比较研究C57BL/6和eNOS-/-小鼠1型糖尿病模型的视网膜病变

目的对链脲佐菌素(STZ)诱导的C57BL/6和eNOS基因敲除(eNOS-/-)小鼠1型糖尿病模型(T1DM)进行对比研究,探讨两类糖尿病小鼠模型的视网膜功能及视网膜血管的病理变化。方法 6-8周龄的C57BL/6和eNOS-/-小鼠腹腔内注射STZ建立T1DM模型。模型建立前后分别行视网膜电图(ERG)检查、荧光血管造影、免疫荧光染色及视网膜神经节细胞计数。结果C57BL/6和eNOS-/-糖尿病小鼠ERGa、b波振幅降低、神经节细胞减少(P<0.05),eNOS-/-糖尿病小鼠视网膜血管迂曲、纤细。与C57BL/6糖尿病小鼠相比,eNOS-/-糖尿病小鼠的视网膜功能及视网膜血管的病理改变更严重、迅速。结论与C57BL/6T1DM模型相比,eNOS-/-T1DM模型能更全面地反映糖尿病视网膜病变的发生、发展,为研究糖尿病及糖尿病视网膜病变提供了一个更理想的动物模型。     

运用电穿孔技术建立小鼠脑内基因转染模型

目的借助生物物理技术建立一种高效实用的脑内基因转染技术，探讨其在神经科学研究中的应用。方法选取孕15 d C57系小鼠，取出子宫角，用自制玻璃电极将目的质粒和荧光质粒混匀后注入胎鼠侧脑室，应用BTX电转染仪在胎鼠脑两颞极间给予设定的电脉冲刺激，后将胎鼠放入孕鼠腹腔让其自然出生后8 d取脑，冰冻切片，抗GFP、抗Tubulin免疫组化染色，荧光显微镜下观察。结果在小鼠大脑皮层Ⅱ、Ⅲ层，转染CAG-EGFP的脑片可见绿色荧光细胞带，转染细胞抗GFP免疫组化染色阳性；转染DS-red的呈红色荧光细胞带，转染细胞均呈抗Tubulin免疫组化染色阳性。结论子宫内胚胎电转染技术是一个很好的在体基因转染技术，可为神经科学研究提供一个很好的技术平台。     

丹那唑对小鼠子宫内膜异位种植的抑制及其机制

 目的 观察丹那唑对子宫内膜异位症模型小鼠异位内膜的影响，以初步探讨子宫馁膜异位症中丹那唑对小鼠异位内膜粘附的作用。方法 用增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,EGFP）转基因和野生型C57BL/6J小鼠建立子宫内膜异位症模型，丹那唑组给予丹那唑灌胃，对照组给予等量的生理盐水灌胃，2周后处死动物，成像并比较两组小鼠荧光表达的强弱； Western blot和real time RT-PCR等技术对异位内膜的粘附因子ICAM-1、CD44进行检测。结果 镜下可见模型小鼠肠管间、腹壁下、肝叶下或脾周形成绿色团块状或星点状内膜异位病灶，丹那唑组异位灶体积及荧光表达强度明显低于对照组 (P＜0.05)；丹那唑组和对照组的凋亡率显著高于空白组（P值均＜0.001），而丹那唑组的凋亡率显著高于对照组（P＜0.01）；丹那唑组CD44、ICAM-1 蛋白和mRNA表达显著低于对照组（P值均＜0.01）,以2－△△Ct计算CD44、ICAM-1 mRNA表达量（空白组为1），对照组、丹那唑组的CD44 mRNA表达量分别是空白组的16.34、3.43倍；对照组、丹那唑组的ICAM-1 mRNA表达量分别是空白组的1.53、1.12倍。结论 丹那唑可抑制子宫内膜异位症模型小鼠异位内膜的粘附和病灶的产生，这种作用主要可能是通过促进细胞凋亡达到降低粘附因子ICAM-1、CD44的表达而实现的。     

