大鼠血管平滑肌细胞中以COX-2/JAK2/STAT3为靶向的信号转导分子调控机制的研究

目的:研究转录信号转导子和激活子3(STAT3)信号转导通路与选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂调控血管平滑肌细胞(VSMC)增殖凋亡的关系,明确COX-2抑制剂作用的细胞内信号转导机制。方法:将选择性COX-2抑制剂NS-398,作用于鼠VSMCs,运用MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察NS-398对细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测药物作用前后VSMCs中COX-2mRNA表达;Westernblot检测药物作用前后STAT3通路相关蛋白JAK2、STAT3、CyclinD1、Bcl-2的表达及磷酸化活性。结果:鼠VSMCs中COX-2mRNA呈高表达,NS-398呈时间、剂量依赖性方式抑制VSMCs细胞增殖,促进其凋亡。加入NS-398的VSMCs中COX-2mRNA表达水平显著下降(P<0·01)。同时P-JAK2、P-STAT3、CyclinD1、Bcl-2表达水平随作用时间延长而下降(P<0·01)。结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对VSMCs作用与COX-2mRNA水平相关,癌基因Stat3信号转导通路调控了NS-398对VSMCs作用的细胞内信号转导机制,最终通过其下游靶基因CyclinD1、Bcl-2影响VSMCs的增殖与凋亡。     

铁皮石斛多糖对缺血性脑卒中大鼠脑组织JAK/STAT3信号通路的影响

[目的]探讨铁皮石斛多糖(DOP)对缺血性脑卒中大鼠脑组织Janus激酶(JAK)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路的影响。[方法]以线栓法建立大脑中动脉闭塞大鼠模型。SD大鼠随机分为模型组、DOP低剂量(25μg/g)组、DOP中剂量(50μg/g)组、DOP高剂量(100μg/g)组、依达拉奉组,每组12只;另取12只SD大鼠设为假手术组。经药物干预后,以Longa分级法对各组大鼠进行神经功能缺损评分;通过三苯基氯化四氮唑染色检测大鼠脑梗死情况;苏木精-伊红染色观察大鼠海马神经组织病理形态变化;酶联免疫吸附法检测大鼠脑组织炎性细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、环氧合酶2(COX-2)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western blot检测大鼠脑组织JAK/STAT3信号通路相关蛋白表达水平。[结果]与假手术组相比,模型组大鼠海马神经元皱缩、变小,变性坏死,结构破损,排列紊乱,且数目明显减少,海马神经组织整体呈现明显病理损伤,神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织IFN-γ、COX-2及IL-6水平、p-JAK/JAK、p-STAT3/STAT3明显升高(P<0....     

芒柄花素调节JAK2/STAT3信号通路对妊娠高血压大鼠的治疗作用

目的:探讨芒柄花素(FMN)对妊娠高血压(PIH)大鼠的治疗作用及可能机制。方法:将妊娠大鼠分为正常组(Normal组,生理盐水)、PIH组(生理盐水)、FMN组[40 mg/(kg·d) FMN)]、Janus激酶2(JAK2)抑制剂组[AG490组,5 mg/(kg·d) AG490]、FMN+JAK2抑制剂组[FMN+AG490组,40 mg/(kg·d) FMN+5 mg/(kg·d) AG490],每组12只。除Normal组外,其余各组大鼠连续4 d皮下注射125 mg/(kg·d) L-精氨酸甲酯构建PIH模型。观察大鼠尾静脉压、24 h尿蛋白含量,血清血管内皮因子[内皮素1(ET-1)、一氧化氮(NO)]、炎性因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)]、心肌损伤指标[肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]、肾损伤指标[血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)]水平,心肌、肾组织病理学变化及心肌、肾组织中氧化应激指标[丙二醛(MDA)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)]和JAK2/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白...     

