糖化重组生存素腺病毒疫苗抗肿瘤作用的实验研究

背景与目的：生存素在调控细胞凋亡和有丝分裂过程中起着重要作用,在正常分化的组织中不表达或表达极低,而在胚胎组织和大部分肿瘤组织中广泛表达,而这一特点为恶性肿瘤的基因治疗提供了很好的靶标.本研究制备糖化重组生存素腺病毒疫苗,观察其抗肿瘤作用并探讨其作用机制.方法：将重组生存素腺病毒和甘露聚糖在氧化条件下偶联,同时建立小鼠结肠癌和Lewis肺癌模型,以糖化重组生存素腺病毒疫苗治疗荷瘤小鼠,观察肿瘤体积和小鼠生存时间.对小鼠肿瘤组织作TUNEL染色观察肿瘤细胞凋亡.为了检测疫苗的保护作用,预先以糖化重组生存素腺病毒疫苗免疫接种小鼠,或合用抗CD4、CD8和NK单克隆抗体阻断相应的淋巴细胞亚群,再接种肿瘤,观察小鼠肿瘤生长情况.结果：糖化重组生存素腺病毒疫苗治疗组小鼠肿瘤生长受到明显抑制,无明显不良反应发生,小鼠的生存时间明显延长,肿瘤细胞凋亡明显增加.同时,糖化重组生存素腺病毒疫苗能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫,这一免疫反应依赖于CD4和CD8淋巴细胞,也部分依赖于NK细胞.结论：糖化重组生存素腺病毒疫苗能诱导机体产生特异性的主动免疫反应,诱导肿瘤细胞凋亡,具有明确的抗肿瘤作用,值得进一步研究.     

中性粒细胞——乳腺癌肺转移的重要"帮凶"

研究人员发现中性粒细胞是乳腺癌小鼠模型肺转移灶微环境中的一种主要组成成分,同时也是促进转移灶形成的一个重要推动因素. 早期研究已经证明中性粒细胞在炎症性应答过程中发挥重要作用,但关于中性粒细胞是否会促进肿瘤形成一直存在争议.     

荷人肺癌小鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物学特性初探

背景与目的 为了更好地研究肺癌的治疗方法,建立起可靠的动物评价模型迫在眉睫.本研究的目的是研究建立肺癌原代组织块小鼠移植瘤模型的成熟方法,观察移植瘤的肿瘤生物学特性,在建模方法及基本特征等方面来证明该肿瘤模型的合理性和科学性,以期为肿瘤研究提供更有效的实验动物模型.方法 取人新鲜完整肺癌组织块移植于NOD/SCID小鼠右侧前肢肩背部皮下,或经皮肺穿刺取得肿瘤小块移植于BALB/c裸小鼠肾包膜下.待皮下肿瘤增大,将其切下传代于裸小鼠右侧前肢肩背部皮下.观察移植瘤生物学特性,并取肿瘤行常规病理切片及CEA、细胞角蛋白、Ki67免疫组化检测,将原代肿瘤和移植瘤进行EGFR 18-21外显子和K-Ras 12,59外显子基因检测,采用流式细胞仪检测移植瘤细胞的细胞周期.结果 本研究进行了11例肺癌组织的NOD/SCID小鼠和裸鼠建模,建成3例可多次成功传代的腺癌、小细胞肺癌和鳞癌模型.传代移植成功率高.荷瘤小鼠生长情况良好,生存期长.各代移植瘤模型的组织病理学及免疫组化表型、EGFR和K-Ras基因检测均与来源肺癌组织相一致.移植瘤细胞周期中S期延长,提示瘤细胞有增殖活性.结论 本研究在国内首次利用新鲜的完整肺癌组织建成了荷肺癌NOD/SCID小鼠及裸鼠模型,并传代移植于裸鼠,建模成功率为27%.移植瘤较好地保留了人原发肺癌的恶性特征及组织病理学、生物学特性,是一种接近人体的肺癌模型,可为肺癌研究提供良好的实验平台.     