高脂饮食对子宫内膜异位症小鼠异位病灶生长及FABP4蛋白表达的影响

目的:探究高脂饮食对子宫内膜异位症发展的影响及作用机制。方法:取20只C57BL/6J小鼠建立子宫内膜异位症小鼠模型,将建模小鼠随机分为高脂饮食组和普食组,每组9只,高脂饮食组小鼠采用高脂饲料饲养,普食组小鼠采用普通饲料饲养,每周测量小鼠体重1次。饲养8周后取静脉血并处死小鼠,测量两组小鼠体重、观察子宫内膜异位病灶的大小及形态,计算Lee′s指数,免疫组化法检测子宫内膜异位病灶中脂肪酸结合蛋白4(FABP4)蛋白的表达,ELISA法测定两组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平,Western blot检测子宫内膜异位病灶中PPARγ和NF-κB蛋白的表达。结果:高脂饮食组小鼠饲养8周后体重增加量、Lee′s指数和子宫内膜异位病灶体积大于普食组小鼠(P<0.05)。高脂饮食组小鼠子宫内膜异位病灶中FABP4蛋白的阳性表达高于普食组小鼠(P<0.05)。高脂饮食组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平高于普食组小鼠(P<0.05)。与普食组比较,高脂饮食组小鼠子宫内膜异位病灶中PPARγ蛋白表达降低,NF-κB蛋白表达升高(P<0.05)。结论:高脂饮...     

同基因、异基因骨髓移植小鼠模型中T淋巴细胞组织浸润的观察

目的:观察异基因骨髓移植中,供体T淋巴细胞在受体各器官(包括肝、肠、皮肤、肺、肾、脑和心肌等)中的分布情况,以及与同基因移植的异同.方法:以尼龙毛法从转增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因C57BL/6小鼠和C57BL/6小鼠脾细胞中分离T淋巴细胞,以红色荧光细胞膜染料PKH26(10μmol/ml)染色C57BL/6小鼠T淋巴细胞,将eGFP T淋巴细胞或PKH26 T淋巴细胞与C57BL/6小鼠骨髓细胞一起经尾静脉分别输入经8.0 Gy全身照射的同基因受体小鼠(C57BL/6)和异基因受体小鼠(BALB/c)体内,建立小鼠同基因、异基因骨髓移植模型.在移植后第1天、第4天、第8天处死小鼠,观察肝、肠、皮肤、肺、肾、心、脑等组织冰冻切片中荧光细胞的分布.结果:异基因骨髓移植模型中,移植后第1天,受体小鼠各器官中未见绿色或红色荧光细胞;移植后第4天、第8天可见绿色或红色荧光细胞,主要分布于肝、肠、皮肤、肺,而肾、心、脑等组织中未见;移植后第8天肝、肠、皮肤、肺中eGFP T淋巴细胞明显多于第4天;而移植后第8天肝、肠、皮肤、肺中PKH26 T淋巴细胞明显少于第4天(细胞膜上PKH26因细胞分裂而逐渐减少).同基因骨髓移植模型中,移植后第1天、第4天和第8天,肝、肠、皮肤、肺、肾、心、脑组织中均未见红色或绿色荧光细胞.结论:异基因骨髓移植中,可能因供体T淋巴细胞被激活、增殖,故可大量进入受体肝、肠、皮肤、肺等器官;肝、肠、皮肤是公认的移植物抗宿主病(GVHD)靶器官,肺可能也是潜在的GVHD靶器官.同基因骨髓移植中,可能因供体T淋巴细胞不能被激活、增殖,因而不能大量进入受体肝、肠、皮肤、肺等器官.     

α-半乳糖酰基鞘胺醇诱发小鼠流产机制初探

目的利用α-半乳糖酰基鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)诱发性C57BL/6J小鼠流产模型,初步探讨NKT细胞活化与C57BL/6J小鼠流产的关系。方法孕7 d和孕10 d C57BL/6J小鼠,每组8只腹腔注射α-Galcer,72 h后处死鼠剖腹探察胚胎数量。于0,24 h取胎盘淋巴细胞,流式细胞术检测CD3 NK1.1 细胞百分率和CD69 /CD3 NK1.1 细胞百分率,ELISA方法检测α-Galcer处理不同时间血清孕酮(P)水平,并做子宫胎盘免疫组化切片观察。结果C57BL/6J小鼠可由α-Galcer引起流产。胎盘CD3 NK1.1 淋巴细胞在0,24 h分别为(2.96±0.22)%和(4.17±0.67)%,CD69 /CD3 NK1.1 细胞百分率分别为(6.54±1.13)%和(82.45±5.85)%。ELISA方法测得血清P浓度为(0.15±0.01)ng/ml与对照组(1.28±0.03)ng/ml相比差异有显著性。胎盘子宫免疫组化切片显示α-Galcer处理组孕激素受体(PR)表达明显强于对照组。结论α-Galcer可诱发C57BL/6J小鼠流产,NKT细胞的活化及其分泌的细胞因子可能是导致流产的主要原因。     

