离体培养的大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞中松弛素样因子mRNA的表达及调节

目的:观察松弛素样因子(relaxin-like factor, RLF)mRNA在离体培养的大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞中的表达,初步探讨影响其表达调控的可能机制.方法:离体培养来自健康Wistar大鼠卵巢的颗粒细胞和黄体细胞,分别加入血小板活化因子(PAF)、促性腺激素(FSH或hCG)、腺苷酸环化酶激动剂(Forscolin)、蛋白激酶C(PKC)激动剂佛波酯(PMA),以培养液作为对照.采用RT-PCR方法观察各组RLF mRNA的表达,每组设5个复孔.结果:离体培养的大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞均有RLF mRNA的表达,颗粒细胞中加入PAF、FSH、Forscolin、PMA组RLF mRNA的表达均较对照组增强(P＜0.05或P＜0.01);黄体细胞中加入PAF、Forscolin、PMA组RLF mRNA的表达均较对照组增强(P＜0.05),但加入hCG组无明显变化.结论:大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞RLF mRNA的表达受PAF的正性调节,蛋白激酶A(PKA)和PKC信号通路的激活可能促进RLF mRNA的表达.     

大鼠黄体细胞的长期培养

本实验建立长期细胞培养条件,观察了黄体细胞在无血清M199培养液中的分泌机能。结果发现随着黄体细胞密度增加,孕酮分泌量相应增多,24小时内培养液中孕酮含量随时间延长而增加。黄体细胞对hCG、Forskolin和佛波酮(PMA)等因素的刺激反应良好。     

硫代脯氨酸对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

本研究采用黄体细胞孵育的方法，观察了硫代脯氨酸对离体黄体细胞孕酮生成的影响，及此影响与cAMP的关系，研究表明硫代脯氨酸呈剂量依赖性抑hCG诱导的黄体细胞孕酮分泌；当硫代脯氨酸浓度为2.4mg/ml时，30min后即发生明显地抑制孕酮分泌作用（P＜0．01）；硫代脯氨酸同时也是显降低黄体细胞cAMP产生。结果显示，在黄体细胞体外培养条件下，硫代脯氨酸可能通过降低cAMP产生而抑制hCG的生孕酮作用。     

酪,丝,苏氨基酸对催产素促黄体细胞孕酮生成作用的影响

实验研究了催产素(Oxytocin,OXT)对PMSG-hCG顺序处理的未成年大鼠离体黄体细胞孕酮生成的影响。结果表明,10mIU,100mIu,1000mIu的催产素对黄体细胞孕酮分泌均有促进作用,以100mIU时作用最强。0.2mmol/L丝氨酸或酪氨酸可抑制催产素所引起的孕酮分泌,以酪氨酸的作用较强;0.2mmol/L苏氨酸对黄体细胞孕酮分泌无影响。     

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对卵巢的影响

目的通过实验观察TNF-α对妇女卵巢颗粒细胞和黄体细胞的直接作用以及与某些妇科疾病的关系。方法用放射免疫方法观察了不孕症和功能性子宫出血患者血清中TNF-α浓度,用细胞培养方法观察了TNF-α对人黄体细胞和颗粒细胞cAMP和孕酮生成的影响。结果与正常人相比不孕症和功能性子官出血患者血清中TNF-α浓度显著增高;TNF-α剂量依赖性刺激人颗粒细胞cAMP生成;TNF-α抑制人离体黄体细胞基础孕酮生成,具有剂量依赖性和时间依赖性特征;TNF-α预处理24h对hCG诱导人黄体细胞孕酮分泌和cAMP生成均有显著的抑制作用。结论 TNF-α对女性生殖能力有显著影响。     

催产素对兔离体孵育黄体细胞孕酮生成的影响

采用酶分散的兔离体黄体细胞孵育方法,观察了hCG和OT对其孕酮生成的影响。结果表明:hCG可致孕酮生成,且呈剂量反应关系。各浓度OT对孕酮生成均有促进作用。提示OT致孕酮生成可能与IP_3和DG通过激活了3β-HSD活性有关。     

GABA对黄体细胞孕酮分泌及凋亡的影响

目的：探讨ＧＡＢＡ对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响及其机制,孕酮生成与细胞凋亡的关系。方法：未成年Ｗｉｓｔａｒ雌性大鼠,经ＰＭＳＧ－ｈＣＧ顺序处理后,取出双侧卵巢制成黄体细胞悬浮液,进行细胞培养,放射免疫分析方法测定激素含量,３’－末端原位标记法检测离体培养黄体细胞自发凋亡,结果：⑴ＧＡＢＡ抑制黄体细胞基础孕酮的生成及ｈＣＧ刺激下的孕酮生成,⑵Ｆｏｒｓｋｌｉｎ促进黄体细胞孕酮的生成,ＧＡＢＡ抑制Ｆｏｒ     