丰富环境对肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织NK细胞活性、Ki67蛋白表达的影响

目的:探讨丰富环境对肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织NK细胞活性、Ki67蛋白表达的影响,为丰富环境干预肺癌临床推广应用提供实验依据.方法:动物分组:将旷场试验筛选出的中等活跃组小鼠24只,随机分为标准环境模型组和丰富环境模型组,每组12只.常规条件下培养小鼠LLC肺癌细胞至对数生长期,无菌接种于小鼠右侧腋下,建立小鼠肺癌模型.标准环境模型组为建肺癌模型后正常环境中饲养.丰富环境模型组为建肺癌模型后丰富环境中饲养.4周后取材.MTT法检测小鼠NK细胞活性.HE染色观察两组肿瘤病理学形态.免疫组织化学SP法检测肿瘤组织中Ki67的表达.结果:小鼠LLC肺癌模型成瘤率100%.丰富环境组小鼠NK细胞活性为(30.02±5.79)%,标准环境组小鼠NK细胞活性为(25.49±4.51)%,丰富环境组小鼠NK细胞活性明显大于标准环境模型组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05).丰富环境组和标准环境组小鼠均为低分化的恶性肿瘤.丰富环境组和标准环境组小鼠肿瘤组织Ki67阳性表达率分别为75.0%、91.7%,差异有统计学意义.结论:丰富环境可能通过增强NK细胞活性,调节肿瘤组织Ki67蛋白表达,减少肿瘤发生、发展.     

可移植性人脑胶质瘤组织裸小鼠脑内移植及其MR显像研究

背景与目的:文献报道的胶质瘤动物原位移植模型,大多数是将细胞悬液立体定向接种于鼠脑内,操作繁杂,耗时长,难以在短时间内完成批量实验.本研究接种可移植性人脑胶质瘤组织于裸小鼠脑内,探讨建立人脑胶质瘤裸小鼠原位移植模型及其MR活体成像的可行性.方法:在套管针内,置入位于裸小鼠皮下生长的可移植性人脑胶质瘤组织2 mm3,经微型颅钻钻颅孔后经套管针推入裸小鼠右尾状核内,第30天在配有小鼠专用micro-23微线圈的1.5T MR机上进行头颅扫描和专用软件测量显像的肿瘤体积.继而取全脑作连续冰冻切片,HE染色,在光学显微镜下观察肿瘤病理特征,在体视显微镜目镜下用测微尺测量肿瘤.然后将上述两种方法测得的数据进行统计学分析,评价荷瘤鼠活体MR显像计算肿瘤体积的可行性.结果:经MR扫描的15只颅内接种肿瘤的小鼠,有14只的尾状核区域见到肿瘤显像;在脑切片上,与MR像相同部位见到了肿瘤组织.经脑切片测得的肿瘤体积[(23.19±10.18)mm3]和经MRI测得的肿瘤体积[(23.45±11.64)mm3]比较差异无统计学意义(P＞0.05).肿瘤模型制作成功率为93%(14/15),肿瘤模型MR显像成功率为100%(14/14).结论:经套管针定量植入胶质瘤组织于裸小鼠尾状核,制作可移植性裸小鼠人脑胶质瘤原位模型,具有操作便捷、省时、便于批量制作、致瘤率高等优点.配有小鼠专用微型线圈的1.5T MR机可用于荷瘤裸小鼠的头颅成像、在活体上对移植瘤进行定位和体积测量等研究.     

肺癌标志物识别的蛋白质组分析

在新近蛋白质组学的发展中,对疾病蛋白质组的综合和深入研究已成为重要议题.已有研究报道了在包括肺癌在内的不同疾病中发现的一些生物标志物,有一些在肺癌诊断和预测中有潜在价值.然而,它们很少作为器官特异性生物标志物以充分比较不同肿瘤类别的模型.本文评价了最近发表的一项在不同基因工程小鼠模型中进行比较蛋白质组的研究,并阐明已发现标志物在人肺癌诊断中的有效性及应用.     

肿瘤相关性恶液质:VEGF作用机制的实验研究

背景与目的 VEGF在肿瘤发展中起着重要的作用,是肿瘤治疗的靶点之一.本研究目的是观察VEGF高表达的荷瘤小鼠各脏器的病理改变.并探讨VEGF在肿瘤相关性恶液质发展过程中的作用.方法 将鼠源性纤维肉瘤细胞T241-VEGF和T241-Vector注射至小鼠背侧皮下,制备移植瘤模型,观察荷瘤小鼠一般情况,记录生存时间,检测血红蛋白和红细胞,测定血清hVEGF含量,病理学检查肝脏、脾脏、肾上腺、骨髓情况,共聚焦显微镜观察皮下肿瘤血管形态学变化.结果 VEGF组荷瘤小鼠出现严重的贫血、体重减轻和肝脾肿大等恶液质表现,生存率明显下降.外周血红细胞和血红蛋白明显下降,血清VEGF却明显升高.肝脏、脾脏、肾上腺和骨髓的组织病理学检测异常,移植瘤血管形态迥异.结论 肿瘤分泌的VEGF作用于荷瘤小鼠的多种组织和器官,表现为典型恶液质症状.提示VEGF参与荷瘤小鼠肿瘤相关性恶液质的发生和进展,为临床应用抗VEGF治疗肿瘤相关性恶液质提供了新的理论依据,更为晚期肿瘤患者联合抗VECF治疗奠定了实验基础.     