造血干细胞全标记红色和绿色荧光转基因小鼠的筛选

目的 对五种荧光转基因小鼠造血干细胞中的荧光标记细胞进行分析,筛选造血干细胞全标记红色和绿色荧光转基因小鼠,为造血干细胞分化机制体内示踪研究提供理想的动物模型.方法 采用活体荧光影像系统对两种红色荧光转基因小鼠品系C57BL/6J-TgN(CAG-DsRed-1和CAG-DsRed-2) ZLFILAS和三种绿色荧光转基因小鼠品系C57BL/6J-TgN(CAG-EGFP-1、CAG-EGFP-2和CAG-EGFP-3)ZLFILAS的荧光标记进行比较;采用流式细胞术检测各转基因小鼠的骨髓lin(-)c-kit(+)Sea-1+(LSK)造血干细胞荧光标记细胞比率,根据标记比率筛选造血干细胞全标记红色和绿色荧光转基因小鼠.结果 活体荧光影像分析表明转基因小鼠均系统性表达红色或绿色荧光.流式细胞术检测表明LSK造血干细胞中高度表达红色和绿色荧光,其中,C57BL/6J-TgN(CAG-DsRed-1)ZLFILAS和C57BL/6J-TgN(CAG-EGFP-1)ZLFILAS的造血干细胞全部为荧光标记细胞.结论 筛选获得在造血干细胞中全标记的红色和绿色荧光转基因小鼠,可为造血干细胞体内研究提供有效示踪工具.     

近交系小鼠不同供受体组合对移植心脏存活期的影响

目的:在小鼠异位心脏移植模型中观察近交系小鼠不同品系的供受体组合对于移植心脏生存时间的影响.方法:采用腹腔异位小鼠心脏移植模型,术后通过扪诊评估移植心功能,比较C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J常见近交系小鼠六种不同供受体组合生存时间的差异,并进行组织病理评分.结果:C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J六种不同供受体组合的受体心脏存活时间无统计学差异,中位生存时间均为7～8 d,而且组内生存时间差异小;移植心脏组织病理检查发现所有标本均表现为严重的排斥反应,各组间无明显差异.结论:C3H/HeJ、Balb/c和C57BL/6J不同供受体组合均能符合移植免疫研究的要求,但是综合考虑手术难度、术后检测、喂养以及感染等因素,C57BL/6J和C3H/HeJ适合作为供体小鼠,而Ba1b/c更适合作为受体小鼠.     

-半乳糖神经鞘胺醇诱发小鼠流产机制的初探

目的 利用 -半乳糖神经鞘胺醇( -galactosylceramide, -Galcer)诱发性C57BL/6J小鼠流产模型,初步探讨NKT细胞活化与C57BL/6J小鼠流产的关系。方法 孕7d和孕10d C57BL/6J小鼠,每组8只腹腔注射 -Galcer,72h后处死鼠剖腹探察胚胎数量。于0h和24h取胎盘淋巴细胞,流式细胞术检测CD3+NK1.1+细胞百分率和CD69+CD3+NK1.1+细胞百分率,ELISA方法检测 -Galcer处理不同时间血清孕酮（P）水平,并做子宫胎盘免疫组化切片观察。结果 C57BL/6J小鼠可由 -Galcer引起流产。胎盘CD3+NK1.1+淋巴细胞在0,24h分别为（2.96±0.22）%和（4.17±0.67）%,CD69+CD3+NK1.1+细胞百分率分别为（6.54±1.13）%和（82.45±5.85）%。ELISA方法测得血清P浓度为（0.15±0.01） ng/ml与对照组(1.28±0.03)ng/ml相比差异有显著性。胎盘子宫免疫组化切片显示 -Galcer处理组孕激素受体（PR）表达明显强于对照组。结论 -Galcer可诱发C57BL/6J小鼠流产,NKT细胞的活化及其分泌的细胞因子可能是导致流产的主要原因。     

NF-kappaB p50基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立及其研究

目的利用NF-kappaBp50基因敲除小鼠建立子宫内膜异位症模型探索NF-kappaBp50亚单位在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法利用子宫内膜移植法建立P50基因敲除小鼠及野生型对照小鼠的子宫内膜异位症动物模型,检测建模后异位病灶大小、免疫组化检测异位病灶、在位内膜以及阴道磷酸化p65(p-p65)、PKCepsilon和TRPV1的表达。结果 p50基因敲除小鼠异位病灶明显减小,并且,p50基因敲除小鼠异位病灶,在位内膜,以及阴道的p-p65 and PKCepsilon的表达也下降。结论 NF-kappaBp50亚单位在子宫内膜异位症的发生发展中起重要作用,可能是潜在的治疗靶标。     