解剖、生理和组织胚胎学

蚝例09胎儿肾脏胚胎性间叶肉瘤一例/赵俊霄…//中华妇产科杂志一1994,29(11).-~681%例10 cAMP介导内皮素一1对大鼠黄体细胞孕酮分泌的作用/徐斯凡…//生殖医学杂志一1995、4(2)一88一91 本文作者采用大鼠黄体细胞体外孵育技术,放免侧定方法,观察了缩血管肤内皮素一1(ET一l)对黄体细胞孕酮分泌的影响及其与细胞内信使cAMP的相互关系。结果表明,10“6InoFL的ET一1可显著抑制黄体细胞的墓础孕酮分泌和hCG诱导的孕酮分泌,外源性cAMP和腺昔酸环化醉激动剂Fookol访则可促进黄体细胞分泌孕酮;当。AMP或Fo.Uin与ETwel共同作用时,前者可完…     

心房钠尿肽对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

采用大鼠黄体细胞体外培养的方法，观察了心房钠尿肽（ANP）对黄体细胞孕酮生产的影响及与细胞内信使cAMP的相互关系，发现ANP能抑制黄体细胞孕酮的基础分泌及人绒毛膜促性腺激素（HCG）刺激下的孕酮分泌，当浓度10^-7mol/L的AMP加入培养的黄体细胞悬液30min 后，即发生明显地抑制孕酮分泌作用（P＜0．01）；腺苷酸环化酶激动剂Forskolin则可促进黄体细胞分泌孕酮，当Forskolin与ANP共同作时，ANP可抑制Forskolin对黄体细胞的促进作用，孕酮分泌恢复到对照组水平，实验结果提示：ANP可能是一种卵巢局部调节肽，它可能通过抑制小黄体细胞内的腺苷酸环化酶，减少CAMP的生成和释放，进而抑制小黄体细胞的孕酮分泌。     

酪氨酸、GnRH对大鼠下丘脑外侧视前区(APL)单位放电的影响

近年来,我室多方面的研究结果表明,酪氨酸对下丘脑—垂体—卵巢轴的活动发生重要的影响。曾证明酪氨酸有抑制hCG致孕酮生成作用及抑制hCG引起的离体培养的卵巢颗粒细胞孕酮分泌,并使cAMP分泌降低。曾报导酪氨酸可刺激家兔离体培养垂体前叶细胞LH和cAMP的生成,并有加强促性腺素释放激素〔GnRH(LH-RH)〕效应作用。一些报导指出,在下丘脑视前区等处与脑其他部位间存在广泛和复杂的神经联系,下丘脑以外的一切可以影响生殖机能的神经信息最后都集中于丘脑下部的GnRH神经元。为探讨酪氨酸对下丘脑的作用,特向大鼠侧脑室注入酪氨酸和     

OT与hCG对兔黄体细胞孕铜生成的影响

本文采用兔离休黄体细胞孵育方法,观察hCG与不同剂量OT和OT与不同剂量hCG对黄体细胞孕酮生成的影响。结果表明:各种不同剂量OT对hCG致孕酮生成有协同效应,而各种不同剂量hCG对OT致孕酮生成具有抑制作用。提示两种实验结果可能是经不同作用机制实现的。     

消抗灵对离体培养的大鼠颗粒细胞雌孕激素生成的影响

目的：探讨中药复方制剂一消抗灵治疗妊娠抗心磷脂综合症引起的免疫性不育的作用机制。方法：用未成年雌性大鼠,PMSG处理,48h后处死,取其卵巢,收集颗粒细胞,放射免疫分析方法测定激素含量,观察了消抗灵在有或元hCG和Forskolin的情况下,对颗粒细胞雌二醇(E2)和孕酮(P4)生成的影响。结果：1、消抗灵能显抑制颗粒细胞E2和R的生成,并呈剂量依赖性;2、抑制hCG诱导下E2和P4的生成;3、对Forskolin存在下的颗粒细胞B2、P4的生成,消抗灵也有抑制诈用。结论：消抗灵对妊娠竞疫不育的治疗机制与其抑制颗粒细胞E2的生成有关,其诈用可能是通过抑制cAMP—PK信息传递系统实现的。     