芥菜籽对氧化偶氮甲烷诱导小鼠结直肠癌的影响

背景与目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,在我国发病率和死亡率呈不断上升趋势.文献报道芥菜籽具有抗肿瘤的活性,本研究旨在观察在氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)诱发昆明种小鼠发生结直肠癌的过程中,通过芥菜籽(mustard seed,MS)进行饮食干预能否预防肿瘤的发生.方法:选择6周龄昆明种雌性小鼠,随机分为AOM组、AOM+5%MS干预组、AOM+10%MS干预组和正常对照组.小鼠皮下注射AOM(10 mg/kg体质量),每周1次,连续3周.32周时颈椎脱臼处死小鼠,分离结直肠,用预冷的0.9%NaCl溶液冲洗肠内容物.观察记录各组小鼠有无肿瘤发生及发生数目、大小和位置,计算肿瘤发生率.结果:正常对照组小鼠未发现肿瘤,AOM模型组小鼠结直肠肿瘤发生率为86.7%,5%MS干预组及10%MS干预组小鼠结直肠肿瘤发生率分别为60.0%和41.7%,与模型组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).AOM模型组小鼠荷瘤数为(2.2±1.2)个,而5%MS干预组和10%MS干预组小鼠荷瘤数分别为(1.1±1.1)个和(0.7±0.9)个,与AOM模型组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:通过芥菜籽饮食干预能够抑制UAOM诱导的小鼠结直肠癌的发生发展,可进一步用于结直肠癌防治的研究.     

靶向磁性热疗对小鼠结肠癌皮下移植模型作用的观察

目的:以小肠黏膜下层(SIS)吸附磁颗粒作为热疗介质,研究靶向磁热疗对小鼠结肠癌皮下移植模型的作用.方法:选择Balb/c雌性小鼠66只,4～6周龄,体质量22～25 g,CT26结肠癌细胞皮下注射建立小鼠模型.将磁流体颗粒沉淀于置备好的SIS上,手术植入实验组小鼠结肠癌组织周围进行包裹.每24 h将实验组小鼠暴露在突变磁场下60 min,共3次.对应设置空白对照组,SIS对照组,磁流体对照组,磁场对照组进行对比研究,每组11只.观察各组小鼠的肿瘤生长情况和小鼠生存时间,检测各组小鼠各主要脏器的病理变化.结果:磁热疗作用后,实验组肿瘤中心温度在15 min后稳定在43℃,而正常组织温度则始终稳定在24℃.病理检测显示,各组小鼠各主要脏器未见明显结构异常.与各对照组相比较,实验组小鼠肿瘤生长受到显著抑制,P＜0.05;生存时间显著延长,P＜0.05.结论:以SIS吸附磁颗粒作为热疗介质的靶向磁热疗能显著抑制小鼠结肠癌模型的肿瘤生长,延长小鼠生存时间.靶向磁热疗的进一步研究有可为结肠癌治疗提供新的方法.     

氦氖激光抗肿瘤作用研究

小鼠的人体移植瘤保持人体肿瘤形态和功能特征，表现型和遗传型都与原发性肿瘤相似，是最接近于人类肿瘤的实验模型，目前已在肿瘤学和免疫学等研究领域中广泛应用。本研究采用人胃癌组织及S；。。腹水瘤细胞接种于小鼠皮下，鼠间传代建立小鼠移植瘤模型，并采用He－Ne激光照射     

山仙颗粒对S-180荷瘤小鼠T细胞活性及瘤组织中Caspase-9影响的实验研究

目的:通过建立昆明小鼠S-180荷瘤模型,观察山仙颗粒(SXG)对S-180荷瘤小鼠T细胞活性及肿瘤组织中Caspase-9表达的影响,探讨其抗肿瘤的分子机制.方法:构建S-180荷瘤小鼠模型,并随机分为5组,即空白对照组、模型组、SXG低、中、高剂量组,早晚灌胃给药,连续30天.颈椎脱臼处死小鼠,游离脾脏,剥离肿瘤组织.应用MTT比色法及免疫组织化学法分别检测荷瘤小鼠脾脏T细胞活性与S-180实体瘤组织中Caspase-9的表达.结果:SXG用药各组小鼠T细胞对于S-180细胞的抑制率均高于模型组,与模型组比较均有显著差异(P<0.01);SXG用药各组,S-180肿瘤组织中Caspase-9的表达明显上调,与模型组相比较具有显著差异(P<0.01).结论:SXG有抑制肿瘤的作用,其机制与促进Caspase-9介导的肿瘤细胞凋亡密切相关.     