人子宫内膜异位症小白鼠模型的建立及雌、孕激素受体的表达

目的：为子宫内膜异位症(EM)的临床研究提供实验动物模型。方法：选择成熟雌性小白鼠，切除卵巢。实验组：取EM患者和正常育龄妇女分泌晚期子宫内膜，剪碎，随机置入小白鼠盆腹腔；对照组：同法置入人大网膜。实验Ⅰ组和对照组给雌激素支持，实验Ⅱ组不给雌激素。各组小白鼠分别于5、10、15、20d脱颈椎处死，观察异位病灶生长情况。免疫组化法检测异住病灶雌、孕激素受体表达。结果：子宫内膜种植第5天，腹膜等部位即见异位病灶生长，可见腺体细胞及散在间质细胞，时间越长，病灶与小白鼠组织融合越明显，粘连越重。用EM患者和正常育龄妇女内膜种植的异位病灶无差别，实验Ⅰ组和Ⅱ组所形成的异位病灶亦无差别。它们的雌、孕激素受体表达未显示差别，多数呈弱表达。结论：小白鼠做为EM早期动物模型科学、简便、可行，雌激素对早期异位病灶发生无影响，EM是与多因素相关的全身性疾病。     

Effect of recombinant human endostatin on endometriosis in mice

Background Direct and indirect evidences have suggested that angiogenesis is a prerequisite for the development of endometriosis. Aiming at offering experimental evidences for anti-angiogenesis therapy, we transplanted the eutopic endometrium from patient with endometriosis into the severe combined immunodeficiency disease (SCID) mice, to evaluate the effect of the endostatin on the growth and angiogenesis of the established endometriosis lesions in SCID mice model.Methods Eutopic endometrium of women with endometriosis was transplanted into the SCID mice. The mice were randomized into treatment (n=10) and control groups (n=10). Two weeks after the implantation of endometrium fragment, the treatment group was injected with recombinant human endostatin YH-16 into the peritoneal cavity (2 mg·kg(-1)·d(-1)), whereas the control group received equivalent volume of PBS (200 &micro;l/d). The volume of endometriotic lesions in SCID mice was measured every three days, and all the treatment lasted for 14 days. Immunohistochemistry was used to determine microvessel density (MVD) and the expression of VEGF. The results were analyzed by t test and χ(2) test to value the treating effect. Results Compared with the control group, growth of endometriosis lesion was reduced in the mice treated with YH-16. Statistically significant differences in the volume and weight of the ectopic lesions were observed between the treatment and the control groups (P&lt;0.05). Microscopical examination showed that after being treated with YH-16, the volume of the endometrial tissues decreased, the glands depauperated, and the glandular epithelium partially degenerated. Necrotic debris was observed in the endometrial stroma. MVD and expression of VEGF in the treatment group were significantly lower than those in the control group (P&lt;0.05). Conclusions Recombinant human endostatin affects the maintenance and growth of endometriotic tissues by inhibiting angiogenesis and reducing the expression of VEGF in ectopic lesion. The angiostatic agent may be promising as a therapy for endometriosis.     

子宫内膜异位症SCID小鼠动物模型的构建

目的 构建子宫内膜异位症 (内异症) 裸鼠及SCID小鼠动物模型, 比较在位及异位来源的人子宫内膜组织对移植效果的影响, 为内异症的药物治疗研究提供有利的动物模型基础.方法 取性成熟BALB/c-nu/nu裸鼠及SCID小鼠各30只, 通过皮下移植法, 将在位及异位子宫内膜移植到下腹部皮下, 定期观察异位病灶的大小, 术后6周取出病灶, 病理学检查.结果 裸鼠及SCID小鼠均可建立成功的内异症动物模型.其中SCID小鼠的建模成功率较裸鼠更高 (86.7%vs 66.7%) .在位子宫内膜组种植的成功率明显高于异位子宫内膜组 (100%vs84.2%) .结论 SCID小鼠在位内膜皮下种植方法可成功建立内异症动物模型.     