去垂体后酪氨酸抗hCG致孕酮生成的作用

本实验室曾在离体或整体动物实验证明,酪氨酸有抑制hCG致孕酮生成作用。为了进一步观察酪氨酸的抑制作用不需要垂体参与,我们使用去垂体后24小时的大鼠实验。结果证明,大鼠去垂体后,酪氖酸仍有抑制hCG致孕酮生成的作用。这表明在整体情况下。酪氨酸抑制作用的部位在卵巢,而不需垂体参与。     

PACAP mRNA在大鼠排卵过程中的表达与调节

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽（pituitary adenylate cyclase—activating polypeptide，PACAP）mRNA在排卵过程中的表达情况与调节其表达的因素。方法采用RT-PCR对PACAP mRNA在使用外源性激素诱导的大鼠排卵过程中的表达变化进行研究，并在体外培养的排卵前卵泡颗粒细胞中分析了不同处理因素对其表达的影响。结果对预先用孕马血清（PMSG）处理的未成年大鼠给予hCG发现，给予hCG4～12h期间，PACAP转录水平持续升高，其表达水平在给予hCG4h后达高峰。对体外培养的排卵前卵泡颗粒细胞的研究结果分析显示，与对照组相比hCG和hCG＋PAF能提高颗粒细胞PACAP mRNA水平。结论PACAP mRNA在排卵前卵泡呈瞬时性高表达，提示了PACAP可能在排卵过程中发挥重要作用。hCG能促进PACAP的转录，并且PAF可加强这种促进作用。     

大鼠多囊卵巢动物模型的实验研究

给２４日龄雄性大鼠皮下埋植孕酮硅胶棒,２天后再连续９天,注射低剂量ｈＣＴ后,分别观察了卵巢形态,血清激素含量。结果发现,实验组大鼠卵巢重量增加,呈多囊性改变,卵泡颗粒细胞减少百膜细胞层增加,电镜可见膜细胞内大量脂滴,血清中孕酮,睾酮明显增高,而雌二醇变化不明显。     

囊性纤维化跨膜转导调节器在卵巢过度刺激综合征模型大鼠卵巢中表达的变化

目的建立大鼠卵巢过度刺激综合征(OHSS)模型,研究囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)在OHSS大鼠卵巢中表达的变化及意义。方法未成年Wistar雌鼠,随机分为过度刺激组和常规刺激组,建立OHSS模型;比较两组间卵巢重量,血雌二醇水平;并分别通过免疫组织化学和免疫印迹法比较两组间卵巢组织中CFTR蛋白表达量的变化。结果过度刺激组大鼠卵巢重量、血雌二醇水平显著高于常规刺激组;免疫组化方法检测到CFTR呈棕黄色颗粒表达于大鼠卵巢黄体细胞以及未排卵泡的黄素化颗粒细胞和卵泡膜细胞胞质,免疫组化和免疫印迹定量分析均显示过度刺激组卵巢CFTR蛋白表达量显著高于常规刺激组。结论注射过量促性腺激素致大鼠血雌二醇水平异常升高,使卵巢内CFTR表达量显著增加,卵巢形成多发性滤泡囊肿和黄体囊肿,间质水肿,体积和重量增加,参与诱发OHSS。     

蛋白激酶C在人绒毛膜癌JAR细胞中作用的研究

目的：研究蛋白激酶C(protein kinaseC，PKC)对人绒毛膜癌JAR细胞分泌人绒毛膜促性腺激素(hCG)的影响，进一步探讨PKC在调控JAR细胞hCG分泌中的作用。方法：不同浓度的PKC激动剂phorbol 12—myristrate l3—acetate(PMA)急性和慢性刺激、PKC抑制剂chelerythrine chlorine(CHEL)分别作用JAR细胞，用ELASA法测定hCG分泌量变化，以及蛋白印迹(Western blot)法测定细胞内磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)的改变。结果：不同浓度PMA急性刺激时，抑制JAR细胞hCG分泌，在200nmol/L时，其抑制作用最强；不同浓度PMA慢性刺激时，JAR细胞hCG分泌量增加，在200nmol／L时，其作用最强。CHEL作用JAR细胞时，hCG分泌量升高，在600nmol/L时，其作用最强。对照组及各实验组都有活性的MAPK的表达，与对照组相比，PMA慢性刺激组、CHEL组MAPK磷酸化水平升高;PMA急性刺激组MAPK磷酸化水平降低。结论：PKC参与调节JAR细胞hCG的分泌，活性升高时，下调MAPK磷酸化，使JAR细胞hCG分泌减少，而活性降低时，增强MAPK磷酸化，JAR细胞hCG分泌量增加。MAPK通路激活是PKC介导的JAR细胞分泌hCG的重要机制。