PCR技术检测棘阿米巴26S核糖体DNA

目的:用聚合酶链反应(PCR)方法检测棘阿米巴的26S核糖体DNA(26S rDNA,Rns),为早期诊断棘阿米巴角膜炎提供方法.方法:分离培养三株不同基因型棘阿米巴虫株,提取虫株基因组DNA,合成棘阿米巴属特异性引物(ArDNA-a),通过聚合酶链反应(PCR)扩增部分26S rDNA序列.结果:三株不同基因型棘阿米巴虫株属于两种基因型,其中Acanthamoeba sp.CJY/s2株和Acanthamoeba sp.CJY/s株属于Rns T4基因型,Acastellanii Neff株属于Neff基因型.PCR扩增后,Acanthamoeba sp.CJY/s2和Acastellanii Neff株的26S核糖体DNA基因片段扩增出分子量大小为126 bp的特定扩增带,而Acanthamoeba sp.CJY/s株的26S核糖体DNA基因片段则未得到预期的扩增带.结论:用棘阿米巴属特异性引物(ArDNA-a)可以有效扩增Acanthamoeba sp.CJY/s2和Acastellanii Neff株的26S核糖体DNA基因,可以为部分棘阿米巴性角膜炎的早期检测提供新的检测手段.     

广东湛江地区真菌性角膜炎病原菌的分离鉴定和分析

目的了解广东湛江地区引起真菌性角膜炎的病原真菌的分布情况. 方法对70例疑患真菌性角膜炎的患者,取病变角膜上皮组织,分别进行真菌直接涂片镜检和真菌培养,并对检查阳性者进行菌种鉴定. 结果70例病眼患者均检出真菌,涂片镜检真菌阳性67份,阳性率为95.7%,真菌培养阳性65份,阳性率92.9%,总一致性为89.6%.检出菌种分属14个属26个种,其中镰刀菌属22株（33.8%）,弯孢霉属20株（30.8%）、曲霉属4株（6.2%）,球孢子菌属4株（6.2%）,其他菌属15株（23.1%）. 结论北热带的广东湛江地区真菌性角膜炎主要致病菌属为镰刀菌属和弯孢霉属,主要菌种以新月弯孢霉最多见.     

多重聚合酶链反应在感染性角膜炎诊断中的应用价值

[目的]探讨多重聚合酶链反应(MPCR)在感染性角膜炎诊断中的应用价值.[方法]选择角膜炎患者59例,其中细菌感染性角膜炎29例、真菌感染性角膜炎16例、单纯疱疹病毒(HSV)感染性角膜炎14例;另选择正常眼20例作为对照组.提取所有受试者角膜上皮和或结膜囊分泌物中的DNA进行MPCR扩增,扩增片段有520bp(细菌),310bp(真菌),179bp(病毒).利用凝胶成像分析系统对结果进行观察分析,并与传统微生物培养法进行比较.[结果]细菌感染性角膜炎组中MPCR扩增出520bp的有20例,同时扩增出520bp和310bp的有1例,阳性率为72.4%,细菌微生物培养结果阳性率为72.4%(χ2=0.000,P>0.05).真菌感染性角膜炎组中MPCR扩增出310 bp的有8例,同时扩增出520bp和真菌310 bp的有1例,阳性率为56.3%,真菌微生物培养结果阳性率为43.8%(χ2=0.29,P>0.05).细菌、真菌、HSV感染性角膜炎组MPCR阳性检测率均明显高于正常对照组(P<0.001).真菌、细菌、HSV感染的角膜炎患者用MPCR扩增出相应病原体的例数为35例,相符率为59.3%,两组间差异有统计学意义(χ2=31.72,P<0.001).[结论]MPCR是诊断和鉴别诊断感染性角膜炎的有效方法.     

1株罕见念珠状链杆菌分离株全基因组测序鉴定

目的 应用全基因组测序方法,鉴定中山市1名发热及皮疹待查因的患者血液中分离的1株罕见菌株.方法 对1株罕见菌株进行传统微生物生化鉴定无果之后,提取细菌基因组DNA,并进行全基因测序,按照de novo的方式进行组装后,应用微生物基因组序列的平均核苷酸相似度(ANI)鉴定方法进行物种鉴定.结果 该株罕见菌用传统微生物方法...     