孕三烯酮和米非司酮对子宫内膜异位症患者异位内膜及腹腔液巨噬细胞凋亡的影响

目的：对培养的异位子宫内膜及腹腔液巨噬细胞分组加入孕三烯酮及米非司酮药物,观察其细胞生长情况及形态学变化,同时进行细胞凋亡率检测等研究,探讨子宫内膜异位症的临床治疗。方法：对12例患子宫内膜异位症妇女异位子宫内膜的离体组织及腹腔液进行细胞培养,在相同的生长期,分别加入一定剂量的孕三烯酮或米非司酮后,观察细胞的生长状况并用流式细胞仪检测其凋亡率。结果：加入药物后,细胞的生长速度减慢,其凋亡率较未用药组明显增加,差异有显著性（P＜0．05）,而两种药物在同一种细胞,相同作用时间的凋亡率无统计学意义。结论：孕三烯酮及米非司酮对异位子宫内膜细胞及腹腔液巨噬细胞有抑制作用,并且可以诱导异位子宫内膜细胞及腹腔液巨噬细胞的凋亡。     

不同转染方式对GFP表达质粒在小鼠肝脏的表达影响

目的 研究经流体力学注射、门静脉和腹腔常规注射3种不同途径注射GFP表达质粒后,目的基因在小鼠肝脏的表达情况及其转基因效率.方法 将裸质粒或脂质体包裹的质粒DNA分别应用流体力学注射、门静脉及腹腔常规注射法注入同种异体小鼠体内,48h后分别取血和肝组织,通过荧光显微镜观察3种转染途径对质粒DNA在小鼠肝脏的表达影响.结果 流体力学注射组及门静脉常规注射组均可见大量绿色荧光蛋白表达,两组的荧光表达量差异无统计学意义(P>0.05),腹腔注射组小鼠的肝脏仅见少量的绿色荧光表达,但3组内脂质体/质粒DNA复合物组绿色荧光表达量均明显高于裸质粒组(P<0.05).结论 应用流体力学注射及门静脉常规注射脂质体/质粒DNA复合物途径,目的基因均在小鼠肝脏高效表达,两种途径无明显差异,流体力学注射可广泛用于肝靶向性的活体基因转染.     

消癥注射液对实验性子宫内膜异位症异位内膜Fas、Survivin表达的影响

【目的】探讨消癥注射液治疗子宫内膜异位症的机制。【方法】采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法对SD雌性大鼠内膜异位内膜治疗前后进行子宫内膜组织中Fas和Survivin基因表达的测定.【结果】模型组中Fas基因表达的降低,survivin基因表达升高,使其无论在位还是异位内膜的促凋亡能力下降,异位的内膜在盆腔外存活的能力增强,而治疗后消癥注射液和无水乙醇均升高了Fas基因的表达,降低survivin基因表达,两治疗组之间比较差异无显著意义（P〉0．05）,但不同剂量消癥注射液之间有一定的差别（P〈0．05）。【结论】消癥注射液和无水乙醇均能升高了Fas基因的表达,降低survivin基因表达,从而诱导异位内膜细胞调亡的发生,达到治疗目的．     

Mechanism of Elevated Vascular Endothelial Growth Factor Levels in Peritoneal Fluids from Patients with Endometriosis

Endometriosisisoneofcommon gynecologicdiseasesanditspathogenesisisunclear .Theimplan tationofexfoliatedendometrium ,depositedintheperitonealcavitybyretrogrademenstruation ,isas sumedinmostcasestobethecause .However ,acrit icalstepintheestablishmentofanyex…     

大鼠子宫内膜异位模型的建立与组织学观察

目的为开发诊治子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)的新药研究提供理想的动物模型。方法取雌性未交配性成熟大鼠,术前雌激素诱导,麻醉开腹取部份右侧子宫,将内膜种植于左腹壁内,术后16周取出包块,进行组织形态学、组织化学观察。结果异位内膜在腹壁内生长,呈隆起囊状小包块,内有黏液,具有正常子宫内膜基本组织结构,囊腔较大。异位内膜中有糖原、RNA的存在。结论该手术方法建立的子宫异位内膜生长良好,术后一周就可摸及包块大小,为开发研究子宫内膜异位症的新药提供了方便。     

孕激素受体与子宫内膜异位症的关系

目的探讨孕激素受体(PR)与子宫内膜异位症(内异症)的关系。方法采集内异症患者(内异症组)和宫颈上皮内瘤变患者(对照组)的子宫内膜为在位内膜,并种植于裸鼠腹腔为内异症组和对照组的异位内膜。采用Western印迹杂交方法检测PRA与PRB蛋白表达情况并进行比较分析。结果内异症组和对照组的在位和异位内膜PRA蛋白均呈阳性表达;内异症组的在位和异位内膜PRB蛋白呈阴性表达,而对照组在位和异位内膜PRB蛋白呈阳性表达。对照组与内异症组的在位和异位内膜的PRA蛋白相对表达量间差异无统计学意义(P>0.05),PRB蛋白相对表达量间差异有统计学意义(P<0.01)。结论内异症患者在位内膜和异位内膜PRB的阴性表达可能与内异症有关。