单次大剂量照射对Lewis肺癌移植瘤的放射生物学效应

目的 研究同等生物有效剂量 （biological effective dose,BED）下, 单次大剂量照射对Lewis肺癌移植瘤的生物学作用。方法 构建Lewis肺癌C57小鼠移植瘤模型,待移植瘤直径达4~6 mm时随机分为3组:空白对照组 (0 Gy组)、单次大剂量组 （12 Gy/1 f/1 d组）及常规照射组 (22 Gy/11 f/15 d组),后两组BED值均为26.4 Gy。绘制移植瘤生长曲线,于第1次照射后的第1、3、8、15、21 d处死荷瘤小鼠,收集肿瘤组织并采用流式细胞术、免疫荧光等实验技术检测肿瘤细胞的乏氧、损伤及周期的变化。结果 两种剂量分割模式均可抑制小鼠移植瘤的生长,单次大剂量组肿瘤生长抑制更为明显 (P <0.05)。单次大剂量组首次照射后第3、8、15 d乏氧细胞较常规照射组低 （P <0.05）,且其第1、3 d磷酸化组蛋白 （γ-H2AX）阳性肿瘤细胞数高于后者 （P <0.05）。两种剂量分割模式可使G0/G1期细胞比例减少,G2/M期细胞比例增加,且单次大剂量组G2/M期细胞增加更为明显 （P <0.05）。结论 同等BED不同分割模式下,单次大剂量放射治疗较常规分割放射治疗对肿瘤的生长抑制作用更为显著,基于线性二次模型 （LQ模型）的BED可能低估了大分割放疗的生物学效应。     

黄连素增强肺癌放射敏感性的机制研究

目的 探讨黄连素对Lewis肺癌(Lewis lung cancer, LLC)细胞小鼠移植瘤的放射增敏效应。方法 建立肺癌LLC细胞小鼠移植瘤模型；移植瘤平均体积增至约100 mm³时(第0天),将24只小鼠随机分为4组：对照组、黄连素组(5 mg/kg黄连素)、照射组(8 Gy)、黄连素+照射组(5 mg/kg黄连素+8 Gy)。第2天开始，黄连素组和黄连素+照射组每隔1 d腹腔注射黄连素5 mg/kg,对照组和照射组腹腔注射等体积的生理盐水，给药第6次后(第12天),照射组及黄连素+照射组予局部单次8 Gy照射。第13天起各组均不予处理，每隔2 d测量1次小鼠肿瘤体积。待对照组小鼠肿瘤体积增至2 000 mm³时(第24天),处死小鼠，测量移植瘤体积，计算肿瘤体积抑制率；并对移植瘤标本进行免疫荧光染色中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)相关蛋白瓜氨酸组蛋白3(citrullinated histone H3,CitH3)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)...     

四逆汤组成药物不同配伍对Lewis肺癌小鼠血清血管内皮生长因子表达的影响

目的研究温阳法代表方四逆汤及其组成药物不同配伍,对Lewis肺癌小鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,及其抗肿瘤复发转移作用。方法采用正交设计确定四逆汤中附子、干姜、炙甘草的不同配伍,共分为17组,C57BL/6小鼠102只,按正交表分为17组,每组6只,Lewis肺癌小鼠模型制备的次日起,各组小鼠每天进行灌胃给药60 mg/kg。第15天脱颈椎处死各组小鼠。瘤组织称重,计算抑瘤率。观察瘤组织病理变化,计数肺表面转移瘤结节数。用双抗体夹心ELISA法检测血清VEGF变化。结果四逆汤对小鼠Lewis肺癌的瘤重有不同程度的影响。第4、6、7、10组小鼠瘤重、瘤重指数明显低于对照组(第1组,P<0.05)和完整方组(第17组,P<0.05),尤以第10组最明显(P<0.01)。就抑瘤率来说,第4、6、7、10组的抑瘤率也是各药物组中最高的。第5、7、11、16组在转移瘤结节数量上与第1组比较有统计学意义(P<0.05),其中第7、11、16组的转移瘤结节数量少于第1组;在血清VEGF的表达上,第2、3、6、7、10、11、12、13、14、16、17组与第1组比较有显著差异(P<0.01)。结论四逆汤中附子、干姜、炙甘草均具有抑制Lewis肺癌小鼠细胞增殖的作用,其配伍以3∶1∶6的比例对Lewis肺癌小鼠细胞增殖抑制最明显。     

