Results The 35th passage of 16HBE cells transformed by CdCl2 exhibited overlapping growth. Compared with the non-transformed cells, colonies of transformed cell lines in soft agar showed statistically significant increases and dose-dependent effects （P〈0.01）. All Cd-induced transformed cell lines formed rumors in nude mice within 2 weeks of inoculation, but none of the mice injected with non-transformed cells showed tumors even after 3 weeks. All tumors were pathologically identified as poorly differentiated squamous cell carcinoma. The eIF3 p36 genes in different stages of 16HBE cells transformed by CdCl2 were elevated as compared with the non-transformed control （P〈0.01）, and the eIF3 expression increased with the degree of cell malignancy. Conclusion CdCl2 is capable of inducing morphological transformation in 16HBE cells and transformed cells are potentially tumorigenic. Over-expression of eIF3 p36 is positively correlated with malignant transformation of 16HBE cells induced by CdCl2 and may be one of the molecular mechanisms potentially responsible for carcinogenesis due to Cd.     

人鼻咽癌DNA对Rat-Ⅰ细胞株的转化活性及其基因表达的研究

为了解EB病毒基因组阳性人鼻咽癌DNA在转染正常细胞后可能发生的生物学作用,作者将人鼻咽癌活检组织的DNA(EB病毒基因组阳性),用磷酸钙方法转染正常Rat-Ⅰ细胞,使其恶转;用软琼脂培养的转化细胞能贴壁生长,并形成克隆;转化细胞易与PHA发生凝集;克隆接种裸鼠形成纤维肉瘤;转化细胞和裸鼠肿瘤组织用抗C_3补体免疫荧光法检测EBNA呈阳性;染色体原位杂交显示在某些细胞中期染色体上有银粒出现。     

Alterations of FHIT gene and P16 gene in nickel transformed human bronchial epithelial cells

INTRODUCTION Nickel is a widely distributed occupational and environmental pollutant. Epidemiological studies demonstrated that the incidence of respiratory tract cancer is correlated with worksite exposure to nickel. Nickel is also a potent carcinogen in laboratory animals. The International Agency for Research on Cancer (IARC) has classified nickel compounds as confirmed human carcinogens[1]. However, the mechanism of nickel carcinogenesis remains unknown. Insoluble nickel compounds…     

人肺癌DNA转化活性的初步研究

本文用磷酸钙沉淀技术,以人肺鳞癌组织高分子量 DNA 进行了小鼠成纤维细胞NIH3T3的转化实验。得到的转化细胞能在软琼脂板上生长;可诱导 NIH3T3细胞二轮转化;在裸鼠体内有明显的致瘤性;其 DNA 经酶切后与人 ALU 重复序列探针杂交呈阳性反应;并证明有 c～myc 基因扩增及有 v-fos 同源宁列的存在。     

细胞培养中的癌变原理研究：III.丁酸诱导金仓鼠恶性...

The MNNG transformed Syrian hamster lung fibroblast cell line (BHLB4) established in our laboratory was treated with 2.0 mmol/L butyric acid. We obtained a butyric acid-dependent partially reversed cell line (ButB4) similar to normal cells in morphology, membrane properties, proliferation rate, colony-forming ability on solid agar culture, etc. However, when transplanted into nude mice, this cell line's tumorigenicity remained intact. Detection of cAMP levels in the cytoplasm showed much higher levels in ButB4 cells than in transformed cells. Butyric acid activity is evidently associated with changes of cAMP. In addition to phenotypical analysis, the karyotypes of ButB4 and BHLB4 were analyzed in detail. It was found that the disomy rate of C15 was significantly increased in ButB4 cells (73%) as compared with BHLB4 cells (33%). These results show that butyric acid not only induces phenotypic reversion in BHLB4 cells directly, but can also selectively kill C15 monosomy cell clones, allowing rapid growth of C15 disomy cell clones. Butyric acid may also influence maintenance of the reversion phenotype.     

细胞培养中的癌变原理研究Ⅲ.丁酸诱导金仓鼠恶性转化细胞的表型逆转和染色体非随机改变

用2mmol/L丁酸长期处理金仓鼠恶性转化细胞,得到一个丁酸依赖型的逆转细胞系.逆转细胞在形态、核质比例、增殖速度、琼脂表面生长能力等生物学指标上均接近正常细胞;且细胞内cAMP水平也有较大幅度提高。遗传学分析结果表明,与金仓鼠细胞癌变相关的第15号染色体单体出现频率呈非随机改变,转化细胞为67％,逆转细胞仅占27％。提示丁酸对转化细胞的影响可能涉及生化物质的代谢和基因的调控。     

氟化物的细胞转化作用研究

应用金黄地鼠胚胎细胞转化试验检测了氟化物的诱变致癌性。结果显示,１、４ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ氟化钠（ＮａＦ）受试组与阴性对照存活约８０ｄ,未见转化发生。而２ｍ ｍ ｏｌ／ＬＮａＦ处理组（ＳＨＥＦ２）细胞逐渐出现类似阳性对照ＭＮＮＧ 诱导的转化细胞特征;培养至１１０ｄ 有转化集落形成;接种培养１５０ｄ 的ＳＨＥＦ２ 于裸鼠腹部皮下有纤维肉瘤形成。提示氟化物对哺乳动物细胞可能具有致突变性和潜在致癌性