氢氧化钾涂片镜检法诊断真菌性角膜炎的应用

目的探讨氢氧化钾（KOH）涂片镜检法对真菌性角膜炎的诊断价值,了解真菌性角膜炎的病原学特征。方法取58例真菌性角膜炎患者的角膜溃疡标本,作KOH涂片镜检、真菌培养及菌种鉴定。结果 KOH涂片镜检法和真菌培养法的阳性率分别为58.62%（17/29）、52.94%（9/17）,两者的真菌检出率差异无统计学意义（P〉0.05）。9份培养阳性标本中,共分离出3属3种真菌,其中镰刀菌属、暗色孢科真菌、酵母菌分别占35.29%、11.76%、5.88%。结论 KOH涂片镜检法是早期诊断本病的简单、有效方法,镰刀菌和暗色孢科真菌是宁夏地区真菌性角膜炎的主要致病菌。     

应用rDNA ITS测序检测海南岛条件致病性真菌

目的:应用内转录间隔区(ITS)引物建立一种较为敏感、特异检测和鉴定条件致病性真菌的方法,为进一步鉴定不同真菌的种、型的亲缘关系提供分子生物学依据。方法:用常规的真菌检验方法对76份口腔标本做初步鉴定,采用通用引物ITS1、ITS4对可疑真菌菌悬液进行PCR扩增,PCR扩增产物纯化、DNA测序,做序列比对分析。结果:ITS-PCR扩增出种特异的DNA条带,检测菌株76株,DNA测序鉴定出白假丝酵母菌53株(69.7%),其他真菌23株(30.3%)。结论:采用ITS引物测序法,可准确地检测出不同种的条件致病性真菌,并为进一步鉴定菌株的变异性,发现亚种提供基础。     

棘阿米巴角膜炎的实验室诊断及实验研究

目的 :找出快速诊断和鉴定棘阿米巴角膜炎的方法 ,建立棘阿米巴角膜炎的动物模型。方法 :10 %氢氧化钾 (KOH)湿封片镜检、棘阿米巴原虫培养、倒置显微镜观察、病理切片作HE染色和PAS染色检查。通过家兔应用激素 3天后 ,经角膜基质内注射棘阿米巴原虫悬液。结果 :角膜刮片及手术切除的角膜材料 ,经 10 %氢氧化钾 (KOH)湿封片镜检 ,前者查到 8例棘阿米巴角膜炎病例 ,后者确诊 5例 ;手术切除的角膜材料经原虫培养 ,分离出 6株棘阿米巴原虫 ;应用倒置显微镜直接观察 ,见到棘阿米巴原虫的包囊、滋养体和棘刺。建立了家兔棘阿米巴角膜炎动物模型。结论 :应用 10 %KOH湿封片镜检以及通过倒置显微镜直接观察培养的原虫可对棘阿米巴角膜炎作快速诊断 ;倒置显微镜可直接观察和鉴定棘阿米巴原虫 ,方法简便、不污染、快速 ;家兔棘阿米巴角膜炎的动物模型建成快速及实用     

真菌通用引物PCR反应鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡

目的 利用真菌通用引物PCR反应，鉴别兔眼真菌性和细菌性角膜溃疡。方法 根据临床上常见的致病细菌菌株(金葡菌、绿脓菌)，真菌菌株(烟曲霉菌、白念菌、镰刀菌)，制作兔眼角膜溃疡的动物模型，选取一对真菌通用引物，一对寡核苷酸引物B2F(5'ACTITCGTAGGATAG-3')和B4R(5'-TGATCGtcttccataaata-3')，对标本进行聚合酶链反应。结果 在687bp处出现DNA扩增带者为阳性。造模后第3d真菌组出现扩增带阳性的90％，第5d真菌组出现扩增带阳性的96．6％。细菌组始终未出现阳性结果。结论 真菌通用引物PCR反应检测鉴别真菌性与细菌性角膜溃疡有较好的敏感性和特异性。     

真菌性角膜炎的诊断与治疗

真菌性角膜炎是夏秋季节比较常见的角膜炎症，常常是由于植物性外伤所致，因为植物的枝叶经常带有真菌。引起角膜炎的真菌种类很多，至少有３５个菌属，常见的致病菌有镰刀菌属、念珠菌属、曲霉菌属及青霉菌等。除植物性外伤以外，亦有因为滥用抗生素、激素治疗角膜炎，造...     

软性角膜接触镜配戴相关性微生物研究

软性角膜接触镜在全球已经拥有近亿的配戴者,显然,接触镜是有效纠正近视而广受欢迎的方式,而且总的来说是比较安全的,每年发生并发症的概率低于万分之二,但并非没有并发症,最重要的并发症是微生物性角膜炎.大多数角膜炎是细菌引起,G-菌,尤其是假单胞菌属,是绝大多数严重细菌性角膜炎的病因,真菌、阿米巴原虫相对少见,但发病率相对更高.为此,我们对软性角膜接触镜配戴者眼部、镜片及护理产品的微生物状况进行了调查分析,结果报告如下.