多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用

目的：探讨多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对荷Lewis肺癌小鼠的抑瘤 效应。 方法：将荷瘤小鼠随机分为对照组、10 Gy照射组、4次2.5 Gy照射组、4次质粒组、质粒 + 10 Gy组和4次(质粒+2.5 Gy）组。小鼠肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒后36 h,接受X射线照射,观察各组小鼠治疗后不同时间肿瘤生长速率, 18 d后计数各组小鼠肺转移 结节数, 并称量瘤重。 结果：治疗后12~18 d,4次（质粒+2.5 Gy）组肿瘤生长速率明显低于质粒+10 Gy组（P<0.001）。治疗后18 d,4次（质粒+2.5 Gy）组小鼠肺转移结节数和瘤重明显低于质粒+10 Gy组（分别为P<0.001和P<0.01）。 结论：多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因-放射治疗。     

益气养阴方对Lewis肺癌移植小鼠免疫重塑相关因子表达的影响

目的 观察益气养阴方对Lewis肺癌移植小鼠免疫重塑相关因子IL-10、TGF-β表达的影响。方法 30只近交系C57BL/6纯系小鼠行Lewis肺癌细胞移植造模后随机分为3组：模型组、中药组及西药组,每组10只。模型组只行造模,中药组给予灌胃益气养阴方悬液,1次/d,0.4 ml/次。西药组将Nivolumab按照0.273 mg/10g溶于0.2 mL生理盐水中腹腔注射,每2周1次;各组均常规喂食。接种后第2 d开始给药,给药3周。第7d开始观察记录各组小鼠瘤体大小(每3 d测1次瘤体大小)。观察期满后各组小鼠断颈处死,留取各组肿瘤组织,ELISA法测定肿瘤组织匀浆IL-10、TGF-β、Foxp3含量,流式细胞仪检测小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例。结果 中药组及西药组肿瘤体积增长均减慢,两组抑瘤率比较无统计学差异(p>0.05);与模型组相比,中药组及西药组肿瘤组织IL-10、TGF-?表达及Foxp3表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与中药组比较,西药组肿瘤组织IL-10、TGF-?、Foxp3表达降低更明显,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,两组药物干预组小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例降低(P<0.05),西药组小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例降低较中药干预组降低更明显(P<0.05)。结论 益气养阴方可抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长,其机制可能与降低肿瘤组织Foxp3表达,减少CD4+CD25+Treg细胞分化,降低IL-10、TGF-β表达,改善细胞免疫抑制状态,进而发挥调节免疫重塑作用有相关性。     

异功化瘤颗粒对Lewis肺癌的抑制作用

目的观察异功化瘤颗粒对小鼠Lewis肺癌的抑制作用,并与标准化疗药比较,了解其药效学特点,为临床应用提供药理学依据.方法荷Lewis肺癌的C57BL/6小鼠分为5-Fu组,异功化瘤大、中、小剂量组;与空白对照组一起,通过检测各组小鼠体重、瘤重变化和抑瘤率观察异功化瘤颗粒对Lewis肺癌的治疗作用.结果各组小鼠体重均增加,大、中剂量组抑瘤率分别为大剂量组(21.6g/kg)达53.2%,中剂量组(10.8g/kg)为39.3%(P＜0.05).结论异功化瘤颗粒大剂量21.6g/kg及中剂量10.8g/kg对Lewis肺癌均有明显抑制作用.     

小鼠肺癌模型的建立及其在顺铂、恩度对比试验中的应用

目的:构建Lewis肺癌C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型,研究恩度与顺铂及联和用药对Lewis肺癌C57BL/6小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用.方法:使用C57BL/6小鼠作为实验动物.培养小鼠Lewis肺癌细胞,收集对数生长期的肿瘤细胞,调整细胞悬液浓度至1×107/ml.于小鼠右侧腋部皮下注射细胞悬液0.2 ml(细胞总数为2×104).建立Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤动物模型.待接种后第8天,能扣及肿瘤时(约8 mm)开始实验.将40只荷瘤小鼠随机分为四组.A组:生理盐水组;B组:顺铂组;C组:恩度组;D组:恩度与顺铂联用组.C组、D组每日给予恩度3 mg/kg,腹腔注射给药,每日1次,连续14 d;B组、D组腹腔注射顺铂0.2 ml(按照1 mg/kg给药),每天1次,连续2周.A组给予生理盐水0.2 ml/只腹腔注射,每日1次,连续二周后处死.观察各组小鼠的生存质量情况,每3天称取体重一次并测量肿瘤长短径,描绘肿瘤生长曲线;称量瘤重,计算抑瘤率.结果:各治疗组小鼠移植瘤生长较生理盐水组相对缓慢.联合治疗组肿瘤体积明显小于生理盐水组、顺铂组和恩度组;顺铂组、恩度组和联合治疗组抑瘤率分别为32.19%、21.96%、55.08%.顺铂与恩度联用对小鼠移植瘤具有协同抑制作用(Q>1.15).结论:在实验条件下,恩度与化疗药物顺铂均对Lewis肺癌皮下移植瘤生长有明显抑制作用.恩度与顺铂对Lewis肺癌移植瘤具有较好的协同抑制作用,同时能够改善小鼠的生存质量,在肺癌治疗中具有一定潜力.     