柚皮苷调节JAK2/STAT3信号通路对急性缺血性脑梗死大鼠神经损伤的影响

目的:观察柚皮苷通过调节蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导子与激活子3(STAT3)信号通路对急性缺血性脑梗死大鼠神经损伤的影响。方法:将60只大鼠分为对照组、假手术组、模型组、模型+生理盐水组、模型+柚皮苷组和模型+柚皮苷+白细胞介素(IL)-6组,每组10只大鼠。采用大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立急性缺血性脑梗死模型。术后24 h对神经功能进行评分,测定脑梗死面积,观察脑组织病理形态;干/湿法检测脑水肿;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测JAK2/STAT3信号通路蛋白及Bax、Bcl-2蛋白表达;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测脑细胞凋亡;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氧化应激因子[过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)]和炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6]。结果:与对照组和假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、水肿指数升高,脑梗死面积增加,细胞排列紊乱,细胞间隙变宽,细胞空泡增多,细胞变性,细胞染色不均匀,变性细胞指数(D...     

花青素调节JAK2/STAT3信号通路对自身免疫性心肌炎大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的:探讨花青素对自身免疫性心肌炎(AE)大鼠T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡及Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法:将60只SD大鼠分为对照(NC)组、模型(Model)组、花青素组(50 mg/kg花青素)、STAT3激活剂Colivelin组(1 mg/kg Colivelin)、花青素+Colivelin组(50 mg/kg花青素+1 mg/kg Colivelin),每组12只。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清炎性因子水平;苏木素-伊红(HE)染色检测心肌病理变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测脾脏维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头蛋白p3(Foxp3)mRNA表达情况;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测心肌JAK2/STAT3通路相关蛋白表达。结果:Model组心肌明显坏死和水肿,大量炎性细胞浸润;花青素组心肌无明显的坏死和细胞肿胀;Colivelin组心肌损伤加重;与花青素组...     

lncRNA ARAP1-AS2通过JAK2/STAT3信号通路对小鼠糖尿病肾病的影响

目的 探讨lncRNA锚蛋白重复和pH结构域/反义RNA(ARAP1-AS)2通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对糖尿病肾病的影响及其机制。方法 将MPC-5细胞分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2组、高糖+AG490组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2+AG490组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测MPC-5细胞凋亡率;Western印迹检测细胞增殖核抗原KI67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、酪氨酸激酶(JAK)2、磷酸化(p)-JAK2、信号转导和转录激活因子(STAT)3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ARAP1-AS2和突触孔蛋白(Synaptopodin)、结蛋白(Desmin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平。结果 与对照组比较,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显降低,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显升高,Synaptopodin mR...     

姜黄素抑制STAT3信号通路对胰腺癌细胞增殖的影响

目的:研究姜黄素对STAT3活性的调控作用,以探讨姜黄素对人类胰腺癌细胞增殖的影响.方法:应用MTT法检测姜黄素在不同浓度(20、40、60、80、100 μmol/L)及以中效浓度(IC50)的姜黄素分别作用于胰腺癌SW1990细胞0、4、12、24、48、32 h后对胰腺癌SW1990细胞增殖活性的影响;不同浓度姜...     

JAK2/STAT3信号通路在肝内胆管细胞癌中的表达及预后

目的 探讨Janus激酶2/信号转导子与转录激活子(JAK2/STAT)3信号通路在人胆管细胞癌(ICC)组织中的表达和临床特征意义。方法 采用免疫组织化学技术检测80例ICC组织及其相应的癌旁组织中JAK2和STAT3中的表达情况,并分析两者表达与ICC患者临床病理参数之间的关系。结果 ICC组织中JAK2与STAT3蛋白的阳性表达率均高于相应癌旁组织,两者表达呈明显正相关。JAK2与STAT3与肝硬化、胆管癌栓、血管侵犯、肿瘤分化、临床分期密切相关(均P<0.05);Kaplan-Meier分析表明高表达JAK2与STAT3的患者生存率及生存期更短,预后更差;Cox模型分析表明,JAK2与STAT3是影响ICC患者生存期的独立预后因素(均P<0.05)。结论 JAK2/STAT3信号通路在ICC组织中高表达,是反映ICC发生发展的重要生物学指标。     