平调饮抗肿瘤作用的实验研究

背景与目的:建立H22肝癌腹水瘤荷瘤小鼠模型,通过给予模型鼠平调饮灌胃评价其抗肿瘤作用.材料与方法:用H22腹水肝癌株种植于小鼠右腋皮下,致移植性肿瘤,建立H22肝癌腹水瘤荷瘤小鼠模型.将模型鼠分成阴性对照组,平调饮组,平调饮+5-Fu组和5-Fu组,共4组,各组模型鼠分别灌胃生理盐水、平调饮、平调饮+5-Fu和5-Fu,连续灌胃10 d后,观察瘤体大小、胸腺指数、脾脏指数、抑瘤率、生命延长率和VEGF在肿瘤及肿瘤周围组织中的表达.结果:平调饮组肿瘤平均瘤体、VEGF值减小,胸腺指数、脾脏指数、抑瘤率(48.6%)及生命延长率(168.3%)增高.结论:平调饮可提高胸腺指数,降低5-Fu对免疫功能的毒性作用,显著延长荷瘤小鼠的生存期.平调饮可能通过促进肿瘤细胞分化成熟,抑制肿瘤细胞增殖,降低肿瘤组织和肿瘤周围组织中VEGF表达,而对H22腹水型小鼠肿瘤的发展起抑制作用.     

分次照射不同间隔时间对C57BL小鼠Lewis肺癌生长影响的研究

目的 通过对相同照射剂量、不同照射时间的放射对小鼠Lewis肺癌肿瘤生长延迟时间、小鼠生存时间的研究,探讨分次照射不同间隔时间对肿瘤的放射效应的影响.方法 将移植Lewis肺癌种鼠的肿瘤组织制备成1 × 107个/ml肿瘤细胞悬液,选掸48只8-10周雄性C57BL/6J小鼠右后肢外侧小腿腓肠肌处接种0.1 ml,建市移植瘤小鼠模型.肿瘤直径达0.8-1.0 cm时随机分成6个组:空白对照组、18 Gy单次照射组,9 Gy 2次每次间隔30 min组,2.57 Gy 7次每次间隔5 min组、9 Gy 2次每次间隔60 min组、2.57 Gy 7次每次问隔10 min组.隔日测量并记录肿瘤长短直径,观察肿瘤生长曲线、生长延缓时间及小鼠生存时间.结果 不同间隔时间各组生长延缓时间均<18 Gy单次照射组.照射总间隔时间30 min与60 min相比,小鼠肿瘤的生长变缓;而放射总间隔时间相同的各组,小鼠肿瘤生长延缓相似.与18 Gy单次照射组比较,放射总间隔时间延长缩短了小鼠生存时间;放射间隔时间30min和60min对小鼠肿瘤牛长影响相似.结论 小鼠Lewis肺癌模型中,相间照射剂量、放射总间隔时间延长降低了放射疗效,表现为缩短了小鼠肿瘤牛长延缓时间及总生存时间.对小鼠肿瘤生长影响程度与放射间隔时间的长短有关,间隔时间越长对小鼠肿瘤生长影响越大,但间隔30、60 min之间对小鼠生存时间影响差别不大.     

乳腺癌MMTV-ErbB-2转基因小鼠模型的培育观察

目的 研究乳腺癌模型MMTV-ErbB-2转基因小鼠的饲养管理及生长发育情况.方法 乳腺癌模型MMTV-ErbB-2转基因小鼠6只(♀3,♀3).模型动物饲养于清洁级饲育室,按AIN级进行饲养管理.记录小鼠的繁育情况、出瘤时间、肿瘤个数、直径、体质量.结果 MMTV-ErbB-2转基因小鼠已成功繁育9代.共产仔鼠420只.MMTV-ErbB-2转基因小鼠中雌鼠在24～46周均长出乳腺癌肿块,单只鼠的乳腺癌肿块数目1～4个,肿块直径3～15 mm.结论 乳腺癌模型MMTV-ErbB-2转基因小鼠已被成功繁育,MMTV-ErbB-2转基因小鼠生长良好,具有较强的繁殖和适应能力.     