重组人血管内皮抑素联合放疗对Lewis肺癌小鼠碳酸酐酶Ⅸ和钙粘连蛋白表达的影响

目的:观察重组人血管内皮抑素(Endostar)联合放射治疗(简称放疗)对Lewis肺癌小鼠碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)和钙粘连蛋白(E-cadherin,E-cad)表达的影响,进一步探讨Endostar对放疗的协同增敏机制。方法:建立Lewis肺癌小鼠模型,随机分为空白对照组、Endostar组、放疗组、Endostar联合放疗组,分别予以相应干预后观察各组移植瘤生长情况。治疗结束后第1天摘除小鼠眼球采血,用RT-PCR检测各组血清中CAⅨ和E-cad mRNA表达情况。结果:(1)随着时间延长,与空白对照组比较,Endostar组和放疗组移植瘤体积变化差异无统计学意义(P>0.05),Endostar联合放疗组肿瘤体积变化差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Endostar组、放疗组和Endostar联合放疗组CAⅨ表达均较空白对照组降低(P<0.05),Endostar联合放疗组下降更明显(P<0.05)。(3)Endostar组、放疗组和Endostar联合放疗组E-cad mRNA表达均较空白对照组增加(P<0.05),Endostar联合放疗组与放疗组、Endostar组比较,E-cad mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Endostar具有放射增敏作用,Endostar联合放疗能明显抑制Lewis肺癌移植瘤的生长,这种作用可能是通过下调CAⅨmRNA、上调E-cad mRNA表达,改善瘤体局部乏氧状态和增加氧供实现的。     

放疗对lewis肺癌荷瘤小鼠MMP、VEGF、MVD的影响

目的 建立lewis肺癌荷瘤小鼠动物模型,研究局部放疗对与肿瘤生长、转移密切相关的基质金属蛋白酶(MMPs)、血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)表达的影响.方法 建立负载lewis肺癌细胞的C57BL/6荷瘤小鼠动物模型,随机分为放疗组和未放疗组.当肿瘤细胞接种后14 d,肿瘤体积增至190 mm3左右时,放疗组应用医用直线加速器6MV-X射线对原发肿瘤分次照射,5 Gy/次,隔日1次,共20 Gy/4次.当放疗结束后第8 d(即接种后28 d),小鼠开始出现呼吸困难时,同时处死放疗组、未放疗组小鼠.解剖小鼠取原发瘤、癌旁正常组织.免疫组化法检测原发瘤及癌旁正常组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、原发瘤中VEGF、MVD的表达.结果 肿瘤组织中MMP2、MMP9表达高于癌旁正常组织(P＜0.05);放疗组肿瘤组织中MMP2、MMP9、VEGF、MVD较未放疗组表达增强(P＜0.05),而癌旁正常组织中MMP2、MMP9无明显变化.结论 放疗增强了lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中MMP2、MMP9、VEGF、MVD 的表达,为临床联合运用放疗与MMP抑制剂以及其它抗血管生成治疗,提高肿瘤治疗疗效提供了实验依据.     

阿米福汀在肺癌放射治疗时对机体正常细胞和肺癌细胞的影响

目的　探讨阿米福汀对体外培养的中国仓鼠V79细胞和C5 7BL/ 6小鼠造血系统的放射保护作用及其在肺癌放射治疗时对肺癌组织生长的影响。方法　将体外培养的中国仓鼠V79细胞接种于培养皿后,分别给予2～10Gy的γ射线照射,用药组在照射前30min暴露于阿米福汀(1 2mmol/L) ,评价阿米福汀对照射后V79细胞存活分数的影响;给予C5 7BL/ 6无瘤小鼠腹腔注射阿米福汀(2 0 0mg/kg) 30min后进行全身照射(8Gy) ,在照射后不同时间观察外周血白细胞数量的变化;给予荷Lewis肺癌C5 7BL/ 6小鼠肿瘤局部照射10Gy ,照射前30min腹腔注射阿米福汀(2 0 0mg/kg) ,评价阿米福汀对肿瘤放疗效果的影响。结果　用药组V79细胞的集落存活分数高于单纯放射组(P <0 0 5 ) ;用药组无瘤小鼠外周血白细胞数较单纯放射组下降幅度小且恢复快(P <0 0 5 ) ;在观察的2 0d内,比较用药组和单纯放射组荷Lewis肺癌小鼠肿瘤体积,在相同时间点两组之间比较无显著性差异(P >0 0 5 )。结论　本研究从离体和在体两方面证实了阿米福汀对机体正常细胞产生放射保护的同时,对肿瘤组织细胞无放射保护作用