脑损伤后大鼠NPAS4与JAK2/STAT3信号通路的关系

目的 探讨神经元PAS结构域蛋白(NPAS)4与Janus激酶(JAK)2/信号传导与转录激活因子(STAT)3通路在大鼠颅脑损伤后的相关联系。方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组、TBI组、TBI+AG490组,建立损伤模型,利用免疫组化染色、Western印迹及实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测JAK2、STAT3、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3及NPAS4蛋白。结果 损伤后NPAS4蛋白可见表达升高,并在12 h时达到最高,并持续至少7 d,与p-JAK2、p-STAT3蛋白时序性表达趋势一致,相邻两时间点比较差异显著(P<0.05);且TBI+AG490组p-JAK2、p-STAT3及NPAS4蛋白表达量较TBI组均显著下降(P<0.05)。结论 NPAS4可在大鼠颅脑损伤后迅速升高并发挥神经保护作用,且其相关作用可能受到JAK2/STAT3通路的调节。     

人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能、Janus激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路的影响。方法 卵清蛋白致敏建立过敏性哮喘大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分成模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)、人参皂苷Rb1低剂量组(25 mg/kg)、人参皂苷Rb1高剂量组(50 mg/kg),每组14只。取14只健康大鼠设为对照组,各组腹腔注射相应药物处理14 d。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清白细胞介素(IL)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、免疫球蛋白(Ig)E水平,苏木素-伊红染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分,分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和Western印迹法测定大鼠肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平。结果 对照组肺组织结构正常,未观察到病理学改变;模型组肺组织出现肺泡壁充血和炎性细胞浸润的明显病理变化;地塞米松组、人参皂苷Rb1高剂量组肺组织损伤的严重程度明显减轻,炎性细胞浸润明显被抑制;人参皂苷Rb1低剂量组肺组织仍可见炎症反应,但较模型组程度轻。与对照组比较,模型组血清IL-4...     

山药多糖对脓毒症大鼠心肌损伤及JAK2/STAT3信号通路的影响

[目的]探索山药多糖(RDPS-Ⅰ)对脓毒症大鼠心肌损伤及酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。[方法]将90只大鼠随机分为RDPS-Ⅰ低(1.0 g/kg)、中(2.0 g/kg)、高(3.0 g/kg)剂量组及模型组、阳性对照组、假手术组。通过取出盲肠进行结扎、穿孔的方法复制脓毒症大鼠,造模完成后,RDPS-Ⅰ低、中、高剂量组分别给予相应剂量RDPS-Ⅰ灌胃,阳性对照组予以200 mg/kg剂量皮下注射4 mL/kg的氨苄西林溶液,其余两组给予生理盐水,每12 h干预1次,连续干预6天。干预结束后,检测大鼠血流动力学指标平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、心率(HR);苏木精-伊红(HE)染色观察脓毒症大鼠心肌组织病理学变化;TUNEL染色检测脓毒症大鼠心肌细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中炎症因子水平;Western blot检验大鼠心肌组织中JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平。[结果]相比于假手术组,模型组大鼠心肌组织排列紊乱,出现严重炎症细胞浸润现象,LVSP、HR、MAP降低56%、54%、5...     

基于STAT3信号通路探讨槲皮素对宫颈癌HeLa细胞的体外抗肿瘤机制

目的 基于信号转导子与转录激活子(STAT)3信号通路探讨槲皮素对宫颈癌HeLa细胞的体外抗肿瘤机制。方法 取0、20、40、60、80μmol/ml浓度的槲皮素分别分为对照组、A组、B组和C组,以适宜的条件培养人宫颈癌Hela细胞48 h,检测细胞增殖、凋亡、侵袭和细胞中STAT3。结果 随着槲皮素浓度的增加细胞增殖率逐渐减小;凋亡率升高、侵袭数减少,STAT3蛋白及磷酸化水平下调,各组两两比较差异显著(P<0.05)。结论 槲皮素可能通过调控Janus激酶(JAK)2/STAT3信号通路来抗肿瘤的。     