p53/LKB1双缺失子宫内膜癌小鼠模型建立与生物学鉴定

目的 近年来,子宫内膜癌发病率逐年上升,LKB1基因缺失是引发子宫内膜癌的一个重要原因.建立由p53loxploxpLKB1loxploxp双缺失致子宫内膜腺癌的小鼠模型,为研究子宫内膜肿瘤的发生发展提供动物模型.方法 选取6周龄p53和LKB1小鼠雌雄各2只.PCR鉴定拟诱导模型小鼠的基因型.显微镜下将Ad5-CMV-Cre(AdCre)腺病毒注射到p53loxploxpLKB1loxploxp基因型小鼠的一侧子宫内,诱导子宫内膜肿瘤形成.HE切片染色确定子宫肿瘤的类型.结果 成功获得基因型为p53loxploxpLKB1loxploxp的转基因小鼠.经PCR鉴定目的基因含有loxp位点.该小鼠子宫AdCre腺病毒注射后最早第2周出现不典型增生,4周时约25％HE切片染色诊断为子宫内膜腺癌,而未注射侧子宫正常;12周左右出瘤率为100％,荷瘤生存时间≤34周.LKB1loxploxp与p53loxp LKB1loxploxp基因型小鼠注射侧子宫20周出瘤率约为33％,荷瘤生存时间平均为52周.结论 小鼠模型病理学示,腺体不规则,腺管排列拥挤、紊乱,异型性细胞增多,可见核分裂像,符合子宫内膜腺癌特征.通过显微注射AdCre腺病毒于小鼠子宫内,成功敲除p53及LKB1基因,建立子宫内膜腺癌转基因小鼠模型.该模型成瘤时间短,出瘤率高,其病理表现与人类子宫内膜腺癌类同,是研究子宫内膜癌发生发展的理想小鼠模型.     

裸小鼠移植瘤的转移研究

Rygaad和Povlsen 1969年首次将人结肠癌在裸小鼠移植成功,迄今大多数人恶性肿瘤均可在裸小鼠移植。大量研究表明裸小鼠人癌移植瘤是目前人体外最接近人类肿瘤的整体实验模型。但人癌裸小鼠移植后,能否保持其原浸润转移的恶性生物学行为,研究结果意见不一。利用人癌裸小鼠移植瘤模型研究人类肿瘤     

抗PD-L1药物在晚期肿瘤治疗中的应用

程序性死亡分子1(PD-1)及其配体1(PD-L1)在肿瘤细胞逃避宿主免疫系统的识别和消除中发挥重要作用.小鼠肿瘤模型给予抗PD-L1单抗呈现明显的宿主抗肿瘤反应.目前,PD-1/PD-L1信号通路的免疫治疗药物在多种传统方法治疗失败的肿瘤中收到了良好的效果,且不良反应较小,为晚期肿瘤的免疫治疗提供了宝贵的临床经验.     

小鼠肝癌原位移植模型的建立及其研究意义

目的:建立小鼠的肝癌原位移植模型,为研究肝癌的侵袭转移机制奠定基础.方法:体外培养小鼠肝癌细胞株H22细胞并进行传代,调整细胞浓度为1×107/ml,接种到小鼠腹腔,进行腹腔传代培养,腹腔传代3次后,收集腹水瘤细胞,用生理盐水洗涤2遍,调整细胞浓度为2×107/ml,用50 μl的微量注射器无菌开腹直视下向小鼠肝脏左叶注入50 μl的H22细胞,术后常规饲养,14天后人道主义处死小鼠,解剖观察小鼠肝脏肿瘤形成情况,病理组织学方法鉴定肿瘤组织.结果:肉眼可见肿瘤结节形成良好,成瘤率高,病理鉴定为肝癌.结论:成功建立了小鼠的肝癌原位移植模型,为后续研究肝癌的免疫逃逸和侵袭转移提供了实验基础.     

人源性肿瘤组织异种移植模型的建立及应用CSCD

人源性肿瘤组织异种移植(PDTX)模型是指将患者新鲜的肿瘤组织移植到免疫缺陷小鼠,依靠小鼠提供的微环境生长的一种异种肿瘤移植模型。此模型高度保留了原代肿瘤的生物学特征,维持了肿瘤细胞生长的微环境,可代替患者进行临床前试验研究,为临床前药效的评估、个体化治疗方案的筛选提供了有效的研发基础。本文就PDTX模型在肿瘤研究中的建立、临床应用及其局限性进行综述。     

诺维氏梭菌对小鼠移植性肝癌的抑制作用

目的:评估无毒诺维氏梭菌对小鼠移植性肝癌的抑瘤效应,及其在肿瘤和重要器官的定植情况,并确定瘤内注射的最佳剂量.方法:建立H22皮下移植瘤BALB/c小鼠模型后称小鼠重量,测量肿瘤大小,并按随机原则分为生理盐水组、无毒诺维氏梭菌低剂量组(1.0×107/mL,0.5 mL)、中剂量组(1.0×108/mL,0.5 mL)...