基于JAK2/STAT3通路探究七氟醚对心肌缺血再灌注大鼠血管内皮损伤的改善作用

目的 探讨七氟醚是否能通过调节蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/转录激活因子3(STAT3信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠血管内皮损伤。方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、七氟醚组、抑制剂组和抑制剂+七氟醚组五组,每组各12只,除假手术组外,其余组通过冠状动脉（冠脉）左前降支结扎法建立MIRI模型。模型组和假手术组大鼠实验前2 h尾静脉注射生理盐水1 ml,缺血末再灌注开始时吸入纯氧3 min。七氟醚组大鼠实验前2 h尾静脉注射生理盐水1 ml,缺血末再灌注开始时吸入2%七氟醚3 min;抑制剂组大鼠实验前2 h尾静脉注射3 mg/kg JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490;抑制剂+七氟醚组大鼠实验前2 h尾静脉注射3 mg/kg AG490,缺血末再灌注开始时吸入2%七氟醚3 min。超声心动图检测各组大鼠左心室射血分数（LVEF）、左心室短轴缩短率（LVFS）,左心室收缩末期内径（LVESD）和左心室舒张末期内径（LVEDD）,TTC染色检测各组大鼠心肌梗死面积,ELISA检测各组大鼠血清中内皮素-1(ET-1)、血栓素A2(TXA2)和前列环素（PGI2...     

STAT3对心肌细胞调控作用机制的研究进展

信号转导子和转录激活子3(STAT3)作为一种常见的急性反应性因子,在多种组织器官中表达,参与多种信号级联通路,能调控数百个基因表达,参与细胞生长、凋亡、癌变等多种生命活动.STAT3及其相关信号通路参与调控心肌细胞凋亡、氧化应激、炎症反应、心肌肥大等病理生理过程.     

IL-6/STAT3通路对THP-1单核细胞环氧化酶2表达的影响

目的探讨人THP-1单核细胞中白细胞介素6(IL-6)/信号转导与转录激活子3(STAT3)通路与环氧化酶2(COX-2)表达之间的关系。方法以人THP-1单核细胞株作为研究对象,分别设置0至48 h不同时间点,检测IL-6对STAT3磷酸化和COX-2表达的时效性影响。用100μmol/L S3I-201(STAT3通路选择性抑制剂)对THP-1单核细胞预处理24 h,再经10μg/L IL-6作用相应时间,将THP-1单核细胞分为4组:对照组、S3I-201组、IL-6组及IL-6+S3I-201组,检测STAT3磷酸化及COX-2表达水平变化。采用实时荧光定量PCR方法检测THP-1单核细胞COX-2的mRNA表达量,Western blot方法检测THP-1单核细胞STAT3磷酸化水平与COX-2的蛋白表达量。结果THP-1单核细胞经IL-6作用后STAT3的磷酸化及COX-2的表达均出现时效性激活,IL-6刺激5 min后STAT3磷酸化水平即显著增加(P0.001),同时COX-2 mRNA和蛋白水平均明显上调,分别于1 h和2 h达到峰值(P0.001)。与对照组相比,S3I-201组COX-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P0.01);与IL-6组相比,IL-6+S3I-201组STAT3磷酸化水平下降(P0.001),COX-2 mRNA表达水平降低(P0.001),同时COX-2蛋白表达受到明显抑制(P0.05)。结论 IL-6能够激活THP-1单核细胞STAT3通路,其可能通过催化下游COX-2的表达影响动脉粥样硬化性疾病进程。     

N-乙酰半胱氨酸通过抑制JAK2/STAT3信号通路对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否通过抑制JAK2/STAT3信号通路对高糖诱导的内皮细胞损伤起保护作用。方法 体外分别应用不同浓度NAC对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行预处理,筛选出NAC减轻高糖诱导的HUVEC细胞毒性的最佳浓度。使用最佳浓度的NAC预处理高糖诱导的HUVEC,通过CCK-8检测细胞存活率,Hoechst33258核染色荧光显微镜照相法检测内皮细胞凋亡的形态学改变,Western blot检测JAK2/STAT3信号通路的蛋白表达水平,DCFH-DA检测细胞内活性氧水平,ELISA检测相关炎症因子细胞间黏附分子1(ICAM-1)、核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的含量;荧光探针JC-1检测线粒体膜电位的变化。结果 应用7 mmol/L NAC预处理HUVEC 30 min可明显减轻高糖诱导的HUVEC损伤,使细胞存活率升高,细胞凋亡数量减少,细胞凋亡蛋白cleaved Caspase-3表达减少,胞内活性氧堆积及线粒体膜电位丢失减少(P＜0.01)。NAC能抑制高糖对p-JAK2、p-STAT3表达的上调作用(P＜0.01),同时可抑制高糖诱导的炎症反应,使炎症因子ICAM-1、NF-κB、TNF-α及白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的水平下降(P＜0.01)。结论NAC能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路对高糖诱导的HUVEC损伤起到保护作用。     

阻断JAK-STAT信号通路对大鼠类风湿关节炎治疗作用的实验研究

目的探讨阻断Janus激酶-信号转导子和转录活化子(JAK-STAT)信号通路对大鼠类风湿关节炎的治疗作用。方法2005年10月至2006年9月在中国医科大学实验动物中心将关节炎模型建立成功且关节炎指数大于2分的30只大鼠随机分为胶原诱导的关节炎(CIA)模型组,JAK-STAT信号通路特异性阻断剂(AG490)低、中、高剂量组及来氟米特组,另有6只大鼠为正常对照组。分别予以生理盐水1mL/d(对照组,CIA模型组)、AG4901、5、10mg/(kg.d)、来氟米特10mg/(kg.d)腹腔注射或灌胃,44d后处死。比较大鼠体重、关节炎指数、足趾容积、病理评分及p-STAT1、p-STAT3的变化情况。结果CIA模型组关节炎发展迅速,关节炎指数、足趾容积明显增高,p-STAT1、p-STAT3表达增多,体重减轻;AG490低剂量组大鼠体重较CIA模型组有所增加,关节肿胀减轻,在一定程度抑制了JAK-STAT的激活;AG490中剂量组在体重、关节炎指数、足趾容积、病理评分等方面均较CIA模型组有明显改善(P<0.05),其疗效与来氟米特相当,同时可明显抑制JAK-STAT通路的激活;AG490高剂量组病理评分改善程度优于来氟米特组。结论JAK激酶特异性阻断剂AG490可以明显抑制STAT的过度激活,有效地减轻大鼠关节炎症状及组织病理损害,其疗效存在剂量依赖性。     

基于STAT3信号通路研究柠檬苦素对胃癌模型小鼠免疫因子表达的影响

目的 分析柠檬苦素对胃癌小鼠模型免疫因子表达的影响并探索其作用机制。方法 选取50只SPF级小鼠,随机分为5组各10只,构建MFC胃癌荷瘤模型,建模成功后随机分为模型组、阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组并给予对应药物灌胃,1次/d,连续14 d。计算脾指数、胸腺指数及抑瘤率;流式细胞术检测CD4⁺、CD8⁺ T细胞及其比值;酶联免疫吸附试验检测血清免疫因子白细胞介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ的表达水平;免疫组化法检测胃癌组织磷酸化信号转导与转录激活因子(p-STAT3)、基质金属蛋白酶(MMP)-9阳性表达率;Western印迹法检测胃癌细胞STAT3磷酸化水平。结果 与模型组相比,阳性对照组脾指数、胸腺指数显著降低(P<0.05),柠檬苦素低、中、高剂量组脾指数、胸腺指数显著升高(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组、柠檬苦素低、中、高剂量组抑瘤率均显著增加(P<0.05)。柠檬苦素低、中、高剂量组CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞百分数和CD4^...